CN115558717A - Emc8基因的检测试剂在制备胃癌检测试剂盒中的应用及胃癌检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及EMC8基因的检测试剂在制备胃癌检测试剂盒中的应用及胃癌检测试剂盒。本发明首次揭示了EMC8基因与胃癌相关，在胃癌患者中EMC8基因的表达水平显著升高且具有统计学意义。本发明中所述EMC8基因作为胃癌早期诊断的标志物具有重要参考价值。基于此，本发明将EMC8基因的检测试剂应用于制备胃癌的检测试剂盒，制备得到的试剂盒具有方便、快捷等特点，可用于胃癌的早期诊断领域，为胃癌患者的确诊提供指导。
Description
技术领域
本发明涉及EMC8基因的检测试剂在制备胃癌检测试剂盒中的应用及胃癌检测试剂盒，属于生物医学技术领域。
背景技术
胃癌具有高发病率和高死亡率的特点，是世界上主要的癌症之一，也是重要的全球医疗保健问题，对全人类的健康造成了重要影响。有资料显示，超过70％的胃癌发生在发展中国家，疾病负担严重是癌症防治的难点和重点。胃癌患者具有发病率高、转移率高、死亡率高，早诊率低、根治性切除率低、5年生存率低的特点。目前在胃癌领域，仍然十分缺乏有效的检测胃癌的试剂盒，以及早期诊断的肿瘤标记物，因此迫切的需要一种较为敏感的标志物，为胃癌的早期诊断提供客观依据。
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)是一种体外特异性扩增目的DNA片段的技术，其基本原理是利用碱基互补配对原则。实时荧光定量PCR是以cDNA作为模板，在 DNA Polymerase(聚合酶)作用下，参照目的片段的特异性引物序列，特异性合成上、下游引物之间的目的片段。检测结合在DNA双链中的荧光信号，根据Ct值等可以对目的mRNA进行定量检测。因此设计出能够识别目的片段的特异性引物序列，是保证目的mRNA定量准确的重要保证和重要环节。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了EMC8基因的检测试剂在制备胃癌检测试剂盒中的应用及胃癌检测试剂盒。
本发明的技术方案如下：
EMC8基因的检测试剂在制备胃癌检测试剂盒中的应用。
根据本发明优选的，所述EMC8基因的NCBI Gene数据库Gene ID为10328。
根据本发明优选的，所述胃癌检测试剂盒为荧光定量PCR检测试剂盒。
根据本发明优选的，所述胃癌检测试剂盒用于检测细胞、组织、血浆或血清中的EMC8 基因。
一种胃癌检测试剂盒，包括EMC8基因的荧光定量PCR反应试剂。
根据本发明优选的，所述EMC8基因的荧光定量PCR反应试剂包括EMC8基因的上游引物和下游引物；所述上游引物和下游引物的序列如下：
EMC8_F：5’-CCCATGCTGGAGGTGGCTCT-3’，
EMC8_R：5’-GGACTGGCATCCTTTACTCG-3’。
根据本发明优选的，所述胃癌检测试剂盒还包括内参体系。
进一步优选的，所述内参体系为内参基因β-actin(beta-actin)的荧光定量PCR的检测体系，包括β-actin基因的上游引物和下游引物；所述上游引物和下游引物的序列如下：
β-actin_F：5’-GAAGAGCTACGAGCTGCCTGA-3’，
β-actin_R：5’-CAGACAGCACTGTGTTGGCG-3’。
根据本发明优选的，所述试剂盒中还包括用于荧光定量PCR的酶液和缓冲液体系，为现有的市购产品。
上述胃癌检测试剂盒在胃癌早期诊断中的应用。
有益效果：
1、本发明首次揭示了EMC8基因与胃癌相关，在胃癌患者中EMC8基因的表达水平显著升高且具有统计学意义。基于此，本发明将EMC8基因的检测试剂应用于制备胃癌的检测试剂盒，制备得到的试剂盒具有方便、快捷等特点，可用于胃癌的早期诊断领域，为胃癌患者的确诊提供指导。
2、本发明中所述EMC8基因作为胃癌早期诊断的标志物具有重要参考价值。根据EMC8 基因设计的试剂盒可用于胃癌的筛查，有着较高的临床使用价值及推广价值。
附图说明
图1是实施例1中统计学检验分析结果图。
具体实施方式
下面结合实验例对本发明的技术方案作进一步描述，但是本发明的保护范围并不仅限于此。实施例中涉及的试剂及药品，若无特殊说明，均为普通市售产品；实施例中涉及的实验步骤，若无特殊说明，均为本领域常规操作。
实施例1、EMC8基因在胃癌患者中的表达水平
1、检测90个样本，分别来自45例胃癌患者，其中每例患者均取癌组织和癌旁组织样本，共90个样本(45对癌组织和癌旁组织)的cDNA。该90个样本的cDNA购买于上海芯超生物科技有限公司，型号为胃癌MecDNA-HStmA030CS01和MecDNA-HStmA060CS01。
2、荧光定量PCR：
根据NCBI Gene数据库Gene ID为10328所示的EMC8基因设计引物，具体如下：
EMC8_F：5’-CCCATGCTGGAGGTGGCTCT-3’，
EMC8_R：5’-GGACTGGCATCCTTTACTCG-3’。
以β-actin(beta-actin)基因作为内参基因进行qPCR，所述β-actin基因NCBI的Gene 数据库Gene ID为60；
内参基因β-actin的引物序列如下：
β-actin_F：5’-GAAGAGCTACGAGCTGCCTGA-3’，
β-actin_R：5’-CAGACAGCACTGTGTTGGCG-3’。
荧光定量PCR体系：总反应体系为10μL；2×SYBR Green PCR Master Mix 5μL，QNROX Reference Dye 0.05μL，上游引物稀释液0.7μL(终浓度0.7μM)，下游引物稀释液0.7μL(终浓度0.7μM)，RNase-Free water加cDNA溶解液3.55μL。反应试剂2×SYBR Green PCRMaster Mix，QN ROX Reference Dye购买自QuantiNovaTM 
Green PCR Kit。
反应条件(最大/快速模式)：PCR初始活化步骤，95℃，2分钟；两步循环，变性95℃，5秒；退火/延伸步骤，60℃，10秒，共40循环。仪器为赛默飞QuantStuidio 3。
通过以上荧光定量PCR获得45对来自胃癌患者的癌组织和癌旁组织样本中EMC8基因的表达水平数据。
3、统计学分析：
以2-ΔΔCt法数据进行数据标准化及分析，对每例胃癌患者(分别有一个癌组织样本和一个癌旁组织样本)，分别进行2-ΔΔCt法进行计算，以计算出目的基因在每例胃癌患者的表达情况。
ΔCt＝目的基因Ct值-内参基因Ct值，ΔΔCt＝癌样本ΔCt值-癌旁样本ΔCt值，2-ΔΔCt反映每例胃癌患者的癌组织样本目的基因的相对表达水平。对实验检测的原始数据进行质控，其中取CT平均值的基本方法为，目的基因CT值取重复样本复孔平均值；内参基因CT值取重复样本复孔平均值。对数据进行质控后，分别按照以下两种方法分别进行分析。
①.单样本单侧t检验，H0：为胃癌患者中EMC8的相对表达水平为1，H1：为胃癌患者中EMC8的相对表达水平大于1，取α＝0.1000。此次检测分析，样本例数为n＝45例，单样本单侧t检验，对EMC8的mRNA相对表达水平进行统计学分析，取mu＝1，α＝0.1000(单侧)。
统计结果，t＝1.7488，p-value＝0.04365。经检验，按α水准拒绝H0。在45例胃癌中的EMC8的mRNA的相对表达水平平均为1.2024，因此胃癌患者中EMC8高表达且具有统计学意义。
②.u检验，样本均数与总体均数的比较，H0：为μ＝1.0000，H1：为μ>1.0000，α＝0.1000 (单侧)
统计结果，u＝1.7488，p＝0.040163。经检验，按α水准拒绝H0。在45例胃癌中的EMC8 的mRNA的相对表达水平平均为1.2024，因此胃癌患者中EMC8高表达且具有统计学意义。
以上分析通过简明统计14.0(Concise Statistics，CS14.0)计算。如图1所示，以上统计结果说明胃癌患者中EMC8基因的表达水平显著升高，具有统计学意义。可以根据EMC8基因的表达水平进行胃癌的早期诊断，因此可基于EMC8基因制作用于胃癌早期诊断的试剂盒。
Claims (8)
1.EMC8基因的检测试剂在制备胃癌检测试剂盒中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述EMC8基因的NCBI Gene数据库Gene ID为10328。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述胃癌检测试剂盒为荧光定量PCR检测试剂盒。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述胃癌检测试剂盒用于检测细胞、组织、血浆或血清中的EMC8基因。
5.一种胃癌检测试剂盒，其特征在于，包括EMC8基因的荧光定量PCR反应试剂。
6.如权利要求5所述的胃癌检测试剂盒，其特征在于，所述EMC8基因的荧光定量PCR反应试剂包括EMC8基因的上游引物和下游引物；所述上游引物和下游引物的序列如下：
EMC8_F：5’-CCCATGCTGGAGGTGGCTCT-3’，
EMC8_R：5’-GGACTGGCATCCTTTACTCG-3’。
7.如权利要求5所述的胃癌检测试剂盒，其特征在于，所述胃癌检测试剂盒还包括内参体系；所述内参体系为内参基因β-actin(beta-actin)的荧光定量PCR的检测体系，包括β-actin基因的上游引物和下游引物；所述上游引物和下游引物的序列如下：
β-actin_F：5’-GAAGAGCTACGAGCTGCCTGA-3’，
β-actin_R：5’-CAGACAGCACTGTGTTGGCG-3’。
8.权利要求5所述的胃癌检测试剂盒在胃癌早期诊断中的应用。
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