CN115554472A - 一种用于移植的生物组织处理方法 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及组织移植领域，具体公开了一种用于移植的生物组织处理方法，包括以下步骤：摘取组织；前清洗；高压处理：将组织和处理液一起放入包装袋内，密封包装袋后，将包装袋放入流体介质中，对包装袋施加净水压力，其中，处理液中的成分包括核酸分解酶和缓冲液；后清洗：对高压处理后的组织进行清洗。本申请可以很好地改善超高流体静压力对细胞组织的脱细胞过程中的稳定性，而且得到的脱细胞组织细胞毒性小、细胞诱导分化效果优异。

Description

一种用于移植的生物组织处理方法
技术领域
本申请涉及组织移植领域，更具体地说，它涉及一种用于移植的生物组织处理方法。
背景技术
组织移植过程是将自体组织或人工生物材料等移植到身体的某一部位，从而可以恢复由于先天性或后天性因素引起的畸形或组织缺损。组织移植通常包括皮肤移植、骨及软骨移植、真皮及脂肪移植、黏膜移植、筋膜移植、肌移植、神经移植、复合组织移植、生物材料填入以及组织工程化组织移植等。
相较于以牺牲自体健康组织为代价的自体组织移植，人工生物材料移植逐渐成为组织移植中的热门方案，但是，机体对人工材料通常存在排异反应。为了解决上述问题，脱细胞技术走入了大众视野。
脱细胞技术是通过化学和物理的方法去除异体或异种组织中的细胞，从而形成无免疫原性或低免疫原性的生物组织支架。对于生物组织的脱细胞方式有使用表面活性剂、使用酶、使用酸化剂和使用超高流体静压力处理等。其中超高流体静压力处理后的脱细胞组织，具有细胞毒性小、诱导细胞分化效果好等优点。
不过，发明人发现，在利用超高流体静压力处理处理的细胞组织的时候，需要对温度和压力进行控制，但是有时会出现在相同温度和压力的处理条件下，最终获得的脱细胞组织性质不一致的情况。说明超高流体静压力对细胞组织的脱细胞过程存在不稳定的问题，这对脱细胞组织的临床应用中，是十分严重的问题。
发明内容
为了提高超高流体静压力处理细胞组织的稳定性，并获得细胞毒性小、诱导细胞分化效果好的脱细胞组织。本申请提供一种用于移植的生物组织处理方法。
本申请提供的一种用于移植的生物组织处理方法，采用如下的技术方案：
一种用于移植的生物组织处理方法，包括以下步骤：
摘取组织；
前清洗；
高压处理：将组织和处理液一起放入包装袋内，密封包装袋后，将包装袋放入流体介质中，对包装袋施加净水压力，其中，处理液中的成分包括核酸分解酶和缓冲液；
后清洗：对高压处理后的组织进行清洗。
通过采取上述技术方案，由于利用超高流体静压力获得脱细胞组织的过程需要在流体介质中进行，因此发明人在研究过程中，初始时通过改变流体介质的种类来提高对生物组织处理的稳定性。发明人分别利用水、生理盐水、生理盐水和甘油的混合液、葡萄糖等作为流体介质，来对生物组织进行超高流体静压力处理，但是结果依然不理想。发明人猜想可能是生物组织中残留的细胞成分影响到了脱细胞的过程。
紧接着发明人想到核酸分解酶可以利于生物组织中核酸成分的分解，因此发明人将核酸分解酶直接加入了流体介质中，从而使得核酸分解酶和超高流体静压力配合，对生物组织进行脱细胞化。结果发明人发明人意外发现，核酸分解酶的加入，提高了对生物组织中细胞成分的去除效率。但是对于脱细胞过程的稳定性依然没有很好地改善。
发明人又经过了大量的试验和研究，都没有找到提高脱细胞过程稳定性的办法，最后发明人顿悟到，虽然利用超高流体静压力获得脱细胞组织的过程需要在流体介质中进行，本领域技术人员本能地想到对流体介质的种类进行改变，但是是否可以换个角度思考问题？因此发明人利用包装袋对生物组织进行预先包装，并在包装袋中放入核酸分解酶和缓冲液的混合液作为处理液，将生物组织和处理液从超高流体静压力处理的大环境中相对隔离开来。最终发明人发现，此操作可以很好地改善超高流体静压力对细胞组织的脱细胞过程中的稳定性，而且将核酸分解酶和缓冲液混合的处理液和生物组织一起放入包装袋中，还可以大大提高对生物组织的处理效率，得到的脱细胞组织细胞毒性小、细胞诱导分化效果优异。
优选的，所述缓冲液包括PBS缓冲液、HEPES缓冲液中的至少一种。
优选的，所述高压处理中，包装袋至少有两层，组织和处理液位于最内侧的包装袋中，其余包装袋内填充液体介质。
通过采用上述技术方案，采用至少两层的包装袋，最后得到的脱细胞组织性能更为优异。
优选的，所述高压处理中，包装袋有两层，组织和处理液位于最内侧的包装袋中，外侧包装袋内填充液体介质，处理液的密度大于液体介质的密度。
通过采取上述技术方案，发明人在研究中心发现，当处理液的密度大于液体介质的密度的时候，脱细胞过程更加稳定，发明人猜测，这可能是因为在压力传递到生物细胞组织上的过程中，处理液的密度更大，可以减少超高净水压力大环境的压力对包装袋中小环境压力的影响，使得压力更加稳定且均匀地作用在生物组织上。
优选的，所述高压处理步骤中，将包装袋放入高压设备中进行高压处理，所述高压设备包括基座、加压仓和注水组件，所述加压仓包括固定仓和移动仓，所述固定仓固定连接在所述基座上，所述固定仓的内壁为圆周壁且轴向一端开口设置，所述移动仓的外周为圆周壁且轴向一端开口设置，所述移动仓的开口端插入所述固定仓内，所述移动仓的外周壁和所述固定仓的内周壁贴合，所述固定仓的开口端设置有第一密封件，所述第一密封件和所述移动仓的外周壁抵接，所述基座上设置有用于驱动所述移动仓滑移或者原地转动的驱动组件；所述固定仓的内侧壁上固定连接有导向套，所述导向套内滑移连接有载物套，所述导向套和所述载物套上均贯穿设置有通水槽；所述载物套的外周壁上开设有螺旋弧槽，且所述载物套的外周壁上还开设有平直弧槽，所述平直弧槽沿所述载物套轴向贯穿所述载物套，所述平直弧槽和所述螺旋弧槽相通设置，所述载物套伸出所述导向套的一端位于所述移动仓内，所述移动仓内壁上转动连接有导向球，所述导向球和所述平直弧槽一一对应设置，所述导向球远离所述移动仓的一端插入所述平直弧槽或所述螺旋弧槽中，所述导向球的球壁和所述平直弧槽槽壁或所述螺旋弧槽槽壁抵接；所述注水组件和所述固定仓相通设置。
通过采取上述技术方案，由于固定仓和移动仓分体设置，因此在移动仓远离固定仓且载物套暴露在固定仓外侧的时候，方便对组织产品进行存放和拿取。驱动组件使得移动仓沿轴向滑移，导向球沿着平直弧槽滚动，即可实现移动仓在固定仓沿轴向的滑移，方便对加压仓进行扣合。并且，在驱动组件带动载物套远离转动的时候，使得导向球恰好进入到螺旋弧槽中，使得载物套和移动仓之间发生类似螺纹进给的运动，从而载物套可以在导向套上滑移，实现载物套进出导向套进而固定仓；从而本申请导向球、平直弧槽和螺旋弧槽配合、载物套和移动仓配合，实现移动仓沿轴向滑移的同时，可以实现载物套的滑移，便于移动仓和载物套的收纳，从而可以便于工作人员拿取和存放产品。
优选的，所述导向套的内周壁和所述载物套的外周壁均设置有磁性层。
通过采取上述技术方案，可以增加导向套和载物套之间的摩擦力，对载物套进行摩擦定位，减少载物套的随意移动。
优选的，所述驱动组件包括螺纹轴杆、驱动环座、压紧块和进给螺块，所述螺纹轴杆固定连接在所述移动仓伸出所述固定仓的一端，所述驱动环座转动连接在所述基座上，所述基座上设置有用于驱动所述驱动环座转动的驱动件，所述螺纹轴杆远离所述移动仓的一端穿过所述驱动环座的环内壁，所述螺纹轴杆外周壁和所述驱动环座的环内壁之间有空隙，所述进给螺块至少有三个且沿所述驱动环座的径向滑移连接在所述驱动环座环内壁上，至少三个的所述进给螺块沿所述驱动环座的周向均布，所述进给螺块相对于所述螺纹轴杆的一端和所述螺纹轴杆抵接并螺纹连接；所述压紧块至少有三个且沿所述驱动环座的径向滑移连接在所述驱动环座环内壁上，所述压紧块相对于所述螺纹轴杆的一端和所述螺纹轴杆之间有空隙，至少三个的所述压紧块沿所述驱动环座的周向均布；至少三个的所述压紧块和至少三个的所述进给螺块滑移方向相反，所述驱动环座上设置有驱动所述进给螺块和所述压紧块滑移的动力组件，所述基座上还沿所述螺纹轴杆的轴向滑移设置有导向块，所述导向块和所述螺纹轴杆之间设置有联动组件。
通过采取上述技术方案，驱动环座转动后通过啮合作用带动第一齿轮和第二齿轮转动，然后在第一锥齿轮组和第二锥齿轮组的换向作用喜爱，使得第一螺套和第二螺套转动，从而第一螺套和第一螺块之间发生螺纹进给，第二螺套和第二螺块之间发生螺纹进给。从而只要使得第一螺块和第二螺块的进给方向相反，即可使得压紧块和进给螺块沿着相反方向滑移；因此在压紧块抵紧在螺纹轴杆上，导向块和螺纹轴杆分离，即可利用驱动转座带动螺纹转杆转动，进而移动仓转动；当压紧块远离螺纹轴杆，进给螺块抵接在螺纹轴杆上且恰好和螺纹轴杆上的螺纹配合，同时，导向块和螺纹轴杆被联动组件相对固定在一起，因此驱动环座转动的时候，进给螺块即可和螺纹轴杆轴杆之间发生螺纹进给，使得螺纹轴杆带动移动仓沿着轴向滑移，方便快捷。
优选的，所述动力组件包括驱动齿环、第一齿轮、第二齿轮、第一螺块、第二螺块、第一螺套和第二螺套，所述驱动环座内设置有容纳腔，所述驱动齿环转动连接在所述容纳腔的腔壁上，所述容纳腔的腔壁上设置有用于带动驱动齿轮转动的驱转件。所述第一齿轮和所述第二齿轮均转动连接在所述容纳腔腔壁上且均和所述驱动齿环啮合，所述第一齿轮和所述进给螺块一一对应设置，所述第二齿轮和所述压紧块一一对应设置；所述第一螺套通过第一锥齿轮组和所述第一齿轮连接，所述第一螺块固定连接在所述进给螺块伸入所述容纳腔的一端，所述第一螺块和所述第一螺套的内周壁螺纹连接；所述第二螺套通过第二锥齿轮组和所述第二齿轮连接，所述第二螺块固定连接在所述压紧块伸入所述容纳腔的一端，所述第二螺块和所述第二螺套的内周壁螺纹连接。
优选的，所述注水组件包括供水箱、进水管头、出水管头、连通管和喷水球头，所述固定仓背离所述移动仓的外侧壁上开设有安装槽，所述固定仓相对于开口端的内侧壁上设置有第一管槽和第二管槽，所述第一管槽和第二管槽均和所述安装槽相通；所述进水管头滑移设置在所述安装槽槽壁上，所述基座上设置有驱动所述进水管头滑移的滑移件；所述进水管头位于所述安装槽内的一端密封设置，所述进水管头伸出所述安装槽的一端和供水箱之间设置有通水管和水泵，所述通水管位于所述水泵靠近所述固定仓的一端设置有第一控制阀；所述第一管槽相通于所述安装槽的一端和所述第二管槽相通于所述安装槽一端沿所述进水管头滑移方向排列设置；所述进水管头的周壁上贯穿设置有通水口，所述出水管头安装在所述第一管槽槽壁上，所述连通管设置在所述第二管槽槽壁上，所述连通管靠近所述进水管头的一端和所述出水管头靠近所述进水管头的一端均设置有第二密封件，所述通水口的槽壁和所述出水管头相通或者和所述连通管相通，所述喷水球头固定连接在所述固定仓相对于开口端的内壁上，所述喷水球头内设置有若干走水孔道，所述走水孔道贯穿所述喷水球头伸入所述固定仓的球壁，所述连通管远离所述进水管头的一端和所述喷水球头连接并和所有所述走水孔道相通；所述固定仓顶端连通有排气管，所述排气管上安装有第二控制阀。
通过采取上述技术方案，在通水口和出水管头相通的时候，供水箱、通水管、水泵和进水管头、出水管头配合，正常向加压仓中注入流体介质。在高压处理结束后，通过移动进水管头，使得通水口和连通管相通，即可使得流体介质或者清洗水进入到喷水球头中，受到走水孔道的导向作用，流体介质或者清洗水多角度喷射进入到固定仓中，可以对固定仓和移动仓进行一定的清理，提高脱细胞组织处理过程的洁净性。
综上所述，本申请具有如下效果：
1.本申请将核酸分解酶和缓冲液的混合液作为处理液，然后对处理液和生物组织进行预先包装后再放入高压设备的流体介质中，将生物组织和处理液从超高流体静压力处理的大环境中相对隔离开来，并在20-25℃的温度下对生物组织进行高压处理。可以很好地改善超高流体静压力对细胞组织的脱细胞过程中的稳定性，并且可以提高对生物组织的处理效率，得到的脱细胞组织细胞毒性小、细胞诱导分化效果优异。
2.本申请利用缓冲液搭配核酸分解酶作为处理液，可以适用于不同类型生物组织的脱细胞处理。
3.本申请提供了一种高压设备，可以便捷地实现对产品的存放和拿取，方便快捷。
附图说明
图1是本申请实施例3中高压设备的结构示意图。
图2是图1中沿A-A线的剖视图。
图3是用以体现本申请实施例3中移动仓结构的爆炸图。
图4是用以体现本申请实施例3中注水组件结构的示意图。
图5是图4中沿B-B线的剖视图。
图6是图5中C处的放大图。
图7是用以体现本申请实施例3中驱动组件结构的示意图。
图8是图7中沿D-D线的剖视图。
图9是用以体现本申请实施例3中动力组件结构的示意图。
图10是用以体现本申请实施例3中联动组件结构的示意图。
图11是图10中沿E-E线的剖视图。
附图标记说明：1、基座；11、第一基块；2、加压仓；21、固定仓；211、排气管； 212、第二控制阀；213、排液管；214、第三控制阀；22、移动仓；221、第二基块；23、第一密封件；24、第一连杆；25、导向套；26、载物套；261、螺旋弧槽；262、平直弧槽；27、磁性层；28、通水槽；29、导向球；291、环套；3、注水组件；31、供水箱；32、进水管头； 321、通水口；322、第二密封件；33、出水管头；34、连通管；35、喷水球头；351、走水孔道；36、安装槽；361、第一管槽；362、第二管槽；37、第三基块；38、滑移件；39、通水管；391、水泵；392、第一控制阀；4、驱动组件；41、螺纹轴杆；42、驱动环座；43、压紧块；44、进给螺块；45、第一轴座；46、驱动件；461、第一电机；462、驱动齿轮；47、导向块；5、联动组件；51、托块；52、压块；53、升降螺杆；54、升降螺环；55、第一弧槽；56、第二弧槽；57、让位槽；58、第三电机；59、动力齿轮；6、动力组件；61、驱动齿环；62、第一齿轮；63、第二齿轮；64、第一螺块；65、第二螺块；66、第一螺套；67、第二螺套；68、容纳腔；69、驱转件；691、第二电机；692、驱转齿轮；7、第一锥齿轮组； 71、第一换向锥齿轮；72、第一驱动锥齿轮；8、第二锥齿轮组；81、第二换向锥齿轮；82、第二驱动锥齿轮。
具体实施方式
以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。
实施例
实施例1
本实施例1提供了一种用于移植的生物组织处理方法。
一种用于移植的生物组织处理方法，包括以下步骤：
步骤一：摘取组织；
在4℃条件下将食用猪颈动脉血管切成1厘米长的小段。
步骤二：前清洗；
用生理盐水作为清洗液，将摘取后的猪心脏组织放入到清洗液中，25℃条件下振荡6小时，完成清洗。
步骤三：高压处理；
将清洗后的血管组织和处理液一起放入第一个包装袋内，然后对包装袋进行熔覆，从而密封包装袋。然后再将装有血管组织的包装袋放入第二个包装袋中，同时在第二个包装袋中加入液体介质，然后对第二个包装袋进行熔覆，密封第二个包装袋。并且在本实施例中，两层包装袋中均没有气泡。
最后将包装好的两层包装袋放入高压处理装置中，高压处理装置内填充有流体介质，在20℃的温度下，对包装袋施加980MPa的流体静压力，压力施加时间为10分钟，完成脱细胞处理。
其中处理液为核酸分解酶和HEPES缓冲液的混合物，核酸分解酶和HEPES缓冲液的质量用量比为1：7。液体介质为水。
步骤四：后清洗；
将高压处理后的血管组织放入清洗液中，4℃下振荡清洗4天，然后用80wt％乙醇水溶液振荡清洗3天，再利用HEPES缓冲液振荡清洗2周，得到脱细胞组织。清洗液和本实施例中处理液为相同物质。
实施例2
本实施例1提供了一种用于移植的生物组织处理方法。
一种用于移植的生物组织处理方法，包括以下步骤：
步骤一：摘取组织；
在4℃条件下将食用猪骨髓切成1厘米×1厘米的小块。
步骤二：前清洗；
用生理盐水作为清洗液，将摘取后的猪心脏组织放入到清洗液中，25℃条件下振荡6小时，完成清洗。
步骤三：高压处理；
将清洗后的猪骨髓组织和处理液一起放入第一个包装袋内，然后对包装袋进行熔覆，从而密封包装袋。然后再将装有猪骨髓组织的包装袋放入第二个包装袋中，同时在第二个包装袋中加入液体介质，然后对第二个包装袋进行熔覆，密封第二个包装袋。并且在本实施例中，两层包装袋中均没有气泡。
最后将包装好的两层包装袋放入高压处理装置中，高压处理装置内填充有流体介质，在20℃的温度下，对包装袋施加980MPa的流体静压力，压力施加时间为10分钟，完成脱细胞处理。
其中处理液为核酸分解酶和PBS缓冲液的混合物，核酸分解酶和HEPES缓冲液的质量用量比为1：9.3。液体介质为水。
步骤四：后清洗；
将高压处理后的猪骨髓组织放入清洗液中，在37℃的环境下振荡清洗2周后，得到脱细胞组织。清洗液和本实施例中的清洗液为相同物质。
实施例3
本实施例提供了一种高压设备。
如图1和图2所示，高压设备包括基座1、加压仓2和注水组件3；本实施例中的加压仓2包括圆桶型的固定仓21和圆桶形的移动仓22，固定仓21的轴向一端和移动仓22的轴向一端均开口设置；基座1上设置有第一基块11，固定仓21固定连接在第一基块11的顶端且轴向水平，移动仓22的开口端插入固定仓21内，而且移动仓22的外周壁和固定仓 21的内周壁贴合。移动仓22即可以在固定仓21内沿轴向滑移，也可以沿着自身圆周方向转动。固定仓21的开口端设置有第一密封件23，本实施例中的第一密封件23为密封圈，第一密封件23的环内壁和移动仓22的外周壁抵接，而且基座1上设置有用于驱动移动仓 22转动或者滑移的驱动组件4。注水组件3和固定仓21相连通。
如图2和图3所示，在本实施例中，固定仓21的内侧圆周壁远离开口端一侧固定连接有第一连杆24，第一连杆24上固定连接有圆形的导向套25，导向套25和固定仓21的共中轴线；导向套25内插设有圆形的载物套26，而且导向套25的内周壁和载物套26的外周壁均涂覆有磁性层27。载物套26在导向套25的内周壁上沿导向套25轴向滑移，导向套25 和载物套26上均贯穿设置有通水槽28。载物套26的外周壁上开设有螺旋弧槽261，而且载物套26的外周壁上还开设有两个平直弧槽262，两个平直弧槽262沿载物套26轴向贯穿载物套26且沿载物套26周向均布，同时，平直弧槽262和螺旋弧槽261相通设置，平直弧槽 262和螺旋弧槽261的宽度和弧度均相同且平滑过渡。
如图2和图3所示，载物套26伸出导向套25的一端位于移动仓22内，移动仓22 内壁通过第二基块221固定连接有环套291，环套291和平直弧槽262一一对应设置；环套 291内转动连接有导向球29，环套291的环周壁和导向球29球壁贴合，而且导向球29远离第二基块221的一端伸出环套291，导向球29伸出环套291的一端插入平直弧槽262，而且导向球29的球壁和平直弧槽262槽壁贴合。
初始时，移动仓22远离固定仓21，载物套26大部分伸出导向套25且位于固定位置，将产品放入载物套26上，然后启动驱动组件4，移动仓22沿轴向朝向固定仓21移动，移动仓22插入到固定仓21，导向球29在平直弧槽262中滚动。移动仓22达到规定位置后，驱动组件4带动移动仓22原地转动，此时导向球29进入到螺旋弧槽261中，导向球29球壁和螺旋弧槽261槽壁贴合并在螺旋弧槽261中滚动，从而载物套26沿着轴向向导向套25 中移动，载物套26达到规定位置后，导向球29移动到平直弧槽262中，此时再利用驱动组件4带动移动仓22沿轴向移动，即可使得移动仓22到固定仓21的合适位置中，完成产品装载。
然后利用注水组件3向固定仓21和移动仓22中注入流体介质并使得固定仓21和移动仓22中无气泡。然后根据需要对加压仓2进行加压，加压方式可以是保持加压仓2内容积不变，通过注水组件3继续加入流体介质而进行加压；或者是启动驱动组件4，使得导向球29继续在平直弧槽262中滑移，使得移动仓22向固定仓21中滑移而减小加压仓2的容积，进行加压。
高压处理结束后，释放加压仓2的压力，排出加压仓2中的流体介质。然后启动驱动组件4，使得移动仓22沿轴向远离固定仓21，达到规定位置后，再驱动移动仓22原地转动，导向球29在螺旋弧槽261中滚动，使得载物套26伸出导向套25，再带动移动仓22沿轴向移动，导向球29在平直弧槽262中滚动，使得移动仓22远离固定仓21，此时从暴露在外侧的载物套26中取出产品即可。
如图4和图5所示，注水组件3包括供水箱31、进水管头32、出水管头33、连通管 34和喷水球头35，固定仓21背离移动仓22的外侧壁上开设有方形的安装槽36，进水管头 32外周壁为方形管且沿固定仓21轴向滑移设置在安装槽36槽壁上，进水管头32位于安装槽36内的一端密封设置，进水管头32外周壁和安装槽36槽壁贴合。基座1上固定连接有第三基块37，第三基块37上安装有滑移件38，本实施例中的滑移件38是气缸，滑移件38 的驱动端和进水管头32伸出固定仓21的一端外周壁固定连接。而且进水管头32伸出固定仓21的一端连接有通水管39，通水管39通过水泵391和供水箱31连接，而且通水管39 位于水泵391靠近固定仓21的一端设置有第一控制阀392。
如图5和图6所示，安装槽36顶壁上沿固定仓21轴向排列开设有第一管槽361和第二管槽362，第一管槽361位于第二管槽362远离移动仓22的一侧。而且第一管槽361 和第二管槽362贯穿固定仓21相对于开口端的内侧壁。出水管头33安装在第一管槽361槽壁上，出水管头33和第一管槽361槽壁之间密封连接且和固定仓21内部相通。连通管34 固定安装在第二管槽362槽壁上，喷水球头35固定连接在固定仓21相对于开口端的内壁上，喷水球头35内开设有若干走水孔道351，走水孔道351贯穿喷水球头35伸入固定仓21的球壁，连通管34远离进水管头32的一端和喷水球头35密封连接，而且连通管34远离出水管头33的一端和所有走水孔道351相通。在本实施例中，连通管34靠近进水管头32的一端和出水管头33靠近进水管头32的一端均固定连接有第二密封件322，第二密封件322为密封圈，两个第二密封件322始终和进水管头32顶壁抵接；进水管头32的顶壁上还贯穿设置有通水口321。而且固定仓21顶端连通有排气管211，排气管211上安装有第二控制阀 212。固定仓21底端连通排液管213，排液管213上安装有第三控制阀214。
初始时，通水口321和出水管头33相通，出水管头33处的第二密封件322位于通水口321周侧，打开第一控制阀392和第二控制阀212，同时，连通管34上的第二密封件 322和进水管头32密封抵接而封闭连通管34。启动水泵391，即可稳定地向固定仓21中加入流体介质，直至加压仓2中无气泡后，关闭第二控制阀212和第一控制阀392，关闭水泵 391，完成流体介质的注入，后续进行高压处理。完成高压处理后，打开第三控制阀214，排出流体介质后，将移动仓22从固定仓21中滑移出来，进行产品拿取。在高压处理结束、取出产品后，启动滑移件38，使得进水管头32朝向移动仓22滑移，使得通水口321和连通管34相通，连通管34上的第二密封件322在通水口321周侧形成密封。然后向供水箱 31中加入清洗水，然后打开第一控制阀392，启动水泵391，清洗水通过连通管34进入到走水孔道351中，清洗水再经由走水孔道351喷射到加压仓2中，对加压仓2进行一定的清洗即可。另外，本实施例中的注水组件也可以包括水箱、连接在水箱和固定仓21之间的水管，水管通过泵和水箱连接，水管位于泵远离水箱的一端安装有阀。注水组件只完成向加压仓2中的注入流体介质的工作，不进行清洗工作。
如图7和图8所示，本实施例中的驱动组件4包括螺纹轴杆41、驱动环座42、压紧块43和进给螺块44，螺纹轴杆41固定连接在移动仓22伸出固定仓21的一端，螺纹轴杆 41和移动仓22共中轴线。基座1上固定连接有第一轴座45，驱动环座42转动连接在第一轴座45上且和移动仓22共中轴线，基座1上设置有驱动件46，本实施例中的驱动件46包括固定安装在基座1上的第一电机461和固定连接在第一电机461驱动端的驱动齿轮462，驱动齿轮462和驱动环座42的环外壁啮合。螺纹轴杆41远离移动仓22的一端穿过驱动环座42的环内壁，螺纹轴杆41外周壁和驱动环座42的环内壁之间有空隙。而且在本实施例中基座1沿螺纹轴杆41的轴向滑移连接有导向块47，导向块47和螺纹轴杆41之间设置有联动组件5。
如图8和图9所示，本实施例中的进给螺块44有四个且均沿驱动环座42的径向滑移连接在驱动环座42环内壁上，四个进给螺块44沿驱动环座42周向均布且共圆设置；本实施例中的压紧块43也有四个且均沿驱动环座42的径向滑移连接在驱动环座42环内壁上，四个压紧块43沿驱动环座42周向均布且共圆设置，四个进给螺块44位于四个压紧块43远离移动仓22的一侧；压紧块43和进给螺块44的滑移方向相反，驱动环座42上设置有驱动进给螺块44和压紧块43滑移的动力组件6。
启动联动组件5，将导向块47和螺纹轴杆41相对固定在一起，启动动力组件6，使得四个进给螺块44抵接在螺纹轴杆41上并和螺纹轴杆41上的螺纹配合，同时压紧块43远离螺纹轴杆41。启动驱动件46，驱动环座42转动，进给螺块44和螺纹轴杆41之间发生螺纹进给，螺纹轴杆41可以带动移动仓22沿着轴向滑移。操作联动组件5，将导向块47和螺纹轴杆41分离，启动动力组件6，使得进给螺块44远离螺纹轴杆41，同时压紧块43抵紧在螺纹轴杆41上，此时转动驱动环做，压紧块43带动螺纹轴杆41原地转动，从而可以带动移动仓22原地转动。
如图8和图9所示，动力组件6包括驱动齿环61、第一齿轮62、第二齿轮63、第一螺块64、第二螺块65、第一螺套66和第二螺套67，驱动环座42内设置有容纳腔68，驱动齿环61转动连接在容纳腔68的腔壁上且和驱动环座42共中轴线，驱动齿环61位于螺纹轴杆41的周侧且位于压紧块43和进给螺块44之间。而且容纳腔68腔壁上设置有驱转件69，驱转件69包括固定连接在容纳腔68腔壁上的第二电机691和固定连接在第二电机691上的驱转齿轮692，驱转齿轮692和驱动齿环61环内壁啮合。第一齿轮62和第二齿轮63均转动连接在容纳腔68腔壁上，第一齿轮62和进给螺块44一一对应设置，第二齿轮63和压紧块43一一对应设置。而且四个第一齿轮62和四个第二齿轮63进和驱动齿环61环外壁啮合。
第一螺套66通过第一锥齿轮组7和第一齿轮62连接，第一锥齿轮组7包括同轴连接在第一齿轮62上的第一驱动锥齿轮72和固定连接在第一螺套66上的第一换向锥齿轮71，第一换向锥齿轮71和第一驱动锥齿轮72啮合。第一螺块64固定连接在进给螺块44伸入容纳腔68的一端，第一螺块64和第一螺套66的内周壁螺纹连接。第二螺套67通过第二锥齿轮组8和第二齿轮63连接，第二锥齿轮组8包括同轴连接在第二齿轮63上的第二驱动锥齿轮82和固定连接在第二螺套67上的第二换向锥齿轮81，第二换向锥齿轮81和第二驱动锥齿轮82啮合。第二螺块65固定连接在压紧块43伸入容纳腔68的一端，第二螺块65和第二螺套67的内周壁螺纹连接。
驱动第二电机691，使得驱动齿环61正转，从而第一齿轮62和第二齿轮63转动，第一齿轮62通过第一锥齿轮组7带动第一螺套66转动，第二齿轮63通过第二锥齿轮组8 带动第二螺套67转动，第一螺套66和第一螺块64发生螺纹进给，第二螺套67和第二螺块 65发生螺纹进给，而且第一螺块64和第二螺块65的螺纹进给方向相反，从而压紧块43和进给螺块44反向滑移，压紧块43远离螺纹轴杆41，进给螺块44抵接在螺纹轴杆41上。同理，反转驱动齿环61，即可使得压紧块43抵紧在螺纹轴杆41上，进给螺块44远离螺纹轴杆41。
如图10和图11所示，联动组件5包括托块51、压块52、升降螺杆53和升降螺环 54，托块51固定连接在导向块47顶端，托块51上表面开设有第一弧槽55，第一弧槽55 槽壁光滑，第一弧槽55槽壁和螺纹轴杆41贴合，压块52沿竖直方向滑移设置在托块51上且位于螺纹轴杆41上方，压块52下表面开设有第二弧槽56，第二弧槽56槽壁粗糙，升降螺杆53固定连接在压块52底端，托块51上表面设置有让位槽57，升降螺杆53底端伸入让位槽57中，托块51上固定连接有第三电机58，第三电机58驱动端固定连接有动力齿轮 59，升降螺环54转动连接在托块51上且和升降螺杆53螺纹连接，动力齿轮59和升降螺环 54换外壁啮合。启动第三电机58，动力齿轮59和升降螺环54啮合，升降螺杆53和升降螺环54发生螺纹进给，压块52下移，第二弧槽56抵紧在螺纹轴杆41上，即可将导向块47 和螺纹轴杆41相对固定在一起。
本实施例3的工作原理为：初始时，移动仓22远离固定仓21，载物套26大部分伸出导向套25且位于固定位置，按照实施例1中的脱细胞参数，将包装袋放入载物套26上。驱动第二电机691，压紧块43远离螺纹轴杆41，进给螺块44抵接在螺纹轴杆41上；启动第三电机58，压块52下移，第二弧槽56抵紧在螺纹轴杆41上；启动驱动件46，驱动环座 42转动，螺纹轴杆41带动移动仓22沿轴向朝向固定仓21移动，移动仓22插入到固定仓 21，此过程中导向球29在平直弧槽262中滚动。
移动仓22达到规定位置后，驱动第二电机691，压紧块43抵紧在螺纹轴杆41上，进给螺块44远离螺纹轴杆41；启动驱动件46，驱动环座42转动，螺纹轴杆41带动移动仓 22原地转动；此时导向球29进入到螺旋弧槽261中，导向球29球壁和螺旋弧槽261槽壁贴合并在螺旋弧槽261中滚动，载物套26沿着轴向向导向套25中移动，载物套26达到规定位置后，导向球29移动到平直弧槽262中；此时再启动驱动件46，使得移动仓22到固定仓21的合适位置中，完成产品装载。
启动水泵391，即可稳定地向固定仓21中加入流体介质，直至加压仓2中无气泡后，关闭第二控制阀212和第一控制阀392，关闭水泵391，完成流体介质的注入，后续进行高压处理。处理结束后，排出流体介质，将移动仓22和固定仓21分离，并且移动仓22的移动过程中，载物套26伸出导向套25，然后取出包装袋，完成高压处理。
性能检测
对实施例1和实施例2得到的脱细胞组织进行性能检测，具体如下：
一、脱细胞化DNA比计算：
测定各脱细胞化组织的质量，将其制成检测片备用。
1.检测片的DNA含量测定：将检测片浸渍于蛋白质分解酶溶液中并使其溶解，然后用苯酚/氯仿进行处理而去除蛋白质，利用乙醇沉淀法回收DNA。利用 PicoGreen(LifeTechnologies公司)对回收的DNA进行荧光染色，并测定荧光强度，由此对 DNA进行定量，根据检测片的质量与DNA的量计算出检测片的DNA含量。
(检测片的DNA含量)＝(DNA的量)/(检测片的质量)。
(2)干燥检测片的DNA含量测定：将检测片在60℃的恒温槽中保持12小时后检测片，检测其质量，求出干燥减重比，根据检测片的DNA含量与干燥减重比，算出检测片的每单位干燥质量的DNA含量。
(干燥减重比)＝(经干燥的检测片的质量)/(检测片的质量)。
(干燥检测片的DNA含量)＝(检测片的DNA含量)/(干燥减重比)。
2.计算出脱细胞化DNA比。
按照步骤(1)和步骤(2)的方案，检测未脱细胞化组织的干燥检测片的DNA含量。脱细胞化DNA比计算方式如下：
(脱细胞化DNA比)＝(脱细胞化组织的干燥检测片的DNA含量)/(未脱细胞化组织的干燥检测片的DNA含量)。
二、细胞迁移测试
L929细胞(小鼠成纤维细胞)在37℃用MEM培养基培养24小时以进行饥饿。向24孔板培养皿中添加1mL含有5％脱细胞组织的MEM培养基，且在各孔中设置细胞培养插入物(孔径8μm)。将在MEM培养基中培养的L929细胞接种至插入物(1.0x105个细胞/孔)，且在37℃培养3小时，且测量迁移至插入物下的孔的细胞的数目。细胞数目的测量在DAPI染色之后用荧光显微镜实施，且计算5个孔的平均数目N。
1.神经突增生测试
将PC12细胞(来自大鼠肾上腺髓质的嗜铬细胞瘤)接种至具有含有10％马血清和5％胎牛血清(FBS)的RPMI培养基的胶原包被的24孔板培养皿(1.0x104个细胞/孔)，且在37℃培养24 小时。将培养基更换为含有0.1％马血清的RPMI培养基，且在各孔中设置细胞培养插入物 (孔径8μm)。向插入物中添加200μL含有5％脱细胞组织的盐水，且在添加和不添加50ng 神经生长因子的情况下继续培养24小时。用相差显微镜观察细胞以根据以下标准来估计神经突增生的效果。
2.脱细胞稳定性检测
按照实施例1和实施例2的脱细胞化步骤，分别进行20次脱细胞化处理，然后对20组实施例1的脱细胞组织和20组实施例2的脱细胞组织进行脱细胞化DNA比计算、细胞迁移测试和神经突增生测试。以第一组脱细胞组织为基准，检测其余组脱细胞组织的性能偏差值，性能偏差值＝(|(实施例n性能)-(实施例1性能)|)/(实施例1性能)，最后记录平均值。
上述检测结果见表1
脱细胞组织性能检测表
Figure RE-GDA0003918956950000141
首先由检测结果可知，无论是血管还是带有骨的猪骨髓，本申请得到的脱细胞组织细胞毒性小、细胞诱导分化效果优异；而且无论是实施例1还是实施例2，在经过20次相同步骤的脱细胞处理后，最终脱细胞组织的性能偏差不超过0.01％，说明本申请的脱细胞处理处理过程稳定性良好。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (9)

1.一种用于移植的生物组织处理方法，其特征在于，包括以下步骤：
摘取组织；
前清洗；
高压处理：将组织和处理液一起放入包装袋内，密封包装袋后，将包装袋放入流体介质中，对包装袋施加净水压力，其中，处理液中的成分包括核酸分解酶和缓冲液；
后清洗：对高压处理后的组织进行清洗。
2.根据权利要求1所述的一种用于移植的生物组织处理方法，其特征在于，所述缓冲液包括生理盐水、PBS缓冲液、HEPES缓冲液中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的一种用于移植的生物组织处理方法，其特征在于，所述高压处理中，包装袋至少有两层，组织和处理液位于最内侧的包装袋中，其余包装袋内填充有液体介质。
4.根据权利要求3所述的一种用于移植的生物组织处理方法，其特征在于，所述高压处理中，包装袋有两层，组织和处理液位于最内侧的包装袋中，外侧包装袋内填充液体介质，处理液的密度大于液体介质的密度。
5.根据权利要求1所述的一种用于移植的生物组织处理方法，其特征在于，所述高压处理步骤中，将包装袋放入高压设备中进行高压处理，所述高压设备包括基座(1)、加压仓(2)和注水组件(3)，所述加压仓(2)包括固定仓(21)和移动仓(22)，所述固定仓(21)固定连接在所述基座(1)上，所述固定仓(21)的内壁为圆周壁且轴向一端开口设置，所述移动仓(22)的外周为圆周壁且轴向一端开口设置，所述移动仓(22)的开口端插入所述固定仓(21)内，所述移动仓(22)的外周壁和所述固定仓(21)的内周壁贴合，所述固定仓(21)的开口端设置有第一密封件(23)，所述第一密封件(23)和所述移动仓(22)的外周壁抵接，所述基座(1)上设置有用于驱动所述移动仓(22)滑移或者原地转动的驱动组件(4)；所述固定仓(21)的内侧壁上固定连接有导向套(25)，所述导向套(25)内滑移连接有载物套(26)，所述导向套(25)和所述载物套(26)上均贯穿设置有通水槽(28)；所述载物套(26)的外周壁上开设有螺旋弧槽(261)，且所述载物套(26)的外周壁上还开设有平直弧槽(262)，所述平直弧槽(262)沿所述载物套(26)轴向贯穿所述载物套(26)，所述平直弧槽(262)和所述螺旋弧槽(261)相通设置，所述载物套(26)伸出所述导向套(25)的一端位于所述移动仓(22)内，所述移动仓(22)内壁上转动连接有导向球(29)，所述导向球(29)和所述平直弧槽(262)一一对应设置，所述导向球(29)远离所述移动仓(22)的一端插入所述平直弧槽(262)或所述螺旋弧槽(261)中，所述导向球(29)的球壁和所述平直弧槽(262)槽壁或所述螺旋弧槽(261)槽壁抵接；所述注水组件(3)和所述固定仓(21)相通设置。
6.根据权利要求5所述的一种用于移植的生物组织处理方法，其特征在于，所述导向套(25)的内周壁和所述载物套(26)的外周壁均设置有磁性层(27)。
7.根据权利要求5所述的一种用于移植的生物组织处理方法，其特征在于，所述驱动组件(4)包括螺纹轴杆(41)、驱动环座(42)、压紧块(43)和进给螺块(44)，所述螺纹轴杆(41)固定连接在所述移动仓(22)伸出所述固定仓(21)的一端，所述驱动环座(42)转动连接在所述基座(1)上，所述基座(1)上设置有用于驱动所述驱动环座(42)转动的驱动件(46)，所述螺纹轴杆(41)远离所述移动仓(22)的一端穿过所述驱动环座(42)的环内壁，所述螺纹轴杆(41)外周壁和所述驱动环座(42)的环内壁之间有空隙，所述进给螺块(44)至少有三个且沿所述驱动环座(42)的径向滑移连接在所述驱动环座(42)环内壁上，至少三个的所述进给螺块(44)沿所述驱动环座(42)的周向均布，所述进给螺块(44)相对于所述螺纹轴杆(41)的一端和所述螺纹轴杆(41)抵接并螺纹连接；所述压紧块(43)至少有三个且沿所述驱动环座(42)的径向滑移连接在所述驱动环座(42)环内壁上，所述压紧块(43)相对于所述螺纹轴杆(41)的一端和所述螺纹轴杆(41)之间有空隙，至少三个的所述压紧块(43)沿所述驱动环座(42)的周向均布；至少三个的所述压紧块(43)和至少三个的所述进给螺块(44)滑移方向相反，所述驱动环座(42)上设置有驱动所述进给螺块(44)和所述压紧块(43)滑移的动力组件(6)，所述基座(1)上还沿所述螺纹轴杆(41)的轴向滑移设置有导向块(47)，所述导向块(47)和所述螺纹轴杆(41)之间设置有联动组件(5)。
8.根据权利要求7所述的一种用于移植的生物组织处理方法，其特征在于，所述动力组件(6)包括驱动齿环(61)、第一齿轮(62)、第二齿轮(63)、第一螺块(64)、第二螺块(65)、第一螺套(66)和第二螺套(67)，所述驱动环座(42)内设置有容纳腔(68)，所述驱动齿环(61)转动连接在所述容纳腔(68)的腔壁上，所述容纳腔(68)的腔壁上设置有用于带动驱动齿轮(462)转动的驱转件(69)；所述第一齿轮(62)和所述第二齿轮(63)均转动连接在所述容纳腔(68)腔壁上且均和所述驱动齿环(61)啮合，所述第一齿轮(62)和所述进给螺块(44)一一对应设置，所述第二齿轮(63)和所述压紧块(43)一一对应设置；所述第一螺套(66)通过第一锥齿轮组(7)和所述第一齿轮(62)连接，所述第一螺块(64)固定连接在所述进给螺块(44)伸入所述容纳腔(68)的一端，所述第一螺块(64)和所述第一螺套(66)的内周壁螺纹连接；所述第二螺套(67)通过第二锥齿轮组(8)和所述第二齿轮(63)连接，所述第二螺块(65)固定连接在所述压紧块(43)伸入所述容纳腔(68)的一端，所述第二螺块(65)和所述第二螺套(67)的内周壁螺纹连接。
9.根据权利要求5所述的一种用于移植的生物组织处理方法，其特征在于，所述注水组件(3)包括供水箱(31)、进水管头(32)、出水管头(33)、连通管(34)和喷水球头(35)，所述固定仓(21)背离所述移动仓(22)的外侧壁上开设有安装槽(36)，所述固定仓(21)相对于开口端的内侧壁上设置有第一管槽(361)和第二管槽(362)，所述第一管槽(361)和第二管槽(362)均和所述安装槽(36)相通；所述进水管头(32)滑移设置在所述安装槽(36)槽壁上，所述基座(1)上设置有驱动所述进水管头(32)滑移的滑移件(38)；所述进水管头(32)位于所述安装槽(36)内的一端密封设置，所述进水管头(32)伸出所述安装槽(36)的一端和供水箱(31)之间设置有通水管(39)和水泵(391)，所述通水管(39)位于所述水泵(391)靠近所述固定仓(21)的一端设置有第一控制阀(392)；所述第一管槽(361)相通于所述安装槽(36)的一端和所述第二管槽(362)相通于所述安装槽(36)一端沿所述进水管头(32)滑移方向排列设置；所述进水管头(32)的周壁上贯穿设置有通水口(321)，所述出水管头(33)安装在所述第一管槽(361)槽壁上，所述连通管(34)设置在所述第二管槽(362)槽壁上，所述连通管(34)靠近所述进水管头(32)的一端和所述出水管头(33)靠近所述进水管头(32)的一端均设置有第二密封件(322)，所述通水口(321)的槽壁和所述出水管头(33)相通或者和所述连通管(34)相通，所述喷水球头(35)固定连接在所述固定仓(21)相对于开口端的内壁上，所述喷水球头(35)内设置有若干走水孔道(351)，所述走水孔道(351)贯穿所述喷水球头(35)伸入所述固定仓(21)的球壁，所述连通管(34)远离所述进水管头(32)的一端和所述喷水球头(35)连接并和所有所述走水孔道(351)相通；所述固定仓(21)顶端连通有排气管(211)，所述排气管(211)上安装有第二控制阀(212)。
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