CN115518081A - 一种治疗犊牛腹泻的复合益生菌粉、复合益生菌制剂及其制备方法 - Google Patents
一种治疗犊牛腹泻的复合益生菌粉、复合益生菌制剂及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及复合益生菌粉制剂技术领域，特别是涉及一种治疗犊牛腹泻的复合益生菌粉，含有该复合益生菌粉的复合益生菌制剂及其制备方法。该复合益生菌粉的原料包括植物乳杆菌植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种，以上益生菌配合使用能够调节紊乱的肠道菌群结构，提高机体的免疫力，维护肠道屏障，减少致泻菌和炎症因子，进而改善机体健康水平。该复合益生菌制剂的原料包括上述复合益生菌粉以及益生元、电解质和膳食纤维，不仅能够利用菌种之间的独特协同作用，有效形成益生菌肠道屏障，改善肠道微生态环境，调整受损肠道粘膜恢复，同时还能补充机体流失的电解质，增强免疫细胞活性，达到更快更有效地治疗犊牛腹泻的效果。
Description
技术领域
本发明涉及复合益生菌粉制剂技术领域，特别是涉及一种治疗犊牛腹泻的复合益生菌粉及其制备方法，以及含有该复合益生菌粉的复合益生菌制剂及其制备方法。
背景技术
犊牛腹泻是指犊牛由于肠蠕动亢进、肠内容物吸收不全或吸收困难，致使肠内容物与多量水分被排出体外，粪便呈稀汤或水样，犊牛产生脱水、酸中毒等的一种病症，临床表现为精神沉郁，高热，腹胀，腹痛，废食，呼吸短促，粪便恶臭、发黑、间或混有血丝气泡，急性大量水泻，呈进行性脱水、酸中毒等，是造成犊牛生长发育不良和死亡的主要疾病之一。犊牛腹泻一年四季均可发生，尤其以初春、夏末、秋初气候多变季节多发，发病率高，哺乳期犊牛更容易发生腹泻，约占犊牛发病率的80％，而且发生过腹泻的犊牛在今后的生长过程中还易感染呼吸道疾病，对犊牛的发育、生长、成活等有很大影响，给养牛业造成相当大的经济损失。
当前国内外在临床上多采用抗生素治疗犊牛腹泻，常用药物有庆大霉素、土霉素、头孢哌酮、诺氟沙星、氟派酸等，虽然抗生素治疗具有一定的疗效，但由于犊牛腹泻的致病因素多，抗生素针对性不强，还容易产生耐药性及畜产品药物残留超标等问题，严重危害人畜健康及公共卫生安全。因此，有效控制犊牛腹泻，减少耐药性及抗生素残留，研制出适应性广、高效稳定、低耐药性、环保安全的产品，对促进奶产业持续健康发展具有极其重要的意义。
发明内容
针对以上技术问题，本发明提供一种治疗犊牛腹泻的复合益生菌粉、复合益生菌制剂及其制备方法。该复合益生菌粉通过特定益生菌的组合，一方面能够调节犊牛肠道菌群缺失，调节紊乱的肠道菌群结构，同时能够提高机体的免疫力，进而改善机体健康水平。该复合益生菌制剂含有该复合益生菌粉，还含有益生元和电解质，通过益生菌、益生元和电解质的共同调理，在发挥上述益生菌作用的同时，还能补充因腹泻流失的电解质，纠正肠道酸中毒，治疗犊牛腹泻见效快，疗效好。
为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：
第一方面，本发明实施例提供一种复合益生菌粉，该复合益生菌粉的原料包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)和德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillusdelbrueckii subsp.bulgaricus)。
犊牛肠道内数以亿计的微生物构成了犊牛肠道菌群，这些微生物与机体正常代谢密切相关，当犊牛肠道内微生态平衡一旦遭到破坏，其菌群结构便会受到影响，随之犊牛健康受到威胁。已有研究表明，腹泻犊牛肠道内优势菌群种类及数量有别于健康犊牛肠道菌群，菌种及结构的不同会直接影响到犊牛正常生理代谢，因此用于保持健康犊牛的益生菌制剂并不适用于腹泻犊牛。
本发明通过植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种的配合使用，能够调节紊乱的肠道菌群结构，提高机体的免疫力，维护肠道屏障，减少致泻菌和炎症因子，进而改善机体健康水平。
结合第一方面，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌Lp45。该菌株已于2013年8月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.8072。该菌株为已公开菌株，在公开号为CN103642716A，发明名称为“一种植物乳杆菌及其应用”的专利申请文本中公开。
植物乳杆菌LP45在pH3.0的人工胃液中消化4小时后的存活率可达到122.4％，在0.3％胆盐的液体培养基中4小时后生存率可达到47.8％；在胃肠道上皮细胞的粘附能力为72，粘附力强，并且对于大肠杆菌，金黄色葡萄球菌具有明显的抑制作用。将其应用于该益生菌粉中，既能够使其发挥更好的免疫调节作用，还能有助于肠道损伤部位的修复。
结合第一方面，所述双歧杆菌为双歧杆菌L531。该菌株已于2019年3月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.17329。该菌株为已公开菌株，在公开号为CN113142304A，发明名称为“一种促进人体代谢产生黄金便的益生菌组合物及应用”的专利申请文本中公开。
双歧杆菌L531在pH3.0的人工胃液中消化3小时后，存活率仍能够达到90％以上；在pH8.0的人工肠液中消化5h后，存活率仍达到95％以上。双歧杆菌L531代谢产生的磷壁酸与肠粘膜上皮细胞相互作用，密切结合，与其他厌氧菌群一起共同占据肠道黏膜表面，形成一个生物学屏障，表现出强劲的定植抗；其代谢产生的大量乳酸、醋酸、B族维生素等，能够有效降低肠道pH，促进肠道铁、钙磷元素的利用率，加强蛋白分解。双歧杆菌L531对肠道致泻菌株志贺氏痢疾杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、埃希氏大肠杆菌、绿脓杆菌均有不同程度的拮抗作用，同时还可以作为抗原刺激机体免疫应答，激活巨噬细胞的β-半乳糖苷酶活性，加强和促进吞噬能力，使机体处于一种免疫监视和免疫清除状态，具有免疫调节作用。双歧杆菌L531菌株内不存在质粒DNA，故不存在在肠道中传播耐药性质粒的风险。将其应用于该益生菌粉中，有助于维护肠道黏膜的生物学屏障，提高对铁、钙元素的利用率，拮抗肠道致泻菌株，并加强免疫调节作用。
结合第一方面，所述嗜热链球菌为嗜热链球菌S131。该菌株已于2021年09月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.23336。该菌株为已公开菌株，在公开号为CN113736715A，发明名称为“一株嗜热链球菌S131及其在免疫调节领域中的应用”的专利申请文本中公开。
嗜热链球菌S131是一种耗氧的革兰氏阳性菌，它能够利用葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖及半乳糖代谢产生乳酸和叶酸。嗜热链球菌S131具有多种抗氧胁迫机制，在有机体内具有抗氧化能力，其分泌的SOD具有阻断炎症因子分泌的作用。将其应用于该益生菌粉中，有利于减少炎症因子的产生。
此外，该益生菌粉中还应用了德氏乳杆菌保加利亚亚种，该菌种能够与嗜热链球菌共享生态环境而产生协同作用，同时能够代谢产生多种抗菌素，针对引起犊牛腹泻的致病菌具有很好的抑制作用。该菌种还能够促进饲喂乳中的蛋白和乳糖的分解，延长食糜在肠道中的流通时间，增加肠道对营养物质的吸收，使的腹泻犊牛更快恢复健康。
优选地，所述植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种的活菌数之比为(300～700):(400～800):(50～150):(3～7)。
优选地，所述植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种的活菌数之比为(400～600):(500～700):(80～120):(4～6)。
优选地，所述植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种的活菌数之比为500:600:100:5。
第二方面，本发明实施例还提供上述复合益生菌粉的制备方法：将植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种通过高密度发酵培养，获得菌种冻干粉。
第三方面，本发明实施例还提供一种复合益生菌制剂，其原料包括上述复合益生菌粉以及益生元、电解质和膳食纤维。将上述复合益生菌粉与益生元、电解质和膳食纤维配合使用，不仅能够发挥该复合益生菌粉的上述作用，还能补充因腹泻流失的电解质，纠正肠道酸中毒，使该复合益生菌制剂治疗犊牛腹泻见效快，疗效好。
结合第三方面，所述益生元包括甘露寡糖。
甘露寡糖存在特殊的糖苷键，不能被动物有机体中的胰淀粉酶消化，可以直接进入小肠有选择的促进益生菌的增值，尤其是促进双气杆菌的生长。同时，甘露寡糖作为益生元能够与大多数具有外源凝集素的病原菌特异性结合，抑制病原菌在肠道上与受体结合进一步阻止病原菌的粘附，甚至可以将附着在肠道上的致病菌吸附运送出体外，起到保护肠道的作用。
优选地，所述复合益生菌制剂中所述益生元的质量百分比为15～25％。
结合第三方面，所述膳食纤维包括抗性糊精。
抗性糊精是一种分子水溶性膳食纤维，具有独特的生理功能及良好的加工特性，酸热稳定性好，消化耐性强，能够改善动物肠道菌群组成，吸收肠道有害物质。
结合第三方面，所述电解质包括氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠和柠檬酸钠中的至少一种。
氯化钠用于补充因犊牛腹泻导致的机体钠离子和氯离子流失，维持机体内环境稳定，电信号传导稳定；氯化钾用于补充因犊牛腹泻导致的机体钾离子和氯离子流失，维持机体内环境稳定，钠钾泵的正常工作。碳酸氢钠和柠檬酸钠能够用于纠正腹泻犊牛机体因流失电解质而引起的酸中毒情况。
优选地，所述复合益生菌制剂中所述电解质的质量百分比为2～23％。
进一步优选地，所述复合益生菌制剂中所述氯化钠的质量百分比为7％～9％，所述氯化钾的质量百分比为3％～5％，所述碳酸氢钠的质量百分比为3％～5％，所述柠檬酸钠的质量百分比为2％～4％。
结合第三方面，所述复合益生菌制剂中，所述复合益生菌粉的用量为810～1210CFU/g。
结合第三方面，所述复合益生菌制剂中还包括维生素C和蛋氨酸锌。
第四方面，本发明实施例还提供上述复合益生菌制剂的制备方法：包括以下操作：按照上述重量分数准确称取所述益生元、电解质、膳食纤维的40目～60目粉末，混合后干燥至水分降至5％以下，再与所述复合益生菌粉混合均匀。若益生元、电解质、膳食纤维的水分含量不超过5％则无需干燥，若超过5％，则对其进行干燥，以提高益生菌的稳定性，延长该复合益生菌制剂的货架期。烘干时物料温度以不高于85℃为宜，烘干至水分低于5％后，凉至室温，即可与复合益生菌粉混合。烘干方式可采用沸腾烘干，以提高干燥效率。
本发明的有益效果在于：
本发明选择植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种进行配伍，配伍后四种菌之间无拮抗，适用于腹泻犊牛的特殊肠道环境，能够调节紊乱的肠道菌群结构，提高机体的免疫力，维护肠道屏障，减少致泻菌和炎症因子，进而改善机体健康水平。进而，本发明根据腹泻犊牛的电解质流失情况，结合现代微生物学研究，将益生菌、益生元、电解质和膳食纤维进行合理搭配，制成犊牛肠道微生态调节的制剂，在治疗犊牛腹泻、肠炎作用的同时还可以促进犊牛采食及生长。
附图说明
图1为实施例6中复合益生菌制剂制作的工艺流程图；
图2为效果例1中各菌种对致病菌的抑菌效果图；
图3为效果例2中使用实施例6的复合益生菌制剂24小时后大肠杆菌变化图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
本发明实施例提供了一种复合益生菌粉，包括植物乳杆菌Lp45、双歧杆菌L531、嗜热链球菌S131和德氏乳杆菌保加利亚亚种(产自河北一然生物科技股份有限公司)，活菌数之比为100:120:20:1。
实施例2
本发明实施例提供了一种复合益生菌粉，包括植物乳杆菌Lp45、双歧杆菌L531、嗜热链球菌S131和德氏乳杆菌保加利亚亚种(产自河北一然生物科技股份有限公司)，活菌数之比为200:350:40:3。
实施例3
本发明实施例提供了一种复合益生菌粉，包括植物乳杆菌Lp45、双歧杆菌L531、嗜热链球菌S131和德氏乳杆菌保加利亚亚种(产自河北一然生物科技股份有限公司)，活菌数之比为150:125:40:1。
实施例4
本发明实施例提供了一种复合益生菌粉，包括植物乳杆菌Lp45、双歧杆菌L531、嗜热链球菌S131和德氏乳杆菌保加利亚亚种(产自河北一然生物科技股份有限公司)，活菌数之比为300:800:50:7。
实施例5
本发明实施例提供了一种复合益生菌粉，包括植物乳杆菌Lp45、双歧杆菌L531、嗜热链球菌S131和德氏乳杆菌保加利亚亚种(产自河北一然生物科技股份有限公司)，活菌数之比为700:400:150:3。
实施例6
本发明实施例提供了一种复合益生菌制剂，由以下原料制成：
该复合益生菌制剂的制备方法为：将复合益生菌粉、氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、柠檬酸钠、蛋氨酸锌、维生素C、甘露寡糖、抗性糊精分别粉碎后过40目筛，按上述比例称取粉碎过筛后的各原料，将氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、柠檬酸钠、蛋氨酸锌、抗性糊精在80℃沸腾干燥20min(水分＜5％)，加入粉碎过筛后的复合益生菌粉，混合30min，包装，即得。该制备方法的工艺流程图如图1所示。
实施例7
本发明实施例提供了一种复合益生菌制剂，由以下原料制成：
该复合益生菌制剂的制备方法同实施例6。
实施例8
本发明实施例提供了一种复合益生菌制剂，由以下原料制成：
实施例3制得的复合益生菌粉 11×1010CFU/g
该复合益生菌制剂的制备方法同实施例6。
实施例9
本发明实施例提供了一种复合益生菌制剂，由以下原料制成：
该复合益生菌制剂的制备方法同实施例6。
实施例10
本发明实施例提供了一种复合益生菌制剂，由以下原料制成：
该复合益生菌制剂的制备方法同实施例6。
效果例1
本效果例提供了上述复合益生菌粉中的植物乳杆菌Lp45、双歧杆菌L531、嗜热链球菌S131和德氏乳杆菌保加利亚亚种对致病菌的抑菌效果。其中致病菌包括：产肠毒素大肠杆菌(ETEC)和肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)。
1、有益菌(植物乳杆菌Lp45、双歧杆菌L531、嗜热链球菌S131和德氏乳杆菌保加利亚亚种)培养
第一步：用MRS肉汤配置有益菌亲代菌液，按照2％接种量接种到另外一个培养液中培养一代，按次步骤共培养三代；
第二步：在培养到第三代后调整OD600＝1后再在37℃培养48小时
第三步：6000RPM/min离心5分钟，取上清液过0.22微米滤膜后，4℃保存备用。
4.2致病菌培养
配置致病菌菌液后放入摇床，调整OD600＝0.1后再稀释10倍，4℃保存备用。
4.3牛津杯双层琼脂扩散法
取10毫升2％琼脂倾倒第一层→待第一层凝固后，用已灭菌的镊子将牛津杯放到第一层琼脂上→按照200毫升固体培养基+1毫升致病菌悬液混匀后缓慢倾倒第二层(每个平板15到20毫升)→待第二层凝固后，拔掉牛津杯，在每个孔中加入100微升制备好的有益菌上清液，37℃培养箱培养10小时。
结果如图2所示。
效果例2
本效果例提供了上述复合益生菌制剂在动物腹泻中的应用。
试验动物腹泻模型构建：选取牧场1-60日龄腹泻犊牛1000头。将发生腹泻的犊牛按照犊牛腹泻粪便评分表(如表1所示)进行评分统计记录。
表1犊牛腹泻粪便评分表
| 分数 | 腹泻情况和分别状态 |
| 0 | 无腹泻；粪便正常，形态好 |
| 1 | 轻度腹泻；粪便半成型，比正常粪便软 |
| 2 | 中度腹泻；粪便呈半水样，但仍有固体成分 |
| 3 | 重度腹泻；完全水样粪便 |
根据表1评判标准，上述1000头腹泻犊牛中20％为重度腹泻(3分)，80％为中度腹泻(2分)。
将上述犊牛分为阳性对照组(治疗药物为庆大霉素和恩诺沙星)和实验组，且每组均有20％重度腹泻犊牛和80％中度腹泻犊牛。
阳性对照组先按每1kg体重0.2ml的剂量肌肉注射庆大霉素注射液(0.2g/5mL)，对于在第3天仍腹泻的犊牛，按每1kg体重0.05ml的剂量肌肉注射恩诺沙星注射液(1.0g/10mL)至腹泻犊牛恢复健康，即犊牛粪便评分为0分。
实验组用实施例6制得的复合益生菌制剂融入常乳中，采取自由采食的方式进行饲喂(每天饲喂60g)至腹泻犊牛恢复健康，达到治愈要求。
实验组在使用实施例6的复合益生菌制剂24小时后，随机选择部分犊牛检测大肠杆菌变化，如图3所示(图中横坐标代表犊牛编号，标记“公”的编号表示雄性犊牛，未标记“公”的编号为雌性犊牛)。需要说明的是，犊牛体内大肠杆菌为正常存在菌株，可分为中性菌和致病菌，中性菌不具有感染性。经检测，饲喂后大肠杆菌数量有增加现象的(如211114、211114公、211112(1)、211120)为犊牛体内中性大肠杆菌恢复而数量增加，增加幅度超出致病大肠杆菌的减少幅度，属于正常现象；饲喂后大肠杆菌数量减少的是犊牛体内致病大肠杆菌大幅度减少，减少幅度超过中性大肠杆菌增加幅度。
饲喂期间在第3天、第5天记录治愈的犊牛数量，计算治愈率(即犊牛粪便评分为0分)。
阳性对照组和实验组的治疗效果如表2所示：
表2阳性对照组和实验组的治疗效果
结果显示，实施例6制得的复合益生菌制剂对于犊牛腹泻具有优异的治疗效果。
饲喂第5天时对实验组腹泻状态严重的犊牛(评分为3分)进行四联抗原检测，检测粪便中可能存在的阳性致病细菌、病毒和寄生虫，结果如表3所示。
表3严重腹泻犊牛粪便中的致病菌情况
对比例1
本对比例考察了腹泻犊牛使用单菌株的情况。
1、单菌株菌剂的制备：
单菌株菌剂的原料包括：10×1010cfu/g的单菌株菌粉，8％wt氯化钠，4％wt氯化钾，4％wt碳酸氢钠，3％wt柠檬酸钠，0.4％wt蛋氨酸锌，20％甘露寡糖，余量为抗性糊精。制备方法同实施例6。
其中单菌株菌粉分别为植物乳杆菌LP45、植物乳杆菌L1016、双歧杆菌L531、长双岐杆菌L1256和嗜热链球菌S131，分别制成植物乳杆菌LP45菌剂、植物乳杆菌L1016菌剂、双歧杆菌L531菌剂、长双岐杆菌L1256菌剂和嗜热链球菌S131菌剂。
2、试验过程
选取牧场1-60日龄腹泻犊牛40头，按照犊牛腹泻粪便评分表进行评分，结果为：评分为3分的犊牛共8头，评分为2分的犊牛共32头。
将以上40头腹泻犊牛随机分成5组，分别为植物乳杆菌LP45组、植物乳杆菌L1016组、双歧杆菌L531组、长双岐杆菌L1256组、嗜热链球菌S131组。各组分别按1.0×1010CFU/g的剂量将对应的单菌株菌剂融入常乳中，每天饲喂60g，5天后按照犊牛腹泻粪便评分表进行评分统计，根据评分结果记录治愈头数，计算治愈率，如表4所示。
表4 5天内各组腹泻犊牛治愈情况
由结果可见，按与效果例2相同活菌数的单菌株菌剂饲喂腹泻犊牛，治疗犊牛腹泻能够起到一定的效果，但是治愈率较低。
对比例2
本对比例考察了不同菌株组合所得菌剂治疗腹泻犊牛的情况。
1、菌剂的制备：
A组菌剂的原料包括：10×1010cfu/g的植物乳杆菌LP45与双歧杆菌L531的混合菌粉，8％wt氯化钠，4％wt氯化钾，4％wt碳酸氢钠，3％wt柠檬酸钠，0.4％wt蛋氨酸锌，3％维生素C，20％甘露寡糖，余量为抗性糊精。混合菌粉的制备方法同实施例1，植物乳杆菌LP45与双歧杆菌L531的活菌数之比为1:1.2，菌剂的制备方法同实施例6。
B组菌剂的原料包括：10×1010cfu/g的植物乳杆菌LP45与嗜热链球菌S131的混合菌粉，8％wt氯化钠，4％wt氯化钾，4％wt碳酸氢钠，3％wt柠檬酸钠，0.4％wt蛋氨酸锌，3％维生素C，20％甘露寡糖，余量为抗性糊精。混合菌粉的制备方法同实施例1，植物乳杆菌LP45与嗜热链球菌S131的活菌数之比为5:1，菌剂的制备方法同实施例6。
C组菌剂的原料包括：10×1010cfu/g的植物乳杆菌LP45、双歧杆菌L531和嗜热链球菌S131的混合菌粉，8％wt氯化钠，4％wt氯化钾，4％wt碳酸氢钠，3％wt柠檬酸钠，0.4％wt蛋氨酸锌，3％维生素C，20％甘露寡糖，余量为抗性糊精。混合菌粉的制备方法同实施例1，植物乳杆菌LP45、双歧杆菌L531和嗜热链球菌S131的活菌数之比为5:6:1，菌剂的制备方法同实施例6。
D组菌剂的原料包括：10×1010cfu/g的植物乳杆菌LP45、双歧杆菌L531、嗜热链球菌S131和枯草芽孢杆菌(产自河北一然生物科技股份有限公司)的混合菌粉，8％wt氯化钠，4％wt氯化钾，4％wt碳酸氢钠，3％wt柠檬酸钠，0.4％wt蛋氨酸锌，3％维生素C，20％甘露寡糖，余量为抗性糊精。混合菌粉的制备方法同实施例1，植物乳杆菌LP45、双歧杆菌L531、嗜热链球菌S131和枯草芽孢杆菌的活菌数之比为100:120:20:1，菌剂的制备方法同实施例6。
2、试验过程
选取牧场1-60日龄腹泻犊牛，按照犊牛腹泻粪便评分表进行评分，结果为：评分为3分的犊牛共8头，评分为2分的犊牛共32头。
将以上腹泻犊牛随机分成4组，分别A组(植物乳杆菌LP45+双歧杆菌L531)、B组(植物乳杆菌LP45+嗜热链球菌S131)、C组(植物乳杆菌LP45+双歧杆菌L531+嗜热链球菌S131)、D组(植物乳杆菌LP45+双歧杆菌L531+嗜热链球菌S131+枯草芽孢杆菌)。各组分别按1.0×1010CFU/g的剂量将上述各组对应的菌剂融入常乳中，每天饲喂60g，5天后按照犊牛腹泻粪便评分表进行评分统计，根据评分结果记录治愈头数，计算治愈率，如表5所示。
表5 5天内各组腹泻犊牛治愈情况
由结果可见，按与效果例2相同活菌数、由不同益生菌制成的菌剂饲喂腹泻犊牛，治疗犊牛腹泻也能起到一定的效果，但治愈率相对于实施例6来说较低。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种复合益生菌粉，其特征在于，原料包括植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种。
2.根据权利要求1所述的复合益生菌粉，其特征在于，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌Lp45，保藏号为CGMCC No.8072；和/或
所述双歧杆菌为双歧杆菌L531，保藏号为CGMCC No.17329；和/或
所述嗜热链球菌为嗜热链球菌S131，保藏号为CGMCC No.23336。
3.根据权利要求1或2所述的复合益生菌粉，其特征在于，所述植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种的活菌数之比为(300～700):(400～800):(50～150):(3～7)。
4.根据权利要求3所述的复合益生菌粉，其特征在于，所述植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种的活菌数之比为(400～600):(500～700):(80～120):(4～6)。
5.根据权利要求4所述的复合益生菌粉，其特征在于，所述植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种的活菌数之比为500:600:100:5。
6.权利要求1～5任一项所述的复合益生菌粉的制备方法，其特征在于，将植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种通过高密度发酵培养，获得菌种冻干粉。
7.一种复合益生菌制剂，其特征在于，原料包括权利要求1～5任一项所述的复合益生菌粉以及益生元、电解质和膳食纤维。
8.根据权利要求7所述的复合益生菌制剂，其特征在于，所述益生元包括甘露寡糖；和/或
所述膳食纤维包括抗性糊精；和/或
所述电解质包括氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠和柠檬酸钠中的至少一种。
9.根据权利要求8所述的复合益生菌制剂，其特征在于，所述复合益生菌制剂中所述益生元的质量百分比为15～25％；和/或
所述复合益生菌制剂中所述电解质的质量百分比为2～23％。
10.权利要求7～9任一项所述的复合益生菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下操作：称取所述益生元、电解质、膳食纤维的40目～60目粉末，混合后干燥至水分降至5％以下，再与所述复合益生菌粉混合均匀。
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