CN115515622A - 用于皮肤状况的衍生自乙酰胆碱酯酶c-末端的多肽 - Google Patents

Abstract

本发明涉及皮肤，并且涉及用于处理、预防或改善多种皮肤状况(如，皮肤起皱、变色、以及伤口处理)的新颖的组合物、处理法以及方法。本发明还延伸到化妆品和药物组合物，以及在皮肤上使用它们处理各种状况的方法。例如，该组合物可用于处理脱发、秃头和作为皮肤增白剂。

Description

用于皮肤状况的衍生自乙酰胆碱酯酶C-末端的多肽

本发明涉及皮肤，并且涉及用于处理、预防或改善多种皮肤状况(如皮肤起皱、变色以及伤口处理)的新颖的组合物、处理法以及方法。本发明还延伸到化妆品和药物组合物，以及在皮肤上使用它们处理各种状况的方法。例如，组合物可以用于处理脱发、秃头和作为皮肤增白剂。

乙酰胆碱酯酶(AChE)在发育的不同阶段表达为各种形式，所有的形式都有相同的催化酶促活性，但是各种形式都具有不同的分子组分。“有尾”(T-AChE-SEQ ID NO：1)在突触处表达，并且发明人之前已经鉴定了两种肽，可以从T-AChE的C-末端切割这两种肽，一种是称为“T14”(SEQ ID NO：3)的14个氨基酸长的肽，其在内的另一种是称为“T30”(SEQ IDNO：2)的30个氨基酸长的肽。AChE C-末端肽“T14”已经被鉴定为是AChE分子的显著部分，负责非水解作用的其范围。

合成的类似物(即，“T14”)以及随后它被嵌入到其中的更大、更稳定、和更有效力的氨基酸序列(即，“T30”)展示了与报道的“非胆碱能的”AChE的作用相似的作用，而T30序列内的惰性15个氨基酸长的肽(即，“T15”-SEQ ID NO：4)没有作用。T14肽结合α7烟碱性受体上的变构位点，其中它自己没有作用。然而，在初级配体(如，乙酰胆碱或膳食胆碱)存在的情况下，T14增强了由这些初级试剂诱导的钙流入。过量的钙可以被吸收到线粒体中，其中它损害氧化磷酸化，并且引起电子泄漏。因此，形成自由基，然后该自由基使细胞膜不稳定，然后细胞死亡。

皮肤的表皮层是在成熟的成年人中连续更新过程的几个实例之一。细胞周期过程由作为T14(Greenfield et al.，2004)的靶的α-7受体(Arreondo et al.2002J CellBiol.159(2)：325-36)的激活驱动。因此，发明人研究了衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的各种肽对角质形成细胞皮肤细胞系的作用，并且观察到包含T14序列的T30肽(SEQ ID NO：2)出人意料地不仅刺激细胞内钙流入到皮肤细胞中，而且还诱导细胞增殖。不希望受任何特定的理论的束缚，发明人提出T14及其生物活性变体和片段结合α7受体上的变构位点，并且由此调节钙进入，这进而促进细胞生长和增殖。

因此，发明人认为衍生自乙酰胆碱酯酶C-末端的肽将具有在与皮肤细胞更新有关的各种皮肤状况中的应用，包括抗衰老和伤口愈合。发明人假设衍生自乙酰胆碱酯酶的肽对角质形成细胞的增殖作用将在处理与衰老相关的皮肤状况中具有应用性。角质形成细胞的增殖和角质形成细胞分化的相关衰减被承认为改善与衰老相关的皮肤状况(Gilhar etal,2004,aged hμMan skin exhibits decreased epidermal thickness,flattening ofthe dermal-epidermal junction,and decreased keratinocyte proliferation(衰老的人类皮肤显示出减少的表皮厚度、真皮-表皮连接的变平、以及减少的角质形成细胞增殖))。

角质形成细胞生长因子已经显示出调节上皮组织中的增殖和分化，并且甚至可以调节毛囊的克隆源性干细胞(J.Invest Dermatol.2000，April，114(4)：667-730)。因此，发明人认为本发明的多肽还可以用于处理脱发和/或秃头。

因此，在本发明的第一方面，提供了一种衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段，用于预防、处理或改善与衰老有关的皮肤状况。

在本发明的第二方面，提供了一种预防、处理或改善与衰老有关的皮肤状况的方法，该方法包括向需要这种处理的受试者施用，或已经施用处理有效量的衍生自乙酰胆碱酯酶的C-端的多肽或者其生物活性变体或片段。

在本发明的第三方面，提供了一种衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段在用于预防或处理与衰老相关的皮肤状况中的用途。

在本发明的第四方面中，提供了一种用于皮肤的美容处理的方法，该方法包括向皮肤施用一种衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段。

因此，在第五方面，提供了一种衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段，用于预防、处理或者改善脱发或秃头。

在本发明的第六方面，提供了一种预防、处理或改善脱发或秃头的方法，该方法包括向需要这种处理的受试者施用，或已经施用处理有效量的衍生自乙酰胆碱酯酶的C-端的多肽或者其生物活性变体或片段。

在本发明的第七方面，提供了一种衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段在用于预防或者处理脱发或秃头中的用途。

此外，发明人认为本发明的多肽可以用作皮肤增白剂。

因此，在第八方面，提供了一种衍生自乙酰胆碱酯酶C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段用作为皮肤增白剂。

在本发明的第九方面，提供了一种增白皮肤的方法，该方法包括，向需要这种处理的受试者施用，或已经施用处理有效量的一种衍生自乙酰胆碱酯酶的C-端的多肽或者其生物活性变体或片段。

在本发明的第十方面，提供了一种衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段在皮肤增白中的用途。

乙酰胆碱酯酶是一种水解乙酰胆碱的丝氨酸蛋白酶，并且将是技术人员熟知的。在大脑中发现的乙酰胆碱酯酶的主要形式被称为有尾的乙酰胆碱酯酶(T-AChE)。人类有尾的乙酰胆碱酯酶的一个实施方式的蛋白质序列(Gen Bank：AAA68151.1)在长度上是614个氨基酸，并且在此被提供为SEQ ID No：1，如下：

[SEQ ID NO：1]

应当理解，SEQ ID NO：1的前31个氨基酸残基被移除，同时蛋白被释放，从而留下583个氨基酸序列。因此，优选地，乙酰胆碱酯酶包含基本上如SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列或者其生物活性变体或片段，或者由其组成，更优选地，排除在N-末端的31个氨基酸。

优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽包含氨基酸序列或其截短段，该氨基酸序列衍生自形成乙酰胆碱酯酶的C-末端的最后300、200、100或50个氨基酸，优选地，其中乙酰胆碱酯酶包含基本上如SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列。

衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段优选地包含氨基酸序列或其截短段，该氨基酸序列衍生自形成乙酰胆碱酯酶的C-末端的最后50个氨基酸。衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段优选地包含氨基酸序列或其截短段，该氨基酸序列衍生自形成乙酰胆碱酯酶的C-末端的最后40个氨基酸。衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段优选地包含氨基酸序列或其截短段，该氨基酸序列衍生自形成乙酰胆碱酯酶的C-末端的最后30个氨基酸。

优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含3与50个之间的氨基酸残基、3与40个之间的氨基酸残基、3与35个之间的氨基酸残基或3与30个之间的氨基酸残基。优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含3与25个之间的氨基酸残基、3与20个之间的氨基酸残基、3与15个之间的氨基酸残基或3与10个之间的氨基酸残基。

优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含4与50个之间的氨基酸残基、4与40个之间的氨基酸残基、4与35个之间的氨基酸残基或4与30个之间的氨基酸残基。优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含4与25个之间的氨基酸残基、4与20个之间的氨基酸残基、4与15个之间的氨基酸残基或4与10个之间的氨基酸残基。

优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含5与50个之间的氨基酸残基、5与40个之间的氨基酸残基、5与35个之间的氨基酸残基或5与30个之间的氨基酸残基。优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含5与25个之间的氨基酸残基、5与20个之间的氨基酸残基、5与15个之间的氨基酸残基或5与10个之间的氨基酸残基。

优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含6与50个之间的氨基酸残基、6与40个之间的氨基酸残基、6与35个之间的氨基酸残基或6与30个之间的氨基酸残基。优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含6与25个之间的氨基酸残基之间、6与20个之间的氨基酸残基之间、6与15个之间的氨基酸残基之间或6与10个之间的氨基酸残基之间。

优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含7与50个之间的氨基酸残基、7与40个之间的氨基酸残基、7与35个之间的氨基酸残基或在7与30个之间的氨基酸残基。优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含7与25个之间的氨基酸残基、7与20个之间的氨基酸残基、7与15个之间的氨基酸残基或7与10个之间的氨基酸残基。

优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含8至50个之间的氨基酸残基、8至40个之间的氨基酸残基、8至35个之间的氨基酸残基或8至30个之间的氨基酸残基。优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含8至25个之间的氨基酸残基、8至20个之间的氨基酸残基、8至15个之间的氨基酸残基或8至10个之间的氨基酸残基。

优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含9与50个之间的氨基酸残基、9与40个之间的氨基酸残基、9与35个之间的氨基酸残基或9与30个之间的氨基酸残基。优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含9与25个之间的氨基酸残基、9与20个之间的氨基酸残基、9与15个之间的氨基酸残基或9与10个之间的氨基酸残基。

优选地，源自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含10与50个之间的氨基酸残基、10与40个之间的氨基酸残基、10与35个之间的氨基酸残基或10与30个之间的氨基酸残基。优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含10与25个之间的氨基酸残基、10与20个之间的氨基酸残基、10与15个之间的氨基酸残基或10与12个之间的氨基酸残基。

优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含11与50个之间的氨基酸残基、11与40个之间的氨基酸残基、11与35个之间的氨基酸残基或11与30个之间的氨基酸残基。优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含11与25个之间的氨基酸残基、11与20个之间的氨基酸残基、11与15个之间的氨基酸残基或11与13个之间的氨基酸残基。

优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含12与50个之间的氨基酸残基、12与40个之间的氨基酸残基、12与35个之间的氨基酸残基或12与30个之间的氨基酸残基。优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含12与25个之间的氨基酸残基、12与20个之间的氨基酸残基、12与15个之间的氨基酸残基或12与14个之间的氨基酸残基。

优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含13与50个之间的氨基酸残基、13与40个之间的氨基酸残基、13与35个之间的氨基酸残基或13与30个之间的氨基酸残基。优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含13与25个之间的氨基酸残基、13与20个之间的氨基酸残基、13与15个之间的氨基酸残基。

优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含14与50个之间的氨基酸残基、14与40个之间的氨基酸残基、14与35个之间的氨基酸残基或14与30个之间的氨基酸残基。优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含14与25个之间的氨基酸残基、14与20个之间的氨基酸残基、14与17个之间的氨基酸残基。

更优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含10与35个之间的氨基酸。最优选地，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-端的多肽或者其生物活性变体或片段包含14与30个氨基酸。

甚至更优选地，多肽或者其生物活性变体或片段包含3与12个之间的氨基酸、3与10个之间的氨基酸、3与8个之间的氨基酸。甚至更优选地，多肽或者其生物活性变体或片段包含4、5或6个氨基酸。最优选地，多肽或者其生物活性变体或片段包含4或6个氨基酸。

T30的氨基酸序列(对应于SEQ ID NO：1的最后30个氨基酸残基)在此被提供为SEQID NO：2，如下：

KAEFHRWSSYMVHWKNQFDHYSKQDRCSDL

[SEQ ID NO：2]

因此，在一个实施方式中，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含基本上如SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列或者其生物活性变体或片段，或者由其组成。

T14肽的氨基酸序列(对应于朝向SEQ ID NO：1的末端定位的14个氨基酸残基，并且缺少在T30中发现的最后15个氨基酸)在此被提供为SEQ ID NO：3，如下：

AEFHRWSSYMVHWK

[SEQ ID NO：3]

因此，在一个实施方式中，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段包含基本上如SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列或者其生物活性变体或片段，或者由其组成。

应当理解，如果以上片段长度中的任何片段包含T14(SEQ ID NO：3)或者其生物活性变体或片段，则它们将是活性的，如图1和3中所示，例如，它们证明T30，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端和包含T14序列的一种多肽，在角质形成细胞中诱导钙流入，并且刺激增殖。

因此，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段可以具有比T14(SEQ ID NO：3)更多或更少的氨基酸残基，但是仍然可以包括T14(SEQ ID NO：3)或者其生物活性变体或片段。因此，在一些实施方式中，优选的是根据本发明的多肽及其生物活性变体或片段衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端，并且包含T14(SEQ ID NO：3)或者其生物活性变体或片段，或者由T14(SEQ ID NO：3)或者其生物活性变体或片段组成。

例如，在一个实施方式中，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段的长度可以在8与50个氨基酸残基之间，并且包含T14(SEQ ID NO：3)或者其生物活性变体或片段。在另一个实施方式中，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段可以是多达50、40或30个氨基酸的长度，并且包含T14(SEQ ID NO：3)或者其生物活性变体或片段。

然而，如实例方式中所描述的，在其他实施方式中，短于T14的肽(例如，肽NBP-402、403、610、611、806、807、808以及1012)已经显示出是出人意料地活性的。

因此，在优选的实施方式中，多肽或者其生物活性变体或片段包含3个氨基酸或由3个氨基酸组成。

在一个优选实施方式中，多肽或者其生物活性变体或片段包含4个氨基酸或由4个氨基酸组成。优选地，多肽或者其生物活性变体或片段包含基本上如SEQ ID NO：5或6中所示的氨基酸序列或由基本上如SEQ ID NO：5或6中所示的氨基酸序列组成。

SEQ ID NO：5的氨基酸序列(即，“NBP-402”)是：WKAE。有利地，这种肽不是天然地存在的，并且因此展现出对蛋白酶的抗性，否则当在受试者的皮肤上使用它时，蛋白酶可能降解它。因此，优选SEQ ID NO：5。

SEQ ID NO：6的氨基酸序列(即，“NBP-403”)是：KAEF。

在一个优选实施方式中，多肽或者其生物活性变体或片段包含5个氨基酸或由5个氨基酸组成。

在一个优选实施方式中，多肽或者其生物活性变体或片段包含6个氨基酸或由6个氨基酸组成。优选地，多肽或者其生物活性变体或片段包含基本上如SEQ ID NO：7或8中所示的氨基酸序列或由基本上如SEQ ID NO：7或8中所示的氨基酸序列组成。

SEQ ID NO：7的氨基酸序列(即，“NBP-610”)是：SSYMVH。

SEQ ID NO：8的氨基酸序列(即，“NBP-611”)是：SYMVHW。

在一个优选实施方式中，多肽或者其生物活性变体或片段包含7个氨基酸或由7个氨基酸组成。

在一个优选实施方式中，多肽或者其生物活性变体或片段包含8个氨基酸或由8个氨基酸组成。优选地，多肽或者其生物活性变体或片段包含基本上如SEQ ID NO：9、10或11中所示的氨基酸序列或由基本上如SEQ ID NO：9、10或11所示的氨基酸序列组成。

SEQ ID NO：9的氨基酸序列(即，“NBP-806”)是：FHRWSSYM。

SEQ ID NO：10的氨基酸序列(即，“NBP-807”)是：HRWSSYMV。

SEQ ID NO：11的氨基酸序列(即，“NBP-808”)是：RWSSYMVH。

在一个优选实施方式中，多肽或者其生物活性变体或片段包含9个氨基酸或由9个氨基酸组成。

在一个优选实施方式中，多肽或者其生物活性变体或片段包含10个氨基酸或由10氨基酸组成。优选地，多肽或者其生物活性变体或片段包含基本上如SEQ ID NO：12中所示的氨基酸序列或由基本上如SEQ ID NO：12中所示的氨基酸序列组成。

SEQ ID NO：12的氨基酸序列(即，“NBP-1012”)是：YMVHWKAEFH。有利地，这种肽也不是天然地存在的，并且因此展现出对蛋白酶的抗性，否则当在受试者的皮肤上使用它时，蛋白酶可能降解它。因此，优选SEQ ID NO：12。

如实施例中所描述的，这些线性肽结合α7受体上的变构位点，并且由此调节钙离子进入，这进而促进细胞生长和增殖。此外，这些肽不会负面地影响细胞生存力。

T15的氨基酸序列(对应于SEQ ID NO：1的最后15个氨基酸残基)在此被提供为SEQID NO：4，如下：

NQFDHYSKQDRCSDL

[SEQ ID NO：4]

因此，在一个实施方式中，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段不由基本上如SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列组成。

本文定义的多肽、其变体或片段可以被环化。环状多肽是肽链，其N-末端和C-末端本身与形成氨基酸的环状链的肽键连接在一起。例如，衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽可以是T14的环化形式(SEQ ID NO：3)。

应当理解，可以使用本领域技术人员通常已知的标准肽合成方法，从头合成在此所描述的任何多肽或肽，并且因此，然后可以用于在此所述的任何化妆品/处理应用中。因此，通过在此提供的序列的相邻氨基酸之间形成肽键可以产生任何肽，以建立全序列长度，即，提供第一氨基酸，第二氨基酸连接于第一氨基酸，以此类推，直到所希望的肽长度。因此，不必以全部的乙酰胆碱酯酶序列或其较短的截短段开始，并且通过从N-端和/或C-末端移除氨基酸直到达到所希望的肽长度来减少多肽的长度。实际上，为了速度、方便和成本，优选的是使用从头肽合成方法，产生多肽或者其生物活性变体或片段。

与衰老有关的皮肤状况可以选自由以下各项组成的状况的组：细纹、皱纹、变色、不均匀的色素沉着、下垂、增大的孔、粗糙的皮肤、干燥的皮肤、萎缩纹；不均匀的色调；瑕疵；皮肤增厚或变薄；以及它们的任何组合。

优选地，本发明的多肽用于减缓衰老的征兆。优选地，与衰老有关的皮肤状况是起皱或皱纹形成。因此，减缓衰老的征兆可以意指预防、延缓、阻止或逆转哺乳动物皮肤中的皱纹形成过程。

因此，应当理解，在此描述的肽降低了“衰老效果”而不是“衰老”本身。换言之，肽的施用减小了受试者的外观年龄，并且可以使皮肤看起来比其实际更年轻。

目前，DNA甲基化(或表观遗传学)的检测被用作皮肤衰老的读出(ClinicalEpigenetics，12，105(2020))，并且视黄醇(也称为维生素A₁-醇)被用作“黄金标准”基准，其他抗衰老皮肤处理产品与该基准进行比较。然而，显然需要提供改进的方法，通过该方法可以改善皮肤年龄的外观。

如此使用的术语“皱纹”可以指皮肤中的褶皱或折痕。通过测量皱纹的长度可以评估皱纹形成。

使用皱纹严重性标度可以确定皱纹形成的严重性，例如皱纹严重性评级标度(WSRS)和Glogau分类。

皱纹的大小和强度可以从细线到深沟变化。皮肤中的皱纹可分为三种不同类型：动态皱纹、静态皱纹和皱纹褶皱。动态皱纹由皮肤下面的肌肉的重复收缩引起。例如，皱眉或深纹引起眉毛之间的皱纹(即，眉间纹)，而微笑和/或斜视引起眼睛的远端角处的皱纹(即，横眼角纹)。当面部处于中性或自然位置时，静态皱纹或休息时的皱纹是由皮肤弹性的丧失引起的，皮肤弹性的丧失可以由多种因素引起，包括太阳损伤、营养不良、吸烟、以及遗传因素，或由肌肉的痉挛或色调引起。皱纹褶皱，其可表现为鼻子和嘴之间的深沟槽，例如由下面的面部结构的下垂引起。

本发明的多肽也可以用作增白剂。

如实施例中所描述的，发明人在角质形成细胞系HaCaT上进行细胞内钙流入测定和细胞增殖测定，HaCaT是人角质形成细胞的一种广泛使用和表征的模型。发明人已经出人意料地表明线性肽T30能够在HaCaT中诱导细胞内钙流入，这与细胞增殖的刺激相关。发明人还已经表明T30的惰性组分，“T15”不诱导细胞内钙流入，并且不刺激细胞增殖，表明T30的活性组分为T14。

发明人还认为，除了在预防、处理或改善与衰老有关的皮肤状况(例如，皱纹等)中有效之外，本发明的多肽还可以用于处理伤口。

因此，在本发明的第十一方面，提供了一种衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段用于处理伤口。

在本发明的第十二方面，提供了一种处理伤口的方法，该方法包括，向需要这种处理的受试者施用，或已经施用处理有效量的衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段。

多肽或者其生物活性变体或片段可如第一方面中所定义。

根据本发明的“伤口处理”优选地包括上皮组织的上皮再形成。伤口的上皮再形成需要角质形成细胞的迁移和增殖。有利地，本发明的多肽刺激角质形成细胞增殖，并且因此有助于伤口愈合的增殖阶段。

上皮再形成定义为通过上皮细胞迁移以闭合伤口来恢复完整上皮。上皮覆盖身体的所有表面，内部和外部。因此，处理包括上皮再形成和可以被用于任何上皮创伤中，即，身体的内部或外部。

优选地，增加伤口愈合的速率。

伤口愈合的速率

优选地，本发明的多肽增加伤口的愈合速率。伤口的愈合速率可以涉及每天愈合的绝对面积、每天愈合的初始面积的百分比以及每天朝向伤口中心推进伤口边缘、完成伤口闭合的时间或本领域已知的任何其他方法，包括在此描述的那些。伤口的愈合速率的增加是指与对照处理或未处理的伤口愈合时发生的愈合水平相比达到的增加。

伤口部位

用本发明的多肽处理的伤口可以存在于任何身体部位，以及伤口可以发生的任何组织或器官中。皮肤代表了增加伤口的愈合速率的优选部位。发明人认为本发明的多肽可以有利地增加在所有类型的上皮伤口中的伤口愈合。其中可以看到本发明的作用的特定伤口的实施例包括选自由以下各项组成的组的伤口：皮肤伤口(例如烧伤、切口伤口、压力溃疡)、肺伤口、眼睛伤口(包括由眼睛手术，例如LASIK手术、LASEK手术、PRK手术、青光眼过滤手术、白内障手术或其中晶状体囊可以经受瘢痕形成的手术，所引起的瘢痕形成的抑制)，例如引起角膜结疤的那些；经受囊收缩的伤口(其通常是围绕乳房的植入物)；口腔的伤口，包括唇和腭(例如，抑制由于唇或腭裂的处理引起的瘢痕形成或促进闭合或口腔溃疡)；内部器官，如消化组织和生殖组织的伤口；体腔如腹腔、骨盆腔和胸腔的伤口(其中抑制瘢痕形成可以减少粘连形成的发生次数和/或形成的粘连的大小)；和手术伤口(特别地与美容手术相关的伤口，如用于毛发移植手术的条状移植物的瘢痕修正或分离)。特别优选的是本发明的多肽用于增加上皮再形成的速率、伤口愈合和/或预防、减少或抑制与皮肤伤口相关的瘢痕形成。

切口伤口可以是用本发明的多肽可以处理的伤口的优选组。使用本发明的药物和方法，手术切口伤口可以构成一组特别优选的伤口，就该组伤口而言，可以增加伤口愈合。

本发明的多肽可以用于愈合与整形或美容手术相关的伤口。由于大量的整形或美容手术由选择性手术程序组成，在手术之前和/或在大约伤口闭合时(例如，在施用缝合线之前或之后)，可以容易地施用本发明的多肽，并且这种用途代表了本发明的特别地优选的实施方式。

通常，在手术程序中，可以施用本发明的多肽的优选途径是经由局部注射(如，皮内注射)。这种注射可以形成升高的水泡，这些水泡然后可以作为手术程序的一部分被切开，或可替代地，例如，通过缝合线，已经闭合伤口之后，通过注射伤口边缘可以升高水泡。可替代地，多肽可以按乳膏制剂或绷带施用，或可以涂覆在用于切口闭合的缝合线上。

瘢痕修正是手术程序，其中“修正”现有瘢痕(例如，通过切除或重新对齐)以便减少由现有瘢痕引起的美容和/或机械破坏。可能这些中最佳已知的是“Z成形术”，其中两个V形皮肤瓣片被转位以允许张力线的旋转。本发明的多肽在与瘢痕修正相关的程序中的用途代表根据本发明的优选用途。

应认识到，由烧伤损伤引起的伤口(出于本发明的目的，该烧伤损伤可以被认为包括暴露于加热的气体或固体，连同涉及热液体的烫伤损伤；由暴露于极端低温引起的“冷冻烧伤”损伤；辐射烧伤；以及化学烧伤，如由苛性试剂引起的那些)可以在如此受折磨的个体的大面积上延伸。因此，烧伤可导致覆盖大比例患者身体的瘢痕形成。这种大范围的覆盖增加了所形成的瘢痕将覆盖化妆品重要性提高的区域(如，面部、颈部、手臂或手)或机械重要性的区域(特别地覆盖关节或围绕关节的区域)的风险。儿童经常遭受由热液体引起的烧伤损伤(例如，由于平锅、水壶等的倾覆)，并且由于儿童的相对较小的身体大小，特别可能在高比例的身体面积上引起广泛损害。因此，与烧伤后的瘢痕形成相关的美容和机械损伤的风险升高。在大烧伤之后，用皮肤移植作处理。本发明可以与皮肤移植联合使用，以促进上皮细胞从移植物迁移至未覆盖的伤口，以在皮肤的非移植区域中快速建立屏障。

发明人已经证明，如在此所描述的不同长度的大量线性肽具有涉及皮肤或角质形成细胞的处理和美容的应用。可以合成这些肽，并且将其外源地施加至皮肤(或毛囊)，以发挥它们的美容或处理作用。

因此，在本发明的第十三方面，提供了一种或多种肽、其衍生物或类似物，其包含基本上如SEQ ID NO：2、3或5-12中所示的氨基酸序列或由其组成，用于预防、处理或改善下列各项：

(i)与衰老有关的皮肤状况；

(ii)伤口；

(iii)脱发或秃头；或

(iv)作为皮肤增白剂。

在本发明的第十四方面，提供了一种预防、处理或改善下列各项的方法：

(i)与衰老有关的皮肤状况；

(ii)伤口；

(iii)脱发或秃头；或

(iv)作为皮肤增白剂，

方法包括向需要这种处理的受试者施用或已经施用处理有效量的一种或多种肽、其衍生物或类似物，该肽、其衍生物或类似物包含基本上如SEQ ID NO：2、3或5-12中所示的氨基酸序列或由其组成。

在本发明的第十五方面，提供了一种或多种肽、其衍生物或类似物在用于预防、处理或改善下列各项中的用途，该肽、其衍生物或类似物包含基本上如SEQ ID NO：2、3或5-12中所示的氨基酸序列或由其组成：

(i)与衰老有关的皮肤状况；

(ii)伤口；

(iii)脱发或秃头；或

作为皮肤增白剂。

在本发明的第十六方面，提供了一种用于皮肤的美容处理的方法，该方法包括向皮肤施加一种或多种肽、其衍生物或类似物，该肽、其衍生物或类似物包含基本上如SEQ IDNO：2、3或5-12中所示的氨基酸序列或由其组成。

术语“其衍生物或类似物”可以意指一种肽，其中氨基酸残基被具有相似侧链或肽主链特性的残基(不论是天然氨基酸、非天然氨基酸或氨基酸模拟物)置换。此外，这种肽的末端可以由具有与乙酰基或酰胺基团类似特性的N-和/或C-末端保护基团保护。

根据本发明的肽的衍生物和类似物还可以包括增加肽在体内半衰期的那些。例如，本发明的肽的衍生物或类似物可以包括肽的类肽和反类肽衍生物、肽-类肽杂交体以及肽的D-氨基酸衍生物。

类肽，或聚-N-取代的甘氨酸，是一类肽模拟物，其侧链附接到肽主链的氮原子，而不是α-碳，如同它们是在氨基酸中。可以从肽结构的知识容易地设计本发明的肽的类肽衍生物。反类肽(其中所有氨基酸被反向顺序的类肽残基替换)也是根据本发明的合适的衍生物。与肽或含有一个类肽残基的类肽-肽杂合体相比，预期反类肽在相反方向上结合在配体结合沟槽中。因此，类肽残基的侧链能够指向与原始肽中的侧链相同的方向。

术语“衍生自”可以意指氨基酸序列，该氨基酸序列是AChE的C-末端或其一部分中存在的或者形成AChE的C-末端或其一部分的氨基酸序列的衍生物或者修饰。

术语“其截短段”可以意指衍生自AChE的肽通过氨基酸的移除而减小少了大小。通过从肽的C-和/或N-末端移除残基可以实现氨基酸的减少，通过从肽链核心内缺失一个或多个氨基酸也可以实现氨基酸的减少。

应当理解，根据本发明的多肽可以用于药物和/或化妆品中，其可以用作单一处理法(即，根据本发明的多肽的用途)，用于处理伤口，特别地增加伤口愈合的速率和/或处理、预防或改善与衰老、脱发、秃头有关的皮肤状况或作为皮肤增白剂。可替代地，根据本发明的多肽可以用作已知的用于处理伤口，特别地增加伤口愈合的速率和/或预防、处理或改善与衰老、脱发、秃头有关的皮肤状况的已知处理法的辅助物或与其组合使用，或作为皮肤增白剂。

根据本发明的多肽可以组合在具有大量不同形式的组合物中，特别地取决于组合物待使用的方式。因此，例如，组合物可以是以下形式：粉末、片剂、胶囊、液体、软膏、乳膏、凝胶、水凝胶、气溶胶、喷雾、胶束溶液、透皮贴剂、脂质体悬浮液或可以施用给需要处理的人或动物的任何其他适合的形式。应当理解，根据本发明的药物或化妆品的载体应该是施用它的受试者良好耐受的载体，并且优选地使得多肽能够递送至皮肤。

根据本发明的多肽还可以结合在缓慢释放或延迟释放装置中，例如逐层组装的绷带中。这样的装置可以例如被插入在皮肤上或皮肤下，并且药物或化妆品可以被释放数周或甚至数月。至少邻近处理部位可以定位装置。当需要用多肽长期处理时，并且正常地需要频繁施用(例如，至少每天注射)，这样的装置可以是特别地有利的。

在优选实施方式中，根据本发明的药物或化妆品可以局部地被施用于皮肤，优选地直接在需要处理的部位施用。

应当理解，所需的多肽的量由其生物活性和生物利用度决定，这接着取决于施用模式，多肽的生理化学性质以及其是用作单一处理法还是用于联合处理法。施用的频率还将受正在处理的受试者体内的多肽(线性或环状)的半衰期影响。待施用的最佳剂量可以由本领域技术人员确定，并且将随使用的特定多肽、药物组合物的强度、施用模式和障碍的阶段的进展而变化。取决于所处理的特定受试者的另外的因素将导致需要调整剂量，包括受试者年龄、体重、性别、饮食、以及施用时间。

通常，取决于所使用的多肽，在0.001μg/kg体重与10mg/kg体重之间、或在0.01μg/kg体重与1mg/kg体重之间的根据本发明的多肽的每日剂量可以用于处理与衰老相关的伤口或皮肤状况。

可以在引起伤口的损伤发作之前、期间或之后施用多肽。每日剂量可以作为单次施用(例如，局部乳膏剂或喷雾剂)施用。可替代地，在一天期间，多肽可能需要施用两次或更多次。作为实施例，多肽可以作为0.07μg与700mg(即，假定体重为70kg)之间的两次(或更多次，取决于正在处理的障碍的严重性)每日剂量施用。接受处理的患者在醒来时可以施用第一剂量，并且然后在晚上，或在此之后以3小时或4小时的间隔，施用第二剂量(如果涉及两次剂量方案)。可替代地，可以使用缓释装置来向患者提供根据本发明的多肽的最佳剂量，而无需施用重复剂量。

已知的程序，例如制药或化妆品工业常规地采用的那些(例如，体内实验、临床试验等)，可以用于形成根据本发明的多肽的特定制剂以及精确的处理或美容方案(例如，试剂的每日剂量以及施用的频率)。

因此，发明人认识到，可以生产包含本发明的多肽的新颖的药物组合物。

因此，在本发明的第十七方面，提供了一种皮肤状况处理的药物组合物，该药物组合物包含处理有效量的根据第一或第十三方面的多肽或者其生物活性变体或片段，以及可选地药物学上可接受的载体。

本发明在第十八方面还提供了制备根据第十七方面的皮肤状况处理的药物组合物的方法，该方法包括将处理有效量的根据第一或第十三方面的多肽或者其生物活性变体或片段与药物学上可接受的载体组合。

药物组合物优选地用于预防、处理或改善与衰老有关的皮肤状况，或用于处理伤口。

优选地，药物组合物包含一种或多种具有基本上如SEQ ID NO：2、3或5-12中所示的氨基酸序列的肽或者其衍生物或类似物。

然而，发明人还理解可以生产包含本发明的多肽的新颖的化妆品组合物。

因此，在本发明的第十九方面，提供了一种化妆品组合物，该化妆品组合物包含有效量的根据第一或第十三方面的多肽或者其生物活性变体或片段，以及可选地化妆品上可接受的载体。

本发明在第二十方面中还提供了一种用于制备根据第十九方面的化妆品组合物的方法，该方法包括将处理有效量的根据第一或第十三方面的多肽或者其生物活性变体或片段与化妆品上可接受的载体组合。

优选地，化妆品组合物包含一种或多种具有基本上如SEQ ID NO：2、3或5-12中所示的氨基酸序列的肽或其衍生物或类似物。

在一些实施方式中，在此描述的组合物可以是防晒霜、油或洗剂。

在其他实施方式中，组合物可以是保湿剂或湿润制剂。

在其他实施方式中，组合物可以是抗衰老或抗皱制剂。

在其他实施方式中，组合物可以是毛发生长刺激或促进制剂。

在其他实施方式中，组合物可以是皮肤增白制剂。

化妆品组合物优选地用于预防、处理或改善：

(i)与衰老有关的皮肤状况；

(ii)伤口；

(iii)脱发或秃头；或

(iv)作为皮肤增白剂。

与衰老有关的皮肤状况可以选自由以下各项组成的组：细纹、皱纹、变色、不均匀的色素沉着、下垂、增大的孔、粗糙的皮肤、干燥的皮肤、萎缩纹；不均匀的色调；瑕疵；皮肤增厚或变薄；以及它们的任何组合。优选地，化妆品组合物减缓衰老的征兆，如减少起皱或皱纹形成。

“受试者”可以是脊椎动物、哺乳动物或家畜。因此，根据本发明的组合物和药物可以用于处理任何哺乳动物，例如家畜(例如马)、宠物，或可以用于其他兽医应用中。然而，最优选地，受试者是人类。

多肽、化妆品组合物或药物组合物的“处理有效量”是任何量，该任何量是当给受试者施用时，处理伤口或处理与衰老相关的皮肤状况所需的上述量。

例如，所使用的多肽、化妆品组合物或药物组合物的处理地有效量可以是从约0.01mg至约800mg，并且优选地从约0.01mg至约500mg。优选的是多肽、化妆品组合物或药物组合物的量为约0.1mg至约250mg，最优选约0.1mg至约20mg的量。

如在此提及的“药物学上可接受的载体”是本领域技术人员已知的在配制药物组合物中有用的任何已知的化合物或已知化合物的组合。

如在此提及的“化妆品上可接受的载体”是本领域技术人员已知的在配制化妆品组合物中有用的任何已知的化合物或已知化合物的组合。

在一个实施方式中，化妆品上或药物学上可接受的载体可以是固体，并且组合物可以处于粉末或片剂的形式。在另一个实施方式中，化妆品或药物载体可以是凝胶，并且组合物可以处于乳膏剂等的形式。

然而，化妆品或药物载体可以是液体，并且化妆品或药物组合物处于溶液的形式。液体载体用于制备溶液、悬浮液、乳液、糖浆、酏剂以及加压组合物。根据本发明的多肽可以溶解或悬浮在化妆品上或药物学上可接受的液体载体中，例如水、有机溶剂、二者的混合物或者化妆品上或药物学上可接受的油或脂肪。液体载体可以包含其他合适的化妆品或药物添加剂，如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、调味剂、悬浮剂、增稠剂、着色剂、粘度调节剂、稳定剂或渗透调节剂。用于口服和胃肠外施用的液体载体的合适实施例包括水(部分包含上述添加剂，例如纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠溶液)、醇(包括一元醇和多元醇，例如乙二醇)及其衍生物和油(例如，分馏的椰子油和花生油)。对于肠胃外施用，载体还可以是油酯，如油酸乙酯和豆蔻酸异丙酯。无菌液体载体在用于肠胃外施用的无菌液体形式组合物中是有用的。用于加压组合物的液体载体可以是卤代烃或者其他化妆品上或药物学上可接受的推进剂。

本发明的多肽、化妆品组合物和药物组合物可以按无菌溶液或悬浮液的形式口服施用，该无菌溶液或悬浮液含有其他溶质或悬浮剂(例如，足以使溶液等渗的盐水或葡萄糖)、胆汁盐、阿拉伯胶、明胶、脱水山梨醇单油酸酯、聚山梨醇酯80(山梨醇的油酸酯及其与环氧乙烷共聚的酸酐)等。本发明的多肽、化妆品组合物或药物组合物还可以以液体或固体组合物形式口服施用。适合于口服施用的组合物包括固体形式，如丸剂、胶囊、颗粒、片剂、以及粉末，以及液体形式，如溶液、糖浆、酏剂以及悬浮液。可用于肠胃外施用的形式包括无菌溶液、乳液和悬浮液。在希望通过口服摄取施用本发明的多肽的情况下，应当理解，所选择的激动剂将优选地是对降解具有升高程度的抗性的激动剂。例如，所选择的激动剂可以被保护(使用本领域普通技术人员熟知的技术)，这样使得在消化道中的其降解速率被降低。

优选地，本发明的多肽可以以乳膏、凝胶、洗液、软膏、皮肤溶液、悬浮液、喷雾、泡沫、沐浴添加剂、火棉胶、浸渍敷料或药用膏药的形式局部地施用。乳膏可以是水包油型或油包水型。本发明的多肽和组合物可以与乳化剂，如烷基硫酸盐、烷基胺、烷基嘧啶化合物等局部地被施用。用于乳膏制剂的可接受的油包括：白矿脂、石蜡、鲸蜡硬脂醇、椰油甘油酯、鲸蜡醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸鲸蜡酯、可可脂(butyrμM cacao)、向日葵油(oleμMhelianthi)、白蜂蜡、羊毛脂、棕榈酸异丙酯、硬脂酸、硬脂酸镁。为了制备凝胶，可以使用以下凝胶形成的添加剂：纤维素胶(羧甲基纤维素)、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、乙基羟基纤维素或锂皂石。

优选地，本发明的多肽可以与防腐剂、抗氧化剂、络合剂、溶剂、香料、杀细菌剂、气味吸收剂、维生素、保湿剂、自晒褐色化合物和抗皱活性剂一起局部地施用。

本发明的组合物可以含有化妆品上可接受的添加剂或佐剂以及化妆品或皮肤的活性剂。代表性的添加剂和佐剂包括，例如油溶性或油混溶性溶剂或共溶剂。添加剂和佐剂的合适实施例包括但不限于脂肪醇、脂肪酰胺、碳酸亚烃酯、乙二醇、低级醇(例如，乙醇、丙二醇)、分散增强剂、聚合物、增稠剂、稳定剂、保湿剂、润湿剂、着色剂、填料、螯合剂、抗氧化剂(例如，BHT、生育酚)、精油、香料、染料、中和剂或pH调节剂(例如，柠檬酸、三乙胺(TEA)和氢氧化钠)、防腐剂、杀菌剂、调理剂或软化剂(例如，泛酰醇和尿囊素)、提取物(如，植物提取物)或用于这种类型的应用的化妆品中常用的任何其他成分。添加剂和佐剂在组合物中的存在量通常范围可以为约0.01％至约10％的重量。化妆品活性剂或皮肤活性剂的实施例包括自由基清除剂、维生素(例如，维生素E及其衍生物)、抗弹性蛋白酶和抗胶原酶的试剂、肽、脂肪酸衍生物、类固醇、痕量元素、藻类和浮游生物的提取物、酶和辅酶、类黄酮和神经酰胺、羟基酸及其混合物以及增强剂。这些成分在组合物中存在的油相中可以是可溶的或可分散的。

用于处理肺或其他呼吸组织中的伤口的包含本发明的多肽的药物和组合物可以被配制为用于吸入。

能够实现本发明的所希望的作用的任何适合的途径可以用于施用处理有效量的本发明的多肽。然而，通常优选的是本发明的多肽通过局部施用被提供给组织。

可以实现这种局部施用的合适方法将取决于组织或器官的特性。优选的施用途径的选择还可以取决于待处理的组织或器官对于所选择的药物或化妆品是否是可渗透的。适合的施用途径可以选自由以下各项组成的组：注射；喷雾、软膏、凝胶或乳膏的施用；药物的吸入；从生物材料或其他固体药物或化妆品(包括缝合线或伤口敷料)的释放。

适合的递送系统可以包括散粒系统、支架或水凝胶。散粒颗粒包括微粒或纳米颗粒。这种散粒颗粒可以是基于脂质或基于聚合物的。优选地，基于聚合物的颗粒是可生物降解的。支架可以包括衍生自天然ECM，例如HA、胶原和壳聚糖的那些生物材料。支架也可以包括被制造为模拟ECM的仿生材料，包括通过电纺纱生产的微/纳米纤维支架。以提供处理地有效量(或处理有效量的已知部分或倍数)的本发明多肽的一个或多个剂量单位的形式，可以优选地提供本发明的多肽。制备这种剂量单位的方法将是技术人员熟知的；例如参见Remington”s Pharmaceutical Sciences 18th Ed.(1990)。

可以在无菌敷料或贴片上提供适合的多肽，该无菌敷料或贴片可以用于覆盖待处理的伤口处的伤口。

本发明的多肽可以从装置或植入物释放，或可以用于涂覆这样的装置，例如，支架、或受控的释放装置、或伤口敷料或用于伤口闭合的缝合线。

应当理解，包含本发明的多肽的组合物的载体应该是患者良好耐受的，并且允许多肽释放至待处理的伤口的载体。这种载体优选地是相对“温和的”，即非炎性的、可生物降解的、生物可溶解的或生物可再吸收的。

包含本发明的多肽的组合物的剂量可以优选地足以在单次施用中提供处理地或化妆品上有效量的适合的激动剂。然而，应当理解，每种剂量本身不需要提供处理地或化妆品上有效量的本发明的多肽，而是处理地或化妆品上有效的量可以替代地通过重复施用适合的剂量来建立。

在另一个实施方式中，本发明的多肽可以被配制为药物学上或化妆品上可接受的经表皮递送系统的一部分，例如，贴片/敷料。固体载体可以包括一种或多种物质，该一种或多种物质还可以充当调味剂、润滑剂、增溶剂、悬浮剂、填充剂、助流剂、压缩助剂、粘合剂或片剂崩解剂。载体还可以包括封装材料。。

在用于处理体腔，例如，腹腔或骨盆腔中的伤口中使用的根据本发明的药物可以配制成冲洗液、灌洗液、凝胶或滴注剂。

在本发明的药物或化妆品或方法中使用的多肽可以被掺入到生物材料中，从生物材料可以释放多肽以特别地处理伤口。掺入本发明的多肽的生物材料适合用于许多情况，并且适用于许多身体部位，但是在向眼睛(例如，视网膜手术或青光眼过滤手术之后)或向希望抑制再狭窄或粘连的部位提供本发明的适合的多肽中可以具有特别的应用性。

应当理解，本发明延伸至任何核酸或肽或其变体、衍生物或类似物，其基本上包含在此提及的任何序列的氨基酸或核酸序列，包括其功能变体或功能片段。术语“基本上氨基酸/核苷酸/肽序列”、“功能变体”和“功能片段”可以是与在此提及的任何一种序列的氨基酸/核苷酸/肽序列具有至少40％序列同一性的序列，例如与被鉴定为SEQ ID NO：1-12的序列具有40％同一性的序列。

还设想了与所提及的任何序列具有大于65％、更优选地大于70％、甚至更优选地大于75％、并且还更优选地大于80％序列同一性的序列同一性的氨基酸/多核苷酸/多肽序列。优选地，氨基酸/多核苷酸/多肽序列与在此提及的任何序列具有至少85％同一性，更优选地至少90％同一性，甚至更优选地至少92％同一性，甚至更优选地至少95％同一性，甚至更优选地至少97％同一性，甚至更优选地至少98％同一性，并且最优选地至少99％同一性。

技术人员将理解如何计算两个氨基酸/多核苷酸/多肽序列之间的百分比同一性。为了计算两个氨基酸/多核苷酸/多肽序列之间的百分比同一性，必须首先准备两个序列的比对，随后计算序列同一性值。两个序列的百分比同一性可以取不同的值，这取决于：(i)用于比对序列的方法，例如ClustalW、BLAST、FASTA、Smith-Waterman(在不同的程序中实施)，或来自3D比较的结构比对；和(ii)比对方法使用的参数，例如，局部比对对整体比对，使用的对记分矩阵(例如，BLOSμM62、PAM250、Gonnet等)，以及空位罚分，例如，函数形式和常数。

在进行比对后，存在计算两个序列之间的百分比同一性的许多不同方式。例如，可以将同一性的数除以：(i)最短序列的长度；(ii)比对的长度；(iii)序列的平均长度；(iv)非空位位置的数；或(v)排除突出端的等效位置的数。此外，应当理解，百分比同一性也强烈依赖于长度。因此，一对序列越短，可以预期偶然发生的序列同一性越高。

因此，应当理解，蛋白质或DNA序列的准确比对是复杂的过程。流行的多重比对程序ClustalW(Thompson等人，1994，Nucleic Acids Research，22，4673-4680；Thompson等人，1997，Nucleic Acids Research，24，4876-4882)是用于产生根据本发明的蛋白质或DNA的多重比对的优选方式。ClustalW的适合的参数可以如下：对于DNA比对：空位开放罚分＝15.0，空位延伸罚分＝6.66，并且矩阵＝同一性。对于蛋白质比对：空位开放罚分＝10.0，空位延伸罚分＝0.2，并且矩阵＝Gonnet。对于DNA和蛋白质比对：ENDGAP＝-1，并且GAPDIST＝4。本领域技术人员将意识到，可能需要改变这些和其他参数，以用于最佳序列比对。

优选地，两个氨基酸/多核苷酸/多肽序列之间的百分比同一性的计算然后可以从如(N/T)*100的比对来计算，其中N是序列共享相同残基的位置的数，并且T是比较的位置的总数，包括空位，并且包括或排除突出端。优选地，在计算中包括突出端。因此，用于计算两个序列之间的百分比同一性的最优选的方法包括：(i)使用ClustalW程序，使用合适的参数集合，准备序列比对，例如，如上所述；以及(ii)将N和T的值插入下式：序列同一性＝(N/T)*100。

用于鉴定类似序列的替代方法是本领域技术人员已知的。例如，基本上相似的核苷酸序列将由在严格条件下与DNA序列或其互补序列杂交的序列编码。通过严格条件，发明人意指在约45℃下在3x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中与过滤结合的DNA或RNA杂交，随后在约20-65℃下在0.2xSSC/0.1％SDS中进行至少一次洗涤的核苷酸。可替代地，基本上相似的多肽可以与SEQ ID NO：1至12中示出的序列相差至少1、但少于5、10、20、50或100个氨基酸。

由于遗传密码的简并性，清楚的是在此所描述的任何核酸序列可以变化或改变而基本上不影响由其编码的蛋白质的序列，以提供其功能变体。合适的核苷酸变体是具有通过编码序列内的相同氨基酸的不同密码子的取代而改变的序列，从而产生沉默(同义)变化的那些。其他合适的变体是具有同源核苷酸序列，但包含全部或部分序列的变体，所述序列通过编码氨基酸的不同密码子的取代而改变，所述氨基酸具有与其取代的氨基酸类似的生物物理特性的侧链，以产生保守改变。例如，小的非极性疏水性氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甲硫氨酸。大的非极性疏水性氨基酸包括苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。极性中性氨基酸包括丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。带正电荷的(碱性)氨基酸包括赖氨酸、精氨酸和组氨酸。带负电荷的(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。因此，应当理解，哪些氨基酸可以被具有相似生物物理特性的氨基酸替换，并且本领域技术人员将知道编码这些氨基酸的核苷酸序列。

在此所描述的所有特征(包括任何所附权利要求、摘要和附图)和/或如此公开的任何方法或过程的所有步骤可以通过任何组合方式与任何上述方面组合，除了这样的特征和/或步骤中的至少一些相互排斥的组合之外。

为了更好地理解本发明，并且示出可以如何实施本发明的实施方式，现在将通过实施例的方式参照附图，在附图中：

图1示出了线性肽T30和T15在低钙条件下诱导细胞内钙流入到角质形成细胞系中的能力。

图2示出了线性肽T30和T15在高钙条件下诱导细胞内钙流入到角质形成细胞系中的能力。

图3示出了在低钙条件下用线性肽T30和T15处理的角质形成细胞系的A)细胞生存力程度和B)细胞增殖。

图4示出了在高钙条件下用线性肽T30和T15处理的角质形成细胞系的A)细胞生存力程度和B)细胞增殖。

图5示出了使用与T30/NBP-14(对照)相比不同长度的根据本发明的线性肽(在此称为肽402、403、610、611、806、807、808以及1012)的另外的实施方式的实验的结果，以及它们影响钙离子流入到PC12细胞(“钙”)、乙酰胆碱酯酶活性(“AChE”)和细胞“生存力”的能力。右手栏示出“钙”+“AChE”/“生存力”的值。

图6示出了T14、T30、402和611线性肽对PC12细胞的钙流入的作用。上图：T14(左)和T30(右)作用在0.5、1、2.5和5μM的剂量应答。下图：在10、50、100以及500μM时402(左)和611(右)作用的剂量应答。以相同的方式分析所有处理，基线扣除和对其各自对照的归一化。乙酰胆碱(Ach)注射的第一时间点(2秒)由于Ach(100μM)的可能的注射假象和/或急性副作用而从归一化中排除。

图7示出了T30和线性肽402对钙离子流入的作用的比较。

图8示出了线性肽402和611对PC12细胞的钙流入的作用。左图：自乙酰胆碱(Ach)注射以来钙流入的时间过程。数值表示为在基线扣除后，未处理的对照细胞的百分比(平均值±SEM)。在从0(记录开始)至1.8秒的值之间对Ach注射之前的基线取平均值。右图：钙流入的峰表示为对照百分比(平均值±SEM)。在Ach注射(2.2-3.0秒)后的第一秒内，对“细胞柱”(由每个柱6个重复孔组成)中的每n个确定峰。对峰进行统计分析。使用一样品t检验(双有尾P值)来比较平均峰值钙流入与100的值(其指示未处理的细胞的相对钙流入)。通过直方图上方的一个小三角形(P＜0.05)和两个正方形(P＜0.01)指示显著差异。在未配对t测试之后，星号(*)显示出肽402和611之间的显著差异。

图9示出了AchE肽(T14和T30；左图)和较短肽(402和611；右图)对PC12细胞中来自烟碱性乙酰胆碱受体(nAChR)的钙流入峰的浓度-应答曲线的作用。钙流入的峰表示为图8中的对照百分比。在Ach注射(2.2-3.0秒)后的第一秒内确定峰。

图10示出了在细胞外基质中乙酰胆碱酯酶(AChE)释放作为现存细胞的补偿作用的结果。

实施方式

基本原理

发明人已经基于乙酰胆碱酯酶的C-末端产生了大量线性肽，称为T14、T15和T30肽，并且评估了它们在角质形成细胞系中的作用。发明人已经产生了一系列其他较短的衍生自乙酰胆碱酯酶的线性肽，称为肽：402、403、610、611、806、807、808以及1012，以及还有线性T14的环化形式(称为环状NBP-14)，并且然后在一系列测定中测试这些肽，包括钙离子流入、乙酰胆碱酯酶活性以及细胞生存力。这些实验显示了线性肽如何可以用于多种皮肤相关的应用中，如皮肤起皱、变色、伤口处理、处理脱发、秃头以及作为皮肤增白剂。

实施例1-T14、NBP-14、T15和T30

“有尾”的乙酰胆碱酯酶(T-AChE)在突触处表达，并且本发明人之前已经鉴定了可以从其C-末端切割的两种肽，一种称为“T14”(14个氨基酸长)，其在内的另一种称为“T30”(30个氨基酸长)。线性肽的氨基酸序列T14是AEFHRWSSYMVHWK[SEQ ID NO：3]。该肽还经由末端丙氨酸(A)和赖氨酸(K)残基已经被环化，形成NBP-14。可以通过几种不同的手段实现环化。例如，Genosphere Biotechnologies(法国)通过将线性肽转化成N-末端至C-末端内酰胺来进行T14的环化。产生NBP-14的T14的环化将两个末端，即，HWK-AEF合在一起。

线性肽的氨基酸序列T30是KAEFHRWSSYMVHWKNQFDHYSKQDRCSDL[SEQ ID NO：2]。T30是内源的，并且T30的活性部分是T14，这两者都在AChE的C-末端发现的。另一种称为“T15”的肽对应于SEQ ID NO：1的最后15个氨基酸残基，即，NQFDHYSKQDRCSDL [SEQ ID No：4]。

AChE C-末端肽“T14”已经被鉴定为AChE分子的显著部分，负责其非水解作用的范围。合成的14氨基酸肽类似物(即，“T14”)以及随后它被嵌入到其中的更大、更稳定、和更有效的氨基酸序列(即，“T30”)展示了与报道的“非胆碱能的”AChE的作用相似的作用。

实施例2-乙酰胆碱酯酶衍生的肽对角质形成细胞HaCaTs细胞系中的细胞内钙的 作用

发明人检查了乙酰胆碱酯酶衍生的肽T30和T15诱导细胞内钙流入到角质形成细胞(HaCaTs)细胞系中的能力。如图1所示，T30的应用出人意料地诱导角质形成细胞系中细胞内钙的增加，而惰性T15肽的应用不诱导细胞系中细胞内钙的增加。T30在实验上被用作内源产生的T14的替代物，主要是因为在溶液中T30比T14更稳定，其具有聚集的趋势。然而，如上所述，T30包含活性的T14。

实施例3-乙酰胆碱酯酶衍生的肽对角质形成细胞HaCaTs细胞系的增殖的作用

发明人接下来检查了乙酰胆碱酯酶衍生的肽T30和T15诱导HaCaT细胞系增殖的能力，并且还测试了细胞生存力以确定T15和T30对HaCaT细胞系的细胞毒性。结果示于图3和4中。参考图3B和4B，当与未处理的对照(无肽)相比时，T30显著诱导HaCaT细胞的增殖。相反，T15不改变细胞增殖。如图3A和4A所示，T15和T30都不在细胞系中诱导显著的细胞毒性效应。

结论

角质形成细胞与关键脑细胞共享许多共同点，包括胚胎起源和高水平的游离T14(如，由AChE单体的优势所表示的)，并且当脑细胞随着年龄下降时，其遵循类似趋势将发生在表皮中，即，T14水平将随年龄下降。如此所示，如果T14和包含T14或者其生物活性变体或片段的多肽(例如T30)增强角质形成细胞增殖，那么添加T14将因此补充减少的内源水平和恢复与更年轻的年龄相当的细胞增殖速率，由此提供新的和改善的抗衰老处理。

实施例4-其他乙酰胆碱酯酶衍生的肽对钙内流、乙酰胆碱酯酶和细胞生存力的作 用

发明人制备了一系列均小于T14、T15和T30的线性肽。这些是4-聚体、6-聚体、8-聚体和10-聚体，并且被称为神经-生物肽(NBP)：402、403、610、611、806、807、808和1012，如以下表1中所总结的。

表1-线性肽及其序列

SEQ ID No	肽名称	序列
			5	NBP-402	WKAE
6	NBP-403	KAEF
			7	NBP-610	SSYMVH
8	NBP-611	SYMVHW
			9	NBP-806	FHRWSSYM
10	NBP-807	HRWSSYMV
			11	NBP-808	RWSSYMVH
12	NBP-1012	YMVHWKAEFH

测试这些线性肽各自影响钙离子流入到PC12细胞(“钙”)、乙酰胆碱酯酶活性(“AChE”)和细胞“生存力”的能力，并且初始结果显示在图5中。

这些测试的三个值被引入下式：

值记分＝(钙+AchE)/生存力

如图5所示，T30(反映T14)具有171.05(钙)+169.46(AChE)/74.31(生存力)的组合记分，其给出4.58的值记分。

本发明人还研究了环状NBP-14对角质形成细胞系的影响，并且发现它抑制T30诱导的细胞内钙流入到角质形成细胞中。因此，当T30与环状NBP14(在0.5μM)组合时，由于NBP-14的抑制剂效应，其给出仅1.93的值记分。

然后评估肽402、403、610、611、806、807、808和1012中的每一个，并且如图5中可见，这些候选肽都以与T30(即，T14)相当的方式表现，具有均显著高于T30/NBP14对照样品的记分值。出人意料地，当考虑所有三个参数时，肽402、611和1012表现得非常类似于T30，值记分分别地为4.32、4.39和1012。

然而，当仅考虑钙流入时，肽402和1012的表现优于T30，其中钙值分别地为212和179，其中肽402显著地胜过T30的基准。

发明人还注意到肽402和1012不在T14中天然地存在的。因此，它们应该展现出对蛋白酶的抗性，否则当在受试者皮肤上体内使用时，蛋白酶可能降解。

实施例5-线性T14、T30、402和611线性肽对PC12细胞的钙流入的作用

钙荧光测定

在实验前一天，在37℃和5％CO₂，将PC12细胞铺板在具有0.1ml(每孔：40000-80000个细胞)完全培养基(DMEM，包括10mM Hepes、2mM谷氨酰胺、10％热灭活的马血清、5％胎牛血清以及0.25％青霉素/链霉素)的96孔板中。在实验当天，如由制造商所描述的，通过在包含9ml的Hank平衡盐溶液(HBSS)和1ml的普朗尼克(pluronic)F127 Plus的测定缓冲液中添加20μl的Fluo-8来制备Fluo-8溶液(Abcam)。随后，移除0.100ml的生长培养基，和添加70μl的Fluo-8溶液。将用肽402、611、T14或T30的处理以不同的浓度(402和611：10、50、100和500μM；T14和T30：0.5、1、2.5和5μM)添加到Fluo-8中，并且在37℃(和5％CO₂)温育30分钟，并且在室温温育30分钟。1小时后，将板置于荧光分析仪(Fluostar，Optima，BMGLabtech，Ortenberg，Germany)中。在读取荧光之前，制备乙酰胆碱(ACh)100μM(烟碱性受体的激动剂)，并且将其置于Fluostar注射器中。对于每个孔，通过基础荧光读数，随后乙酰胆碱注射形成读数，乙酰胆碱注射通过烟碱性受体诱导钙的增加。

结果

参见图6，显示了T14、T30、402和611肽对PC12细胞中的钙流入的作用。上图示出了在0.5、1、2.5和5μM的T14(左)和T30(右)作用的剂量应答，并且下图示出了在10、50、100和500μM的402(左)和611(右)作用的剂量应答。

参见图6，示出了T14和T30(上图)以及短氨基酸(AA)肽(＜7AA)(下图)的剂量应答。对浓度-应答曲线上的T14和T30包括更全面的范围。与所合成的更短的肽相比，T14和T30是内源的(天然地存在的)。因此，发明人预期T14和T30对nAChR具有更高的亲和力(作为变构调节剂)，解释了它们在较低剂量(＜10^-6M)的作用。较高剂量(>10^-6M)的AChE-肽的抑制作用可以经由如最初由Greenfield等人2004描述的不同机理来阻断nAChR应答。通过在乙酰胆碱存在下受体的快速脱敏可以解释nAChR的这些抑制机理。实际上，通过cAMP依赖性蛋白激酶对nAChR的磷酸化增加了受体的快速脱敏速率，受体在ACh存在下变得无活性(Huganir 1982)。此外，这些更高剂量(>10^-6M)还可以将基础细胞内钙增加至高水平，这将进而使一些nACh受体失活。

总之，402和611线性肽充当类似于T14的正向别构调节剂，并且因此可以充当用于在此所描述的不同皮肤状况的新颖处理。此外，肽402不是天然序列的一部分，因此可以更抵抗体内降解。

实施例6-线性肽402对PC12细胞的钙流入的作用

发明人使用肽402重复钙流入试验，并且结果示于图7中。可以看出，402触发了比T30更高的钙离子流入，这证实了图6中所示的结果。

实施例7-线性肽402和611对PC12细胞的钙流入的作用

分析方法

在三个单独的(96孔的)实验/板上获得数据，由6(611)或5(402)个独立柱组成。每个“处理柱”包含6个孔重复，首先将该6个孔重复平均以确定单个值“n””。乙酰胆碱(Ach)注射的第一时间点(2秒)由于Ach(100μM)的可能的注射假象和/或急性副作用而从归一化中排除。以相同的方式分析所有处理，基线扣除和对其各自对照的归一化。

结果

参见图8，显示了线性肽402和611对PC12细胞的钙流入的作用。左图示出了自乙酰胆碱(Ach)注射以来钙流入的时间过程，并且右图示出了表示为对照百分比的钙流入的峰值±SEM)。

如可以看到的，这些肽可以用作皮肤状况的新处理，并且肽402不是T14的天然序列的一部分，并且因此将可能对蛋白酶降解更具抗性。

实施例8-使用T14、T30、肽402和611的浓度-应答实验

参见图9，显示了AchE肽(T14和T30；左图)和较短肽(402和611；右图)对PC12细胞中来自烟碱性乙酰胆碱受体(nAChR)的钙流入峰的浓度-应答曲线的作用。

实施例9-线性肽402和611对上清液中的乙酰胆碱酯酶活性的作用AChE活性测定

使用测量作为AChE活性结果的硫醇基团的存在的Ellman试剂测量AChE活性。关于细胞生存力测定，在实验前一天将PC12细胞铺板。将细胞用T30、T14、402或611肽(1、5、10、100或500μM)单独或与NBP14(1μM)组合处理。处理后，收集每种处理的上清液(灌注液)，并且将来自每种条件的65μl添加至新的平底96孔板，随后添加50μl的Ellman试剂(磷酸盐缓冲液(0.1M)，pH 7.0；底物：乙酰硫胆碱碘化物0.15M；试剂：5，5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸(DTNB))0.01M和NaHCO₃ 17.86mM，使用以下比率：18(磷酸盐缓冲液)：(乙酰硫胆碱碘化物)：(DTNB))。然后将该板在室温温育30分钟，并且使用BMG CLARIOstar Plus在412nm下读取吸光度值10分钟。使用MARS数据分析软件处理结果。

结果

参见图10，显示了在细胞外基质中乙酰胆碱酯酶(AChE)释放作为现存细胞的补偿效应的结果。如可以看到的，402肽在1μM下比611肽更有效力。然而，在500μM下，611肽具有比在1μM下402的值甚至更高的值。肽402是更有效力的，并且因此在低剂量，它增强了烟碱性受体激活后AchE的释放。在高剂量，如T14/T30，肽将是抑制性的。实际上，在更高剂量，肽402让太多的钙进入，并且因此受体磷酸化，并且关闭，因此然后没有AChE的释放。从5μM，肽402对钙离子通道具有抑制作用，这导致活性降低。对于肽611，这种作用被偏移至更高剂量，因为它不那么有效力。交叉的线反映了该偏移。

SEQUENCE LISTING

<110> 神经生物有限公司

<120> 用于皮肤状况的衍生自乙酰胆碱酯酶C-末端的多肽

<130> GBA1V220007343

<150> 2004804.7

<151> 2020-04-01

<160> 12

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 614

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

Met Arg Pro Pro Gln Cys Leu Leu His Thr Pro Ser Leu Ala Ser Pro

1 5 10 15

Leu Leu Leu Leu Leu Leu Trp Leu Leu Gly Gly Gly Val Gly Ala Glu

20 25 30

Gly Arg Glu Asp Ala Glu Leu Leu Val Thr Val Arg Gly Gly Arg Leu

35 40 45

Arg Gly Ile Arg Leu Lys Thr Pro Gly Gly Pro Val Ser Ala Phe Leu

50 55 60

Gly Ile Pro Phe Ala Glu Pro Pro Met Gly Pro Arg Arg Phe Leu Pro

65 70 75 80

Pro Glu Pro Lys Gln Pro Trp Ser Gly Val Val Asp Ala Thr Thr Phe

85 90 95

Gln Ser Val Cys Tyr Gln Tyr Val Asp Thr Leu Tyr Pro Gly Phe Glu

100 105 110

Gly Thr Glu Met Trp Asn Pro Asn Arg Glu Leu Ser Glu Asp Cys Leu

115 120 125

Tyr Leu Asn Val Trp Thr Pro Tyr Pro Arg Pro Thr Ser Pro Thr Pro

130 135 140

Val Leu Val Trp Ile Tyr Gly Gly Gly Phe Tyr Ser Gly Ala Ser Ser

145 150 155 160

Leu Asp Val Tyr Asp Gly Arg Phe Leu Val Gln Ala Glu Arg Thr Val

165 170 175

Leu Val Ser Met Asn Tyr Arg Val Gly Ala Phe Gly Phe Leu Ala Leu

180 185 190

Pro Gly Ser Arg Glu Ala Pro Gly Asn Val Gly Leu Leu Asp Gln Arg

195 200 205

Leu Ala Leu Gln Trp Val Gln Glu Asn Val Ala Ala Phe Gly Gly Asp

210 215 220

Pro Thr Ser Val Thr Leu Phe Gly Glu Ser Ala Gly Ala Ala Ser Val

225 230 235 240

Gly Met His Leu Leu Ser Pro Pro Ser Arg Gly Leu Phe His Arg Ala

245 250 255

Val Leu Gln Ser Gly Ala Pro Asn Gly Pro Trp Ala Thr Val Gly Met

260 265 270

Gly Glu Ala Arg Arg Arg Ala Thr Gln Leu Ala His Leu Val Gly Cys

275 280 285

Pro Pro Gly Gly Thr Gly Gly Asn Asp Thr Glu Leu Val Ala Cys Leu

290 295 300

Arg Thr Arg Pro Ala Gln Val Leu Val Asn His Glu Trp His Val Leu

305 310 315 320

Pro Gln Glu Ser Val Phe Arg Phe Ser Phe Val Pro Val Val Asp Gly

325 330 335

Asp Phe Leu Ser Asp Thr Pro Glu Ala Leu Ile Asn Ala Gly Asp Phe

340 345 350

His Gly Leu Gln Val Leu Val Gly Val Val Lys Asp Glu Gly Ser Tyr

355 360 365

Phe Leu Val Tyr Gly Ala Pro Gly Phe Ser Lys Asp Asn Glu Ser Leu

370 375 380

Ile Ser Arg Ala Glu Phe Leu Ala Gly Val Arg Val Gly Val Pro Gln

385 390 395 400

Val Ser Asp Leu Ala Ala Glu Ala Val Val Leu His Tyr Thr Asp Trp

405 410 415

Leu His Pro Glu Asp Pro Ala Arg Leu Arg Glu Ala Leu Ser Asp Val

420 425 430

Val Gly Asp His Asn Val Val Cys Pro Val Ala Gln Leu Ala Gly Arg

435 440 445

Leu Ala Ala Gln Gly Ala Arg Val Tyr Ala Tyr Val Phe Glu His Arg

450 455 460

Ala Ser Thr Leu Ser Trp Pro Leu Trp Met Gly Val Pro His Gly Tyr

465 470 475 480

Glu Ile Glu Phe Ile Phe Gly Ile Pro Leu Asp Pro Ser Arg Asn Tyr

485 490 495

Thr Ala Glu Glu Lys Ile Phe Ala Gln Arg Leu Met Arg Tyr Trp Ala

500 505 510

Asn Phe Ala Arg Thr Gly Asp Pro Asn Glu Pro Arg Asp Pro Lys Ala

515 520 525

Pro Gln Trp Pro Pro Tyr Thr Ala Gly Ala Gln Gln Tyr Val Ser Leu

530 535 540

Asp Leu Arg Pro Leu Glu Val Arg Arg Gly Leu Arg Ala Gln Ala Cys

545 550 555 560

Ala Phe Trp Asn Arg Phe Leu Pro Lys Leu Leu Ser Ala Thr Asp Thr

565 570 575

Leu Asp Glu Ala Glu Arg Gln Trp Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser

580 585 590

Ser Tyr Met Val His Trp Lys Asn Gln Phe Asp His Tyr Ser Lys Gln

595 600 605

Asp Arg Cys Ser Asp Leu

610

<210> 2

<211> 30

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

Lys Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys Asn

1 5 10 15

Gln Phe Asp His Tyr Ser Lys Gln Asp Arg Cys Ser Asp Leu

20 25 30

<210> 3

<211> 14

<212> PRT

<213> 智人

<400> 3

Ala Glu Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His Trp Lys

1 5 10

<210> 4

<211> 15

<212> PRT

<213> 智人

<400> 4

Asn Gln Phe Asp His Tyr Ser Lys Gln Asp Arg Cys Ser Asp Leu

1 5 10 15

<210> 5

<211> 4

<212> PRT

<213> 智人

<400> 5

Trp Lys Ala Glu

1

<210> 6

<211> 4

<212> PRT

<213> 智人

<400> 6

Lys Ala Glu Phe

1

<210> 7

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 7

Ser Ser Tyr Met Val His

1 5

<210> 8

<211> 6

<212> PRT

<213> 智人

<400> 8

Ser Tyr Met Val His Trp

1 5

<210> 9

<211> 8

<212> PRT

<213> 智人

<400> 9

Phe His Arg Trp Ser Ser Tyr Met

1 5

<210> 10

<211> 8

<212> PRT

<213> 智人

<400> 10

His Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val

1 5

<210> 11

<211> 8

<212> PRT

<213> 智人

<400> 11

Arg Trp Ser Ser Tyr Met Val His

1 5

<210> 12

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<400> 12

Tyr Met Val His Trp Lys Ala Glu Phe His

1 5 10

Claims (27)

1.一种衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段，用于预防、处理或改善与衰老有关的皮肤状况。

2.根据权利要求1所述用于的多肽或者其生物活性变体或片段，其中，乙酰胆碱酯酶包含基本上如SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列或者其生物活性变体或片段。

3.根据权利要求1或2所述用于的多肽或者其生物活性变体或片段，其中，多肽或者其生物活性变体或片段包含：

(i)3与50个之间的氨基酸残基、3与40个之间的氨基酸残基、3与35个之间的氨基酸残基或3至30个之间的氨基酸残基；或

(ii)3与25个之间的氨基酸残基、3与20个之间的氨基酸残基、3与15个之间的氨基酸残基或3与10个之间的氨基酸残基；或

(iii)3与8个之间的氨基酸残基，或3与7个之间的氨基酸残基。

4.根据前述权利要求中任一项所述用于的多肽或者其生物活性变体或片段，其中，多肽或者其生物活性变体或片段包含基本上如SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列或者其生物活性变体或片段，或者由基本上如SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列或者其生物活性变体或片段组成。

5.根据前述权利要求中任一项所述用于的多肽或者其生物活性变体或片段，其中，多肽或者其生物活性变体或片段包含基本上如SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列或者其生物活性变体或片段，或者由基本上如SEQ ID NO：3中所示的氨基酸序列或者其生物活性变体或片段组成。

6.根据前述权利要求中任一项所述用于的多肽或者其生物活性变体或片段，其中，多肽或者其生物活性变体或片段包含基本上如SEQ ID NO：5或6中所示的氨基酸序列，或者由基本上如SEQ ID NO：5或6中所示的氨基酸序列组成。

7.根据前述权利要求中任一项所述用于的多肽或者其生物活性变体或片段，其中，多肽或者其生物活性变体或片段包含基本上如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所示的氨基酸序列，或者由基本上如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8中所示的氨基酸序列组成。

8.根据前述权利要求中任一项所述用于的多肽或者其生物活性变体或片段，其中，多肽或者其生物活性变体或片段包含基本上如SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列，或者由基本上如SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列组成。

9.根据前述权利要求中任一项所述用于的多肽或者其生物活性变体或片段，其中，多肽或者其生物活性变体或片段包含基本上如SEQ ID NO：12中所示的氨基酸序列，或者由基本上如SEQ ID NO：12中所示的氨基酸序列组成。

10.根据前述权利要求中任一项所述用于的多肽或者其生物活性变体或片段，其中，使用从头肽合成方法产生多肽或者其生物活性变体或片段。

11.一种衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段，在用于预防或处理与衰老有关的皮肤状况中的用途。

12.根据权利要求11所述的用途，其中多肽或者其生物活性变体或片段如权利要求1-10中任一项所定义。

13.根据权利要求1至10中任一项所述用于的多肽或者其生物活性变体或片段，或根据权利要求11或12所述的用途，其中与衰老有关的皮肤状况可以选自由以下组成的组：细纹、皱纹、变色、不均匀的色素沉着、下垂、增大的孔、粗糙的皮肤、干燥的皮肤、萎缩纹；不均匀的色调；瑕疵；皮肤增厚或变薄；以及它们的任何组合。

14.根据权利要求1至10中任一项所述用于的多肽或者其生物活性变体或片段，用于预防、延缓、阻止或逆转哺乳动物皮肤中的皱纹形成的过程。

15.一种用于皮肤的美容处理的方法，所述方法包括向皮肤施用衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段。

16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述多肽或者其生物活性变体或片段如权利要求1至10中任一项所定义的。

17.一种衍生自乙酰胆碱酯酶的C-末端的多肽或者其生物活性变体或片段，用于(i)预防、处理或改善脱发或秃头，或

(ii)作为皮肤增白剂。

18.根据权利要求17所述用于的多肽或者其生物活性变体或片段，其中，多肽或者其生物活性变体或片段如权利要求1至10中任一项所定义。

19.一种预防、处理或改善脱发或秃头，或者用于美白皮肤的方法，所述方法包括，向需要这种处理的受试者施用或已经施用处理有效量的衍生自乙酰胆碱酯酶C-末端的多肽，或者其生物活性变体或片段。

20.一种衍生自乙酰胆碱酯酶C-末端的多肽，或者其生物活性变体或片段，用于处理创伤。

21.根据权利要求20所述用于的多肽，其中，多肽或者其生物活性变体或片段如权利要求1至10中任一项所定义的。

22.一种皮肤状况处理的药物组合物，包含处理有效量的根据权利要求1至10中任一项所述的多肽或者其生物活性变体或片段，以及可选地药物学上可接受的载体。

23.一种用于制备根据权利要求22所述的皮肤状况处理的药物组合物的方法，所述方法包括将处理有效量的根据权利要求1至10中任一项所述的多肽或者其生物活性变体或片段与药物学上可接受的载体组合。

24.一种化妆品组合物，包含有效量的根据权利要求1至10中任一项所述的多肽或者其生物活性变体或片段，以及可选地化妆品上可接受的载体。

25.一种用于制备根据权利要求24所述的化妆品组合物的方法，所述方法包括将处理有效量的根据权利要求1至10中任一项所述的多肽或者其生物活性变体或片段与化妆品上可接受的载体组合。

26.根据权利要求22或24所述的组合物，其中，所述组合物是：

(a)防晒霜、油或洗剂；

(b)保湿或湿润制剂；

(c)抗衰老或抗皱制剂；

(d)刺激或促进毛发生长的制剂；或

(e)皮肤增白制剂。

27.一种或多种肽、其衍生物或类似物，其包含基本上如SEQ ID NO：2、3或5-12中所示的氨基酸序列或者由基本上如SEQ ID NO：2、3或5-12中所示的氨基酸序列组成，用于预防、处理或改善：

(i)与衰老有关的皮肤状况；

(ii)伤口；

(iii)脱发或秃头；或

(iv)作为皮肤增白剂。

Images