CN115462525A - 一种血脂调节组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种血脂调节组合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提出了一种血脂调节组合物及其制备方法和应用,属于中药技术领域。将大豆经过醋泡处理后,与中药提取物、红曲粉混合,酶解得到酶解产物;另将沙棘籽原汁酶解加入活化培养基中,分别对罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌进行活化培养,将活化后的菌种种子液与所述酶解产物混合发酵,得到发酵提取物,然后与含有山楂多糖、羧甲基茯苓多糖的益生元添加剂,和含有泽泻醇C‑23‑醋酸酯、人参总皂苷的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物,具有抑制胆固醇合成,提高HDL‑C/TC比值的作用,能很好的调节血脂的作用,具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及中药技术领域,具体涉及一种血脂调节组合物及其制备方法和应用。
背景技术
高血脂是当代最常见的流行病之一,是一种严重危害人体健康影响人类生活质量的疾病。高血症病也是诱发心力衰竭、脑梗塞、脑出血、肾衰竭等病症的重要因素。
高血脂发病率逐年攀升,由于人们生活水平的提高以及膳食结构的变化,高血脂病出现年轻化态势。目前国内外临床上应用的调脂类中、西类药物很多。西药如非诺贝特、益多酯、呋喃甲氢龙、他汀类等,但以他汀类占主导地位,他汀类药物虽可有效降低血清胆固醇含量,但有报道称该药物与肌肉病变等有关。国内疗效较好的降脂中成药主要有:降脂灵片、通脉降脂片、软脉灵、脂必妥片、安络宁等,这些药物在治疗高血脂症方面发挥了很大的作用。但在高血脂症的治疗过程中化学药虽然作用迅速,但是副作用也大,明显影响血脂血糖等的代谢,还可能损伤心、脑、肾等器官,同时这些药物对高血压引起的高血脂、高血粘、靶器官的损伤等病症无明显的改善作用。服用这些药治标不治本,停药后复发率几乎是100%,病人只能终生依赖药物治疗。
药食两用的中药是指既可用作食品又可用作药品的动物、植物、矿物及其加工品,具有剂量范围宽、毒副作用小等特点。二十一世纪人们追求的是纯天然、无污染、营养、健康、安全的食品。特别是纯天然、无农药残留、无重金属污染又具有营养、保健、安全的食品,必将倍受消费者青睐。
发明内容
本发明的目的在于提出一种血脂调节组合物及其制备方法和应用,具有抑制胆固醇合成,增加HDL-C含量,降低TC、TG含量,提高HDL-C/TC比值的作用,从而起到很好的调节血脂的作用,具有广阔的应用前景。
本发明的技术方案是这样实现的:
本发明提供一种血脂调节组合物的制备方法,将大豆经过醋泡处理后,与中药提取物、红曲粉混合,酶解得到酶解产物;另将沙棘籽原汁酶解加入活化培养基中,分别对罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌进行活化培养,将活化后的菌种种子液与所述酶解产物混合发酵,得到发酵提取物,然后与含有山楂多糖、羧甲基茯苓多糖的益生元添加剂,和含有泽泻醇C-23-醋酸酯、人参总皂苷的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
作为本发明的进一步改进,包括以下步骤:
S1.大豆的处理:将大豆洗净,去皮,浸泡在醋液中,过滤,洗涤,干燥,粉碎,醋泡大豆粉;
S2.中药提取物的制备:将决明子、大黄、姜黄、三七、绞股蓝和荷叶分别洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,加入水中,加热至沸提取,过滤,收集滤液,滤渣重复提取1次,合并两次滤液,浓缩,干燥,得到中药提取物;
S3.酶解:将红曲粉碎,与步骤S1制得的醋泡大豆粉、步骤S2制得的中药提取物混合加入水中,加入第一复合酶酶解,灭酶,得到酶解产物;
S4.沙棘籽酶解提取物的制备:将沙棘籽榨汁后,过滤,得到沙棘原汁,浓缩后,加入第二复合酶酶解,灭酶,冷冻干燥,得到沙棘籽酶解提取物;
S5.活化培养基的制备:将碳源、氮源、无机盐、维生素和步骤S4制得的沙棘籽酶解提取物加入水中,调节pH值,灭菌,得到活化培养基;
S6.菌种的活化:将罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌分别加入不同的步骤S5制得的活化培养基进行活化培养,得到菌种种子液;
S7.发酵:将步骤S6制得的罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S3得到的酶解产物加入总菌种种子液中,发酵培养,浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物;
S8.益生元添加剂的制备:将山楂多糖、羧甲基茯苓多糖混合均匀,得到益生元添加剂;
S9.活性添加剂的制备:将泽泻醇C-23-醋酸酯、人参总皂苷混合均匀,得到活性添加剂;
S10.血脂调节组合物的制备:将步骤S7制得的发酵提取物、步骤S8制得的益生元添加剂和步骤S9制得的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
作为本发明的进一步改进,步骤S1中所述醋液为山西老陈醋,执行标准为GB/T19777-2013,所述大豆与醋液的固液比为1:2-4g/mL,所述浸泡时间为5-7d;步骤S2中所述决明子、大黄、姜黄、三七、绞股蓝和荷叶的质量比为5-10:7-12:2-5:1-3:3-5:1-2;所述中药粉和水或滤渣和水的固液比为1:5-7g/mL;每次提取时间为2-3h;步骤S3中所述红曲、醋泡大豆粉和中药提取物的质量比为3-5:5-7:10;所述第一复合酶选自纤维素酶、果胶酶、α-淀粉酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶中的至少两种;所述酶解的温度为40-50℃,时间为3-5h。
作为本发明的进一步改进,所述第一复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的混合物,质量比为5:1-2。
作为本发明的进一步改进,步骤S4中所述第二复合酶选自纤维素酶、果胶酶、α-淀粉酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶中的至少两种;所述酶解得温度为35-45℃,时间为1-2h;步骤S5中所述碳源、氮源、无机盐、维生素、沙棘籽酶解提取物和水的质量比为15-25:7-12:1-2:0.5-1:10:100-200;所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、可溶性淀粉、糖蜜、琼脂中的至少一种;所述氮源选自硝酸铵、硝酸钾、硝酸钠、氯化铵、氨基酸、蛋白胨、牛肉浸粉、鱼骨粉中的至少一种;所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、硫酸锰、氯化锰、氯化铁、硫酸铁、氯化铜、硫酸铜、氯化镁、硫酸镁、氯化钙、硫酸钙、硫酸钾、硫酸钠中的至少一种;所述维生素选自维生素A、维生素C、维生素D、维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B6、维生素B12、叶酸、维生素K中的至少一种;所述调节pH值至6.6-7.2;所述灭菌的方法为紫外线灭菌或者钴-60辐照灭菌;步骤S6中所述活化培养的温度为36-39℃,时间为18-24h;所述菌种种子液的含菌量为108-109cfu/mL。
作为本发明的进一步改进,所述第二复合酶为果胶酶和中性蛋白酶的混合物,质量比为7:2-4。
作为本发明的进一步改进,步骤S7中所述罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌菌种种子液的质量比为2-5:1-3:1-2;所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:3-5g/mL;所述发酵培养的温度为35-39℃,转速为50-70r/min,时间为36-48h;步骤S8中所述山楂多糖、羧甲基茯苓多糖的质量比为5-7:10;步骤S9中所述泽泻醇C-23-醋酸酯、人参总皂苷的质量比为1-3:2-4;步骤S10中所述发酵提取物、益生元添加剂和活性添加剂的质量比为10:1-2:0.5-1。
作为本发明的进一步改进,具体包括以下步骤:
S1.大豆的处理:将大豆洗净,去皮,浸泡在山西老陈醋中5-7d,所述大豆与醋液的固液比为1:2-4g/mL,过滤,洗涤,干燥,粉碎,醋泡大豆粉;
S2.中药提取物的制备:将5-10重量份决明子、7-12重量份大黄、2-5重量份姜黄、1-3重量份三七、3-5重量份绞股蓝和1-2重量份荷叶分别洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,加入水中,所述中药粉和水的固液比为1:5-7g/mL,加热至沸提取2-3h,过滤,收集滤液,滤渣重复提取1次,所述滤渣和水的固液比为1:5-7g/mL,合并两次滤液,浓缩,干燥,得到中药提取物;
S3.酶解:将3-5重量份红曲粉碎,与5-7重量份步骤S1制得的醋泡大豆粉、10重量份步骤S2制得的中药提取物混合加入100重量份水中,加入2-5重量份第一复合酶,40-50℃酶解3-5h,灭酶,得到酶解产物;
所述第一复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的混合物,质量比为5:1-2;
S4.沙棘籽酶解提取物的制备:将沙棘籽榨汁后,过滤,得到沙棘原汁,浓缩后,得到浓缩汁,向10重量份浓缩汁中加入0.5-1重量份第二复合酶,35-45℃酶解1-2h,灭酶,冷冻干燥,得到沙棘籽酶解提取物;
所述第二复合酶为果胶酶和中性蛋白酶的混合物,质量比为7:2-4;
S5.活化培养基的制备:将15-25重量份碳源、7-12重量份氮源、1-2重量份无机盐、0.5-1重量份维生素和10重量份步骤S4制得的沙棘籽酶解提取物加入100重量份水中,调节pH值至6.6-7.2,紫外线灭菌或者钴-60辐照灭菌,得到活化培养基;
S6.菌种的活化:将罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌分别加入不同的步骤S5制得的活化培养基,36-39℃活化培养18-24h,得到菌种种子液,含菌量为108-109cfu/mL;
S7.发酵:将步骤S6制得的2-5重量份罗伊氏乳杆菌、1-3重量份纳豆芽孢杆菌、1-2重量份紫红曲霉菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S3得到的酶解产物加入总菌种种子液中,所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:3-5g/mL,发酵培养,所述发酵培养的温度为35-39℃,转速为50-70r/min,时间为36-48h,浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物;
S8.益生元添加剂的制备:将5-7重量份山楂多糖、10重量份羧甲基茯苓多糖混合均匀,得到益生元添加剂;
S9.活性添加剂的制备:将1-3重量份泽泻醇C-23-醋酸酯、2-4重量份人参总皂苷混合均匀,得到活性添加剂;
S10.血脂调节组合物的制备:将10重量份步骤S7制得的发酵提取物、1-2重量份步骤S8制得的益生元添加剂和0.5-1重量份步骤S9制得的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
本发明进一步保护一种上述的制备方法制得的血脂调节组合物。
本发明进一步保护一种上述的血脂调节组合物在制备预防、辅助治疗和治疗高血脂的产品中的应用。
本发明具有如下有益效果:发酵醋纳豆是将大豆经过醋泡后,在经过纳豆芽孢杆菌进行发酵大豆醋纳豆,然后加入发酵菌发酵得到了发酵醋纳豆。制得的发酵醋纳豆中的皂甙可以降低血清TC(血清总胆固醇)的含量。此外,发酵醋纳豆中的亚油酸、大豆纤维、维生素E、钙等均有很好的调节血脂作用。发酵醋纳豆的大豆蛋白的赖氨酸/精氨酸比值小,其中,赖氨酸能抑制肝中精氨酸酶的活性,使更多精氨酸用于合成含富精氨酸的载体蛋白,赖氨酸是引起高血脂作用最强的脂蛋白成分,在发酵醋纳豆中的含量较少,从而避免引起高血脂的情况。发酵醋纳豆中的低聚糖还有增加HDL-C(高密度脂蛋白胆固醇),降低TC、TG(血清甘油三酯/三酰甘油),提高HDL-C/TC比值的作用,这是因为大豆低聚糖能被双歧杆菌利用,从而促进双歧杆菌的增殖的生长,而双歧杆菌具有降低胆固醇的作用。另外,发酵醋纳豆中含有的可溶性膳食纤维超过20%。这种可溶性的膳食纤维能稳定的降脂,明显降低TC、升高HDL-C/TC比值。大豆纤维可直接干扰脂固醇在肠内的吸收或胆汁在肠内的重吸收,使人体中胆汁酸排出量明显增加,从而降血脂发挥重要作用。同时,纳豆芽孢杆菌不受胃液的强酸影响,能很快在肠道内定植。纳豆芽孢杆菌所产生的吡啶二羧酸,有效杀灭、抑制肠道内的有害菌和病毒,使肠内菌群达到一个有利健康的动态平衡,从而通过调节肠道微生物来调节血脂平衡。同时,纳豆激酶还可以溶解毛细血管里的血栓、脂肪等,也能起到较好的降血脂的效果。
红曲为红曲霉的菌丝体寄生在粳米上而成的红曲米,其本身含有大量的红曲色素,包括:红斑素、红曲红素、红曲素、红曲黄素、红斑胺、红曲红胺等,这类红曲色素能够降低血脂,降低血压,具有抗氧化和强化肝脏功能,促进细胞新陈代谢,提高人体免疫力;另外,含有的莫纳克林K的化学结构类似于洛佛他汀又不同于洛佛他汀,不仅具有很好地降低胆固醇、调节血脂的效果,且安全无毒副作用。另外,含有的丰富的γ-氨基丁酸、氨基葡萄糖、卵磷脂、类黄酮、不饱和脂肪酸等,都有较好的调节血脂的效果。红曲经过进一步发酵后,还能明显提高肠道中的厚壁菌门数量,从而起到一定的调节血脂的作用,另外,发酵产物中含有的羟甲基四戊酰辅酶(HMGCOA)还原酶抑制剂,HMGCOA还原酶是胆固醇体内生物合成的关键酶,HMGCOA还原酶抑制剂通过抑制胆固醇的分泌从而起到很好的调节血脂的作用。
中药组分包括决明子、大黄、姜黄、三七、绞股蓝和荷叶,决明子具有较好的降脂效果,其含有的蒽醌具有导泻作用,所含蛋白质能改善肝功能、抑制内源TC合成;荷叶能降低全血比黏度、血细胞比容,改善血液浓黏状态;绞股蓝总苷能显著降低高脂血症大鼠血清TC、TG水平,提高HLD-C浓度;三七味甘、微苦、性温,具有止血、散瘀、消肿、止痛、补虚、强壮等功效,具有很好的调节血脂的效果;大黄味苦性寒,大黄有泻下、通疲导滞、抗菌消炎、止痛止血、抗肿瘤和抗突变等作用,含大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚等蒽醌衍生物,具有降低血压和胆固醇等作用;姜黄为姜科植物姜黄的干燥根茎,具有抗炎、降脂、抗氧化、清除自由基、抗粥样动脉硬化等多方面的药理作用,姜黄含有丰富的挥发油、姜黄素、姜黄醇等成分,具有降低血浆总胆固醇、β-脂蛋白和甘油三酯等的作用,并对动脉粥样硬化有一定的效果。多种中药组分经过水提取,酶解、发酵后产生大量的小分子活性组分,相互协同作用下,起到了很好的调节血脂的作用。
沙棘籽酶解提取物中含有维生素E、类胡萝卜素、亚油酸、黄烷酮、肌醇等多种成分,其中,维生素E和亚油酸均可以防止动脉粥样硬化。另外,沙棘籽酶解提取物对变形菌门、变形菌纲、肠杆菌目、肠杆菌属具有较强的抑制作用,同时,能丰富肠道嗜黏阿克曼氏菌和Agilis乳杆菌,从而起到调节总胆固醇、体重指数和血糖的效果。将沙棘经过榨汁,浓缩,酶解后,还得到了大量的小分子糖、短肽物质,加入发酵菌活化培养基中,明显促进发酵菌的活化,提高发酵菌的抗逆性和产酸能力,随后,将活化培养基于发酵底物混合,制得的发酵产物中也含有丰富的沙棘活性物质,起到较好的调节血脂的效果。
肠道菌群与胆汁酸代谢密切相关,胆汁酸是胆固醇分解代谢的主要下游产物,其产生和排泄对维持胆固醇稳态至关重要。益生菌产生的大量的短链脂肪酸降低血浆中胆固醇的浓度,也可以介导L-肉碱代谢,形成三甲胺N-氧化物,三甲胺N-氧化物可以参与胆固醇和甾醇代谢的逆向转运,并促进胆汁酸的生成。益生菌的菌体成分与代谢产物中的相关成分,可直接作用于食物中的胆固醇,降低肠道内的胆固醇吸收率,且能够将胆固醇转变为胆酸盐,控制人体血清胆固醇水平,从而起到很好的调节人体血脂的水平的效果。
罗伊氏乳杆菌已作为益生菌被我国批准用于保健食品中,对肠黏膜具有很强的黏附能力,可改善肠道菌群分布,拮抗有害菌定植,从而调节血脂;纳豆芽孢杆菌具有耐酸、耐热特性,在胃酸下四小时存活率为100%,同时具有强力的病原菌抑制能力,其产物纳豆激酶还具有很好的降血脂、溶血栓的效果,有效改善微循环障碍;紫红曲霉菌经过发酵,能自身合成生物素、硫胺素、核黄素、麦角固醇等多种维生素、多种酶类,有葡萄糖淀粉酶、葡萄糖苷酶、蛋白水解酶、酯化酶和多种代谢产物,主要有红曲色素、胆固醇合成抑制剂、降血压物质、多种酶类、抑菌物质及其它多种生理活性物质。三种益生菌的协同作用下,能起到很好的抑制胆固醇合成,调节血脂的效果。
羧甲基茯苓多糖一方面能很好的溶于水中,从而能够明显恢复和调节肠道微生物群结构。山楂多糖能有效缓解肠道微生物群异常引起的氧化三甲胺水平升高,减缓高脂血症及动脉粥样硬化的发病进程。羧甲基茯苓多糖和山楂多糖协同作用下,能起到很好地益生元的作用,从而明显促进发酵益生菌的增殖以及肠道益生菌的增殖,通过对肠道益生菌的正调节,从而起到较好的调节血脂的效果,两者的添加具有协同增效的作用。
泽泻醇C-23-醋酸酯能改变肠道微生物群的结构,通过增加益生菌的相对丰度、减少致病菌的相对丰度从而对血脂异常产生影响。人参总皂苷能明显加速大鼠血液胆固醇和血浆脂蛋白的生物合成,并且加快血液胆固醇的分解。这种双向调节作用可以促进高脂血症患者总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇下降。与发酵产物混合后,得到的血脂调节组合物具有抑制胆固醇合成,增加HDL-C含量,降低TC、TG含量,提高HDL-C/TC比值的作用,从而起到很好的调节血脂的作用,具有广阔的应用前景。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
罗伊氏乳杆菌,100cfu/g,购于北京北纳创联生物技术研究院;纳豆芽孢杆菌,100cfu/g,购于西安兰杉生物科技有限公司;紫红曲霉菌,ACCC30352,购于沂源康源生物科技有限公司。
纤维素酶,1.1万U/g,购于夏盛(北京)生物科技开发有限公司;果胶酶,6万U/g,购于夏盛(北京)生物科技开发有限公司;中性蛋白酶,5万U/g,购于夏盛(北京)生物科技开发有限公司;无花果蛋白酶,10万U/g,购于山东萍聚生物科技有限公司。
山楂多糖,多糖含量大于30%,购于扶风斯诺特生物科技有限公司;羧甲基茯苓多糖,纯度大于80%,购于武汉鼎信通药业有限公司;泽泻醇C-23-醋酸酯购于云南西力生物技术股份有限公司;人参总皂苷,含量大于80%,购于陕西慈缘生物技术有限公司。
山西老陈醋,执行标准为GB/T 19777-2013,购于山西水塔醋业股份有限公司。
实施例1
本实施例提供一种血脂调节组合物,具体包括以下步骤:
S1.大豆的处理:将10g大豆洗净,去皮,浸泡在20mL山西老陈醋中5d,过滤,清水洗涤,70℃干燥2h,粉碎,醋泡大豆粉;
S2.中药提取物的制备:将5g决明子、7g大黄、2g姜黄、1g三七、3g绞股蓝和1g荷叶分别洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,加入水中,所述中药粉和水的固液比为1:5g/mL,加热至沸提取2h,过滤,收集滤液,滤渣重复提取1次,所述滤渣和水的固液比为1:5g/mL,合并两次滤液,有机膜浓缩,70℃干燥2h,得到中药提取物;
S3.酶解:将3g红曲粉碎,与5g步骤S1制得的醋泡大豆粉、10g步骤S2制得的中药提取物混合加入100g中,加入2g第一复合酶,40℃酶解3h,105℃灭酶10min,得到酶解产物;
所述第一复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的混合物,质量比为5:1;
S4.沙棘籽酶解提取物的制备:将沙棘籽榨汁后,过滤,得到沙棘原汁,有机膜浓缩后,得到浓缩汁,向10g浓缩汁中加入0.5g第二复合酶,35℃酶解1h,105℃灭酶10min,冷冻干燥,得到沙棘籽酶解提取物;
所述第二复合酶为果胶酶和中性蛋白酶的混合物,质量比为7:2;
S5.活化培养基的制备:将10g葡萄糖、5g蔗糖、2g氯化铵、5g蛋白胨、0.8g氯化钠、0.1g硫酸铜、0.1g氯化镁、0.5g维生素C和10g步骤S4制得的沙棘籽酶解提取物加入100g中,调节pH值至6.6,钴-60辐照灭菌,得到活化培养基,平均分成3份,备用;
S6.菌种的活化:将罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌分别加入不同的步骤S5制得的活化培养基,36℃活化培养18h,得到菌种种子液,含菌量为108cfu/mL;
S7.发酵:将步骤S6制得的20g罗伊氏乳杆菌、10g纳豆芽孢杆菌、10g紫红曲霉菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S3得到的酶解产物加入总菌种种子液中,所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:3g/mL,发酵培养,所述发酵培养的温度为35℃,转速为50r/min,时间为36h,有机膜浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物;
S8.益生元添加剂的制备:将5g山楂多糖、10g羧甲基茯苓多糖混合均匀,得到益生元添加剂;
S9.活性添加剂的制备:将1g泽泻醇C-23-醋酸酯、2g人参总皂苷混合均匀,得到活性添加剂;
S10.血脂调节组合物的制备:将10g步骤S7制得的发酵提取物、1g步骤S8制得的益生元添加剂和0.5g步骤S9制得的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
实施例2
本实施例提供一种血脂调节组合物,具体包括以下步骤:
S1.大豆的处理:将10g大豆洗净,去皮,浸泡在40mL山西老陈醋中7d,过滤,清水洗涤,70℃干燥2h,粉碎,醋泡大豆粉;
S2.中药提取物的制备:将10g决明子、12g大黄、5g姜黄、3g三七、5g绞股蓝和2g荷叶分别洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,加入水中,所述中药粉和水的固液比为1:7g/mL,加热至沸提取3h,过滤,收集滤液,滤渣重复提取1次,所述滤渣和水的固液比为1:7g/mL,合并两次滤液,有机膜浓缩,70℃干燥2h,得到中药提取物;
S3.酶解:将5g红曲粉碎,与7g步骤S1制得的醋泡大豆粉、10g步骤S2制得的中药提取物混合加入100g中,加入5g第一复合酶,50℃酶解5h,105℃灭酶10min,得到酶解产物;
所述第一复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的混合物,质量比为5:2;
S4.沙棘籽酶解提取物的制备:将沙棘籽榨汁后,过滤,得到沙棘原汁,有机膜浓缩后,得到浓缩汁,向10g浓缩汁中加入1g第二复合酶,45℃酶解2h,105℃灭酶10min,冷冻干燥,得到沙棘籽酶解提取物;
所述第二复合酶为果胶酶和中性蛋白酶的混合物,质量比为7:4;
S5.活化培养基的制备:将15g葡萄糖、5g果糖、5g麦芽糖、2g硝酸铵、10g蛋白胨、1g氯化钠、0.2g氯化铜、0.2g氯化锰、0.2g氯化铁、0.2g硫酸镁、0.2g氯化钙、0.5g维生素A、0.5g维生素C和10g步骤S4制得的沙棘籽酶解提取物加入100g中,调节pH值至7.2,紫外线灭菌,得到活化培养基,平均分成3份,备用;
S6.菌种的活化:将罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌分别加入不同的步骤S5制得的活化培养基,39℃活化培养24h,得到菌种种子液,含菌量为109cfu/mL;
S7.发酵:将步骤S6制得的50g罗伊氏乳杆菌、30g纳豆芽孢杆菌、20g紫红曲霉菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S3得到的酶解产物加入总菌种种子液中,所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:5g/mL,发酵培养,所述发酵培养的温度为39℃,转速为70r/min,时间为48h,有机膜浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物;
S8.益生元添加剂的制备:将7g山楂多糖、10g羧甲基茯苓多糖混合均匀,得到益生元添加剂;
S9.活性添加剂的制备:将3g泽泻醇C-23-醋酸酯、4g人参总皂苷混合均匀,得到活性添加剂;
S10.血脂调节组合物的制备:将10g步骤S7制得的发酵提取物、2g步骤S8制得的益生元添加剂和1g步骤S9制得的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
实施例3
本实施例提供一种血脂调节组合物,具体包括以下步骤:
S1.大豆的处理:将10g大豆洗净,去皮,浸泡在30mL山西老陈醋中6d,过滤,清水洗涤,70℃干燥2h,粉碎,醋泡大豆粉;
S2.中药提取物的制备:将7g决明子、10g大黄、3.5g姜黄、2g三七、4g绞股蓝和1.5g荷叶分别洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,加入水中,所述中药粉和水的固液比为1:6g/mL,加热至沸提取2.5h,过滤,收集滤液,滤渣重复提取1次,所述滤渣和水的固液比为1:6g/mL,合并两次滤液,有机膜浓缩,70℃干燥2h,得到中药提取物;
S3.酶解:将4g红曲粉碎,与6g步骤S1制得的醋泡大豆粉、10g步骤S2制得的中药提取物混合加入100g中,加入3.5g第一复合酶,45℃酶解4h,105℃灭酶10min,得到酶解产物;
所述第一复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的混合物,质量比为5:1.5;
S4.沙棘籽酶解提取物的制备:将沙棘籽榨汁后,过滤,得到沙棘原汁,有机膜浓缩后,得到浓缩汁,向10g浓缩汁中加入0.7g第二复合酶,40℃酶解1.5h,105℃灭酶10min,冷冻干燥,得到沙棘籽酶解提取物;
所述第二复合酶为果胶酶和中性蛋白酶的混合物,质量比为7:3;
S5.活化培养基的制备:将12g葡萄糖、1g蔗糖、5g果糖、2g麦芽糖、2g硝酸铵、7g蛋白胨、1g氯化铵、1g氯化钾、0.1g硫酸锰、0.1g硫酸铁、0.1g氯化铜、0.1g硫酸镁、0.1g氯化钙、0.5g维生素C、0.1g维生素B12、0.1g叶酸和10g步骤S4制得的沙棘籽酶解提取物加入100g中,调节pH值至7,紫外线灭菌,得到活化培养基,平均分成3份,备用;
S6.菌种的活化:将罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌分别加入不同的步骤S5制得的活化培养基,37℃活化培养21h,得到菌种种子液,含菌量为109cfu/mL;
S7.发酵:将步骤S6制得的35g罗伊氏乳杆菌、20g纳豆芽孢杆菌、15g紫红曲霉菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S3得到的酶解产物加入总菌种种子液中,所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:4g/mL,发酵培养,所述发酵培养的温度为37℃,转速为60r/min,时间为42h,有机膜浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物;
S8.益生元添加剂的制备:将6g山楂多糖、10g羧甲基茯苓多糖混合均匀,得到益生元添加剂;
S9.活性添加剂的制备:将2g泽泻醇C-23-醋酸酯、3g人参总皂苷混合均匀,得到活性添加剂;
S10.血脂调节组合物的制备:将10g步骤S7制得的发酵提取物、1.5g步骤S8制得的益生元添加剂和0.7g步骤S9制得的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
实施例4
与实施例3相比,第一复合酶为单一的纤维素酶,其他条件均不改变。
实施例5
与实施例3相比,第一复合酶为单一的无花果蛋白酶,其他条件均不改变。
实施例6
与实施例3相比,第二复合酶为单一的果胶酶,其他条件均不改变。
实施例7
与实施例3相比,第二复合酶为单一的中性蛋白酶,其他条件均不改变。
对比例1
与实施例3相比,未进行步骤S1,大豆没有经过醋泡处理,其他条件均不改变。
具体包括以下步骤:
S1.中药提取物的制备:将7g决明子、10g大黄、3.5g姜黄、2g三七、4g绞股蓝和1.5g荷叶分别洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,加入水中,所述中药粉和水的固液比为1:6g/mL,加热至沸提取2.5h,过滤,收集滤液,滤渣重复提取1次,所述滤渣和水的固液比为1:6g/mL,合并两次滤液,有机膜浓缩,70℃干燥2h,得到中药提取物;
S2.酶解:将4g红曲粉碎,与6g大豆粉、10g步骤S1制得的中药提取物混合加入100g中,加入3.5g第一复合酶,45℃酶解4h,105℃灭酶10min,得到酶解产物;
所述第一复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的混合物,质量比为5:1.5;
S3.沙棘籽酶解提取物的制备:将沙棘籽榨汁后,过滤,得到沙棘原汁,有机膜浓缩后,得到浓缩汁,向10g浓缩汁中加入0.7g第二复合酶,40℃酶解1.5h,105℃灭酶10min,冷冻干燥,得到沙棘籽酶解提取物;
所述第二复合酶为果胶酶和中性蛋白酶的混合物,质量比为7:3;
S4.活化培养基的制备:将12g葡萄糖、1g蔗糖、5g果糖、2g麦芽糖、2g硝酸铵、7g蛋白胨、1g氯化铵、1g氯化钾、0.1g硫酸锰、0.1g硫酸铁、0.1g氯化铜、0.1g硫酸镁、0.1g氯化钙、0.5g维生素C、0.1g维生素B12、0.1g叶酸和10g步骤S3制得的沙棘籽酶解提取物加入100g中,调节pH值至7,紫外线灭菌,得到活化培养基,平均分成3份,备用;
S5.菌种的活化:将罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌分别加入不同的步骤S5制得的活化培养基,37℃活化培养21h,得到菌种种子液,含菌量为109cfu/mL;
S6.发酵:将步骤S5制得的35g罗伊氏乳杆菌、20g纳豆芽孢杆菌、15g紫红曲霉菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S2得到的酶解产物加入总菌种种子液中,所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:4g/mL,发酵培养,所述发酵培养的温度为37℃,转速为60r/min,时间为42h,有机膜浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物;
S7.益生元添加剂的制备:将6g山楂多糖、10g羧甲基茯苓多糖混合均匀,得到益生元添加剂;
S8.活性添加剂的制备:将2g泽泻醇C-23-醋酸酯、3g人参总皂苷混合均匀,得到活性添加剂;
S9.血脂调节组合物的制备:将10g步骤S6制得的发酵提取物、1.5g步骤S8制得的益生元添加剂和0.7g步骤S9制得的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
对比例2
与实施例3相比,步骤S3中未添加红曲,其他条件均不改变。
具体如下:
S3.酶解:将6g步骤S1制得的醋泡大豆粉、10g步骤S2制得的中药提取物混合加入100g中,加入3.5g第一复合酶,45℃酶解4h,105℃灭酶10min,得到酶解产物;
所述第一复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的混合物,质量比为5:1.5。
对比例3
与实施例3相比,步骤S3中未添加醋泡大豆粉,其他条件均不改变。
具体如下:
S3.酶解:将4g红曲粉碎,与10g步骤S2制得的中药提取物混合加入100g中,加入3.5g第一复合酶,45℃酶解4h,105℃灭酶10min,得到酶解产物;
所述第一复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的混合物,质量比为5:1.5。
对比例4
与实施例3相比,步骤S3中未添加中药提取物,其他条件均不改变。
具体包括以下步骤:
S1.大豆的处理:将10g大豆洗净,去皮,浸泡在30mL山西老陈醋中6d,过滤,清水洗涤,70℃干燥2h,粉碎,醋泡大豆粉;
S2.酶解:将4g红曲粉碎,与6g步骤S1制得的醋泡大豆粉混合加入100g中,加入3.5g第一复合酶,45℃酶解4h,105℃灭酶10min,得到酶解产物;
所述第一复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的混合物,质量比为5:1.5;
S3.沙棘籽酶解提取物的制备:将沙棘籽榨汁后,过滤,得到沙棘原汁,有机膜浓缩后,得到浓缩汁,向10g浓缩汁中加入0.7g第二复合酶,40℃酶解1.5h,105℃灭酶10min,冷冻干燥,得到沙棘籽酶解提取物;
所述第二复合酶为果胶酶和中性蛋白酶的混合物,质量比为7:3;
S4.活化培养基的制备:将12g葡萄糖、1g蔗糖、5g果糖、2g麦芽糖、2g硝酸铵、7g蛋白胨、1g氯化铵、1g氯化钾、0.1g硫酸锰、0.1g硫酸铁、0.1g氯化铜、0.1g硫酸镁、0.1g氯化钙、0.5g维生素C、0.1g维生素B12、0.1g叶酸和10g步骤S3制得的沙棘籽酶解提取物加入100g中,调节pH值至7,紫外线灭菌,得到活化培养基,平均分成3份,备用;
S5.菌种的活化:将罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌分别加入不同的步骤S4制得的活化培养基,37℃活化培养21h,得到菌种种子液,含菌量为109cfu/mL;
S6.发酵:将步骤S5制得的35g罗伊氏乳杆菌、20g纳豆芽孢杆菌、15g紫红曲霉菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S3得到的酶解产物加入总菌种种子液中,所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:4g/mL,发酵培养,所述发酵培养的温度为37℃,转速为60r/min,时间为42h,有机膜浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物;
S7.益生元添加剂的制备:将6g山楂多糖、10g羧甲基茯苓多糖混合均匀,得到益生元添加剂;
S8.活性添加剂的制备:将2g泽泻醇C-23-醋酸酯、3g人参总皂苷混合均匀,得到活性添加剂;
S9.血脂调节组合物的制备:将10g步骤S6制得的发酵提取物、1.5g步骤S7制得的益生元添加剂和0.7g步骤S8制得的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
对比例5
与实施例3相比,未进行步骤S3酶解步骤,直接将红曲粉、醋泡大豆粉和中药提取物混合,其他条件均不改变。
具体包括以下步骤:
S1.大豆的处理:将10g大豆洗净,去皮,浸泡在30mL山西老陈醋中6d,过滤,清水洗涤,70℃干燥2h,粉碎,醋泡大豆粉;
S2.中药提取物的制备:将7g决明子、10g大黄、3.5g姜黄、2g三七、4g绞股蓝和1.5g荷叶分别洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,加入水中,所述中药粉和水的固液比为1:6g/mL,加热至沸提取2.5h,过滤,收集滤液,滤渣重复提取1次,所述滤渣和水的固液比为1:6g/mL,合并两次滤液,有机膜浓缩,70℃干燥2h,得到中药提取物;
S3.混合:将4g红曲粉碎,与6g步骤S1制得的醋泡大豆粉、10g步骤S2制得的中药提取物混合,得到混合物;
S4.沙棘籽酶解提取物的制备:将沙棘籽榨汁后,过滤,得到沙棘原汁,有机膜浓缩后,得到浓缩汁,向10g浓缩汁中加入0.7g第二复合酶,40℃酶解1.5h,105℃灭酶10min,冷冻干燥,得到沙棘籽酶解提取物;
所述第二复合酶为果胶酶和中性蛋白酶的混合物,质量比为7:3;
S5.活化培养基的制备:将12g葡萄糖、1g蔗糖、5g果糖、2g麦芽糖、2g硝酸铵、7g蛋白胨、1g氯化铵、1g氯化钾、0.1g硫酸锰、0.1g硫酸铁、0.1g氯化铜、0.1g硫酸镁、0.1g氯化钙、0.5g维生素C、0.1g维生素B12、0.1g叶酸和10g步骤S4制得的沙棘籽酶解提取物加入100g中,调节pH值至7,紫外线灭菌,得到活化培养基,平均分成3份,备用;
S6.菌种的活化:将罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌分别加入不同的步骤S5制得的活化培养基,37℃活化培养21h,得到菌种种子液,含菌量为109cfu/mL;
S7.发酵:将步骤S6制得的35g罗伊氏乳杆菌、20g纳豆芽孢杆菌、15g紫红曲霉菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S3得到的混合物加入总菌种种子液中,所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:4g/mL,发酵培养,所述发酵培养的温度为37℃,转速为60r/min,时间为42h,有机膜浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物;
S8.益生元添加剂的制备:将6g山楂多糖、10g羧甲基茯苓多糖混合均匀,得到益生元添加剂;
S9.活性添加剂的制备:将2g泽泻醇C-23-醋酸酯、3g人参总皂苷混合均匀,得到活性添加剂;
S10.血脂调节组合物的制备:将10g步骤S7制得的发酵提取物、1.5g步骤S8制得的益生元添加剂和0.7g步骤S9制得的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
对比例6
与实施例3相比,步骤S5中未添加沙棘籽酶解提取物,其他条件均不改变。
具体包括以下步骤:
S1.大豆的处理:将10g大豆洗净,去皮,浸泡在30mL山西老陈醋中6d,过滤,清水洗涤,70℃干燥2h,粉碎,醋泡大豆粉;
S2.中药提取物的制备:将7g决明子、10g大黄、3.5g姜黄、2g三七、4g绞股蓝和1.5g荷叶分别洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,加入水中,所述中药粉和水的固液比为1:6g/mL,加热至沸提取2.5h,过滤,收集滤液,滤渣重复提取1次,所述滤渣和水的固液比为1:6g/mL,合并两次滤液,有机膜浓缩,70℃干燥2h,得到中药提取物;
S3.酶解:将4g红曲粉碎,与6g步骤S1制得的醋泡大豆粉、10g步骤S2制得的中药提取物混合加入100g中,加入3.5g第一复合酶,45℃酶解4h,105℃灭酶10min,得到酶解产物;
所述第一复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的混合物,质量比为5:1.5;
S4.活化培养基的制备:将12g葡萄糖、1g蔗糖、5g果糖、2g麦芽糖、2g硝酸铵、7g蛋白胨、1g氯化铵、1g氯化钾、0.1g硫酸锰、0.1g硫酸铁、0.1g氯化铜、0.1g硫酸镁、0.1g氯化钙、0.5g维生素C、0.1g维生素B12、0.1g叶酸加入100g中,调节pH值至7,紫外线灭菌,得到活化培养基,平均分成3份,备用;
S5.菌种的活化:将罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌分别加入不同的步骤S4制得的活化培养基,37℃活化培养21h,得到菌种种子液,含菌量为109cfu/mL;
S6.发酵:将步骤S5制得的35g罗伊氏乳杆菌、20g纳豆芽孢杆菌、15g紫红曲霉菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S3得到的酶解产物加入总菌种种子液中,所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:4g/mL,发酵培养,所述发酵培养的温度为37℃,转速为60r/min,时间为42h,有机膜浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物;
S7.益生元添加剂的制备:将6g山楂多糖、10g羧甲基茯苓多糖混合均匀,得到益生元添加剂;
S8.活性添加剂的制备:将2g泽泻醇C-23-醋酸酯、3g人参总皂苷混合均匀,得到活性添加剂;
S9.血脂调节组合物的制备:将10g步骤S6制得的发酵提取物、1.5g步骤S7制得的益生元添加剂和0.7g步骤S8制得的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
对比例7
与实施例3相比,步骤S7中未添加罗伊氏乳杆菌菌种种子液,其他条件均不改变。
具体如下:
S7.发酵:将步骤S6制得的20g纳豆芽孢杆菌、15g紫红曲霉菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S3得到的酶解产物加入总菌种种子液中,所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:4g/mL,发酵培养,所述发酵培养的温度为37℃,转速为60r/min,时间为42h,有机膜浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物。
对比例8
与实施例3相比,步骤S7中未添加纳豆芽孢杆菌菌种种子液,其他条件均不改变。
具体如下:
S7.发酵:将步骤S6制得的35g罗伊氏乳杆菌、15g紫红曲霉菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S3得到的酶解产物加入总菌种种子液中,所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:4g/mL,发酵培养,所述发酵培养的温度为37℃,转速为60r/min,时间为42h,有机膜浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物。
对比例9
与实施例3相比,步骤S7中未添加紫红曲霉菌菌种种子液,其他条件均不改变。
具体如下:
S7.发酵:将步骤S6制得的35g罗伊氏乳杆菌、20g纳豆芽孢杆菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S3得到的酶解产物加入总菌种种子液中,所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:4g/mL,发酵培养,所述发酵培养的温度为37℃,转速为60r/min,时间为42h,有机膜浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物。
对比例10
与实施例3相比,未经过步骤S7发酵步骤,其他条件均不改变。
具体包括以下步骤:
S1.大豆的处理:将10g大豆洗净,去皮,浸泡在30mL山西老陈醋中6d,过滤,清水洗涤,70℃干燥2h,粉碎,醋泡大豆粉;
S2.中药提取物的制备:将7g决明子、10g大黄、3.5g姜黄、2g三七、4g绞股蓝和1.5g荷叶分别洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,加入水中,所述中药粉和水的固液比为1:6g/mL,加热至沸提取2.5h,过滤,收集滤液,滤渣重复提取1次,所述滤渣和水的固液比为1:6g/mL,合并两次滤液,有机膜浓缩,70℃干燥2h,得到中药提取物;
S3.酶解:将4g红曲粉碎,与6g步骤S1制得的醋泡大豆粉、10g步骤S2制得的中药提取物混合加入100g中,加入3.5g第一复合酶,45℃酶解4h,105℃灭酶10min,得到酶解产物;
所述第一复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的混合物,质量比为5:1.5;
S4.益生元添加剂的制备:将6g山楂多糖、10g羧甲基茯苓多糖混合均匀,得到益生元添加剂;
S5.活性添加剂的制备:将2g泽泻醇C-23-醋酸酯、3g人参总皂苷混合均匀,得到活性添加剂;
S6.血脂调节组合物的制备:将10g步骤S3得到的酶解产物、1.5g步骤S4制得的益生元添加剂和0.7g步骤S5制得的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
对比例11
与实施例3相比,步骤S10中未添加益生元添加剂,其他条件均不改变。
具体包括以下步骤:
S1.大豆的处理:将10g大豆洗净,去皮,浸泡在30mL山西老陈醋中6d,过滤,清水洗涤,70℃干燥2h,粉碎,醋泡大豆粉;
S2.中药提取物的制备:将7g决明子、10g大黄、3.5g姜黄、2g三七、4g绞股蓝和1.5g荷叶分别洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,加入水中,所述中药粉和水的固液比为1:6g/mL,加热至沸提取2.5h,过滤,收集滤液,滤渣重复提取1次,所述滤渣和水的固液比为1:6g/mL,合并两次滤液,有机膜浓缩,70℃干燥2h,得到中药提取物;
S3.酶解:将4g红曲粉碎,与6g步骤S1制得的醋泡大豆粉、10g步骤S2制得的中药提取物混合加入100g中,加入3.5g第一复合酶,45℃酶解4h,105℃灭酶10min,得到酶解产物;
所述第一复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的混合物,质量比为5:1.5;
S4.沙棘籽酶解提取物的制备:将沙棘籽榨汁后,过滤,得到沙棘原汁,有机膜浓缩后,得到浓缩汁,向10g浓缩汁中加入0.7g第二复合酶,40℃酶解1.5h,105℃灭酶10min,冷冻干燥,得到沙棘籽酶解提取物;
所述第二复合酶为果胶酶和中性蛋白酶的混合物,质量比为7:3;
S5.活化培养基的制备:将12g葡萄糖、1g蔗糖、5g果糖、2g麦芽糖、2g硝酸铵、7g蛋白胨、1g氯化铵、1g氯化钾、0.1g硫酸锰、0.1g硫酸铁、0.1g氯化铜、0.1g硫酸镁、0.1g氯化钙、0.5g维生素C、0.1g维生素B12、0.1g叶酸和10g步骤S4制得的沙棘籽酶解提取物加入100g中,调节pH值至7,紫外线灭菌,得到活化培养基,平均分成3份,备用;
S6.菌种的活化:将罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌分别加入不同的步骤S5制得的活化培养基,37℃活化培养21h,得到菌种种子液,含菌量为109cfu/mL;
S7.发酵:将步骤S6制得的35g罗伊氏乳杆菌、20g纳豆芽孢杆菌、15g紫红曲霉菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S3得到的酶解产物加入总菌种种子液中,所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:4g/mL,发酵培养,所述发酵培养的温度为37℃,转速为60r/min,时间为42h,有机膜浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物;
S8.活性添加剂的制备:将2g泽泻醇C-23-醋酸酯、3g人参总皂苷混合均匀,得到活性添加剂;
S9.血脂调节组合物的制备:将10g步骤S7制得的发酵提取物和0.7g步骤S9制得的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
对比例12
与实施例3相比,步骤S9中未添加泽泻醇C-23-醋酸酯,其他条件均不改变。
具体如下:
S9.活性添加剂的制备:人参总皂苷即为活性添加剂。
对比例13
与实施例3相比,步骤S9中未添加人参总皂苷,其他条件均不改变。
具体如下:
S9.活性添加剂的制备:泽泻醇C-23-醋酸酯即为活性添加剂。
对比例14
与实施例3相比,步骤S10中未添加活性添加剂,其他条件均不改变。
具体包括以下步骤:
S1.大豆的处理:将10g大豆洗净,去皮,浸泡在30mL山西老陈醋中6d,过滤,清水洗涤,70℃干燥2h,粉碎,醋泡大豆粉;
S2.中药提取物的制备:将7g决明子、10g大黄、3.5g姜黄、2g三七、4g绞股蓝和1.5g荷叶分别洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,加入水中,所述中药粉和水的固液比为1:6g/mL,加热至沸提取2.5h,过滤,收集滤液,滤渣重复提取1次,所述滤渣和水的固液比为1:6g/mL,合并两次滤液,有机膜浓缩,70℃干燥2h,得到中药提取物;
S3.酶解:将4g红曲粉碎,与6g步骤S1制得的醋泡大豆粉、10g步骤S2制得的中药提取物混合加入100g中,加入3.5g第一复合酶,45℃酶解4h,105℃灭酶10min,得到酶解产物;
所述第一复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的混合物,质量比为5:1.5;
S4.沙棘籽酶解提取物的制备:将沙棘籽榨汁后,过滤,得到沙棘原汁,有机膜浓缩后,得到浓缩汁,向10g浓缩汁中加入0.7g第二复合酶,40℃酶解1.5h,105℃灭酶10min,冷冻干燥,得到沙棘籽酶解提取物;
所述第二复合酶为果胶酶和中性蛋白酶的混合物,质量比为7:3;
S5.活化培养基的制备:将12g葡萄糖、1g蔗糖、5g果糖、2g麦芽糖、2g硝酸铵、7g蛋白胨、1g氯化铵、1g氯化钾、0.1g硫酸锰、0.1g硫酸铁、0.1g氯化铜、0.1g硫酸镁、0.1g氯化钙、0.5g维生素C、0.1g维生素B12、0.1g叶酸和10g步骤S4制得的沙棘籽酶解提取物加入100g中,调节pH值至7,紫外线灭菌,得到活化培养基,平均分成3份,备用;
S6.菌种的活化:将罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌分别加入不同的步骤S5制得的活化培养基,37℃活化培养21h,得到菌种种子液,含菌量为109cfu/mL;
S7.发酵:将步骤S6制得的35g罗伊氏乳杆菌、20g纳豆芽孢杆菌、15g紫红曲霉菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S3得到的酶解产物加入总菌种种子液中,所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:4g/mL,发酵培养,所述发酵培养的温度为37℃,转速为60r/min,时间为42h,有机膜浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物;
S8.益生元添加剂的制备:将6g山楂多糖、10g羧甲基茯苓多糖混合均匀,得到益生元添加剂;
S9.血脂调节组合物的制备:将10g步骤S7制得的发酵提取物、1.5g步骤S8制得的益生元添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
对比例15
与实施例3相比,步骤S10中未添加发酵提取物,其他条件均不改变。
具体包括以下步骤:
S1.益生元添加剂的制备:将6g山楂多糖、10g羧甲基茯苓多糖混合均匀,得到益生元添加剂;
S2.活性添加剂的制备:将2g泽泻醇C-23-醋酸酯、3g人参总皂苷混合均匀,得到活性添加剂;
S3.血脂调节组合物的制备:将1.5g步骤S1制得的益生元添加剂和0.7g步骤S2制得的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
测试例1
实验动物:清洁级SD雄性大鼠,体重在180±20g/只,实验期间,室温20±2℃,相对湿度60±5%,自由饮水,随机分组,分笼饲养。
高脂乳剂的制备:取20g猪油加热融化,加入10g菜籽油和7g胆固醇,溶解,再加2g胆酸钠和1g丙硫氧嘧啶,搅拌混合10min,然后加入20mL吐温-80,20mL丙二醇及50mL蒸馏水,10000r/min搅拌乳化5min,冷却至室温,继续加蒸馏水至100mL,混合10min,得到脂肪乳剂。
高血脂症模型的建立:按照10mL/(kg·d)剂量,对各组大鼠每日清晨8点空腹灌胃给予高脂乳剂,剩余时间自由摄食普通饲料,自由饮水。大鼠每周称重一次,连续灌服4周。
分组与给药方案:将SD大鼠分为25组,分别为正常组、模型组、阳性药组、实施例1-7组、对比例1-15组,每组6只。除了正常组,其他组均给与高脂乳剂,正常组给与等量的生理盐水。实验组造模同时进行给药干预治疗,实施例1-7组和对比例1-15组每日下午16点按照10g/(kg·d)每天给与实施例1-7或对比例1-15制得的血脂调节组合物一次。阳性药组每日同一时间给与普伐他汀(100mg/kg·d)。
指标检测:末次给药后,所有动物均禁食不禁水,12h后处理各组动物。大鼠称重,麻醉后心脏取血,肝素抗凝,离心,分离血浆,采用试剂盒法检测大鼠血浆中血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的浓度,计算HDL-C/TC的比值。分离小鼠肝脏,并采用试剂盒法测定肝脏组织中过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的含量。蛋白浓度采用BCA测定试剂盒进行测定。
血清TC、TG、HDL-C、LDL-C的结果见表1。
表1
组别 | TC(mmol/L) | TG(mmol/L) | HDL-C(mmol/L) | LDL-C(mmol/L) |
正常组 | 1.67±0.17 | 0.44±0.17 | 0.62±0.15 | 1.22±0.22 |
模型组 | 4.97±0.59<sup>#</sup> | 0.69±0.17<sup>#</sup> | 0.53±0.12<sup>#</sup> | 4.37±0.63<sup>#</sup> |
阳性药组 | 2.17±0.34<sup>*</sup> | 0.51±0.12<sup>*</sup> | 0.60±0.17<sup>*</sup> | 1.34±0.19<sup>*</sup> |
实施例1 | 2.21±0.29<sup>*</sup> | 0.53±0.14<sup>*</sup> | 0.59±0.12<sup>*</sup> | 1.35±0.15<sup>*</sup> |
实施例2 | 2.16±0.25<sup>*</sup> | 0.53±0.11<sup>*</sup> | 0.60±0.14<sup>*</sup> | 1.32±0.17<sup>*</sup> |
实施例3 | 2.13±0.22<sup>*</sup> | 0.52±0.10<sup>*</sup> | 0.61±0.13<sup>*</sup> | 1.30±0.14<sup>*</sup> |
实施例4 | 2.35±0.24 | 0.58±0.12 | 0.57±0.15 | 1.47±0.13 |
实施例5 | 2.41±0.23 | 0.59±0.13 | 0.57±0.11 | 1.49±0.15 |
实施例6 | 2.31±0.25 | 0.55±0.11 | 0.57±0.13 | 1.40±0.19 |
实施例7 | 2.29±0.21 | 0.54±0.15 | 0.58±0.12 | 1.39±0.21 |
对比例1 | 2.32±0.26 | 0.55±0.19 | 0.58±0.19 | 1.41±0.18 |
对比例2 | 2.67±0.22 | 0.61±0.16 | 0.57±0.17 | 1.65±0.20 |
对比例3 | 2.71±0.20 | 0.62±0.12 | 0.56±0.20 | 1.69±0.16 |
对比例4 | 2.83±0.27 | 0.64±0.14 | 0.55±0.16 | 1.78±0.11 |
对比例5 | 2.54±0.22 | 0.60±0.11 | 0.58±0.17 | 1.59±0.12 |
对比例6 | 2.49±0.29 | 0.59±0.10 | 0.58±0.14 | 1.51±0.16 |
对比例7 | 2.58±0.24 | 0.60±0.18 | 0.58±0.15 | 1.61±0.13 |
对比例8 | 2.65±0.28 | 0.61±0.17 | 0.57±0.18 | 1.67±0.12 |
对比例9 | 2.56±0.30 | 0.60±0.14 | 0.58±0.11 | 1.61±0.16 |
对比例10 | 2.75±0.25 | 0.63±0.13 | 0.56±0.13 | 1.72±0.18 |
对比例11 | 2.59±0.31 | 0.60±0.16 | 0.58±0.12 | 1.63±0.22 |
对比例12 | 2.62±0.26 | 0.61±0.19 | 0.57±0.15 | 1.62±0.19 |
对比例13 | 2.65±0.27 | 0.61±0.18 | 0.57±0.17 | 1.64±0.21 |
对比例14 | 2.72±0.24 | 0.62±0.11 | 0.56±0.15 | 1.70±0.23 |
对比例15 | 2.80±0.32 | 0.64±0.14 | 0.55±0.16 | 1.78±0.15 |
注释:#为与正常组相比,P<0.05;*为与模型组相比,P<0.05。
高血脂症是一种常见的慢性病,易引发动脉粥样硬化等心脑血管疾病,通常是因为摄入脂质过多或者体内的脂质代谢紊乱,其具体的表现结果为血清中TC、TG和LDL-C过高,HDL-C过低。TG和TC是评价机体内胆固醇代谢的重要指标,HDL-C的作用是将肝脏外组织的胆固醇逆向转运回肝脏。由上表可知,本发明实施例1-3制得的血脂调节组合物能明显降低血清中TC、TG、LDL-C的含量,提高HDL-C含量。
各组小鼠HDL-C和TC的比值结果见表2。
表2
组别 | HDL-C/TC比值 |
正常组 | 0.371 |
模型组 | 0.111 |
阳性药组 | 0.276 |
实施例1 | 0.273 |
实施例2 | 0.278 |
实施例3 | 0.286 |
实施例4 | 0.243 |
实施例5 | 0.237 |
实施例6 | 0.248 |
实施例7 | 0.253 |
对比例1 | 0.250 |
对比例2 | 0.213 |
对比例3 | 0.207 |
对比例4 | 0.194 |
对比例5 | 0.228 |
对比例6 | 0.233 |
对比例7 | 0.225 |
对比例8 | 0.215 |
对比例9 | 0.227 |
对比例10 | 0.204 |
对比例11 | 0.224 |
对比例12 | 0.218 |
对比例13 | 0.215 |
对比例14 | 0.206 |
对比例15 | 0.196 |
由上表可知,本发明实施例1-3制得的血脂调节组合物能明显提高HDL-C/TC比值,能起到稳定的降脂的效果。
各组小鼠肝脏T-SOD、CAT和GSH-px的结果见表3。
表3
组别 | T-SOD(U/mL) | CAT(U/mg prot) | GSH-PX(μmol/mg prot) |
正常组 | 147.2±21.2 | 82.1±9.23 | 287.7±44.2 |
模型组 | 125.7±19.5<sup>#</sup> | 60.2±5.84<sup>#</sup> | 267.5±36.2<sup>#</sup> |
阳性药组 | 141.7±20.5<sup>*</sup> | 76.8±8.32<sup>*</sup> | 279.9±41.2<sup>*</sup> |
实施例1 | 140.2±21.5<sup>*</sup> | 76.5±6.77<sup>*</sup> | 279.1±42.5<sup>*</sup> |
实施例2 | 141.3±22.3<sup>*</sup> | 76.9±7.89<sup>*</sup> | 279.5±40.7<sup>*</sup> |
实施例3 | 142.5±19.2<sup>*</sup> | 77.2±6.98<sup>*</sup> | 280.7±39.5<sup>*</sup> |
实施例4 | 136.4±21.7 | 72.3±7.12 | 273.2±39.2 |
实施例5 | 137.0±20.4 | 73.0±8.45 | 274.4±40.6 |
实施例6 | 135.5±22.7 | 71.1±7.56 | 276.4±39.7 |
实施例7 | 135.8±25.8 | 71.5±8.11 | 276.9±41.1 |
对比例1 | 138.4±20.4 | 74.2±8.42 | 277.5±42.5 |
对比例2 | 132.4±24.6 | 67.5±9.01 | 274.2±41.7 |
对比例3 | 131.7±19.0 | 66.3±9.22 | 273.8±43.5 |
对比例4 | 130.2±18.4 | 65.2±8.49 | 271.4±44.1 |
对比例5 | 134.6±22.4 | 71.7±8.72 | 272.1±42.7 |
对比例6 | 133.6±25.7 | 70.2±7.46 | 274.5±43.9 |
对比例7 | 133.9±26.2 | 69.2±7.79 | 274.1±40.2 |
对比例8 | 132.7±23.6 | 68.5±8.21 | 273.5±41.7 |
对比例9 | 133.4±26.2 | 70.1±8.15 | 273.9±39.5 |
对比例10 | 131.0±21.4 | 67.5±7.58 | 272.1±41.2 |
对比例11 | 133.7±26.6 | 69.0±7.21 | 273.8±42.2 |
对比例12 | 132.4±24.8 | 68.2±7.48 | 272.2±41.7 |
对比例13 | 132.1±23.1 | 67.8±8.02 | 271.4±39.7 |
对比例14 | 131.2±20.2 | 67.1±9.12 | 270.4±38.8 |
对比例15 | 129.5±18.5 | 65.7±8.46 | 268.9±40.6 |
注释:#为与正常组相比,P<0.05;*为与模型组相比,P<0.05。
氧化应激机制中的酶,如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(TSOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)等,对人体的氧化抗性发挥重要作用。由上表可知,本发明实施例1-3制得的血脂调节组合物能明显提高肝脏中T-SOD、CAT和GSH-px的含量,提高小鼠肝脏抗氧化酶活性,对肝脏氧化损伤具有一定的保护作用。
实施例4、5与实施例3相比,第一复合酶为单一的纤维素酶或无花果蛋白酶,TC、TG、LDL-C含量提高,T-SOD、CAT和GSH-px含量下降。对比例5与实施例3相比,未进行步骤S3酶解步骤,直接将红曲粉、醋泡大豆粉和中药提取物混合,TC、TG、LDL-C含量明显下降,T-SOD、CAT和GSH-px含量明显提高。
对比例2与实施例3相比,步骤S3中未添加红曲,TC、TG、LDL-C含量提高,HDl-C含量下降,HDL-C/TC比值下降。
对比例1与实施例3相比,未进行步骤S1,大豆没有经过醋泡处理,TC、TG、LDL-C含量提高,T-SOD、CAT和GSH-px含量下降。对比例3与实施例3相比,步骤S3中未添加醋泡大豆粉,TC、TG、LDL-C含量提高,HDl-C含量下降,HDL-C/TC比值下降,T-SOD、CAT和GSH-px含量下降。
对比例4与实施例3相比,步骤S3中未添加中药提取物,TC、TG、LDL-C含量提高,HDl-C含量下降,HDL-C/TC比值下降。
实施例6、7与实施例3相比,第二复合酶为单一的果胶酶或中性蛋白酶,T-SOD、CAT和GSH-px含量下降。对比例6与实施例3相比,步骤S5中未添加沙棘籽酶解提取物,TC、TG、LDL-C含量提高,T-SOD、CAT和GSH-px含量下降。
对比例7、8、9与实施例3相比,步骤S7中未添加罗伊氏乳杆菌菌种种子液、纳豆杆菌菌种种子液或红曲霉菌种种子液,TC、TG、LDL-C含量提高,HDl-C含量下降,HDL-C/TC比值下降。对比例10与实施例3相比,未经过步骤S7发酵步骤。
对比例11与实施例3相比,步骤S10中未添加益生元添加剂,TC、TG、LDL-C含量提高,HDl-C含量下降,HDL-C/TC比值下降。
对比例12、13与实施例3相比,步骤S9中未添加泽泻醇或人参总皂苷,TC、TG、LDL-C含量提高,T-SOD、CAT和GSH-px含量下降。对比例14与实施例3相比,步骤S10中未添加活性添加剂,TC、TG、LDL-C含量明显提高,HDl-C含量下降,HDL-C/TC比值下降,T-SOD、CAT和GSH-px含量明显下降。
对比例15与实施例3相比,步骤S10中未添加发酵提取物,TC、TG、LDL-C含量明显提高,HDl-C含量下降,HDL-C/TC比值下降,T-SOD、CAT和GSH-px含量明显下降。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种血脂调节组合物的制备方法,其特征在于,将大豆经过醋泡处理后,与中药提取物、红曲粉混合,酶解得到酶解产物;另将沙棘籽原汁酶解加入活化培养基中,分别对罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌进行活化培养,将活化后的菌种种子液与所述酶解产物混合发酵,得到发酵提取物,然后与含有山楂多糖、羧甲基茯苓多糖的益生元添加剂,和含有泽泻醇C-23-醋酸酯、人参总皂苷的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1.大豆的处理:将大豆洗净,去皮,浸泡在醋液中,过滤,洗涤,干燥,粉碎,醋泡大豆粉;
S2.中药提取物的制备:将决明子、大黄、姜黄、三七、绞股蓝和荷叶分别洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,加入水中,加热至沸提取,过滤,收集滤液,滤渣重复提取1次,合并两次滤液,浓缩,干燥,得到中药提取物;
S3.酶解:将红曲粉碎,与步骤S1制得的醋泡大豆粉、步骤S2制得的中药提取物混合加入水中,加入第一复合酶酶解,灭酶,得到酶解产物;
S4.沙棘籽酶解提取物的制备:将沙棘籽榨汁后,过滤,得到沙棘原汁,浓缩后,加入第二复合酶酶解,灭酶,冷冻干燥,得到沙棘籽酶解提取物;
S5.活化培养基的制备:将碳源、氮源、无机盐、维生素和步骤S4制得的沙棘籽酶解提取物加入水中,调节pH值,灭菌,得到活化培养基;
S6.菌种的活化:将罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌分别加入不同的步骤S5制得的活化培养基进行活化培养,得到菌种种子液;
S7.发酵:将步骤S6制得的罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S3得到的酶解产物加入总菌种种子液中,发酵培养,浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物;
S8.益生元添加剂的制备:将山楂多糖、羧甲基茯苓多糖混合均匀,得到益生元添加剂;
S9.活性添加剂的制备:将泽泻醇C-23-醋酸酯、人参总皂苷混合均匀,得到活性添加剂;
S10.血脂调节组合物的制备:将步骤S7制得的发酵提取物、步骤S8制得的益生元添加剂和步骤S9制得的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S1中所述醋液为山西老陈醋,执行标准为GB/T 19777-2013,所述大豆与醋液的固液比为1:2-4g/mL,所述浸泡时间为5-7d;步骤S2中所述决明子、大黄、姜黄、三七、绞股蓝和荷叶的质量比为5-10:7-12:2-5:1-3:3-5:1-2;所述中药粉和水或滤渣和水的固液比为1:5-7g/mL;每次提取时间为2-3h;步骤S3中所述红曲、醋泡大豆粉和中药提取物的质量比为3-5:5-7:10;所述第一复合酶选自纤维素酶、果胶酶、α-淀粉酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶中的至少两种;所述酶解的温度为40-50℃,时间为3-5h。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述第一复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的混合物,质量比为5:1-2。
5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S4中所述第二复合酶选自纤维素酶、果胶酶、α-淀粉酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶中的至少两种;所述酶解得温度为35-45℃,时间为1-2h;步骤S5中所述碳源、氮源、无机盐、维生素、沙棘籽酶解提取物和水的质量比为15-25:7-12:1-2:0.5-1:10:100-200;所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、可溶性淀粉、糖蜜、琼脂中的至少一种;所述氮源选自硝酸铵、硝酸钾、硝酸钠、氯化铵、氨基酸、蛋白胨、牛肉浸粉、鱼骨粉中的至少一种;所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、硫酸锰、氯化锰、氯化铁、硫酸铁、氯化铜、硫酸铜、氯化镁、硫酸镁、氯化钙、硫酸钙、硫酸钾、硫酸钠中的至少一种;所述维生素选自维生素A、维生素C、维生素D、维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B6、维生素B12、叶酸、维生素K中的至少一种;所述调节pH值至6.6-7.2;所述灭菌的方法为紫外线灭菌或者钴-60辐照灭菌;步骤S6中所述活化培养的温度为36-39℃,时间为18-24h;所述菌种种子液的含菌量为108-109cfu/mL。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述第二复合酶为果胶酶和中性蛋白酶的混合物,质量比为7:2-4。
7.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S7中所述罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌菌种种子液的质量比为2-5:1-3:1-2;所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:3-5g/mL;所述发酵培养的温度为35-39℃,转速为50-70r/min,时间为36-48h;步骤S8中所述山楂多糖、羧甲基茯苓多糖的质量比为5-7:10;步骤S9中所述泽泻醇C-23-醋酸酯、人参总皂苷的质量比为1-3:2-4;步骤S10中所述发酵提取物、益生元添加剂和活性添加剂的质量比为10:1-2:0.5-1。
8.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
S1.大豆的处理:将大豆洗净,去皮,浸泡在山西老陈醋中5-7d,所述大豆与醋液的固液比为1:2-4g/mL,过滤,洗涤,干燥,粉碎,醋泡大豆粉;
S2.中药提取物的制备:将5-10重量份决明子、7-12重量份大黄、2-5重量份姜黄、1-3重量份三七、3-5重量份绞股蓝和1-2重量份荷叶分别洗净、干燥、粉碎,混合均匀,得到中药粉,加入水中,所述中药粉和水的固液比为1:5-7g/mL,加热至沸提取2-3h,过滤,收集滤液,滤渣重复提取1次,所述滤渣和水的固液比为1:5-7g/mL,合并两次滤液,浓缩,干燥,得到中药提取物;
S3.酶解:将3-5重量份红曲粉碎,与5-7重量份步骤S1制得的醋泡大豆粉、10重量份步骤S2制得的中药提取物混合加入100重量份水中,加入2-5重量份第一复合酶,40-50℃酶解3-5h,灭酶,得到酶解产物;
所述第一复合酶为纤维素酶和无花果蛋白酶的混合物,质量比为5:1-2;
S4.沙棘籽酶解提取物的制备:将沙棘籽榨汁后,过滤,得到沙棘原汁,浓缩后,得到浓缩汁,向10重量份浓缩汁中加入0.5-1重量份第二复合酶,35-45℃酶解1-2h,灭酶,冷冻干燥,得到沙棘籽酶解提取物;
所述第二复合酶为果胶酶和中性蛋白酶的混合物,质量比为7:2-4;
S5.活化培养基的制备:将15-25重量份碳源、7-12重量份氮源、1-2重量份无机盐、0.5-1重量份维生素和10重量份步骤S4制得的沙棘籽酶解提取物加入100重量份水中,调节pH值至6.6-7.2,紫外线灭菌或者钴-60辐照灭菌,得到活化培养基;
S6.菌种的活化:将罗伊氏乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、紫红曲霉菌分别加入不同的步骤S5制得的活化培养基,36-39℃活化培养18-24h,得到菌种种子液,含菌量为108-109cfu/mL;
S7.发酵:将步骤S6制得的2-5重量份罗伊氏乳杆菌、1-3重量份纳豆芽孢杆菌、1-2重量份紫红曲霉菌菌种种子液按比例混合,得到总菌种种子液,将步骤S3得到的酶解产物加入总菌种种子液中,所述酶解产物和总菌种种子液的固液比为2:3-5g/mL,发酵培养,所述发酵培养的温度为35-39℃,转速为50-70r/min,时间为36-48h,浓缩,冷冻干燥,得到发酵提取物;
S8.益生元添加剂的制备:将5-7重量份山楂多糖、10重量份羧甲基茯苓多糖混合均匀,得到益生元添加剂;
S9.活性添加剂的制备:将1-3重量份泽泻醇C-23-醋酸酯、2-4重量份人参总皂苷混合均匀,得到活性添加剂;
S10.血脂调节组合物的制备:将10重量份步骤S7制得的发酵提取物、1-2重量份步骤S8制得的益生元添加剂和0.5-1重量份步骤S9制得的活性添加剂混合均匀,得到血脂调节组合物。
9.一种如权利要求1-8任一项所述的制备方法制得的血脂调节组合物。
10.一种如权利要求9所述的血脂调节组合物在制备预防、辅助治疗和治疗高血脂的产品中的应用。
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