CN115418389A - 减轻疏水分析物的体外诊断测定中的脂蛋白干扰的组合物、装置和方法 - Google Patents

Abstract

公开了减轻靶标疏水分析物的体外诊断测定中的脂蛋白干扰的方法，以及可用于所述方法中的组合物、试剂盒和装置。利用包括至少一种消化脂蛋白的酶的预处理试剂。

Description

减轻疏水分析物的体外诊断测定中的脂蛋白干扰的组合物、 装置和方法

本申请是申请日为2020年1月15日，申请号为202080022535.2，发明名称为“减轻疏水分析物的体外诊断测定中的脂蛋白干扰的组合物、装置和方法”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及体外诊断测定的领域，更具体地，涉及减轻疏水分析物的体外诊断测定中的脂蛋白干扰的组合物、装置和方法。

背景技术

体外诊断测定用于检测生物样品中的疏水分析物。然而，已知生物样品中存在的脂蛋白(诸如，但不限于，低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)、中密度脂蛋白(IDL)、高密度脂蛋白(HDL)和乳糜微粒等，其经常通过其胆固醇含量来定量)干扰此类测定，尤其是对于小的疏水分析物(诸如，但不限于，疏水性药物和激素)。目前没有消除这种干扰的方法，因为这些疏水性半抗原，当存在于亲水性血液或血清中时，倾向于将自身插入脂蛋白颗粒的疏水性核心中。因此，经常观察到脂蛋白(胆固醇)的负面干扰，因为一些分析物被束缚在脂蛋白颗粒中，且因此无法用于测定试剂。

当前克服胆固醇或脂蛋白干扰的尝试包括使用有机溶剂提取分析物。这种方法分解脂蛋白，使得疏水分析物变得溶解在有机溶剂中。然而，提取步骤必须手动进行，且因此不适合于减轻在全自动分析仪上进行的测定中的干扰。

在另一种方法中，将有机溶剂或去垢剂添加至试剂混合物中以帮助溶解分析物并部分防止其进入脂蛋白颗粒的疏水核心。然而，通过这种方法减轻脂蛋白干扰是有限的，并且不能完全消除脂蛋白干扰。

先前开发了用于小的免疫抑制性药物他克莫司(也称为FK506)的ELISA测定，其利用蛋白酶来消化免疫亲和素FK506结合蛋白(FKBP)并因此释放任何由FKBP结合的他克莫司。然而，使用蛋白酶来消化蛋白对测定中的胆固醇/脂蛋白干扰的影响有限。

因此，需要减轻脂蛋白干扰(尤其是用于与自动分析仪一起使用)的新的和改进的方法。本公开涉及此类方法以及在其中利用的组合物、试剂盒和装置。

发明内容

在通过示例性语言和结果的方式详细解释发明构思的至少一个实施方案之前，应理解，所述发明构思不限于下面的描述中阐述的其对组分的构造和排列的细节的应用。发明构思能够具有其他实施方案，或者能够以各种方式实践或实施。因此，本文使用的语言意欲被给予最广泛的可能范围和含义，并且实施方案意味着是示例性的—而非穷举性的。而且，应该理解，本文采用的措辞和术语仅仅是为了描述的目的，并且不应被认为是限制性的。

除非本文另有定义，否则结合本公开使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。进一步，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数，并且复数术语应包括单数。前述技术和程序通常根据本领域众所周知的常规方法、并且如在本说明书通篇引用和讨论的各种一般和更具体的参考文献中所述而进行。与本文所述的分析化学、合成有机化学以及药用和药物化学结合利用的命名及其实验室程序和技术是本领域中众所周知和常用的那些。标准技术用于化学合成和化学分析。

本说明书中提及的所有专利、公开的专利申请和非专利出版物指示本公开所属领域的技术人员的技术水平。在本申请的任何部分中引用的所有专利、公开的专利申请和非专利出版物在本文中明确地通过引用以其整体并入，其程度如同每个单独的专利或出版物被具体和个别地指出通过引用并入一样。

鉴于本公开，无需过度实验即可制备和执行本文公开的所有物品、组合物、试剂盒和/或方法。尽管已经在具体实施方案的方面描述了所述物品、组合物、试剂盒和/或方法，但对于本领域技术人员将显而易见的是，在不脱离本公开的构思、精神和范围的情况下，可对所述物品、组合物、试剂盒和/或方法、以及在本文描述的方法的步骤或步骤顺序中应用变化。认为对于本领域技术人员显而易见的所有此类类似的替代和修改在如所附权利要求书限定的发明构思的精神、范围和构思内。

如根据本公开所利用，除非另有指示，否则以下术语应理解为具有以下含义：

与权利要求和/或说明书中的术语“包括”结合使用时，术语“一个/种(a)”或“一个/种(an)”的使用可意味着“一个/种(one)”，但它也与“一个/种或多个/种”、“至少一个/种”和“一个/种或多于一个/种”的含义一致。因此，术语“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“该/所述(the)”包括复数指示物，除非上下文另有明确指示。因此，例如，对“一种化合物”的提及可指一种或多种化合物、2种或更多种化合物、3种或更多种化合物、4种或更多种化合物或更大数目的化合物。术语“多个/种”是指“两个/种或更多个/种”。

术语“至少一个/种”的使用将被理解为包括一个/种以及多于一个/种的任何数量，包括但不限于2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、100个/种等。术语“至少一个/种”可延伸多至100或1000或更多个/种，这取决于它所附接的术语；此外，100/1000的数量不视为限制性的，因为更高的限值也可产生令人满意的结果。此外，术语“X、Y和Z中的至少一个/种”的使用将被理解为包括单独的X，单独的Y和单独的Z，以及X、Y和Z的任何组合。序数术语(即，“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等)的使用仅用于区分两个或更多个事项的目的，并且不意味着暗示例如一个事项相对于另一事项的任何顺序或次序或重要性、或任何添加次序。

在权利要求中使用术语“或”用于意指包括性的“和/或”，除非明确指出仅指替代方案或者除非替代方案是互相排斥的。例如，以下任一种都满足条件“A或B”：A为真(或存在)且B为假(或不存在)，A为假(或不存在)且B为真(或存在)，以及A和B两者均为真(或存在)。

如本文所用，对“一个实施方案(one embodiment)”、“一个实施方案(anembodiment)”、“一些实施方案”、“一个实例(one example)”、“例如”或“一个实例(anexample)”的任何引用意指结合该实施方案描述的具体要素、特征、结构或特点包括在至少一个实施方案中。例如，说明书中各个地方出现的短语“在一些实施方案中”或“一个实例”不一定全部是指同一实施方案。此外，对一个或多个实施方案或实例的所有引用都应被解释为对权利要求非限制性的。

贯穿本申请，术语“约”用于指示，值包括用于测定该值的组合物/仪器/装置、方法的误差的固有变化，或研究受试者间存在的变化。例如，但不限于，当利用术语“约”时，指定值可以与列举值相差正负20%，或15%，或12%，或11%，或10%，或9%，或8%，或7%，或6%，或5%，或4%，或3%，或2%，或1%，因为此类变化适用于执行公开的方法并由本领域普通技术人员所理解。

如在本说明书和权利要求中所用，词语“包含(comprising)”(和任何形式的包含，诸如“包含(comprise)”和“包含(comprises)”)、“具有(having)”(和任何形式的具有，诸如“具有(have)”和“具有(has)”)、“包括(including)”(和任何形式的包括，诸如“包括(includes)”和“包括(include)”)或“含有(containing)”(和任何形式的含有，诸如“含有(contains)”和“含有(contain)”)都是包括性的或开放式的，并且不排除另外的未列举的要素或方法步骤。

如本文所用的术语“或其组合”是指所述术语之前列出的事项的所有排列和组合。例如，“A、B、C或其组合”意欲包括以下中的至少一个：A、B、C、AB、AC、BC或ABC，并且如果次序在特定上下文中是重要的，则也包括BA、CA、CB、CBA、BCA、ACB、BAC或CAB。继续该实例，明确包括的是含有一个或多个事项或术语的重复的组合，诸如BB、AAA、AAB、BBC、AAABCCCC、CBBAAA、CABABB等等。技术人员将理解，除非从上下文可见，否则通常对任何组合中的事项或术语的数量没有限制。

如本文所用，术语“基本上(substantially)”意味着随后描述的事件或情况完全发生或者随后描述的事件或情况在大范围或程度上发生。例如，当与具体事件或情况相关时，术语“基本上”意味着随后描述的事件或情况发生在至少80%的时间、或至少85%的时间、或至少90%的时间、或至少95%的时间。术语“基本上相邻”可以意指两个事项与彼此100%相邻，或者两个事项与彼此密切接近，但与彼此不是100%相邻，或者两个事项之一的一部分与另一事项不是100%相邻，而是与另一事项密切接近。

如本文所用，短语“与…缔合”和“与…偶联”包括两个部分与彼此的直接缔合/结合以及两个部分与彼此的间接缔合/结合。缔合/偶联的非限制性实例包括一个部分与另一部分通过直接键或通过间隔基团的共价结合，一个部分与另一部分直接或通过与所述部分结合的特异性结合对成员的方式的非共价结合，诸如通过将一个部分溶解于另一部分中而将一个部分并入另一部分，以及例如将一个部分涂覆在另一部分上。

如本文所用的术语“样品”将被理解为包括可以根据本公开利用的任何类型的生物样品。可利用的流体生物样品的实例包括但不限于：全血或其任何部分(包括但不限于血浆或血清)、完整或裂解的血细胞(包括但不限于完整或裂解的红血细胞)、尿液、唾液、痰、脑脊液(CSF)、皮肤、肠液、腹膜内液、囊液(cystic fluid)、汗液、间质液、细胞外液、泪液、粘液、膀胱洗液(bladder wash)、精液、粪便、胸膜液、鼻咽液、其组合等。

如本文所用的术语“半抗原”是指能够在体外诊断测定中被识别的小的蛋白质或非蛋白质抗原决定簇(或“表位”)(其可能涉及靶标分析物-特异性结合配偶体，诸如(但不限于)抗体)。

术语“分析物”是指能够在体外诊断测定中被识别的分子(其可能涉及靶标分析物-特异性结合配偶体，诸如(但不限于)抗体)。当测定是免疫测定时，所述分析物包含至少一个抗原决定簇或“表位”，其为分析物的结合靶标分析物-特异性结合配偶体(即，抗体)的区域。当分析物是半抗原时，整个半抗原分子通常形成表位。

如本文所用的术语“靶标分析物-特异性结合配偶体”将理解为是指能够与靶标分析物特异性缔合的任何分子。例如，但不通过限制的方式，所述结合配偶体可以是抗体、受体、配体、适体、分子印迹聚合物(即无机基质)、其组合或衍生物，以及能够特异性结合靶标分析物的任何其他分子。

术语“抗体”在本文中以最广泛的意义使用并且是指例如完整单克隆抗体和多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、表现出期望的分析物结合的生物学活性的其抗体片段及缀合物(诸如，但不限于，Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、Fd、双抗体、单链抗体和其他抗体片段及其缀合物，其保留完整抗体的可变区的至少一部分)、抗体替代蛋白或肽(即，工程改造的结合蛋白/肽)及其组合或衍生物。所述抗体可以是任何类型或类别(例如，IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)或亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。

如本文所用的术语“微流体装置”包括能够进行如本文所述的至少一种诊断测定的任何装置。微流体装置将通常插入自动化进行诊断分析的系统中。在一个非限制性实施方案中，所述微流体装置被构建用于自动化诊断测定中，所述自动化诊断测定通过例如但不限于可商业得自Siemens Healthcare Diagnostics, Inc. (Newark, DE)的DIMENSION®集成化学系统之一进行。然而，应理解，微流体装置可以是本文描述或以其他方式考虑的能够进行一种或多种根据本公开的诊断测定的任何市售产品。此外，所述微流体装置可以包括多个隔室，所述隔室在与临床化学系统一起使用的单个微流体装置上集成多个测定，使得将单一量的生物样品插入微流体装置中，且然后递送至多个测定隔室。

现在转向发明构思，本公开的某些非限制性实施方案通常涉及用于改进疏水分析物的体外诊断测定的性能和可靠性的组合物、试剂盒、装置和方法。具体而言，本公开的某些实施方案涉及用于减轻疏水分析物的体外诊断测定中的脂蛋白干扰的组合物、试剂盒、装置和方法。

本公开的某些非限制性实施方案涉及用于检测生物样品中的靶标疏水分析物的存在和/或浓度的方法。在某些具体(但非限制性)实施方案中，所述方法可以进一步定义为使疏水分析物的体外诊断测定中的脂蛋白干扰最小化的方法。

所述方法包括同时或全部或部分依次组合：(1)怀疑含有靶标疏水分析物的样品；(2)包含至少一种消化脂蛋白的酶(诸如但不限于脂肪酶和/或至少一种其他消化酶(诸如但不限于胃酶，诸如(但不限于)胃蛋白酶和胰酶，诸如(但不限于)淀粉酶和蛋白酶)的预处理试剂；和(3)至少一种能够检测疏水分析物的测定试剂。所述方法进一步包括进行一种或多种基于(3)的检测测定和测定所述样品中存在的靶标疏水分析物的浓度。

当(1)和(2)一起孵育时，预处理试剂中存在的酶消化脂蛋白中的脂质和蛋白。这引起靶标分析物从脂蛋白颗粒的疏水核心释放，使得靶标分析物变得可接近于测定试剂(即，诸如但不限于特异性识别靶标分析物的抗体)。因此，与其中不利用预处理试剂的测定相比，以提高的效率检测靶标分析物，由此为靶标分析物提供更稳健的测定。

所述方法步骤中的一个或多个可以手动进行；或者，如本文所述，所述方法步骤可以在临床化学分析仪系统上完全自动化。

根据本公开，可以利用本领域中已知的用于与如本文所述的体外诊断测定一起使用的任何生物样品。可以利用的生物样品的实例包括但不限于尿液、全血或其任何部分(包括但不限于血浆或血清)、完整(即基本上未裂解)或裂解的血细胞(包括但不限于完整或裂解的红血细胞)、唾液、痰、脑脊液(CSF)、肠液、腹膜内液、囊液(cystic fluid)、汗液、间质液、泪液、粘液、膀胱洗液(bladder wash)、精液、组合等。

可以经由本公开的方法检测能够经由本文公开或以其他方式考虑的测定方法检测的任何疏水分析物。靶标分析物的实例包括疏水小分子，诸如(但不限于)维生素D、他克莫司、西罗莫司、依维莫司、雌激素、雌酮、雌二醇、雌三醇、阿尔法二醇(雌二醇、雌酮和雌三醇)、环孢菌素、炔雌醇、酯化雌激素、莫克雌醇、炔雌醚(qunestrol)、孕激素、孕酮、雄激素、诸如睾酮、二氢睾酮(DHT)、脱氢表雄酮(DHEA)和DHEA硫酸盐(DEHE-S)、雄烯二酮醛固酮、其他类固醇激素、皮质醇、儿茶酚胺、25-羟基维生素D2 (25-OH维生素D2)、25-羟基维生素D3(25-OH维生素D3)、1,25-二羟基维生素D2 (1,25-OH维生素D2)和1,25-二羟基维生素D3(1,25-OH维生素D3)等。

所述预处理试剂包含至少一种酶，其将脂蛋白上的脂质消化成更易溶于水和更小的化合物；所述酶可以是脂肪酶和/或至少一种其他消化酶(诸如但不限于胃酶，诸如(但不限于)胃蛋白酶和胰酶，诸如(但不限于)淀粉酶和蛋白酶)。此外，所述预处理试剂可以包含一种或多种发挥功能以增强酶促活性的额外物质。可存在于预处理试剂中的额外物质的非限制性实例包括酶的至少一种辅因子(例如，但不限于，胆汁酸和/或其盐)、至少一种表面活性剂(例如，但不限于，PLURONIC®嵌段共聚物(BASF Corporation, Ludwigshafen,Germany)或至少一种蛋白酶以及其任何组合。

必须以足够的浓度提供消化脂蛋白的酶，以便引起脂蛋白颗粒的疏水核心释放靶标分析物，使得其变得可接近于测定试剂，由此允许以提高的效率检测靶标分析物。酶的浓度将取决于存在的分析物的量和预处理反应的时间。

预处理试剂中存在的消化脂蛋白的酶可以以允许酶如本文所述发挥功能的任何浓度存在。具体浓度的实例包括，但不限于：约0.01 mg/mL、约0.05 mg/mL、约0.1 mg/mL、约0.2 mg/mL、约0.3 mg/mL、约0.4 mg/mL、约0.5 mg/mL、约0.6 mg/mL、约0.7 mg/mL、约0.8mg/mL、约0.9 mg/mL、约1 mg/mL、约1.5 mg/mL、约2 mg/mL、约2.5 mg/mL、约3 mg/mL、约3.5mg/mL、约4 mg/mL、约4.5 mg/mL、约5 mg/mL、约5.5 mg/mL、约6 mg/mL、约6.5 mg/mL、约7mg/mL、约7.5 mg/mL、约8 mg/mL、约8.5 mg/mL、约9 mg/mL、约9.5 mg/mL、约10 mg/mL、约11mg/mL、约12 mg/mL、约13 mg/mL、约14 mg/mL、约15 mg/mL、约16 mg/mL、约17 mg/mL、约18mg/mL、约19 mg/mL、约20 mg/mL、约21 mg/mL、约22 mg/mL、约23 mg/mL、约24 mg/mL、约25mg/mL、约26 mg/mL、约27 mg/mL、约28 mg/mL、约29 mg/mL、约30 mg/mL、约31 mg/mL、约32mg/mL、约33 mg/mL、约34 mg/mL、约35 mg/mL、约36 mg/mL、约37 mg/mL、约38 mg/mL、约39mg/mL、约40 mg/mL、约41 mg/mL、约42 mg/mL、约43 mg/mL、约44 mg/mL、约45 mg/mL、约46mg/mL、约47 mg/mL、约48 mg/mL、约49 mg/mL、约50 mg/mL、约55 mg/mL、约60 mg/mL、约65mg/mL、约70 mg/mL、约75 mg/mL、约80 mg/mL、约85 mg/mL、约90 mg/mL、约95 mg/mL、约100mg/mL或更高。在一个具体(但非限制性)实施方案中，预处理试剂中酶的浓度被定义为在上文所示的任何两个值的范围内，诸如(但不限于)约0.01 mg/mL至约100 mg/mL的范围，约0.05 mg/mL至约50 mg/mL的范围，约0.1 mg/mL至约20 mg/mL的范围，约0.5 mg/mL至约10mg/mL的范围等。然而应当理解，上面列出的具体浓度范围仅用于举例说明目的，并且不应被视为限制性的；具有上面列出的值之一的下限和上面列出的另一值的上限的任何浓度范围明确落入本公开的范围内。

类似地，预处理试剂的一种或多种额外物质各自可以以允许所述物质发挥功能以增强酶促活性的任何浓度存在。例如，每种额外物质(诸如但不限于酶辅因子如胆汁酸和/或其盐、表面活性剂如PLURONIC®嵌段共聚物或蛋白酶)可以以选自以下浓度的非限制性实例的浓度提供：约0.001%、约0.005%、约0.01%、约0.02%、约0.03%、约0.04%、约0.05%、约0.06%、约0.07%、约0.08%、约0.09%、约0.1%、约0.15%、约0.2%、约0.25%、约0.3%、约0.35%、约0.4%、约0.45%、约0.5%、约0.55%、约0.6%、约0.65%、约0.7%、约0.75%、约0.8%、约0.85%、约0.9%、约0.95%、约1%、约1.1%、约1.2%、约1.3%、约1.4%、约1.5%、约1.6%、约1.7%、约1.8%、约1.9%、约2%、约2.1%、约2.2%、约2.3%、约2.4%、约2.5%、约2.6%、约2.7%、约2.8%、约2.9%、约3%、约3.25%、约3.5%、约3.75%、约4%、约5%、约6%、约7%、约8%、约9%、约10%、约11%、约12%、约13%、约14%、约15%、约16%、约17%、约18%、约19%、约20%、约21%、约22%、约23%、约24%、约25%和更高。在具体(但非限制性)实施方案中，预处理试剂中存在的每种额外物质的浓度被定义为在上文所示的任何两个值的范围内，诸如(但不限于)约0.001%至约25%的范围，约0.005%至约15%的范围，约0.01%至约5%的范围等。然而，应当理解，上面列出的具体浓度范围仅用于举例说明目的，并且不应被视为限制性的；具有上面列出的值之一的下限和上面列出的另一值的上限的任何浓度范围明确落入本公开的范围内。

在某些非限制性实施方案中，能够检测疏水分析物的至少一种测定试剂是免疫测定试剂(即，靶标分析物-特异性结合配偶体(诸如，但不限于，抗体)。然后允许至少一种靶标分析物-特异性结合配偶体结合靶标分析物或至少一种免疫测定试剂。

预处理和测定/检测步骤可以在微流体装置的同一隔室中进行。或者，可以在第一隔室中进行预处理步骤，且然后将预处理的样品转移至第二隔室用于进行检测步骤。

可以将生物样品以其天然形式添加至预处理步骤，或者可以在预处理步骤之前裂解生物样品。因此，在一个具体(但非限制性)实施方案中，本文描述或以其他方式考虑的方法可以进一步包括在第一隔室中裂解生物样品，且然后将裂解的生物样品转移至预处理步骤中利用的第二隔室的步骤。

本文描述的任何方法步骤可以例如但不限于由用户进行。然而，如本文所用，术语“用户”不限于由人类使用；相反，术语“用户”可以包括(例如但不限于)计算机、服务器、网站、处理器、网络接口、人、用户终端、虚拟计算机、其组合等。

本公开的某些非限制性实施方案涉及可用于方便地进行上文所述的诊断测定方法的试剂盒。所述试剂盒包括一种或多种本文描述或以其他方式考虑的任何预处理试剂与一种或多种如本文描述或以其他方式考虑的能够检测疏水分析物的任何测定试剂的组合。

本公开的某些其他非限制性实施方案涉及一种测定装置(诸如但不限于微流体装置)，其含有本文描述或以其他方式考虑的任何预处理试剂中的至少一种以及本文描述或以其他方式考虑的任何测定试剂中的至少一种，并且其中所述测定装置用于上文所述的任何体外诊断测定方法中。

例如，微流体装置可以包括至少一个能够接收怀疑含有靶标疏水分析物的样品的隔室，其中所述至少一个隔室包括至少一种如上文详细描述的预处理试剂。所述隔室可以进一步包含一种或多种本文所述或以其他方式考虑的任何测定试剂。或者，所述微流体装置可以提供有至少第二隔室，所述第二隔室能够与含有预处理试剂的第一隔室流体连通，且所述测定试剂可以包含在所述第二隔室中。所述第二隔室可以是读取室，在所述读取室中，进行用于测定样品中存在的靶标疏水分析物的浓度的检测测定；或者，所述微流体装置可以额外包括能够与所述第二隔室流体连通的读取室。

此外，本公开的试剂盒和/或微流体装置可以进一步含有用于进行本文所述或以其他方式考虑的任何具体诊断测定的其他组分和/或试剂。这些额外组分/试剂的性质将取决于具体测定形式，并且其确定完全在本领域普通技术人员的技术内。本公开的试剂盒和/或微流体装置中可存在的额外试剂/组分的实例包括但不限于稀释剂、裂解剂(用于裂解红血细胞)、洗涤溶液(诸如但不限于等渗溶液)、阳性对照、阴性对照、质量控制和/或致动剂以及其任何组合。

所述试剂盒和/或微流体装置中的各种组分/试剂的相对量可以大幅变化，以提供这样的组分/试剂的浓度，其显著优化需要在测定方法期间发生的反应，并进一步显著优化测定的灵敏度。

本公开的试剂盒可以进一步包括解释如何使用试剂盒的一组书面说明。具有该性质的试剂盒可以与任何微流体装置一起使用和/或用于本文描述或以其他方式考虑的任何方法。

所述微流体装置可以具有与其相关的一种或多种手动功能(即，其中需要移液用于添加一种或多种试剂和/或在两个隔室之间移动混合物)；或者，所述微流体装置可以是全自动的、封闭的系统，其中在装置的构造期间将必要的试剂/组分布置在各个隔室中(其中各个隔室处于连续流体连通(或能够连续流体连通))，且因此在将样品添加至微流体装置后，无需手动操作样品和/或试剂来进行测定。

如上文所述，所述微流体装置包括一个或多个包含上文所述的组分/试剂的隔室。然而，将理解的是，所述微流体装置可以提供有任何数量的隔室、任何隔室排列以及组分/试剂在其之间的任何分布，只要所述装置能够根据本公开发挥功能。当提供有多个隔室时，所述隔室可以与彼此完全分离，或者一个或多个隔室能够与彼此流体连通。能够根据本公开使用的微流体装置的各种结构是本领域中众所周知的，且因此认为不必对其进一步描述。

在某些实施方案中，所述微流体装置包括至少第一和第二隔室。所述第一隔室能够接收生物样品，并且如果期望(但不限于)，可以包括用于裂解红血细胞或以其他方式制备用于预处理和测定的样品的机件。所述分离机件是微流体装置的领域中众所周知的，且因此认为不必对其进一步描述。所述第二隔室能够与所述第一隔室流体连通并且包括至少一种预处理试剂。所述第二隔室可以进一步包括至少一种测定试剂；或者，所述微流体装置可以包括用于储存至少一种测定试剂的第三隔室，并且其中在预处理步骤中样品与预处理试剂孵育后，可以将至少一种测定试剂从所述第三隔室转移至所述第二隔室中。

所述微流体装置还可以包括能够被临床化学系统询问(诸如但不限于通过光谱仪光学询问)的读取室(诸如但不限于光学读取室)。所述读取室可以与上文所述的任何隔室相关联，或者所述读取室可以与和上文所述的那些分开的隔室相关联。

入口通道和隔室以及两个隔室可以被描述为“能够与彼此流体连通”；该短语表明所述隔室仍然可以被密封，但当在其中或它们之间形成的密封被刺穿后，两个隔室能够在其之间具有流体流动。

本公开的试剂盒/微流体装置可以提供有本领域中已知或本文以其他方式考虑的任何其他期望特征。例如但不限于，本公开的试剂盒/微流体装置可以进一步包括一个或多个含有其他溶液的额外隔室，所述溶液诸如但不限于裂解剂(用于裂解红血细胞)、稀释剂、洗涤溶液、标记剂、干扰溶液、阳性对照、阴性对照、质量控制和/或致动剂以及其任何组合。

具体实施方案

下文提供了实施例。然而，应理解本公开，其应用不限于本文公开的具体实验、结果和实验室程序。相反，本实施例仅作为各种实施方案之一提供，并且意在是示例性的，而非穷举性的。

在本实施例中，检查预处理试剂的使用对DIMENSION®集成化学系统(SiemensHealthcare Diagnostics, Inc., Newark, DE)上的依维莫司(EVRO)测定中的胆固醇干扰的影响。在预处理试剂中掺加各种量的脂肪酶、胆汁酸(作为脂肪酶的辅因子)和PLURONIC®嵌段共聚物(BASF Corporation, Ludwigshafen, Germany)，在DIMENSION®集成化学系统(Siemens Healthcare Diagnostics, Inc., Newark, DE)上进行经处理样品的依维莫司(EVRO)测定之前，所述预处理试剂与含有已知量的胆固醇的样品孵育。

如表1中所示，在没有预处理步骤的情况下，对于300 mg/mL、350 mg/mL和400 mg/mL的胆固醇浓度，在EVRO测定中观察到的胆固醇干扰的量分别为-7.6%、-12%和-19%。在300mg/mL、350 mg/mL和400 mg/mL的胆固醇浓度下，添加用包含脂肪酶、其辅因子胆汁酸/盐(用于增强酶促活性)和PLURONIC®作为表面活性剂的试剂的预处理步骤，将胆固醇干扰的量分别降低至1%(从-7.6%)、-0.4%(从-12%)和-3%(从-19%)。因此，使用本公开的组合物和方法，在400 mg/mL胆固醇时基本上消除胆固醇干扰。

表1：脂肪酶对胆固醇干扰减轻的影响。

脂肪酶mg/mL	0	5	5	3	5
						%胆汁盐	0%	0.1%	0.1%	0.1%	0.05%
% Pluronic	0.9%	0.9%	0%	0%	0%
						300 mg/mL胆固醇	-7.6%	1.0%	-0.6%	0.5%	-1.6%
350 mg/mL胆固醇	-12.0%	-0.4%	0.6%	-6.9%	-4.3%
						400 mg/mL胆固醇	-19.0%	-3.0%	-5.4%	-5.6%	-6.9%

因此，根据本公开，已经提供了完全满足上文所述的目的和优点的组合物、试剂盒和装置以及其生产和使用方法。尽管已经结合上文阐述的具体实验、结果和语言描述了本公开，但显然，许多替代、修改和变化对于本领域技术人员将是显而易见的。因此，意欲涵盖落入本公开发明构思的精神和广泛范围内的所有此类替代、修改和变化。

Claims (19)

1.用于检测生物样品中的靶标疏水分析物的存在和/或浓度的方法，所述方法包括以下步骤：

同时或全部或部分依次组合：

(1) 怀疑含有所述靶标疏水分析物的样品；

(2) 消化脂蛋白颗粒的预处理试剂，其中所述预处理试剂包含蛋白酶、脂肪酶和脂肪酶的辅因子；和

(3) 至少一种能够检测疏水分析物的测定试剂；和

进行一种或多种使用(3)的检测测定以测定所述样品中存在的靶标疏水分析物的浓度。

2.权利要求1的方法，其中所述靶标疏水分析物选自维生素D、他克莫司、西罗莫司、依维莫司、雌激素、雌酮、雌二醇、雌三醇、阿尔法二醇、环孢菌素、炔雌醇、酯化雌激素、莫克雌醇、炔雌醚、孕激素、孕酮、雄激素、睾酮、二氢睾酮(DHT)、脱氢表雄酮(DHEA)、DHEA硫酸盐、雄烯二酮、醛固酮、皮质醇、儿茶酚胺、25-羟基维生素D2、25-羟基维生素D3、1,25-二羟基维生素D2和1,25-二羟基维生素D3。

3.权利要求1的方法，其中(3)的至少一种测定试剂被进一步定义为免疫测定试剂。

4.权利要求1的方法，其中脂肪酶以约0.1 mg/mL至约20 mg/mL的范围内的浓度存在于所述预处理试剂中。

5.权利要求1的方法，其中所述脂肪酶的辅因子包含胆汁酸和/或其盐。

6.权利要求1的方法，其中所述预处理试剂还包含表面活性剂。

7.权利要求1的方法，其中所述脂肪酶的辅因子包含胆汁酸和/或其盐，并且其中所述预处理试剂还包含表面活性剂。

8.权利要求1的方法，其中所述预处理试剂还包含胃蛋白酶。

9.权利要求1的方法，其中所述预处理试剂还包含淀粉酶。

10.权利要求1的方法，其中所述生物样品选自：尿液、全血或其任何部分、裂解的血液或其任何部分、唾液、痰、脑脊液(CSF)、肠液、腹膜内液、囊液、汗液、间质液、泪液、粘液、膀胱洗液、精液及其任何组合。

11.权利要求1的方法，其进一步包括在将所述生物样品与所述预处理试剂组合之前，裂解至少部分的生物样品的步骤。

12.权利要求1的方法，其中至少一个步骤通过自动化临床化学分析仪系统进行。

13.用于检测生物样品中的靶标疏水分析物的存在和/或浓度的方法中的试剂盒，所述试剂盒包含：

消化脂蛋白颗粒的预处理试剂，其中所述预处理试剂包含蛋白酶、脂肪酶和脂肪酶的辅因子；和

至少一种能够检测疏水分析物的测定试剂，用于测定所述样品中存在的靶标疏水分析物的浓度。

14.权利要求13的试剂盒，其中所述靶标疏水分析物选自维生素D、他克莫司、西罗莫司、依维莫司、雌激素、雌酮、雌二醇、雌三醇、阿尔法二醇、环孢菌素、炔雌醇、酯化雌激素、莫克雌醇、炔雌醚、孕激素、孕酮、雄激素、睾酮、二氢睾酮(DHT)、脱氢表雄酮(DHEA)、DHEA硫酸盐、雄烯二酮、醛固酮、皮质醇、儿茶酚胺、25-羟基维生素D2、25-羟基维生素D3、1,25-二羟基维生素D2和1,25-二羟基维生素D3。

15.权利要求13的试剂盒，其中(3)的至少一种测定试剂被进一步定义为免疫测定试剂。

16.权利要求13的试剂盒，其中脂肪酶以约0.1 mg/mL至约20 mg/mL的范围内的浓度存在于所述预处理试剂中。

17.权利要求13的试剂盒，其中所述脂肪酶的辅因子包含胆汁酸和/或其盐。

18.权利要求13的试剂盒，其中所述预处理试剂还包含至少一种额外物质，其选自表面活性剂、胃蛋白酶、淀粉酶，及其组合。

19.权利要求13的试剂盒，其中所述脂肪酶的辅因子包含胆汁酸和/或其盐，并且其中所述预处理试剂还包含表面活性剂。