CN115417914A - 一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法 - Google Patents

一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN115417914A
CN115417914A CN202211211581.4A CN202211211581A CN115417914A CN 115417914 A CN115417914 A CN 115417914A CN 202211211581 A CN202211211581 A CN 202211211581A CN 115417914 A CN115417914 A CN 115417914A
Authority
CN
China
Prior art keywords
oligopeptide
hyaluronan
fmoc
formula
resin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211211581.4A
Other languages
English (en)
Inventor
姬胜利
殷金岗
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Reali Tide Biological Technology Weihai Co ltd
Original Assignee
Reali Tide Biological Technology Weihai Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Reali Tide Biological Technology Weihai Co ltd filed Critical Reali Tide Biological Technology Weihai Co ltd
Priority to CN202211211581.4A priority Critical patent/CN115417914A/zh
Publication of CN115417914A publication Critical patent/CN115417914A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/73—Polysaccharides
    • A61K8/735—Mucopolysaccharides, e.g. hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/57—Compounds covalently linked to a(n inert) carrier molecule, e.g. conjugates, pro-fragrances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/91—Injection
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Abstract

本发明涉及一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法，解决了现有技术乙酰透明质酸和寡肽类物质结构不稳定、功能型化妆品中的乙酰透明质酸和寡肽需分别添加、易被酶解、化学稳定性差、易受环境影响而失活和作用时间短的技术问题。本发明提供了一种祛皱抗衰老的乙酰透明质酸寡肽的制备方法，包括以下步骤：将乙酰透明质酸与寡肽通过共价键形式进行连接：寡肽序列中Lys侧链的ε‑NH2与乙酰透明质酸的‑COOH通过酰胺缩合反应生成酰胺键进行连接，生成乙酰透明质酸寡肽；同时提供其应用方法。本发明广泛应用于功能型化妆品技术和整形美容产品技术领域。

Description

一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法
本案是基于2019年10月11日提交的中国专利申请号为2019109634683，名称为一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法的分案申请。
技术领域
本发明属于功能型化妆品技术领域，特别涉及一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法。
背景技术
功能型化妆品的研制现已成为当今化妆品行业开发的主题，其中添加的生物活性成分对细胞的生长和代谢具有重要的调控作用，例如：多肽、多糖等，能有效的应对皮肤损伤和促进皮肤修复。多肽具有特殊的生物活性，对机体的生长、发育和代谢起重要的调节作用，其特殊的生理活性在肌肤老化和护理过程中起重要的调控作用，被广泛应于美容护肤品当中。美容多肽主要是由两个至十个氨基酸组成的小分子寡肽，可促进细胞生长、分化、重建与修复，从根本上改善和修复皮肤损伤，具有显著的祛皱、抗衰老、美白和祛斑等功效，现已成为功能型化妆品的重要组分，并且具有极高的使用安全性，例如：三肽-1能够刺激胶原蛋白、弹性蛋白、纤维连接蛋白以及层粘连蛋白的生成，恢复皮肤弹性和紧致性，具有抗炎、抗氧化、祛皱、抗衰老的作用，可用于头发和护肤品的生产；SIKVAV寡肽和IKVAV寡肽可促进细胞黏连、改善皮肤柔韧性预防皮肤老化等。透明质酸(Hyaluronic acid，HA)是一种糖胺聚糖，具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，可以锁住自身重量1000倍的水分，1％的溶液即可形成凝胶，防止皮肤水分经表皮流失，被称为理想的天然保湿因子，同时也是非常好的的透皮吸收促进剂。透明质酸独特的分子结构和理化性质在机体内具有多种重要的生理学功能，包括预防、修复皮肤损伤和促进创伤愈合等，被广泛用于美容护肤品中的生产。其中小分子透明质酸能够深入真皮，清除氧自由基，改善皮肤营养代谢，促进表皮细胞的增殖和分化，增加皮肤弹性、祛皱和防止衰老；大分子透明质酸能够在皮肤表层形成一层保护膜，能够锁住皮肤内水分、阻隔外界的不良环境因素对皮肤造成的损伤。乙酰透明质酸(Acetylated hyaluronic acid，AcHA)是透明质酸经乙酰化修饰的衍生物，是一种新型、高效的柔肤因子，具有亲水性和亲脂性，可高度软化角质层，对皮肤有很强的亲和力，保水能力超过透明质酸的2倍，其护肤效果优于透明质酸。含有寡肽或透明质酸的功能型化妆品具有安全、稳定、易吸收和效果佳的优点，受到广大消费者的青睐。同时功能型化妆品的产品附加值高、市场空间大，大大的增加了化妆品制造商的利润，越来越多的企业和研究机构投身至功能型化妆品的研究开发。
专利CN106109296B公开了一种含有透明质酸钠、乙酰透明质酸钠的保湿精华水；CN104740643A公开了一种稳定的负载生物活性蛋白或多肽的透明质酸溶液，需分别添加透明质酸与生物活性蛋白或多肽；CN109157471A公开了一种分别添加透明质酸与寡肽的具有修复保湿功能的护肤组物；CN108904317A公开了一种祛皱的多肽组合方法。然而这些专利中均是将透明质酸与多肽单独或组合加至产品当中，并未提及同时兼具两种活性成分功能的透明质酸寡肽、以及它在化妆用组合物中的研制和应用。单一活性成分对细胞作用有限，通过两种活性成分组合使用、或者使用同时兼具两种活性成分功能的组分显然能够取得更好效果。然而人体的透明质酸酶和蛋白酶能够水解透明质酸和寡肽，因此通过皮肤渗透吸收的、以及皮肤表面的透明质酸和寡肽易被酶解失活，同时由于多肽类物质的结构不稳定、易受外界不良环境因素影响而变性、失活，导致它们的活性作用时间短，因而需根据成分特性选择合适的剂型、保护剂，提高稳定性，延长其功效。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术的不足，针对乙酰透明质酸和寡肽类物质结构不稳定的缺点，提供一种兼具乙酰透明质酸和寡肽的功能活性、且化学性质稳定、不易受环境影响、祛皱抗衰老的效果显著且作用时间长的乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法。
本发明采用的技术方案如下：
一种祛皱抗衰老的乙酰透明质酸寡肽，乙酰透明质酸寡肽的结构分别为具有式V、式VI和式VII结构的糖肽：
Figure BDA0003875414730000031
一种祛皱抗衰老的乙酰透明质酸寡肽的制备方法，包括以下步骤：将乙酰透明质酸与寡肽通过共价键形式进行连接：寡肽序列中Lys侧链的ε-NH2与乙酰透明质酸的-COOH通过酰胺缩合反应生成酰胺键进行连接，生成乙酰透明质酸寡肽；
乙酰透明质酸的结构为式I的结构：
Figure BDA0003875414730000041
寡肽的结构分别为式II、式III和式IV的结构：
Figure BDA0003875414730000042
优选的，包括以下步骤：
(1)将乙酰透明质酸制成乙酰透明质酸-TBA；
(2)缩合反应：
①用固相合成法：在活化体系和DIEA存在下，以CTC树脂为固相合成的载体，分别按照寡肽的式II、式III和式IV结构的氨基酸序列从C端至N端依次缩合经活化的Fmoc-氨基酸，进行肽树脂的合成，分别合成寡肽式II、式III和式IV结构的三种N端氨基含有Fmoc保护基的肽树脂；所述合成寡肽的结构式II的肽树脂依次缩合的Fmoc-氨基酸顺序为：Fmoc-Val-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Dde)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Ser-OH；所述合成寡肽的结构式III肽树脂依次缩合的Fmoc-氨基酸顺序为：Fmoc-Val-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Dde)-OH、Fmoc-Ile-OH；所述合成寡肽的结构式IV肽树脂依次缩合的Fmoc-氨基酸顺序为：Fmoc-Lys(Dde)-OH、Fmoc-His-OH、Fmoc-Gly-OH；
②脱除步骤①中制得的含有Fmoc保护基的肽树脂中Lys侧链ε-NH2的保护基Dde、裂解肽树脂，分别得到寡肽式II、式III和式IV结构的三种N端氨基含有Fmoc保护基的寡肽粗肽；
③对步骤②中制得的含有Fmoc保护基的寡肽粗肽进行纯化、经冻干后，分别得到寡肽式II、式III和式IV结构的N端氨基含有Fmoc保护基的三种寡肽纯品；
(3)将步骤(1)中制得的乙酰透明质酸-TBA经活化后，与步骤(2)中制得的寡肽纯品进行缩合反应；所述寡肽序列中Lys侧链的ε-NH2与乙酰透明质酸的-COOH通过酰胺缩合反应生成酰胺键进行连接，生成产物乙酰透明质酸TBA寡肽-Fmoc；
(4)脱除步骤(3)中制得的产物中寡肽N端氨基的Fmoc-保护基，得产物乙酰透明质酸TBA寡肽；
(5)换盐：通过超滤膜(截留分子量500Da)对步骤(4)中制得的产物乙酰透明质酸TBA寡肽进行超滤、洗涤，再通过732型阳离子交换柱(树脂)将其转换为Na+盐，经冻干分别得到具有式V、式VI和式VII结构的乙酰透明质酸寡肽成品。
优选的，乙酰透明质酸的分子量为10kDa～100kDa。
优选的，步骤(2)①中活化体系为：A+D或A+B+C，其中A为HOBT或HOAT，B为HATU、HBTU、TBTU或PyBOP其中任何一种，C为DIEA或TMP，D为DIC；步骤(3)中乙酰透明质酸-TBA的活化方法为：乙酰透明质酸-TBA在EDC存在情况下与HOSU反应24h。
优选的，步骤(2)②中脱除步骤①中制得的含有Fmoc保护基的肽树脂中Lys侧链ε-NH2的保护基Dde的脱除方法为：向步骤(2)①中制得的Fmoc保护基的肽树脂中加入脱保护液反应3h，脱保护液为盐酸羟胺:咪唑:DCM:NMP＝25:18:16:100(w/w/w/w)。
优选的，步骤(2)②中裂解肽树脂的方法为：按照每g肽树脂加入10ml裂解液的比例，在10～30℃条件下反应2-5h，对其进行裂解；裂解液为20％TFE/DCM(v/v)。
优选的，步骤(2)③中纯化方法为采用反相高效液相色潽法对步骤②中制得的含有Fmoc保护基的寡肽粗肽进行纯化，其条件为：流动相A相为H2O，流动相B相为乙腈，采用梯度洗脱，洗脱时间为60min，流速为80ml/min，紫外检测波长为220nm，洗脱梯度B相为10％～40％或1％～31％。
上述任何一项的一种祛皱抗衰老的乙酰透明质酸寡肽的应用方法，将具有式V、式VI和式VII结构的三种乙酰透明质酸寡肽中的任意一种、或任意两种、或三种作为化妆品组分或者添加至化妆品中。
上述任何一项的一种祛皱抗衰老的乙酰透明质酸寡肽的应用方法，将具有式V、式VI和式VII结构的三种乙酰透明质酸寡肽中的任意一种、或任意两种、或三种作为皮肤填充剂应用于面部注射整形美容产品。
本发明的有益效果：
(1)本发明的乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法，针对乙酰透明质酸和寡肽类物质结构不稳定的缺点，得到的乙酰透明质酸寡肽兼具了乙酰透明质酸和寡肽的功能活性，具有乙酰透明质酸的靶向性能有效促进寡肽穿透皮肤屏障，增强皮肤对寡肽的吸收与结合，增加寡肽的使用效果，且其保湿祛皱和抗衰老效果均明显优于寡肽和乙酰透明质酸分别使用以及联合使用的效果，同时其化学性质稳定、提高抗酶解能力，延长半衰期，不易受环境影响、保湿祛皱抗衰老的效果显著、且作用时间长。
(2)本发明将乙酰透明质酸和寡肽采用共价键偶联的方式生成乙酰透明质酸寡肽，直接通过化学改性修饰从根本上赋予其更为优良的特性，且制备合成步骤简单，纯化简易，同时将提供其在化妆品以及美容产品中的应用方法，显著增强功能型化妆品的使用补水祛皱和抗衰老的效果，显著提高用户的使用满意度。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以助于理解本发明的内容。本发明中所使用的方法如无特殊规定，均为常规的生产方法；所使用的原料，如无特殊规定，均为常规的市售产品。
本发明中所使用的缩写的具体含义列于下表中：
Figure BDA0003875414730000071
实施例1
乙酰透明质酸-TBA的制备：
(1)将300g分子量为50kDa的乙酰透明质酸溶解于10L去离子水中，然后通过732(H+)型阳离子交换柱将其中的Na+转换为H+，得到含乙酰透明质酸的洗脱液；
(2)将200g TBAOH加至步骤(1)中含乙酰透明质酸的洗脱液，搅拌2h，进行中和后，得到乙酰透明质酸-TBA反应液；
(3)通过超滤膜(截留分子量500D)对步骤(2)得到的乙酰透明质酸-TBA反应液进行超滤、洗涤、浓缩，除去过量的TBAOH，得到乙酰透明质酸-TBA产物；
(4)对步骤(3)得到的乙酰透明质酸-TBA产物进行冻干，得到乙酰透明质酸-TBA固体粉末。
实施例2
Fmoc-Ser-Ile-Lys-Val-Ala-Val-COOH粗肽的制备：
(1)树脂的溶胀：取25g替代度为1.2mmol/g的CTC树脂，加入200ml DCM将树脂溶胀0.5h，抽干溶剂，再用DMF洗涤树脂两次，抽干溶剂；
(2)Fmoc-Val-CTC树脂的制备：a)将Fmoc-Val-OH、DIEA和步骤(1)溶胀后的CTC树脂按照摩尔质量比值为3:6:1的比例进行混合，在25℃条件下反应2h，得到Fmoc-Val-CTC树脂；b)将MeOH、DMF和DIEA的混合溶液加至树脂中，在30℃条件下反应30min，对树脂进行封闭，再用DMF洗涤树脂两次，抽干溶剂，得封闭后的Fmoc-Val-CTC树脂；
(3)Fmoc保护基的脱除：向步骤(2)得到的封闭后的Fmoc-Val-CTC树脂中加入体积分数20％PIP-DMF溶液，在10～30℃条件下进行两次脱Fmoc保护：第一次脱Fmoc保护和第二次脱Fmoc保护后，再用DMF洗涤树脂至pH为7；第一次脱Fmoc保护时间为5min，第二次脱Fmoc保护时间为10min，得脱Fmoc保护基的树脂；
(4)氨基酸活化：在室温条件下，分别将Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Dde)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Ser-OH各90mmol与90mmol HOBT用适量的DMF溶解，再加入90mmol DIC，活化反应5min，得活化氨基酸；
(5)氨基酸缩合：将步骤(4)得到的活化后的Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Dde)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Ser-OH依次加至步骤(3)得到的脱Fmoc保护基的树脂中，在25℃条件下进行氨基酸的缩合反应2h，茚三酮显色反应监控反应进程，得到Fmoc-Ser-Ile-Lys(Dde)-Val-Ala-Val-CTC树脂；
(6)Dde保护基的脱除：向步骤(5)得到的Fmoc-Ser-Ile-Lys(Dde)-Val-Ala-Val-CTC树脂中，加入脱保护液盐酸羟胺:咪唑:DCM:NMP＝25:18:16:100(w/w/w/w)反应3h后，用300ml DMF和300ml MeOH交替洗涤肽树脂三次，洗涤时间5min/次，将肽树脂收缩，抽干溶剂，真空干燥，得Fmoc-Ser-Ile-Lys-Val-Ala-Val-CTC树脂；
(7)裂解：在圆底烧瓶中按照每g肽树脂加入10ml裂解液20％TFE/DCM(v/v)的比例对步骤(6)得到的Fmoc-Ser-Ile-Lys-Val-Ala-Val-CTC树脂进行裂解，25℃条件下反应2h，抽滤，将滤液进行减压蒸馏、蒸干溶剂，得到Fmoc-Ser-Ile-Lys-Val-Ala-Val-COOH粗肽。
实施例3
Fmoc-Ile-Lys-Val-Ala-Val-COOH粗肽的制备：
(1)树脂的溶胀：取25g替代度为1.2mmol/g的CTC树脂，加入200ml DCM将树脂溶胀0.5h，抽干溶剂，再用DMF洗涤树脂两次，抽干溶剂；
(2)Fmoc-Val-CTC树脂的制备：a)将Fmoc-Val-OH、DIEA和树脂按照摩尔质量比值为3:6:1的比例进行混合，在25℃条件下反应2h，得到Fmoc-Val-CTC树脂；b)将MeOH、DMF和DIEA的混合溶液加至树脂中，在10～30℃条件下反应30min，对树脂进行封闭，再用DMF洗涤树脂两次，抽干溶剂，得封闭后的Fmoc-Val-CTC树脂；
(3)Fmoc保护基的脱除：向步骤(2)得到的封闭后的Fmoc-Val-CTC树脂中加入体积分数20％PIP-DMF溶液，在10～30℃条件下进行两次脱Fmoc保护：第一次脱Fmoc保护和第二次脱Fmoc保护后，再用DMF洗涤树脂至pH为7；第一次脱Fmoc保护时间为5min，第二次脱Fmoc保护时间为10min，得脱Fmoc保护基的树脂；
(4)氨基酸活化：分别将Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Dde)-OH、Fmoc-Ile-OH各90mmol与90mmol HOBT用适量的DMF溶解，再加入90mmol DIC，在室温条件下反应5min，得活化氨基酸；
(5)氨基酸缩合：将步骤(4)中活化后的Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Dde)-OH、Fmoc-Ile-OH依次加至脱除Fmoc保护基的树脂中，在25℃条件下进行氨基酸的缩合反应2h，茚三酮显色反应监控反应进程，最终得到Fmoc-Ile-Lys(Dde)-Val-Ala-Val-CTC树脂；
(6)Dde保护基的脱除：向步骤(5)得到的Fmoc-Ile-Lys(Dde)-Val-Ala-Val-CTC树脂中，加入脱保护液盐酸羟胺:咪唑:DCM:NMP＝25:18:16:100(w/w/w/w)，反应3h后，用300ml DMF和300ml MeOH交替洗涤肽树脂三次，洗涤时间5min/次，将肽树脂收缩，抽干溶剂，真空干燥，得Fmoc-Ile-Lys-Val-Ala-Val-CTC树脂；
(7)裂解：在圆底烧瓶中按照每g肽树脂加入10ml裂20％TFE/DCM(v/v)的比例对步骤(6)得到的Fmoc-Ile-Lys-Val-Ala-Val-CTC树脂进行裂解，25℃条件下反应2h，抽滤，将滤液进行减压蒸馏、蒸干溶剂，得到Fmoc-Ile-Lys-Val-Ala-Val-COOH粗肽。
实施例4
Fmoc-Gly-His-Lys-COOH粗肽的制备：
(1)树脂的溶胀：取37.5g替代度为1.2mmol/g的CTC树脂，加入300ml DCM将树脂溶胀0.5h，抽干溶剂，再用DMF洗涤树脂两次，抽干溶剂；
(2)Fmoc-Lys(Dde)-CTC树脂的制备：a)将Fmoc-Lys(Dde)-OH、DIEA和树脂按照摩尔质量比值为3:6:1的比例进行混合，在25℃条件下反应2h，得到Fmoc-Lys(Dde)-CTC树脂；b)将MeOH、DMF和DIEA的混合溶液加至树脂中，在10～30℃条件下反应30min，对树脂进行封闭，再用DMF洗涤树脂两次，抽干溶剂，得封闭后的Fmoc-Lys(Dde)-CTC树脂。
(3)Fmoc保护基的脱除：向步骤(2)得到的封闭后的Fmoc-Lys(Dde)-CTC树脂中加入体积分数20％PIP-DMF溶液，在10～30℃条件下进行两次脱Fmoc保护：第一次脱Fmoc保护和第二次脱Fmoc保护后，再用DMF洗涤树脂至pH为7；所述第一次脱Fmoc保护时间为5min，所述第二次脱Fmoc保护时间为10min，得脱Fmoc保护基的树脂；
(4)氨基酸活化：分别将Fmoc-His-OH、Fmoc-Gly-OH各135mmol与135mmol HOBT用适量的DMF溶解，再加135mmol DIC，在室温条件下反应5min，得活化氨基酸；
(5)氨基酸缩合：将步骤(4)中活化后的Fmoc-His-OH、Fmoc-Gly-OH依次加至脱除Fmoc保护基的树脂中，在25℃条件下进行氨基酸的缩合反应2h，茚三酮显色反应监控反应进程，最终得到Fmoc-Gly-His-Lys-CTC树脂；
(6)Dde保护基的脱除：向步骤(5)得到的Fmoc-Gly-His-Lys-CTC树脂中，加入300ml脱保护液盐酸羟胺:咪唑:DCM:NMP＝25:18:16:100(w/w/w/w)，反应3h后，用300mlDMF和300ml MeOH交替洗涤肽树脂三次，洗涤时间5min/次，将肽树脂收缩，抽干溶剂，真空干燥，得Fmoc-Gly-His-Lys-CTC树脂；
(7)裂解：在圆底烧瓶中按照每g肽树脂加入10ml裂解液20％TFE/DCM(v/v)的比例对步骤(6)得到的Fmoc-Gly-His-Lys-CTC树脂进行裂解，25℃条件下反应2h，抽滤，将滤液进行减压蒸馏、蒸干溶剂，得到Fmoc-Gly-His-Lys-COOH粗肽。
实施例5
纯化：
将实施例2-实施例4中制备的Fmoc-Ser-Ile-Lys-Val-Ala-Val-COOH粗肽、Fmoc-Ile-Lys-Val-Ala-Val-COOH粗肽以及Fmoc-Gly-His-Lys-COOH粗肽分别进行纯化；
采用反相高效液相色潽法对三种粗肽进行一步纯化，流动相A相为H2O，流动相B相为乙腈，采用梯度洗脱：C18制备柱(50×250mm，10μm)，洗脱时间为60min：对于实施例2和实施例3得到寡肽的洗脱梯度为：B相为10％～40％；对于实施例4得到寡肽的洗脱梯度为：B相为1％～31％；流速为80ml/min，紫外检测波长220nm。最后经浓缩、冻干，得到Fmoc-Ser-Ile-Lys-Val-Ala-Val-COOH肽、Fmoc-Ile-Lys-Val-Ala-Val-COOH肽以及Fmoc-Gly-His-Lys-COOH肽三种寡肽的纯度分别为98.2％、98.0％、98.3％。
实施例6
制备乙酰透明质酸寡肽成品：
(1)活化乙酰透明质酸：将由实施例1制得的50g乙酰透明质酸-TBA溶于DMF中，加入17mmol HOSU、34mmol EDC，30℃反应24h，将反应液倾倒至反应液4倍体积的乙酸乙酯中，搅拌0.5h后静置过夜，进行沉降；将沉淀过滤、并用乙酸乙酯将沉淀洗涤两次，得到活化的乙酰透明质酸；
(2)向步骤(1)得到的活化的乙酰透明质酸溶于DMF，加入17mmol实施例5制得的Fmoc-Ser-Ile-Lys-Val-Ala-Val-COOH肽、Fmoc-Ile-Lys-Val-Ala-Val-COOH肽以及Fmoc-Gly-His-Lys-COOH肽三种寡肽纯品中的任意一种，并加入20.4mmol DIEA搅拌反应，采用茚三酮显色反应监控反应进程，直至反应溶液中无氨基组分使反应达到完全，得Fmoc保护的乙酰透明质酸寡肽；
(3)向步骤(2)得到的Fmoc保护的乙酰透明质酸寡肽的反应体系中加入体积比为10％的二乙胺，脱除肽链N端的Fmoc保护基，再将反应液进行减压蒸馏蒸干溶剂，得乙酰透明质酸寡肽半成品；
(4)将步骤(3)制得的乙酰透明质酸寡肽半成品固体溶解，通过超滤膜(截留分子量500D)进行超滤、洗涤，再通过732型阳离子交换柱将其中的TBA转换为Na+，经冻干分别得到具有式V、式VI和式VII结构的三种乙酰透明质酸寡肽成品。
实施例7
制备乙酰透明质酸寡肽成品：
(1)将由实施例1制得的50g乙酰透明质酸-TBA溶于DMF，加入34mmol HOSU、68mmolEDC，30℃反应24h，将反应液倾倒至反应液4倍体积的乙酸乙酯中，搅拌0.5h后静置过夜，进行沉降；将沉淀过滤、并用乙酸乙酯将沉淀洗涤两次，得到活化的乙酰透明质酸；
(2)向步骤得到的活化的乙酰透明质酸溶于DMF，中加入34mmol实施例5制得的Fmoc-Ser-Ile-Lys-Val-Ala-Val-COOH肽、Fmoc-Ile-Lys-Val-Ala-Val-COOH肽以及Fmoc-Gly-His-Lys-COOH肽三种寡肽纯品中的任意一种，并加入40.8mmol DIEA搅拌反应，采用茚三酮显色反应监控反应进程直至反应溶液中无氨基组分使反应达到完全，得Fmoc保护的乙酰透明质酸寡肽；
(3)向步骤(2)得到的Fmoc保护的乙酰透明质酸寡肽的反应体系中加入体积比为10％的二乙胺，脱除肽链N端的Fmoc保护基，再将反应液进行减压蒸馏蒸干溶剂，得乙酰透明质酸寡肽半成品；
(4)将步骤(3)制得的乙酰透明质酸寡肽半成品固体溶解，通过超滤膜(截留分子量500D)进行超滤、洗涤，再通过732型阳离子交换柱将其中的TBA转换为Na+，经冻干分别得到具有式V、式VI和式VII结构的三种乙酰透明质酸寡肽成品。
实施例8
制备乙酰透明质酸寡肽成品：
(1)将由实施例1制得的50g乙酰透明质酸-TBA溶于DMF，加入51mmol HOSU、102mmol EDC，30℃反应24h，将反应液倾倒至反应液4倍体积的乙酸乙酯中，搅拌0.5h后静置过夜，进行沉降；将沉淀过滤、并用乙酸乙酯将沉淀洗涤两次，得到活化的乙酰透明质酸；
(2)向步骤(1)得到的活化的乙酰透明质酸溶于DMF，加入51mmol实施例5制得的Fmoc-Ser-Ile-Lys-Val-Ala-Val-COOH肽、Fmoc-Ile-Lys-Val-Ala-Val-COOH肽以及Fmoc-Gly-His-Lys-COOH肽三种寡肽纯品中的任意一种，并加入61.2mmol DIEA搅拌反应，采用茚三酮显色反应监控反应进程直至反应溶液中无氨基组分使反应达到完全，得Fmoc保护的乙酰透明质酸寡肽；
(3)向步骤(2)得到的Fmoc保护的乙酰透明质酸寡肽的反应体系中加入体积比为10％的二乙胺，脱除肽链N端的Fmoc保护基，再将反应液进行减压蒸馏蒸干溶剂，得乙酰透明质酸寡肽半成品；
(4)将步骤(3)制得的固体溶解，通过超滤膜(截留分子量500D)进行超滤、洗涤，再通过732型阳离子交换柱将其中的TBA转换为Na+，经冻干分别得到具有式V、式VI和式VII结构的三种乙酰透明质酸寡肽成品。
实施例9
配置乙酰透明质酸寡肽成品作为组分的保湿抗皱化妆品原液：
室温下，在7份等量的无菌水中，均分别添加质量分数为4％的丁二醇和质量分数为0.8％的PE9010作为基质，分别作为实验组1-实验组6和空白组7，再向实验组1-实验组6中分别添加质量分数均为0.5％的乙酰透明质酸、寡肽、乙酰透明质酸与寡肽的组合物、实施例8制得的具有式V、式VI、式VII结构的三种乙酰透明质酸寡肽成品，空白组7加入等质量的无菌水后，均搅拌至完全溶解，调节pH值为5～7后，分别得到透明质酸原液的实验组1、寡肽原液的实验组2(三种分别为式II、式III和式IV结构的寡肽)、乙酰透明质酸与寡肽(三种分别与式II、式III和式IV结构的寡肽)组合原液的实验组3、式V结构的乙酰透明质酸寡肽原液的实验组4、式VI结构的乙酰透明质酸寡肽原液的实验组5、式VII结构的乙酰透明质酸寡肽原液的实验组6、空白组7。
下面通过实验报告来进一步说明本发明的乙酰透明质酸寡肽的性能。
(1)检测项目：
检测乙酰透明质酸寡肽的保湿效果和祛皱效果。
(2)受试样品：
实施例9制得的透明质酸原液的实验组1、寡肽原液的实验组2(三种分别为式II、式III和式IV结构的寡肽)、乙酰透明质酸与寡肽(三种分别与式II、式III和式IV结构的寡肽)组合原液的实验组3、式V结构的乙酰透明质酸寡肽原液的实验组4、式VI结构的乙酰透明质酸寡肽原液的实验组5、式VII结构的乙酰透明质酸寡肽原液的实验组6、空白组7的保湿效果和祛皱效果见表1-表3。
(3)乙酰透明质酸寡肽的使用效果测定：
1.保湿效果：
1.1受试者：选取110名志愿者，年龄在35～40周岁，对其手前臂皮肤进行实验；
1.2受试样品：将实施例9制备的实验组1-实验组6和空白组7的原液作为受试物；
1.3试验前：受试者需要统一用清水清洗双手前臂内侧，洗净后在受试者双手前臂内侧做好测量标记。本实验中左右手前臂各标记两个试验区域。
1.4试验中：每个测试者的手臂均划分出7个测试区域，区域间隔1cm，每处试验区域为3×3cm2，试验样品量为0.2g。受试者每个区域涂抹一种受试物，分别在7个测试区域涂抹实施例9制备的实验组1-实验组6和空白组7的原液。受试者在恒定的环境(测量环境温度为20℃，相对湿度为50％，)中静坐30min后，使用Corneometer CM 825水分测试仪进行受试部位空白值的测量，每个区域依照一定顺序固定测量5各点，得出平均值。然后由专人负责涂抹样品，并开始计时，按试验的设计分别于各时间测量MMV值得变化。将每次每个测试区域所检测的平均值减去空白值，即为该时段MMV值的变化，再除去空白值即得出MMV值的增长率。
平均水分含量增长率％＝(MMVt-MMV0)/MMV0×100％，
式中：MMV0——涂抹前皮肤MMV，
MMVt——涂抹后t时段皮肤MMV。
此种检测方法的测试经验参考数据见表1：以下数据是在正常室温条件下(测量环境温度为20℃，相对湿度为50％)所得到的数据。
表1 Corneometer CM 825水分测试仪测试经验数据
手臂、手、腿部等
皮肤较干燥 ＜35
皮肤较干燥 35-50
皮肤水分充分 ＞50
使用Corneometer CM 825水分测试仪测试了使用实施例9制备的实验组1-实验组6和空白组7的原液4h内，统计计算对70名志愿者其手前臂的皮肤进行测试，各个受试物使皮肤MMV值的变化结果的平均值，数据结果见表2。
表2乙酰透明质酸寡肽的保湿效果对比表
Figure BDA0003875414730000161
实验组1的透明质酸原液、实验组2的寡肽原液(三种分别为式II、式III和式IV结构的寡肽)、实验组3的乙酰透明质酸与寡肽(三种分别与式II、式III和式IV结构的寡肽)组合原液、实验组4的式V结构的乙酰透明质酸寡肽原液、实验组5的式VI结构的乙酰透明质酸寡肽原液、实验组6的式VII结构的乙酰透明质酸寡肽原液、空白组7；其中，实验组2和实验组3中三种式II、式III和式IV结构的寡肽的保湿效果试验数据结果相近，所以表1中使用的实验组2的寡肽原液的保湿效果实验数据为三种结构寡肽保湿效果实验数据的平均值，实验组3的乙酰透明质酸与寡肽组合原液的保湿效果实验数据也为三种结构寡肽与乙酰透明质酸混合保湿效果实验数据的平均值。
由表1乙酰透明质酸寡肽的保湿效果对比表中数据结果可知，皮肤MMV值的变化随时间的增长整体都是呈现逐渐降低的趋势，空白组7其保湿效果最差，充分证明人体皮肤在不添加补水物质成分的时候，只给予无菌水基质的时候，不能有效的将皮肤补水锁水；实验组4-实验组6乙酰透明质酸寡肽原液的保湿效果显著高于单独的实验组1的透明质酸原液、实验组2的寡肽原液，同时也显著高于实验组3的乙酰透明质酸与寡肽组合原液，充分证明本发明制得的乙酰透明质酸寡肽的保湿效果的显著提高，并不是乙酰透明质酸与寡肽简单组合产生的，而是由于乙酰透明质酸和寡肽采用共价键偶联的方式生成乙酰透明质酸寡肽，直接通过化学改性修饰从根本上赋予其更为优良的特性，提高了乙酰透明质酸和寡肽的稳定性，提高抗酶解能力，延长半衰期，增强作用时间，使其保湿效果的显著提高。尤其是实验组4-实验组6组，在120min时皮肤MMV值的变化出现回升的趋势，充分证明乙酰透明质酸寡肽的作用不仅限于皮肤表面，对于深层细胞的补水修复也是具有显著作用，最终产生保持皮肤水分的缓慢降低的趋势，达到长久保湿效果。
2.祛皱效果：
2.1受试者：选取70名志愿者，年龄在35～55周岁，分为7组，每组10人进行皮肤实验；
2.2受试样品及其使用方法：将实施例9制备的实验组1-实验组6和空白组7的原液各0.5g均匀涂抹于志愿者面部皮肤，每天使用一次，连续使用4周；
实验前，先通过Visioline VL 650皱纹测试仪测定试验前的受试者脸部皮肤皱纹面积S0：皮肤皱纹的硅胶复制膜片的变化，经软件分析得到脸部皮肤皱纹面积的变化；
试验中，再分别取每天下午2点的时间点，测量环境温度为20℃，相对湿度为50％，通过Visioline VL 650皱纹测试仪测定脸部皮肤皱纹面积St：皮肤皱纹的硅胶复制膜片的变化，经软件分析得到脸部皮肤皱纹面积的变化；
最后，计算皮肤皱纹面积减少量(％)＝(试验前的皮肤皱纹面积-每周的平均皮肤皱纹面积)/试验前的皮肤皱纹面积×100％＝(S0-St)/S0×100％。
表3乙酰透明质酸寡肽的祛皱效果对比表
Figure BDA0003875414730000171
实验组1的透明质酸原液、实验组2的寡肽原液(三种分别为式II、式III和式IV结构的寡肽)、实验组3的乙酰透明质酸与寡肽(三种分别与式II、式III和式IV结构的寡肽)组合原液、实验组4的式V结构的乙酰透明质酸寡肽原液、实验组5的式VI结构的乙酰透明质酸寡肽原液、实验组6的式VII结构的乙酰透明质酸寡肽原液、空白组7，其中，实验组2和实验组3中三种式II、式III和式IV结构的寡肽的祛皱效果试验数据结果相近，所以表1中使用的实验组2的寡肽原液的祛皱效果实验数据为三种结构寡肽祛皱效果实验数据的平均值，实验组3的乙酰透明质酸与寡肽组合原液的祛皱效果实验数据也为三种结构寡肽与乙酰透明质酸混合祛皱效果实验数据的平均值。
由表2乙酰透明质酸寡肽的祛皱效果对比表数据结果可知，空白组7的皮肤皱纹面积减少量几乎没有变化，证明人体脸部皮肤皱纹在不添加去皱产品的时候，其自身皱纹形成后不会自行消失；实验组4-实验组6乙酰透明质酸寡肽原液的祛皱效果显著高于单独的实验组1的透明质酸原液、实验组2的寡肽原液，同时也显著高于实验组3的乙酰透明质酸与寡肽组合原液，充分证明本发明制得的乙酰透明质酸寡肽的祛皱效果的显著提高，也并不是乙酰透明质酸与寡肽简单组合产生的，而是由于乙酰透明质酸和寡肽采用共价键偶联的方式生成乙酰透明质酸寡肽，直接通过化学改性修饰从根本上赋予其更为优良的特性，提高了乙酰透明质酸和寡肽的稳定性，提高抗酶解能力，延长半衰期，增强作用时间，乙酰透明质酸寡肽具有乙酰透明质酸的靶向性能有效促进寡肽穿透皮肤屏障，增强皮肤对寡肽的吸收与结合，增加寡肽的使用效果，使其祛皱效果的显著提高。优选的，乙酰透明质酸寡肽的添加量为0.001％～25％时，其保湿祛皱效果最显著。
通过化学改性修饰以共价键连接的方式合成方法将寡肽和乙酰透明质酸以共价键连接，得到的乙酰透明质酸寡肽具有复合型活性、产品功效强和功效持续时间久的特点，它的使用效果优于乙酰透明质酸或寡肽单独使用的效果、同时也优于乙酰透明质酸和寡肽联合使用的效果。同时还提供其以在化妆品以及美容产品中的应用方法。
综上，本发明针对乙酰透明质酸和寡肽类物质结构不稳定的缺点，解决了现有技术功能型化妆品中的乙酰透明质酸和寡肽需分别添加、易被酶解、化学稳定性差、易受环境影响而失活和作用时间短的技术难题；制备的乙酰透明质酸寡肽兼具了乙酰透明质酸和寡肽的功能活性，其祛皱和抗衰老效果均明显优于寡肽和乙酰透明质酸分别使用以及联合使用的效果，同时延长其功效，增强功能型化妆品的使用效果，提高用户的使用满意度，可应用范围广。
乙酰透明质酸寡肽的添加量；乙酰透明质酸寡肽的应用范围：还可用于配置具有防晒、保湿、补充皮肤营养、抗炎、抗氧化、祛皱、抗衰老和皮肤修护等功能化妆品；化妆品的剂型包括水溶液、乳液、精华、凝胶、粉底、膏霜和面膜；化妆品的应用范围包括头部洗护、面部洗护和身体洗护等均可以实现本发明的乙酰透明质酸寡肽的应用方法。
以上仅是本发明的实施例而已，例如；乙酰透明质酸的分子量为10kDa～100kDa；缩合反应步骤(2)①中活化体系为：A+D或A+B+C，其中A为HOBT或HOAT，B为HATU、HBTU、TBTU或PyBOP其中任何一种，C为DIEA或TMP，D为DIC；裂解肽树脂的方法为：按照每g肽树脂加入10ml裂解液的比例，在10～30℃条件下反应2-5h，对其进行裂解等均可以实现本发明的乙酰透明质酸寡肽及其制备。
惟以上所述者，仅为本发明的具体实施例而已，当不能以此限定本发明实施的范围，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (10)

1.一种乙酰透明质酸寡肽，其特征在于，所述乙酰透明质酸寡肽的结构为具有式VI结构的糖肽：
Figure FDA0003875414720000011
2.根据权利要求1所述的一种乙酰透明质酸寡肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将乙酰透明质酸与寡肽通过共价键形式进行连接：所述寡肽序列中Lys侧链的ε-NH2与乙酰透明质酸的-COOH通过酰胺缩合反应生成酰胺键进行连接，生成乙酰透明质酸寡肽；
所述乙酰透明质酸的结构为式I的结构：
Figure FDA0003875414720000012
所述寡肽的结构为式III的结构：
Figure FDA0003875414720000013
3.根据权利要求2所述的一种乙酰透明质酸寡肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将所述乙酰透明质酸制成乙酰透明质酸-TBA；
(2)缩合反应：
①用固相合成法：在活化体系和DIEA存在下，以CTC树脂为固相合成的载体，按照寡肽的式III结构的氨基酸序列从C端至N端依次缩合经活化的Fmoc-氨基酸，进行肽树脂的合成，合成寡肽式III结构的N端氨基含有Fmoc保护基的肽树脂；所述合成寡肽的结构式III的肽树脂依次缩合的Fmoc-氨基酸顺序为：Fmoc-Val-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Dde)-OH、Fmoc-Ile-OH；
②脱除步骤①中制得的含有Fmoc保护基的肽树脂中Lys侧链ε-NH2的保护基Dde、裂解肽树脂，得到寡肽式III结构的N端氨基含有Fmoc保护基的寡肽粗肽；
③对步骤②中制得的含有Fmoc保护基的寡肽粗肽进行纯化、经冻干后，得到寡肽式III结构的N端氨基含有Fmoc保护基的寡肽纯品；
(3)将步骤(1)中制得的乙酰透明质酸-TBA经活化后，与步骤(2)中制得的寡肽纯品进行缩合反应；所述寡肽序列中Lys侧链的ε-NH2与乙酰透明质酸的-COOH通过酰胺缩合反应生成酰胺键进行连接，生成产物乙酰透明质酸TBA寡肽-Fmoc；
(4)脱除步骤(3)中制得的产物中寡肽N端氨基的Fmoc-保护基，得产物乙酰透明质酸TBA寡肽；
(5)换盐：通过截留分子量500Da的超滤膜对步骤(4)中制得的产物乙酰透明质酸TBA寡肽进行超滤、洗涤，再通过732型阳离子交换柱树脂将其转换为Na+盐，经冻干得到具有式VI结构的乙酰透明质酸寡肽成品。
4.根据权利要求3所述的一种乙酰透明质酸寡肽的制备方法，其特征在于，所述乙酰透明质酸的分子量为10kDa～100kDa。
5.根据权利要求3所述的一种乙酰透明质酸寡肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)①中所述活化体系为：A+D或A+B+C，其中A为HOBT或HOAT，B为HATU、HBTU、TBTU或PyBOP其中任何一种，C为DIEA或TMP，D为DIC；步骤(3)中所述乙酰透明质酸-TBA的活化方法为：乙酰透明质酸-TBA在EDC存在情况下与HOSU反应24h。
6.根据权利要求3所述的一种乙酰透明质酸寡肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)②中所述脱除步骤①中制得的Fmoc保护基的肽树脂中Lys侧链ε-NH2的保护基Dde的脱除方法为：向步骤(2)①中制得的Fmoc保护基的肽树脂中加入脱保护液反应3h，所述脱保护液由盐酸羟胺、咪唑、DCM、NMP组成，其中盐酸羟胺、咪唑、DCM、NMP的质量比为25:18:16:100。
7.根据权利要求3所述的一种乙酰透明质酸寡肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)②中所述裂解肽树脂的方法为：按照每g肽树脂加入10ml裂解液的比例，在10～30℃条件下反应2-5h，对其进行裂解；所述裂解液由TFE、DCM组成，其中TFE、DCM的体积比为2:8。
8.根据权利要求3所述的一种乙酰透明质酸寡肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)③中所述纯化方法为采用反相高效液相色潽法对步骤②中制得的Fmoc保护基的寡肽粗肽进行纯化，其条件为：流动相A相为H2O，流动相B相为乙腈，采用梯度洗脱，洗脱时间为60min，流速为80ml/min，紫外检测波长为220nm，所述洗脱梯度B相为10％～40％。
9.根据权利要求1-8任何一项所述的一种乙酰透明质酸寡肽的应用方法，其特征在于，将具有式VI结构的乙酰透明质酸寡肽作为化妆品组分或者添加至化妆品中。
10.根据权利要求1-8任何一项所述的一种乙酰透明质酸寡肽的应用方法，其特征在于，将具有式VI的乙酰透明质酸寡肽作为皮肤填充剂制备面部注射整形美容产品的应用。
CN202211211581.4A 2019-10-11 2019-10-11 一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法 Pending CN115417914A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211211581.4A CN115417914A (zh) 2019-10-11 2019-10-11 一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211211581.4A CN115417914A (zh) 2019-10-11 2019-10-11 一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法
CN201910963468.3A CN110713517B (zh) 2019-10-11 2019-10-11 一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910963468.3A Division CN110713517B (zh) 2019-10-11 2019-10-11 一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115417914A true CN115417914A (zh) 2022-12-02

Family

ID=69212498

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910963468.3A Active CN110713517B (zh) 2019-10-11 2019-10-11 一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法
CN202211211581.4A Pending CN115417914A (zh) 2019-10-11 2019-10-11 一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法
CN202211211558.5A Pending CN115611967A (zh) 2019-10-11 2019-10-11 一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910963468.3A Active CN110713517B (zh) 2019-10-11 2019-10-11 一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211211558.5A Pending CN115611967A (zh) 2019-10-11 2019-10-11 一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法

Country Status (1)

Country Link
CN (3) CN110713517B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113402628A (zh) * 2021-06-07 2021-09-17 上海应用技术大学 一种两亲性高生物活性改性透明质酸
CN115215948B (zh) * 2022-06-02 2023-07-11 润辉生物技术（威海）有限公司 一种低分子的乙酰透明质酸脱羧肌肽衍生物、制备方法及应用
CN117050145B (zh) * 2023-10-11 2024-05-03 杭州湃肽生化科技有限公司 美容肽的透明质酸修饰物及其应用
CN117050146A (zh) * 2023-10-11 2023-11-14 杭州湃肽生化科技有限公司 透明质酸修饰的美容肽、制备方法及其用途

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2543157C2 (ru) * 2008-06-17 2015-02-27 Глитек,Инк. Гликозилированный пептид glp-1
TW201427989A (zh) * 2012-12-18 2014-07-16 Novartis Ag 長效性蛋白質之組合物及方法
US20160243281A1 (en) * 2013-10-04 2016-08-25 The Regents Of The University Of California Hyaluronic acid and alginate hydrogel composition
WO2016097211A1 (en) * 2014-12-18 2016-06-23 Galderma S.A. Grafting of cyclodextrin by amide bonds to an ether cross-linked hyaluronic acid and uses thereof
FR3052453B1 (fr) * 2016-06-14 2018-05-18 Sederma Peptide, composition le comprenant et utilisations notamment cosmetiques
CZ2016826A3 (cs) * 2016-12-22 2018-07-04 Contipro A.S. Léčivý prostředek s nosičem na bázi hyaluronanu a/nebo jeho derivátů, způsob výroby a použití
CN106963665B (zh) * 2017-04-06 2018-02-27 湖南御家化妆品制造有限公司 一组保湿组合及其在制备保湿化妆品的应用
CN107261124B (zh) * 2017-06-09 2020-05-22 山东大学 一种新生血管生成抑制肽及其透明质酸修饰物的制备方法与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN110713517A (zh) 2020-01-21
CN115611967A (zh) 2023-01-17
CN110713517B (zh) 2022-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110713517B (zh) 一种乙酰透明质酸寡肽及其制备与应用方法
US8461113B2 (en) Elastin digest compositions and methods utilizing same
US11896704B2 (en) Compounds useful for the treatment and/or care of the skin, hair, nails and/or mucous membranes
AU2008243084B2 (en) Synthetic peptides used for treating the skin and use thereof in cosmetic or dermopharmaceutical compositions
CN109700687B (zh) 包含活性多肽的柔性脂质体化妆品及其制备方法
AU2020217620A1 (en) Compounds useful for the treatment and/or care of the skin, hair, nails and/or mucous membranes
EP2716651A2 (en) Peptide derivatives having a superior moisturizing effect and uses thereof
CN117106021B (zh) 六肽及其组合物和用途
CN117106023B (zh) 五肽化合物及其组合物和用途
CN117126242B (zh) 七肽及其组合物和用途
KR101831977B1 (ko) 상피세포 성장인자의 활성을 가지는 펩타이드 및 그의 용도
CN117050145B (zh) 美容肽的透明质酸修饰物及其应用
CN114437172A (zh) 一种海藻酸寡肽及其制备方法与应用
KR101553637B1 (ko) 펩타이드 지방산 유도체 및 이를 함유하는 주름 개선용 화장품 조성물
CN115215948B (zh) 一种低分子的乙酰透明质酸脱羧肌肽衍生物、制备方法及应用
CN117106022B (zh) 七肽化合物及其组合物和用途
CN114920801B (zh) 一种多肽及其多肽组合物和应用、制得的除皱乳液
KR101942844B1 (ko) 갈산 유도체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 피부외용제 조성물
KR101945946B1 (ko) 겐티스산 유도체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 피부외용제 조성물
WO2024038345A1 (en) Compounds useful for the treatment and/or care of the skin, hair, nails and/or mucous membranes
KR101873816B1 (ko) 상피세포 성장인자의 활성을 가지는 데카펩타이드 및 그의 용도
CN116035936A (zh) 一种具有透皮给药能力的抗皱、保湿组合物及其制备方法和应用
KR20220074281A (ko) 항산화 활성 및 콜라게나제 저해활성을 갖는 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물
CN116077358A (zh) 一种营养液及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination