CN115397449A - 香蜂花叶的分步提取物以及包含该提取物的新的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及香蜂花(Melissa officinalis)叶的分步提取物，以及包含所述分步提取物的新的药物组合物和食品组合物。

Description

香蜂花叶的分步提取物以及包含该提取物的新的药物组合物
技术领域
本发明涉及香蜂花(Melissa officinalis)叶的分步提取物(fractionalextract)和包含所述提取物作为有效组分的新的药物和食品组合物。
背景技术
香蜂花是多年生草本植物，其属于唇形科，也被昵称为柠檬香草(Lemon Balm)。
香蜂花叶提取物含有类黄酮、三萜酸、挥发油、醇苷和酚类化合物，以及咖啡酸衍生物。具体地，香蜂花叶中所含的类黄酮是木犀草苷、大波斯菊苷、鼠李柠檬素、异槲皮苷等，以及为三萜酸的熊果酸。香蜂花叶提取物含有羟基肉桂酸衍生物，如迷迭香酸，这是当今备受关注的非挥发性成分之一，并且还含有作为挥发油的香叶醇、橙花醛、香茅醛和丁香酚。
非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是其中脂肪在肝脏中积累的疾病，其导致肝细胞气球样变(ballooning)和炎症，随后导致纤维化，这可以导致肝硬化并且在一些情况下，导致其他并发症，如肝癌。
患有NASH的患者数目快速增加，但是疾病的病理发生尚不清楚，并且多种原因均在起作用，使其难以用一种病因机制或控制治疗，并且尚无已批准的药物。
NASH慢性发展，因此通常没有具体症状，但是肝功能逐渐恶化，如碱性磷酸酶(ALP)或转氨酶活性升高，其是肝功能的量度。
如果保持不管，NASH发展成肝纤维化或肝硬化，从而导致预后不良。因此，必须抑制肝脏中的脂肪积累以及其他炎症和纤维化以防止NASH发展为肝硬化，但是尚未提出这种治疗。因此，需要发展可以治疗NASH的有效治疗剂。
非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指不考虑酒精摄入，其中甘油三酯在肝脏中过度积累的病况。在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中，如果肝脏中甘油三酯含量高于健康且瘦的人中的前95％，或者肝细胞内细胞质中的甘油三酯颗粒的比例高于5％，则将其定义为单纯性脂肪肝。已报道在10-24％的一般人群中和58-74％的肥胖人群中发生NAFLD。
血管生成是通过它从预先存在的微血管形成新的毛细血管的过程。在胚胎发育、组织再生和创伤愈合以及黄体发育(它是雌性生殖系统中的周期变化)期间发生正常血管生成，并且在这些情况下，它受到密切调控。[Folkman and Cotran,Relation of vascularproliferation to tumor growth,Int Rev Exp Pathol 16,207-248(1976)]。
在成人中，与其他类型的细胞相比，血管内皮细胞生长非常缓慢并且相对不好分裂。然而，基于血管生成-刺激因子的刺激、促血管生成细胞因子从炎性细胞的释放以及释放在胞外基质内多价螯合的血管原介体的水解酶的激活，引起成人中的血管生成。
通常，血管生成过程是蛋白酶对血管基底膜的降解、血管内皮细胞的迁移和通过内皮细胞的增殖和分化的腔形成。血管生成过程中的主要事件之一是酶对血管周围的基底膜的破坏，并且最重要的基质降解酶是属于基质金属蛋白酶(MMP)家族的那些。
已知当发生血管生成调控失败或者血管生成中重要的酶MMP高度激活时，发生病理性血管生成，其与多种疾病有关(参考Polverini PJ,Critical Reviews in OralBiology,6(3),1995,230-247；Arup Das等人,Progress in Retinal and Eye Research,22,2003,721-748；Nick Di Girolamo等人,IOVS,42卷,9期,2001年8月,1963-1968；Patricia Lee等人,Survey of ophthalmology,43卷,3期,1998年11-12月,245-269；D.B.Holland等人,British Journal of Dermatology,150,2004,72-81；Anthony HVagnucci Jr等人,The Lancet,361卷,2003年2月15日,605-608；Berislav V.Zlokovic,Trends in Neuroscience,28卷,4期,2005年4月,202-208；Jaap G.Neels等人,The FASEBJournal express article 10.1096/fj.03-1101fje.2004年4月14日在线发表；D.L.Crandall等人,Microcirculation,4,1997,211-232；G.Voros等人,Endocrinology,146,2005,4545-4554；M.A.Rupnick等人,PNAS,99,2002,10730-10735；E.Brakenhielm等人,Circ.Res.,94,2004,1579-1588；H.R.Lijnen等人,Arterioscler Thromb Vasc Biol.,22,2002,374-379；D.Demeulemeester等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.,329,2005,105-110)。
血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的实例为肥胖症，其中由于能量摄入和消耗的不平衡在体内积累过量脂肪，其可以引起多种健康问题。原因很可能在于生活方式，如过量摄入营养物并且缺少身体活动，并且偶尔，可以继发于毒品应用或疾病。
根据2014年世界卫生组织(WHO)的统计数据，全世界有19亿大于18岁的成人超重，其中有6亿人肥胖。肥胖症是心血管疾病、2型糖尿病和几种类型的癌症的发病率升高的主要因素之一，其导致每年超过280万人由于超重或肥胖症而死亡。
随着人们生活标准的改善，肥胖症已成为全球社会问题。根据2015年全国健康与营养调查，韩国人在过去10年内脂肪摄入量增加了5.9g，并且与2005年相比，肥胖症发病率升高了1.9％。具体地，肥胖症在人群中的发病率显著升高至39.7％，并且高胆固醇血症的发病率从9.9％升高至17.9％。
已开发了几种药物来改善肥胖症，根据它们的作用机制，其大致被分为食欲抑制剂和脂肪吸收抑制剂。然而，抑制食欲的药物，如芬特明和安非拉酮具有副作用，如血压升高、眩晕、头痛、震颤和口干。就脂肪吸收抑制剂奥利司他来说，脂溶性维生素的吸收受到抑制，并且具有副作用，如脂肪痢、脂肪排泄、频繁排便和大便失禁。
因此，对于预防或治疗肥胖症的具有较少副作用的安全药物的开发的需要已升高。
作为血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的实例的黄斑变性是在其中感光细胞浓度极高并且最清楚且准确地接受光的黄斑中由于通过多种原因所造成的退化，造成视力缺陷的疾病。黄斑变性与青光眼和糖尿病性视网膜病一起是造成失明的3种主要原因之一。造成黄斑变性的最大原因是年龄，并且其他原因是家族史、种族和抽烟。当黄斑受损时，眼睛失去辨别细节，如小印刷字体、五官特征或小的物体的能力。
存在两种类型的黄斑变性：非渗出性(干燥)黄斑变性和渗出性(湿润)黄斑变性，并且90％具有黄斑变性的人具有干燥形式。在干燥黄斑变性中，在黄斑下方收集废物材料，从而形成称为脉络膜疣的黄色沉积。脉络膜疣的存在防碍流向视网膜、特别是黄斑的血流，并且当血流减少时，营养物向黄斑的供应减少，借此终止或减弱光敏细胞的有效作用。在湿润黄斑变性中，新的弱血管在视网膜中或视网膜下生长，从而导致流体和血液渗漏到黄斑下方的空间。
尽管黄斑变性被认为是在老年人中频繁发生的疾病，但是已知近年来，患者数目在40和50岁中快速增加。已指出饮食西方化，如脂肪摄入增加是黄斑变性发病年龄降低的主要原因之一。
叶黄素是天然存在的类胡萝卜素，它以无维生素A活性的天然状态存在，并且大量包含在绿色和黄色蔬菜中。叶黄素是食品产品和人血液中最丰富的类胡萝卜素之一，并且已知在抗氧化作用中起作用并且保护植物避免UV射线。对于人，它已知是眼睛黄斑和晶状体的主要成分，在改善眼睛健康和视力中起重要作用。
然而，犹他大学(University of Utah)的Moran眼科中心(Moran Eye Center)的研究小组在美国医协会的期刊“JAMA Ophthalmology”中报道在长期过量服用叶黄素的妇女的中央凹内部发现了圆形、浅黄色晶体样物质。就以上患者来说，已报道她在过去8年每天服用20mg叶黄素补充剂，并且她还消费富含叶黄素的食品，如菠菜、花椰菜、羽衣甘蓝和鳄梨。因此，研究小组认为眼球中沉淀叶黄素，形成晶体并且发生黄斑变性。
因此，尽管叶黄素具有在黄斑变性中改善视力的作用，但是当长期或过量消费时，出现了副作用，如黄斑变性，因此必须发展预防、减轻或抑制它的方法。
银屑病，作为血管生成相关的或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的实例，是被白色或银色鳞片覆盖的慢性炎性疾病，并且具有在身体皮肤上反复发作的不同尺寸的红色丘疹或板状皮疹的清楚边界。它是以表皮增殖和真皮炎症组织学为特征的皮肤病学疾病，其以群体的1至2％的频率发生。它是其中在皮肤上形成小粟状皮疹并且在皮疹顶部积累白色头皮屑样死皮肤细胞的慢性皮肤病。因此，如果它们广泛扩散，则几乎全部身体皮肤被皮疹覆盖。
在银屑病中，随着造成死皮肤细胞的皮肤细胞数目快速增加，头皮屑样死皮肤细胞在皮肤顶部积累。未完全理解造成银屑病的确切原因，但是据认为它是免疫系统问题并且除此之外，遗传因素、环境因素、药物、皮肤刺激、干燥、上呼吸道炎症、精神紧张等也提及作为引起银屑病或使其恶化的因素。
将维生素D类似物、窄带UVB治疗、补骨脂素加紫外A(Bath-PUVA)和环胞霉素用于治疗银屑病。尚不知道银屑病的病因疗法。这是因为尚未清楚识别疾病的病理学原因。治疗方法，如维生素D衍生物软膏剂、窄带UVB治疗、Bath-PUVA和环孢菌素仅是暂时症状缓解治疗，因此它们由于银屑病复发而不能被称为病因疗法。
子宫内膜异位是血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的实例，其中基于雌激素升高，子宫内膜或类似组织发生在子宫外部。它是导致疼痛，包括经期痉挛并且降低生育力的良性疾病，其导致妇女在社会和生殖活动中的生活质量显著降低。在子宫内膜异位中，痛经似乎是非常常见的，并且还确认了除月经外频发的疼痛症状，如下腹痛、背痛、性交疼痛和排便疼痛。
除非实施需要长期治疗和控制的根治性手术，否则许多子宫内膜异位患者复发或重复发作直至绝经期。通常，药物疗法是子宫内膜异位治疗的首选。大致上，将其分为症状疗法和内分泌疗法。对于症状疗法，止痛药物主要用于改善由子宫内膜异位所引起的疼痛。对于内分泌疗法，除疼痛缓解外，将低剂量雌激素-孕酮制剂地诺孕素和促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂用于抑制雌激素依赖性子宫内膜增殖。
然而，据称在10％至30％的子宫内膜异位患者中无法用止痛药物控制与子宫内膜异位有关的疼痛。另外，在使用低剂量雌激素-孕酮制剂时，需要注意血栓形成和肝功能障碍。据报道在长期施用研究中地诺孕素具有71.9％的不规律生殖器出血的副作用，并且可以导致严重的贫血症。在一些情况下，基于雌激素降低作用，由于骨矿物质密度降低，原则上不可以施用GnRH激动剂超过6个月。
如以上所描述的，在子宫内膜异位治疗的药物疗法中，由于已确认每种药物具有其自身的副作用，因此存在多位发现难以继续施用的患者。因此，仍需要开发可以长期施用且具有降低的副作用的新药。
癌症是血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病实例，它是全世界最常见的致死原因之一。每年约有1千万新发病例，占全部死亡的约12％，这使其成为第三大主要致死原因。
在癌症中，乳腺癌是妇女中最常见的恶性肿瘤，其每年导致超过40,000例死亡，并且早期诊断极其重要。尽管有多种已知的抗癌药，但是如果癌症为极晚期或已转移，则尚未改善存活率。
化疗是代表性抗癌疗法，当单独或结合其他疗法使用时，其已用作癌症最有效的治疗。然而，尽管抗癌药在化疗中的效力取决于杀死癌细胞的能力，但是仍存在药物不仅可以对癌细胞起作用，而且也对正常细胞起作用的问题，这要求药物有效治疗癌症。
动脉硬化，也称为动脉粥样硬化，它是血管生成相关的或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的实例，其中由于动脉壁变厚或组织变性，动脉硬化。随着动脉内膜变厚，内径变窄并且干扰提供氧气和多种营养物的血流，从而导致多种疾病。动脉硬化可能发生在脑动脉或冠状动脉中。就脑动脉硬化来说，出现头痛、眩晕和精神错乱并且引起脑软化。就冠状动脉硬化来说，已知它在心脏中引起疼痛和心律不齐，从而导致心绞痛和心肌梗塞。另外，动脉硬化与疾病，如代谢综合征，包括躯干性肥胖症、肥胖症(过重)、血栓形成、高凝和血栓形成病况(动脉和静脉)或血脂异常的发生和发展密切相关。它还导致或加剧了糖尿病并发症。
另外，当血液甘油三酯浓度由于肥胖症、高脂血症等升高时，巨噬细胞转化为泡沫细胞，并且甘油三酯提高了死亡率。因此，随着巨噬细胞死亡，它们的免疫功能和甘油三酯代谢功能降低，其降低了泡沫细胞的移除功能，从而提高了动脉硬化发生或恶化的可能性。因此，为了预防动脉硬化的发病或恶化，重要的是确保即使当血脂浓度较高时，巨噬细胞维持它们移除泡沫细胞的功能或者使甘油三酯所造成的死亡最小化。
目前，基于他汀类的药物，如罗素伐他汀和辛伐他汀主要用于治疗动脉硬化，但是已知它具有降低移除泡沫细胞的巨噬细胞的活性的副作用。另外，已指出基于他汀类的药物存在其中它们引起副作用，如糖尿病、肌营养不良和高血糖症的问题，因此仍需要研究具有较少副作用的天然产物。
关节炎是血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的实例，其大致被分为类风湿性关节炎和骨关节炎(变性关节炎)。类风湿性关节炎是通常涉及关节的慢性、炎性、多系统病症。症状包括疼痛和肿胀，以及多处关节炎症，如手指、手、足、手腕、踝和膝盖，并且还在多个器官如肌肉、皮肤、肺和眼中引起异常。已将遗传因素、致病感染和免疫异常提议为关节炎的病因，但是它们不是确切已知的。
就病理发生来说，由于对自体同源或外源抗原白介素-1(IL-1)的超敏反应，从免疫细胞释放的肿瘤坏死因子(TNF)、前列腺素E2(PGE2)、胶原酶、蛋白酶、物质-P等减少软骨和胶原蛋白，并且引起关节液增殖和炎症，其最终导致软骨和骨的破坏。
骨关节炎是指滑膜关节的变性状况，并且也称为变性关节炎。它是作为衰老现象发生在中年或老年中并且在65岁后引起运动障碍的疾病。据信主要原因在于肥胖症、痉挛综合征、复发性脱位、复发性关节积血、内部关节脱位、炎症性关节炎和痛风等。
骨关节炎主要涉及关节软骨的进行性损伤。随着关节炎的发展，炎性细胞因子，如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)以及一氧化氮(NO)等的产生增加，其在肌肉、腱和韧带组织中导致严重疼痛。
目前使用的关节炎的治疗方法大致被分成非药物治疗、药物治疗和手术治疗。非药物治疗方法包括关节负荷减小、膝盖骨固定、热处理和锻炼。药物治疗包括口服药物和关节内注射。在初始治疗中所使用的药物是非类固醇抗炎药物(NSAID)。尽管这些NSAID仅降低疼痛和减轻症状，但是它们无法预防关节软骨损失或疾病发展。当长期服用时，它可能由于胃肠道、肾、心脏和肝脏以及血液凝固机制的副作用而引起烧心和胃出血。因此，仍需要对具有较少副作用的天然产物进行研究。
炎症性肠病(IBD)是血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的实例，其在大肠和小肠粘膜中导致慢性炎症或溃疡，并且它是其中腹泻和血性便长期持续并复发的无法治愈的疾病。
炎症性肠病是西方更常见的疾病，但是自1980年代起，已在韩国快速增加。IBD的发病为15-35岁，并且所有年龄组均有报道，其中15％大于60岁，并且约15％的IBD患者在近亲属中具有家族史。
尽管炎症性肠病的确切病原学仍不清楚，但是由于自体免疫疾病以及环境或遗传因素，炎症介质和免疫细胞激活被认为是重要的病原学。
炎症性肠病被分为两种病况，溃疡性结肠炎和克罗恩氏病，它们在临床上类似但是在组织学、内窥镜和免疫学方面彼此不同。已知炎症介质和免疫细胞激活是该疾病的重要病原学。
肠免疫系统的持续或不适当的激活在慢性粘膜炎炎症的病理生理学中起重要作用，并且具体地，嗜中性白细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和肥大细胞浸润最终导致粘膜破坏和溃疡。
在炎症性肠病的病理发生过程中，炎性细胞因子，如TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8)起主要作用。
具体地，TNF-α在溃疡性结肠炎患者的结肠腔和结肠上皮细胞中高度表达，并且根据近期研究，TNF-α已知在溃疡性结肠炎的病理发生中起重要作用。抗TNF-α抗体英利昔单抗已知在无法治愈的克罗恩氏病的治疗中有效。然而，这些治疗昂贵并在一些患者中引起副作用，如流体反应或传染性并发症。
当前用于炎症性肠病的治疗使用了阻断前列腺素产生的5-氨基水杨酸(5-ASA)药物，如柳氮磺吡啶、美沙拉秦或类固醇免疫抑制剂。在对类固醇治疗不起反应的情况下，还使用了免疫抑制剂，如硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤和环胞霉素，但是尚无可以预期治愈的药物。
阿尔茨海默氏病是血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的实例，它是痴呆病最常见的病因，其占痴呆病的约60至80％。全世界约有3390万人患有阿尔茨海默氏病，并且在40年后，预期随着预期寿命升高，发病率将为三倍。目前，尚无可以预期提供阿尔茨海默氏病的明确改善的药物，并且因为该疾病发病经历数十年的恶化过程，因此全世界的研究注意力被吸引在阿尔茨海默氏病的预防上。
已知阿尔茨海默氏病是由多种风险因素的复杂相互作用所造成。与遗传风险因素一起，目前已知人口统计学风险因素，如年龄、性别和教育背景以及环境风险因素，如抽烟、饮酒、营养和社会活动。阿尔兹海默症的代表性遗传标志物包括脱脂蛋白E(APOE)ε4，但是这些遗传标志物未被改变或修饰。然而，所要求的因素(例如，血管风险因素、生活方式)是可改变因素，并且因此，除研究这些可改变因素如何调控痴呆病发病的研究外，有可能通过相反调控这些因素来降低或延缓痴呆病发病。
在阿尔兹海默症治疗药物中，德国Merz Pharmaceuticals在1980年代开发了作为用于帕金森氏病和运动障碍的治疗的美金刚(Memantine)，并且它在德国已作为痴呆病治疗上市。作为在1999年发布的它在治疗重度阿尔茨海默氏病中有效的研究结果，在2002年，在欧洲，它被批准作为用于阿尔茨海默氏病的治疗。在2003年10月，美国FDA将其批准用于中度至重度阿尔茨海默氏病的治疗。最近，它还通过Lundbeck作为
Figure BDA0003878953670000111
在韩国上市。可商购的Evixa在片剂或液体形式中含有美金刚盐酸盐，并且考虑到效力和耐受性两者，在不超过每天20mg的最大要求剂量的范围内进行它的施用。
美金刚的作用机制是阻断作为兴奋性神经递质的谷氨酸。谷氨酸过度刺激脑中神经并导致过量钙流入脑神经细胞，从而导致脑神经的破坏和死亡，并且已知美金刚预防这种情况。已知即使在由于阿尔兹海默症患者中谷氨酸的过量分泌所造成的静止期(restingphase)期间，NMDA受体的钙离子通道始终开放，从而导致过量钙流入细胞，这与脑神经死亡有关。美金刚通过作为位于NMDA受体中心的钙离子通道中的低-亲和力拮抗剂起作用，阻断钙向细胞的流入。由于过量钙流入细胞并且当需要生理作用，如记忆和学习时，它降低神经细胞的过度兴奋性，它离开钙离子通道并导致去极化正常发生，从而它稳定生理学神经信号以使神经细胞功能正常化。
然而，作为美金刚的副作用，已报道了食欲不振、腹泻、重量减轻、口干、眩晕、睡眠障碍和疲劳等。另外，已报道它很少引起眩晕、头痛、便秘、昏睡和高血压。因此，仍需要对具有较少副作用的天然产物进行研究。
牙周病是血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的实例，它是一类通过作为生活在口腔中的微生物的代谢产物的毒素所引起的发生在牙齿周围的支持组织中的炎症。这些牙周病在最初阶段从牙龈炎开始，并且如果保持不管，则牙龈炎发展成牙周病，并伴有牙龈肿胀、出血和严重口臭。另外，持续性牙周病发展成进行性牙周病，其中支持牙周膜的胶原蛋白被破坏，并且支持牙齿的牙槽骨溶解，牙周韧带分离以形成在严重情况下可以破坏牙齿的牙周袋。
基于性别、种族和年龄，牙周病的病原学是不同的。这种牙周病恶化数年并且随着感染状况持续，反复缓和状态。其发病率在患有全身性疾病，如糖尿病、AIDS、中性白细胞减少和唐氏综合征的患者中较高。
可以通过使用抑制这些微生物活性并辅助流向发炎牙龈的血流的物质实现预防牙周病最有效的方法。然而，在用于预防和/或治疗牙周病的药物中，抗生素，如青霉素、红霉素和四环素在灭菌和生长抑制中有效，但是具有严重的副作用，如导致出现耐受性细菌。就抗菌剂，如氯己定来说，它具有抑制龋齿形成的作用，但是可以由于强毒性而存在问题。因此，仍需要对具有较少副作用的天然产物进行研究。
糖尿病性视网膜病是血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的实例，它对高血糖症比其他慢性糖尿病相关的并发症更特异。
基于发展程度，糖尿病性视网膜病可以被分成早期非增殖性糖尿病性视网膜病(NPDR)和晚期增殖性糖尿病性视网膜病(PDR)。另外，当伴有糖尿病性黄斑水肿(DME)时，即使在该阶段可以观察到严重视力损失。
如果早期检测到糖尿病性视网膜病，适当控制可以预防视网膜病的发展和恶化，但是如果未正确控制病况，则它可以导致严重视力损失或失明。目前，糖尿病性视网膜病被认为是成人中造成失明的主要原因，并且尽管其具有临床显著性，但是未主动开发用于预防或治疗糖尿病性视网膜病的药物。
因此，对于用于预防或治疗糖尿病性视网膜病的药物开发的需求已提高。
干燥综合征是血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的实例，它是由于淋巴细胞向外分泌腺的侵袭造成分泌障碍的慢性疾病。这种疾病的特征性症状是由泪腺和唾液腺中的淋巴细胞浸润所造成的眼干和口干。随着泪液和唾液的损失，眼睛的特征性变化(称为水性泪液缺乏或干性角膜结膜炎)和口腔的特征性变化(这导致牙齿受损、口腔感染增加、吞咽困难和口腔疼痛)可能引起疼痛。患者还可以患有关节炎症(关节炎)、肌肉炎症(肌炎)、神经炎症(神经病)、甲状腺炎症(甲状腺炎)、肾炎症(肾炎)、肺炎症或身体其他部分的炎症或者淋巴结肿胀。另外，患者可以经历疲劳和睡眠障碍。干燥综合征主要影响中老年妇女。
目前，尚无已知用于干燥综合征的治疗或者恢复腺分泌的有效治疗。常规治疗通常是症状性和支持性的，其包括复水疗法(例如，以缓解眼干和口干症状)和多种润滑形式。处方药物治疗是可用的，包括帮助治疗慢性干眼的环胞霉素，和帮助刺激唾液流动的西维美林或毛果芸香碱。抗炎药，如甲氨蝶呤和羟氯喹也已开药用于改善肌骨胳症状。然而，由于宽泛的严重副作用，当前可用的药物无一是理想的。
青光眼是血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的实例，它是其中负责向脑传递视觉信息的视神经受损的疾病，这使得视神经萎缩并且视野狭窄。作为青光眼的一些类型，已知原发性开角型青光眼(POAG)、正常眼压性青光眼、原发性闭角型青光眼、发育性青光眼、继发性青光眼。另外，尽管视野正常，但是作为其中眼内压慢性较高的病况的高眼压是青光眼的风险因素之一。
在青光眼治疗中，认为降低眼内压并预防进一步的视野障碍是首要的，并且实施药物治疗、激光治疗和手术来降低眼内压，但是这些常规治疗不能使所有患者满意。仍需要含有在现有治疗药物中不存在的具有新作用机制或新结构的活性成分的青光眼治疗药物。
【现有技术参考文献】
【专利文档】
(专利文档1)KP No.10-1055920
(专利文档2)KP No.10-1292931
发明内容
【技术问题】
本发明的目的是提供包含咖啡酸、EDPA(2-(3,4-二羟苯基)乙酸乙酯)、RME(迷迭香酸甲酯)和迷迭香酸的香蜂花叶(melissa leaf)的分步提取物。
本发明的另一个目的是提供用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
本发明的另一个目的是提供用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的药物组合物，
其包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分。
本发明的目的是提供用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含含有咖啡酸、EDPA、RME和迷迭香酸的香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
本发明的另一个目的是提供包含含有咖啡酸、EDPA、RME和迷迭香酸的香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的食品组合物。
【技术解决方案】
本发明人已认识到对于非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪肝以及血管生成相关的疾病/MMP介导的疾病，例如，肥胖症、年龄相关性黄斑变性、银屑病、子宫内膜异位、癌症生长或癌症转移、动脉硬化、关节炎、炎症性肠病、阿尔茨海默氏病、牙周病、糖尿病性视网膜病、干燥综合征和青光眼的预防和治疗进行研究的需要。本发明人尝试实现对于可以预防或治疗这些疾病的天然物质的研究目的。
具体地，当作为活性成分包括新的香蜂花叶的分步提取物时，本发明的发明人发现它对非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝和血管生成相关的疾病/MMP介导的疾病，如肥胖症、年龄相关性黄斑变性、银屑病、子宫内膜异位、癌症生长或癌症转移、动脉硬化、关节炎、炎症性肠病、阿尔茨海默氏病、牙周病、糖尿病性视网膜病、干燥综合征和青光眼具有预防和治疗效果，并且本发明的发明人完成了本发明。
在下文中，将详细描述本发明。
香蜂花叶的分步提取物
本发明提供了包括咖啡酸、EDPA、RME和迷迭香酸的香蜂花叶的分步提取物。
在本发明的一个实施方式中，香蜂花叶的分步提取物可以包含基于香蜂花叶的总分步提取物，按重量计0.1至5％的咖啡酸、按重量计0.05至6％的EDPA、按重量计0.01至2％的RME和按重量计5至50％的迷迭香酸。具体地，(1)0.2至4.0重量％的咖啡酸、0.1至5.0重量％的EDPA、0.02至1.5重量％的RME和6至40重量％的迷迭香酸，(2)0.3至3.0重量％的咖啡酸、0.15至4.0重量％的EDPA、0.03至1.0重量％的RME和7至35重量％的迷迭香酸，(3)0.4至2.0重量％的咖啡酸、0.2至3.0重量％的EDPA、0.04至0.7重量％的RME和8至30重量％的迷迭香酸，但不限于此。在下文中，在该实施方式中，除非另作说明，否则本发明的香蜂花叶的分步提取物可以包含处于上述重量％的咖啡酸、EDPA、RME和迷迭香酸。
在本发明的一个实施方式中，香蜂花叶的分步提取物可以含有按重量计0.05至6％的EDPA(2-(3,4-二羟苯基)乙酸乙酯)，具体地(1)按重量计0.1至5％的EDPA％，(2)按重量计0.15至4％的EDPA，和(3)按重量计0.2至3％的EDPA，但不限于此。
在本发明的一个实施方式中，具有包含在香蜂花叶的分步提取物中的最高EDPA含量的药物组合物是ALS-T20003(按重量计0.85％)，并且通过动物实验已确认ALS-T20003具有预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪性肝病的作用。
本发明的香蜂花叶的分步提取物对于预防和治疗非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪性肝病有效，并且具有优良的药理学作用和低副作用。
本发明的香蜂花叶的分步提取物不含芦丁。
在本发明的一个实施方式中，可以通过用醇提取香蜂花叶，然后浓缩所述醇提物，将所述浓缩物在水中混悬，然后干燥通过乙酸乙酯分馏所获得的部分来获得香蜂花叶的分步提取物。
具体地，在本发明的一个实施方式中，可以通过提取方法获得香蜂花叶的分步提取物，所述提取方法包括用50％至100％的醇提取并浓缩香蜂花叶，在水中混悬，并用乙酸乙酯分馏，但不限于此。
在本发明的一个实施方式中，可以使用热风干燥、冷冻干燥或喷雾干燥法干燥所述部分。例如，可以使用热风干燥机通过热风干燥、通过降低气压，然后冷冻所述部分冷冻干燥或者通过用热空气喷雾所述部分喷雾干燥所述部分。
在本发明的香蜂花叶的分步提取物的制备中，可以使用干燥或未干燥的香蜂花叶或其混合物。对于有效提取，可以在挤压后使用香蜂花叶。
在本发明的一个实施方式中，醇可以是70至80％(v/v)的醇。
在本发明中，术语“醇”是指其中羟基键合至烷基或取代的烷基的碳原子的化合物，并且术语“烷基”是指直链饱和烃基或支链饱和烃基。术语“取代的烷基”是指键合至烷基的碳的取代基为羟基、氰基或卤化物等。
醇是指C1-C6醇，包括70至80％(v/v)的乙醇、甲醇等，并且优选地可以是乙醇或甲醇。
在本发明中，术语“C1-C6”表示具有1个或以上和6个或以下的碳原子的官能团或主链。
在本发明的一个实施方式中，可以通过以下步骤获得醇提物，但不限于此。
(S1)第一提取步骤，通过在80至85℃下用50-100％(v/v)的醇回流提取香蜂花叶2至6小时以获得第一提取物；
(S2)第二提取步骤，在80至85℃下用50-100％(v/v)的醇回流提取在第一提取后剩余的香蜂花残余物2至6小时以获得第二提取物；和
(S3)将第一提取物和第二提取物混合的步骤。
可以通过混合经由以上第一提取步骤和第二提取步骤所获得的第一提取物和第二提取物获得醇提物。
可以使用香蜂花叶的5至15倍(v/w)的50-100％的醇(v/v)，优选地70-80％的醇(v/v)制备醇提物，但不限于此。
根据本发明的实施方式，可以通过以下步骤获得浓缩物，但不限于此。
(S4)第一浓缩步骤，通过在50至60℃的温度条件下和-0.066至-0.070MPa的压力条件下浓缩醇提物5至15小时来获得第一浓缩物，和
(S5)第二浓缩步骤，通过在55至60℃的温度条件下和-0.063至-0.065MPa的压力条件下浓缩第一浓缩物3至10小时来获得第二浓缩物。
根据本发明的实施方式，在干燥所述部分前，还可以包括以下浓缩步骤，但不限于此。
(S6)浓缩所述部分的第三浓缩步骤。
在55至60℃的温度条件下和-0.063至-0.065MPa的压力条件下浓缩所述部分3至10小时的第三浓缩步骤。
在本发明中，术语“部分(级分，fraction)”是指通过实施分馏，从含有多种成分的混合物分离特定组分或特定组分组所获得的最终产物。
在本发明中，未具体限制用于获得香蜂花叶的分步提取物的分馏方法，并且可以根据本领域中常用的方法进行。具体地，通过处理多种溶剂的溶剂分馏、通过穿过具有恒定截留分子量值的超滤膜的超滤分馏、通过多种色谱法(根据尺寸、电荷、疏水性或亲和力制备用于分离)的色谱分馏及其任意组合。具体地，可以存在通过处理通过用特定溶剂提取本发明的香蜂花叶所获得的提取物从所述提取物获得部分的方法。
在本发明中，未具体限制用于获得所述部分的分馏溶剂类型，并且可以使用本领域中已知的任何溶剂，并且具体地，可以使用非极性溶剂乙酸乙酯。
香蜂花叶的分步提取物可以是香蜂花叶的乙醇提取物的乙酸乙酯部分。
方法通过使用50-100％(v/v)的醇有效提取可溶性物质和不溶性物质，并且具有提取在水中具有低溶解度，但在乙酸乙酯中具有高溶解度的不溶性物质的作用。
香蜂花叶乙醇提取物的乙酸乙酯部分可以基于所述部分的总重量，包含0.1至5重量％的咖啡酸、0.05至6重量％的EDPA、0.01至2重量％的RME和5至50重量％的迷迭香酸。具体地，(1)0.2至4.0重量％的咖啡酸、0.1至5.0重量％的EDPA、0.02至1.5重量％的RME和6至40重量％的迷迭香酸，(2)0.3至3.0重量％的咖啡酸、0.15-4.0重量％的EDPA、0.03-1.0重量％的RME和7-35重量％的迷迭香酸，(3)0.4-2.0重量％的咖啡酸、0.2-3.0重量％的EDPA、0.04-0.7重量％的RME和8-30重量％的迷迭香酸。
在本发明的实施方式中，香蜂花叶乙醇提取物的乙酸乙酯部分可以包含0.05至6重量％的EDPA(2-(3,4-二羟苯基)乙酸乙酯)，具体地(1)0.1至5重量％的EDPA，(2)0.15至4重量％的EDPA，和(3)0.2至3重量％的EDPA，但不限于此。
参考以下详细描述的实施方式，本发明的优势和特性以及实现它们的方法将变得显而易见。然而，本发明不局限于以下公开的实施方式，而是将以多种不同形式实施，并且仅这些实施方式使得本发明的公开内容完整，并且提供它们以向本发明所属领域的那些技术人员全面指明本发明的范围，并且仅通过权利要求的范围限定本发明。
用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组 分的药物组合物
本发明的目的是提供用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
香蜂花叶的分步提取物及其制备方法与先前所检验的相同。
根据本发明，术语“非酒精性脂肪性肝炎”是指尽管无饮酒史，但是显示出类似于酒精肝病的形式的疾病。
根据本发明，术语“有效组分”包括通过其固有药理作用直接或间接显示组合物效力的物质或物质组(例如，未识别药理学活性成分的草药等)，这意味着包括主要成分。
根据本发明，用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过对纤维化显示出显著抑制作用以及对Col1A2、TGFβ、IL-6和IL-10的蛋白表达水平显示出抑制作用而具有预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的作用。
本发明的用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分，并且还可以包含药物可用的载体。根据常规方法，可以将其配制成粉末剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳液剂、糖浆、气溶胶等的口服剂量形式、外部制剂和无菌注射溶液。
根据本发明，术语“药物可用的”是指当施用于人时，生理学可用并且通常不引起过敏性反应，如胃肠机能紊乱、眩晕或类似反应的组合物。
根据本发明，术语“药物可用的载体”通常包括药物组合物的液体或非液体基础试剂。如果以液体形式提供药物组合物，则载体通常包括无热原的水；等渗盐水或缓冲(水)溶液，例如，磷酸盐，柠檬酸等。注射缓冲液可以在特定参考媒介物中是高渗、等渗或低渗的，即缓冲液可以在特定参考媒介物中具有高、相等或低含盐量，优选地可以使用上述盐的这些浓度，其不通过渗透压或其他浓度作用引起细胞损坏。
参考媒介物存在于“体内”方法中，例如，如血液、淋巴、胞质液或其他体液或者可以在“离体”方法中用作参考媒介物的体液，例如，作为常规缓冲液或液体。这些常规缓冲液或液体是本领域技术人员已知的。
药物可用的载体包括本领域中常用的那些，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、水、羟苯甲酯、丙羟基苯甲酸酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油等，但不限于此。
另外，本发明的药物组合物可以包含稀释剂或赋形剂，如填充剂、补充剂、结合剂、稀释剂、崩解剂、表面活性剂，和其他药物可用的添加剂。
可以以液体、混悬剂、粉末剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂或提取物的形式制造本发明的药物组合物。
可以口服或肠胃外(例如，涂沫或静脉内、皮下、腹膜内注射)施用本发明的组合物。
根据本发明，术语“口服施用”是通过口注入药物以用于减轻病理症状的方法，并且根据本发明，术语“肠胃外施用”是指除通过口施用外，使用管的皮下、肌内、静脉内或腹膜内施用方法。
用于口服施用的固体剂型可以包括粉末剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、软胶囊、丸剂等。用于口服施用的液体剂量形式可以包括混悬剂、用于内部使用的液体、乳液、糖浆、气溶胶等，并且除了作为经常使用的简单的稀释剂的水和液体石蜡外，可以包括多种添加剂，例如，稀释剂、甜味剂、调味剂、防腐剂等。
对于用于肠胃外施用的剂量形式，可以根据常规方法配制和使用外部制剂，如无菌水溶液、液体制剂、非水溶剂、助悬剂、乳液、滴眼剂、眼膏、糖浆、栓剂、气溶胶等和无菌注射制剂，优选地，可以配制乳膏剂、凝胶剂、贴片、喷雾剂、软膏剂、硬膏剂、洗剂、擦剂、眼膏、滴眼剂、糊剂或泥罨剂药物组合物，但不限于此。基于临床处方，用于局部施用的组合物可以是无水或水性的。可以将丙二醇、聚乙二醇、植物油，如橄榄油和可注射酯，如油酸乙酯用作非水溶剂和助悬剂。作为栓剂基础，可以使用witepsol、聚乙二醇、吐温61、可可脂、月桂酸甘油酯、甘油明胶等。
可以基于所述组合物，以0.1至99.9重量份数，具体地0.1至50重量份数包含根据本发明的药物可用的添加剂，但不限于此。
用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物具有基于总重量的20重量％至80重量％的量的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明，用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过对纤维化以及对Col1A2、TGFβ、IL-6和IL-10的蛋白表达水平显示出显著抑制作用而具有预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的作用。
可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，具体地通过口服途径施用本发明的用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
当每天施用一次至数次时，优选地，以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量施用本发明的用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组 分的药物组合物
本发明的另一个目的是提供用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
香蜂花叶的分步提取物及其制备方法与先前所检验的相同。
根据本发明，术语“非酒精性脂肪性肝病”是指尽管无饮酒史，但是显示出类似于酒精性脂肪肝病的形式的疾病。
根据本发明，用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过显示出体重、血液甘油三酯、血糖和总胆固醇的显著抑制在预防或治疗非酒精性脂肪性肝病中有效。
用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物具有基于总重量的20重量％至80重量％的量的香蜂花叶的分步提取物。
可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，具体地通过口服途径施用本发明的用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
当每天施用一次至数次时，优选地，以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量施用本发明的用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物中所提及的物质同样适用于用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物，只要它们不互相冲突即可。
包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的食品组合物
本发明的另一个目的是提供包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的食品组合物。
香蜂花叶的分步提取物及其制备方法与上述相同。
所述组合物用于预防或改善非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪性肝病中的任一种。
在根据本发明的食品组合物中，当将香蜂花叶的分步提取物用作食品组合物中的添加剂时，它可以按照原样添加或者与其他食品或食品成分一起使用，并且可以根据常规方法适当使用。可以根据每种使用目的，如预防、健康或治疗，适当确定有效组分的混合量。
处于常规食品或饮料的任何形式以及粉末剂、颗粒剂、丸剂、片剂和胶囊剂的食品组合物制剂可以是可能的。
对于食品类型无具体限制，并且可以对其添加物质的食品的实例包括肉、香肠、面包、巧克力、糖果、点心、糕饼、比萨饼、拉面、其他面条、口香糖和乳制品，包括冰淇淋、多种汤、饮料、茶类、酒、酒精饮料和复合维生素，并且可以包括常规意义上的所有食品。
一般地，在食品或饮料的制造中，可以基于100重量份数的原材料，以15重量份数或以下，优选地10重量份数或以下的量添加香蜂花叶的分步提取物。然而，就为了健康和卫生或健康管理的长期摄入来说，所述量可以小于以上范围。另外，因为在本发明中就安全性来说，使用来自天然产物的分步提取物不存在问题，因此也可以以大于所述范围的量使用。
根据本发明的食品组合物中的饮料可以包含多种调味剂或天然碳水化合物作为其他成分，如常规饮料一样。所述天然碳水化合物可以是单糖，如葡萄糖和果糖、二糖，如麦芽糖和蔗糖、多糖，如糊精和环糊精，以及糖醇，如木糖醇、山梨糖醇和赤藓醇。作为甜味剂，可以使用天然甜味料，如非洲竹芋甜素和甜叶菊提取物，或者合成甜味料，如糖精和阿斯巴甜等。天然碳水化合物的比例可以为约0.01至0.04g，优选地约0.02至0.03g每100mL根据本发明的饮料。
除上述外，根据本发明的食品组合物包括多种营养物、维生素、电解质、调味剂、着色剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇和充碳酸气的饮料中使用的碳酸化试剂。另外，本发明的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的食品组合物可以包含天然果汁和用于制备果汁和植物饮料的果浆。可以单独或组合使用这些组分。未限制这些添加剂的比例，但是一般地相对于100重量份数的本发明的食品组合物，在0.01至0.1重量份数的范围内选择。
用于预防或治疗的方法
本发明的目的是通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物，提供用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的方法。
本发明的另一个目的是通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物，提供用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的方法。
根据本发明的实施方式，术语“需要治疗的受试者”是指哺乳动物，包括人，并且术语“施用”是指通过任何适合的方法向患者提供预定物质。在本发明的治疗方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径施用本发明的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
另外，在本发明的用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径施用本发明的香蜂花叶的分步提取物，并且具体地可以口服施用它。
另外，在本发明的用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径施用本发明的香蜂花叶的分步提取物，并且具体地可以口服施用它。
根据本发明的实施方式，术语“治疗有效量的”是指在研究人员、兽医、医学医生或其他临床医师所考虑的组织系统、动物或人中引起生物学或医学反应的有效组分或药物组合物的量，其包括引起要治疗的疾病或病症的症状改善的量。对于本领域技术人员显而易见的是本发明的有效组分的治疗有效的施用剂量和频率将基于所期望的效果而不同。因此，本领域技术人员可以容易地确定最优施用剂量，并且可以通过多种因素调整最优施用剂量，包括疾病类型、疾病严重程度、所述组合物中所包含的有效组分及其他成分的含量、制剂类型和患者年龄、体重、一般健康情况、性别和饮食、所述组合物的施用时间、施用途径和分泌速率、治疗期和相伴药物。
在本发明的用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的方法中，当每天施用一次至数次时，优选地，以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量将本发明的香蜂花叶的分步提取物施用于成人。
在本发明的用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的方法中，当每天施用一次至数次时，优选地，以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量将本发明的香蜂花叶的分步提取物施用于成人。
根据本发明，术语“预防”是指通过施用根据本发明的香蜂花叶的分步提取物抑制或延缓非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪性肝病的任何动作。
根据本发明，术语“治疗”是指通过施用根据本发明的香蜂花叶的分步提取物改善或有利地改变非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪性肝病的任何动作。
包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗的用途
本发明的目的是提供包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的用途。
本发明的另一个目的是提供包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的用途。
包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于药剂制造的用途。
本发明的目的是提供包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的药剂的用途。
本发明的另一个目的是提供包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的药剂的用途。
根据本发明的实施方式，包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的用于制造药剂的药物组合物可以与可接受的载体等混合，并且还可以包含其他试剂。
[血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病]
用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的药物 组合物
本发明将提供用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的药物组合物，其包含含有咖啡酸、EDPA、RME和迷迭香酸作为活性成分的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明，术语“血管生成相关的疾病”是指与新的毛细血管从现有微血管的病理性过量形成相关发生的疾病。
根据本发明，术语“MMP介导的疾病”是指由基质金属蛋白酶(MMP)的过量激活所引起的疾病。
根据本发明，术语“有效组分”是指预期通过其固有药理作用直接或间接显示组合物效力的物质或物质组(包括未识别药理学活性成分的草药等)，这意味着包括主要成分。
根据本发明的实施方式，香蜂花叶的分步提取物可以包含基于香蜂花叶的总分步提取物，按重量计0.1至5％的咖啡酸、按重量计0.05至6％的EDPA、按重量计0.01至2％的RME和按重量计5至50％的迷迭香酸。具体地，它可以包含(1)0.2至4.0重量％的咖啡酸、0.1至5.0重量％的EDPA、0.02至1.5重量％的RME和6至40重量％的迷迭香酸，(2)0.3至3.0重量％的咖啡酸、0.15至4.0重量％的EDPA、0.03至1.0重量％的RME和7至35重量％的迷迭香酸，(3)0.4至2.0重量％的咖啡酸、0.2至3.0重量％的EDPA、0.04至0.7重量％的RME和8至30重量％的迷迭香酸，但不限于此。在下文中，在示例性实施方式中，除非另作说明，否则本发明的香蜂花叶的分步提取物可以包含处于上述重量％的咖啡酸、EDPA、RME和迷迭香酸。
根据本发明的实施方式，香蜂花叶的分步提取物可以包含按重量计0.05至6％的EDPA(2-(3,4-二羟苯基)乙酸乙酯)，具体地(1)按重量计0.1至5％的EDPA，(2)按重量计0.15至4％的EDPA，和(3)按重量计0.2至3％的EDPA，但不限于此。
根据本发明的实施方式，具有包含在香蜂花叶的分步提取物中的最高EDPA含量的药物组合物是ALS-T20003(0.85重量％)，并且可以确认在动物实验中所使用的ALS-T20003抑制血管生成并且具有预防或治疗血管生成和MMP介导的疾病的作用。
包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的本发明的药物组合物在预防和治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病，如肥胖症、年龄相关性黄斑变性、银屑病、子宫内膜异位、癌症生长或癌症转移、动脉粥样硬化、关节炎、炎症性肠病、阿尔茨海默氏病、牙周病、糖尿病性视网膜病、干燥综合征和青光眼中有效，并且具有优良的药理学作用和较少的副作用。
作为包含在本发明的药物组合物中的有效组分的香蜂花叶的分步提取物不含芦丁。
根据本发明的实施方式，可以通过用醇回流提取香蜂花叶，然后浓缩醇提物，将浓缩物在水中混悬，然后用乙酸乙酯分馏并干燥所述部分来获得香蜂花叶的分步提取物。
具体地，根据本发明的实施方式，可以通过提取方法获得香蜂花叶的分步提取物，所述提取方法包括用50％至100％的醇提取香蜂花叶，浓缩，在水中混悬，并用乙酸乙酯分馏，但不限于此。
根据本发明的实施方式，可以使用热风干燥、冷冻干燥或喷雾干燥法干燥所述部分。例如，可以使用热风干燥机热风干燥，或者通过冷冻所述部分并降低气压冷冻干燥，或者通过喷雾所述部分并吹热空气喷雾干燥所述部分。
在本发明的香蜂花叶的分步提取物的制备中，可以使用干燥或未干燥的香蜂花叶或其混合物。对于有效提取，可以精细挤压并使用香蜂花叶。
根据本发明的实施方式，醇可以是70至80％(v/v)的醇，但不限于此。
根据本发明，术语“醇”是指其中羟基键合至烷基或取代的烷基的碳原子的化合物，并且术语“烷基”是指直链饱和烃基或支链饱和烃基，并且术语“取代的烷基”是指键合至烷基的碳的取代基是羟基、氰基、卤化物等。
醇是指C1-C6醇，包括70至80％(v/v)的乙醇、甲醇等，优选地乙醇或甲醇。
根据本发明，术语“C1-C6”表示具有1至6个碳原子的官能团或主链。
根据本发明的实施方式，可以通过以下步骤获得醇提物，但不限于此。
(S1)第一提取步骤，通过在80至85℃下用50-100％(v/v)的醇回流提取香蜂花叶2至6小时以获得第一提取物；
(S2)第二提取步骤，在80至85℃下用50-100％(v/v)的醇回流提取在第一提取后剩余的香蜂花残余物2至6小时以获得第二提取物；和
(S3)将第一提取物和第二提取物混合的步骤。
可以通过混合经由以上第一提取步骤和第二提取步骤所获得的第一提取物和第二提取物获得醇提物。
可以使用香蜂花叶的5至15倍(v/w)的50-100％的醇(v/v)，优选地70-80％的醇(v/v)制备醇提物，但不限于此。
根据本发明的实施方式，可以通过以下步骤获得浓缩物，但不限于此。
(S4)第一浓缩步骤，通过在50至60℃的温度条件下和-0.066至-0.070MPa的压力条件下浓缩醇提物5至15小时来获得第一浓缩物，和
(S5)第二浓缩步骤，通过在55至60℃的温度条件下和-0.063至-0.065MPa的压力条件下浓缩第一浓缩物3至10小时来获得第二浓缩物。
根据本发明的实施方式，在干燥所述部分前，还可以包括以下浓缩步骤，但不限于此。
(S6)浓缩所述部分的第三浓缩步骤。
在55至60℃的温度条件下和-0.063至-0.065MPa的压力条件下浓缩所述部分3至10小时的第三浓缩步骤。
根据本发明，术语“部分”是指通过实施分馏，从含有多种成分的混合物分离特定组分或特定组分组所获得的结果。
根据本发明，未具体限制用于获得香蜂花叶的分步提取物的分馏方法，并且可以根据本领域中常用的方法进行。具体地，通过处理多种溶剂所实施的溶剂分馏、通过穿过具有恒定截留分子量值的超滤膜所实施的超滤分馏、通过多种色谱法(根据尺寸、电荷、疏水性或亲和力制备用于分离)所实施的色谱分馏以及这些的组合。具体地，可以存在通过处理通过用预定溶剂提取本发明的香蜂花叶所获得的提取物从所述提取物获得部分的方法。
根据本发明，未具体限制用于获得所述部分的分馏溶剂类型，并且可以使用本领域中已知的任何溶剂，并且具体地可以使用非极性溶剂乙酸乙酯。
香蜂花叶的分步提取物可以是香蜂花叶的乙醇提取物的乙酸乙酯部分。
方法通过使用50-100％(v/v)的醇有效提取可溶性物质和不溶性物质，并且具有提取在水中具有低溶解度，但在乙酸乙酯中具有高溶解度的不溶性物质的作用。
香蜂花叶乙醇提取物的乙酸乙酯部分可以基于所述部分的总重量，包含0.1至5重量％的咖啡酸、0.05至6重量％的EDPA、0.01至2重量％的RME和5至50重量％的迷迭香酸。具体地，(1)0.2至4.0重量％的咖啡酸、0.1至5.0重量％的EDPA、0.02至1.5重量％的RME和6至40重量％的迷迭香酸，(2)0.3至3.0重量％的咖啡酸、0.15-4.0重量％的EDPA、0.03-1.0重量％的RME和7-35重量％的迷迭香酸，(3)0.4-2.0重量％的咖啡酸、0.2-3.0重量％的EDPA、0.04-0.7重量％的RME和8-30重量％的迷迭香酸。
本发明的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的药物组合物包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分，并且还可以包含药物可用的载体，从而根据常规方法配制成口服剂量形式，如粉末剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳液剂、糖浆、气溶胶等，和用于外部使用，和无菌注射溶液。
制剂的内容物同样可以适用于用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病，例如，肥胖症、年龄相关性黄斑变性、银屑病、子宫内膜异位、癌症生长或癌症转移、动脉硬化、关节炎、炎症性肠病、阿尔茨海默氏病、牙周病、糖尿病性视网膜病、干燥综合征和青光眼的药物组合物。
根据本发明，术语“药物可用的”是指当施用于人时，生理学可用并且通常不引起过敏性反应，如胃肠机能紊乱、眩晕或类似反应的组合物。
根据本发明，术语“药物可用的载体”通常包括药物组合物的液体或非液体基础试剂。如果以液体形式提供药物组合物，则载体通常包括无热原的水；等渗盐水或缓冲(水)溶液，例如磷酸盐，柠檬酸等。注射缓冲液可以在特定参考媒介物中是高渗、等渗或低渗的，即缓冲液可以在特定参考媒介物中具有高、相等或低含盐量，优选地可以使用上述盐的这些浓度，其不通过渗透压或其他浓度作用引起细胞损坏。参考媒介物存在于“体内”方法中，例如，如血液、淋巴、胞质液或其他体液或者可以在“离体”方法中用作参考媒介物的体液，例如，作为常规缓冲液或液体。这些常规缓冲液或液体是本领域技术人员已知的。
药物可用的载体包括本领域中常用的那些，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、水、羟苯甲酯、丙羟基苯甲酸酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油等，但不限于此。
另外，本发明的药物组合物可以包含稀释剂或赋形剂，如填充剂、补充剂、结合剂、稀释剂、崩解剂、表面活性剂，和其他药物可用的添加剂。
可以以液体、混悬剂、粉末剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂或提取物的形式制造本发明的药物组合物。
可以口服或肠胃外(例如，涂沫或静脉内、皮下、腹膜内注射)施用本发明的组合物。
根据本发明，术语“口服施用”是通过口注入药物以用于减轻病理症状的方法，并且根据本发明，术语“肠胃外施用”是指除通过口施用外，使用管的皮下、肌内、静脉内或腹膜内施用方法。
用于口服施用的固体剂量形式可以包括粉末剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、软胶囊、丸剂等。用于口服施用的液体剂量形式可以包括混悬剂、用于内部使用的液体、乳液、糖浆、气溶胶等，并且除了作为经常使用的简单的稀释剂的水和液体石蜡外，可以包括多种添加剂，例如，稀释剂、甜味剂、调味剂、防腐剂等。
对于肠胃外施用的剂量形式，可以根据常规方法配制和使用外部制剂，如无菌水溶液、液体制剂、非水溶剂、助悬剂、乳液、滴眼剂、眼膏、糖浆、栓剂、气溶胶等和无菌注射制剂，优选地，可以配制乳膏剂、凝胶剂、贴片、喷雾剂、软膏剂、硬膏剂、洗剂、擦剂、眼膏、滴眼剂、糊剂或泥罨剂药物制剂，但不限于此。基于临床处方，用于局部施用的组合物可以是无水或水性的。作为非水溶剂和助悬剂，可以使用丙二醇、聚乙二醇、植物油，如橄榄油和可注射酯，如油酸乙酯。作为栓剂基础，可以使用witepsol、聚乙二醇、吐温61、可可脂、月桂酸甘油酯、甘油明胶等。
可以基于药物组合物，以0.1至99.9重量份数，具体地0.1至50重量份数包含根据本发明的药物可用的添加剂，但不限于此。
参考以下详细描述的实施方式，本发明的优势和特性以及实现它们的方法将变得显而易见。然而，本发明不局限于以下所公开的示例性实施方式，但是将以多种不同形式实施。这些示例性实施方式仅使本发明的公开内容完整，并且提供以完整告知本发明所属领域的那些技术人员本发明的范围，并且仅通过权利要求的范围限定本发明。
血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病：肥胖症
根据本发明的实施方式，所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病可以是肥胖症。
根据本发明，术语“肥胖症”是指其中由于脂肪在体内的过量积累，体重升高至骨胳和身体需要的限制以外的状况。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为肥胖症时，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物包含基于总重量的20重量％至80重量％的量的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明，通过显示出体重、血液甘油三酯、血糖和总胆固醇的显著抑制，包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的药物组合物在预防或治疗肥胖症中有效。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为肥胖症时，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，并且具体地通过口服途径施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为肥胖症时，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
除非它们互相冲突，否则在用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的药物组合物中所提及的物质同样适用于肥胖症，它是血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例。
血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病：年龄相关性黄斑变性
根据本发明的实施方式，所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病可以是年龄相关性黄斑变性。
根据本发明，术语“黄斑变性”是指其中黄斑由于衰老、遗传因素、毒性、炎症等恶化，从而导致在严重的情况下视力完全丧失的疾病。
根据本发明，通过抑制黄斑变性病变的大小，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物在预防或治疗年龄相关性黄斑变性中有效。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为年龄相关性黄斑变性时，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物包含基于总重量的20重量％至80重量％的量的香蜂花叶的分步提取物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为年龄相关性黄斑变性时，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，并且具体地通过口服途径施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为年龄相关性黄斑变性时，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
除非它们互相冲突，否则在用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的药物组合物中所提及的物质同样适用于年龄相关性黄斑变性，它是血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例。
血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病：银屑病
根据本发明的实施方式，所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病可以是银屑病。
根据本发明，术语“银屑病”是指以被银白色鳞片覆盖的边缘清楚的丘疹和斑块为特征的慢性炎症性皮肤病。
根据本发明，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过抑制显著表皮厚度、耳组织的炎性细胞浸润以及耳组织中mRNA表达水平，在预防或治疗银屑病中有效。
根据本发明的实施方式，当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为银屑病时，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物包含基于总重量的20重量％至80重量％的量的香蜂花叶的分步提取物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为银屑病时，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，并且具体地通过口服途径施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为银屑病时，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
除非它们互相冲突，否则在用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的药物组合物中所提及的物质同样适用于银屑病，它是血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例。
血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病：子宫内膜异位
根据本发明的实施方式，所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病可以是子宫内膜异位。
根据本发明，术语“子宫内膜异位”是指其中子宫内膜组织存在于卵巢、后壁、子宫韧带、盆壁等中，并且发生多种症状，如疼痛和出血等的疾病。
根据本发明，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过显著减小子宫病变尺寸在预防或治疗子宫内膜异位中有效。
根据本发明的实施方式，当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为子宫内膜异位时，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，并且具体地通过口服途径施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
根据本发明的实施方式，当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为子宫内膜异位时，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
除非它们互相冲突，否则在用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的药物组合物中所提及的物质同样适用于子宫内膜异位，它是血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例。
血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病：癌症
根据本发明的实施方式，所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病可以是癌症生长或癌症转移。
根据本发明，术语“癌症”是指其中细胞周期不受调控并且持续细胞分裂的疾病。
根据本发明，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过显著减小癌性肿瘤尺寸在预防或治疗癌症中有效。
根据本发明的实施方式，当所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是癌症生长或癌症转移时，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物包含基于总重量的20重量％至80重量％的量的香蜂花叶的分步提取物。
癌症可以是以下中的任一种：肺癌、非小细胞肺癌(NSCL)、支气管肺泡细胞肺癌、胃癌、胃肠癌、肝癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼黑素瘤、卵巢癌、直肠癌、结肠直肠癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、阴道癌、外阴癌、食道癌、喉癌、小肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、多发性骨髓瘤、慢性或急性白血病、儿童期实体瘤、淋巴瘤、膀胱癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、轴向收缩肿瘤(axialcontraction tumors)、脑干神经胶质瘤或垂体腺瘤，并且具体地结肠直肠癌。
根据本发明的实施方式，当所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是癌症生长或癌症转移时，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，并且具体地通过口服途径施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
当所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是癌症生长或癌症转移时，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
除非它们互相冲突，否则在用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的药物组合物中所提及的物质同样适用于癌症，它是血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例。
血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病：动脉硬化
根据本发明的实施方式，所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病可以是动脉硬化。
根据本发明，术语“动脉硬化”是指其中当胆固醇或甘油三酯在血管内层衬里中积累时，血管狭窄且硬化并且堵塞的疾病。
根据本发明，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过显著抑制动脉粥样硬化斑块的增加在预防或治疗动脉硬化中有效。
根据本发明的实施方式，当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为动脉硬化时，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物包含基于总重量的20重量％至80重量％的量的香蜂花叶的分步提取物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为动脉硬化时，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，并且具体地通过口服途径施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为动脉硬化时，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
除非它们互相冲突，否则在用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的药物组合物中所提及的物质同样适用于动脉硬化，它是血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例。
血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病：关节炎
根据本发明的实施方式，所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病可以是关节炎。
根据本发明，术语“关节炎”是指其中通过多种原因在骨接触的关节处发生损伤或炎症的疾病。
根据本发明，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过显示出优良的关节炎治疗效果和优良的承重效果在预防或治疗关节炎中有效。
根据本发明的实施方式，当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为关节炎时，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物包含基于总重量的20重量％至80重量％的量的香蜂花叶的分步提取物。
关节炎可以是以下中的任一种：骨关节炎、变性关节炎、脱离性骨软骨炎、关节韧带损伤、牛皮癣关节炎、强直性脊柱炎和类风湿性关节炎，具体地骨关节炎和类风湿性关节炎。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为关节炎时，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，并且具体地通过口服途径施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为关节炎时，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
除非它们互相冲突，否则在用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的药物组合物中所提及的物质同样适用于关节炎，它是血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例。
血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病：炎症性肠病
根据本发明的实施方式，所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病可以是炎症性肠病。
根据本发明，术语“炎症性肠病”是指其中肠道中的异常慢性炎症反复改善和复发的疾病。
根据本发明，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过显示出低疾病活动指数在预防或治疗炎症性肠病中有效。
根据本发明的实施方式，当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为炎症性肠病时，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物包含基于总重量的20重量％至80重量％的量的香蜂花叶的分步提取物。
炎症性肠病可以是以下中的任一种：溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、肠结核、缺血性结肠炎和根据白塞氏病的肠溃疡，具体地溃疡性结肠炎。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为炎症性肠病时，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，并且具体地通过口服途径施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为炎症性肠病时，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
除非它们互相冲突，否则在用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的药物组合物中所提及的物质同样适用于炎症性肠病，它是血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例。
血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病：阿尔兹海默症
根据本发明的实施方式，所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病可以是阿尔兹海默症。
根据本发明，术语“阿尔兹海默症”是指最常见的痴呆病病因，其由于脑细胞中的退行性病变而导致痴呆病症状。
根据本发明，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过改善认知功能在预防或治疗阿尔兹海默症中有效。
根据本发明的实施方式，当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为阿尔兹海默症时，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物包含基于总重量的20重量％至80重量％的量的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明，当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为阿尔兹海默症时，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，并且具体地通过口服途径施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
根据本发明的实施方式，当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为阿尔兹海默症时，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
除非它们互相冲突，否则在用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的药物组合物中所提及的物质同样适用于阿尔兹海默症，它是血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例。
血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病：牙周病
根据本发明的实施方式，所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病可以是牙周病。
根据本发明，术语“牙周病”是指在牙齿周围组织，如齿龈、牙周韧带和牙槽骨中出现的疾病。
根据本发明，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过由于前胶原蛋白的表达升高，有效再生牙龈组织而对牙周病具有显著治疗效果。
根据本发明的实施方式，当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为牙周病时，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物包含基于总重量的20重量％至80重量％的量的香蜂花叶的分步提取物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为牙周病时，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，并且具体地通过口服途径施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为牙周病时，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
除非它们互相冲突，否则在用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的药物组合物中所提及的物质同样适用于牙周病，它是血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例。
血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病：糖尿病性视网膜病
根据本发明的实施方式，所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病可以是糖尿病性视网膜病。
根据本发明，术语“糖尿病性视网膜病”表示其中我们眼睛的视网膜中的血管被糖尿病破坏的状况。
根据本发明，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过对视网膜血管渗漏的优良抑制作用在预防或治疗糖尿病性视网膜病中有效。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为糖尿病性视网膜病时，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物包含基于总重量的20重量％至80重量％的量的香蜂花叶的分步提取物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为糖尿病性视网膜病时，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，并且具体地通过口服途径施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为糖尿病性视网膜病时，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
除非它们互相冲突，否则在用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的药物组合物中所提及的物质同样适用于糖尿病性视网膜病，它是血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例。
血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病：干燥综合征
根据本发明的实施方式，所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病可以是干燥综合征。
根据本发明，术语“干燥综合征”是指其中身体免疫系统攻击产生水分(流体)的腺体的自体免疫疾病。
根据本发明，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过提高唾液和泪液分泌量在预防或治疗干燥综合征中有效。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为干燥综合征时，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物包含基于总重量的20重量％至80重量％的量的香蜂花叶的分步提取物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为干燥综合征时，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，并且具体地通过口服途径施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为干燥综合征时，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
除非它们互相冲突，否则在用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的药物组合物中所提及的物质同样适用于干燥综合征，它是血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例。
血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病：青光眼
根据本发明的实施方式，所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病可以是青光眼。
根据本发明，术语“青光眼”是指在视神经，包括视网膜丛细胞中发生，同时采取视神经萎缩形式的疾病。
根据本发明，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过显著降低升高的眼内压在预防或治疗青光眼中有效。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为青光眼时，用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物包含基于总重量的20重量％至80重量％的量的香蜂花叶的分步提取物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为青光眼时，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，并且具体地通过口服途径施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
当血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病为青光眼时，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
除非它们互相冲突，否则在用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的药物组合物中所提及的物质同样适用于青光眼，它是血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例。
包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的食品组合物
本发明的另一个目的是提供包含含有咖啡酸、EDPA、RME和迷迭香酸的香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的食品组合物。
香蜂花叶的分步提取物及其制备方法与上述相同。
根据本发明的实施方式，所述食品组合物可以用于预防或改善血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病。
根据本发明的实施方式，所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病可以是以下中的另一项：肥胖症、年龄相关性黄斑变性、银屑病、子宫内膜异位、癌症生长或癌症转移、动脉硬化、关节炎、炎症性肠病、阿尔茨海默氏病、牙周病、糖尿病性视网膜病、干燥综合征或青光眼，但不限于此。
癌症可以是以下中的任一种：肺癌、非小细胞肺癌(NSCL)、支气管肺泡细胞肺癌、胃癌、胃肠癌、肝癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼黑素瘤、卵巢癌、直肠癌、结肠直肠癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、阴道癌、外阴癌、食道癌、喉癌、小肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、多发性骨髓瘤、慢性或急性白血病、儿童期实体瘤、淋巴瘤、膀胱癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、轴向收缩肿瘤、脑干神经胶质瘤或垂体腺瘤，并且具体地结肠直肠癌，但不限于此。
关节炎可以是以下中的任一种：骨关节炎、变性关节炎、脱离性骨软骨炎、关节韧带损伤、牛皮癣关节炎、强直性脊柱炎和类风湿性关节炎，具体地骨关节炎和类风湿性关节炎，但不限于此。
根据本发明的实施方式，当将香蜂花叶的分步提取物用作食品组合物中的添加剂时，它可以按照原样添加或者与其他食品或食品成分一起使用，并且可以根据常规方法适当使用。可以根据每种使用目的，如预防、健康或治疗，适当确定有效组分的混合量。
处于常规食品或饮料的任何形式以及粉末剂、颗粒剂、丸剂、片剂和胶囊剂的食品组合物制剂可以是可能的。
对于食品类型无具体限制，并且可以对其添加物质的食品的实例包括肉、香肠、面包、巧克力、糖果、点心、糕饼、比萨饼、拉面、其他面条、口香糖和乳制品，包括冰淇淋、多种汤、饮料、茶类、酒精饮料和复合维生素，并且可以包括常规意义上的所有食品。
一般地，在食品或饮料的制造中，可以基于100重量份数的原材料，以15重量份数或以下，优选地10重量份数或以下的量添加香蜂花叶的分步提取物。然而，就为了健康和卫生或健康管理的长期摄入来说，所述量可以小于或等于以上范围。另外，因为在本发明中就安全性来说，使用来自天然产物的部分不存在问题，因此也可以以大于所述范围的量使用。
根据本发明的食品组合物中的饮料可以包含多种调味剂或天然碳水化合物作为其他成分，如常规饮料一样。上述天然碳水化合物可以是单糖，如葡萄糖和果糖、二糖，如麦芽糖和蔗糖、多糖，如糊精和环糊精，以及糖醇，如木糖醇、山梨糖醇和赤藓醇。作为甜味剂，可以使用天然甜味料，如非洲竹芋甜素和甜叶菊提取物，或者合成甜味料，如糖精和阿斯巴甜等。天然碳水化合物的比例可以为约0.01至0.04g，优选地约0.02至0.03g每100mL根据本发明的饮料。
除上述外，根据本发明的食品组合物包括多种营养物、维生素、电解质、调味剂、着色剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇和充碳酸气的饮料中使用的碳酸化试剂。另外，本发明的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的食品组合物可以包含天然果汁和用于制备果汁和植物饮料的果浆。可以单独或组合使用这些组分。未限制这些添加剂的比例，但是一般地相对于100重量份数的本发明的食品组合物，在0.01至0.1重量份数的范围内选择。
用于预防或治疗的方法
本发明的另一个目的是通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物，提供用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的方法。
具体地，根据血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病类型，提供了以下预防或治疗方法。
根据本发明的实施方式，通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物提供了用于预防或治疗肥胖症的方法。
根据本发明的实施方式，通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物提供了用于预防或治疗年龄相关性黄斑变性的方法。
根据本发明的实施方式，通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物提供了用于预防或治疗银屑病的方法。
根据本发明的实施方式，通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物提供了用于预防或治疗子宫内膜异位的方法。
根据本发明的实施方式，通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物提供了用于预防或治疗癌症的方法。
根据本发明的实施方式，通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物提供了用于预防或治疗动脉硬化的方法。
根据本发明的实施方式，通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物提供了用于预防或治疗关节炎的方法。
根据本发明的实施方式，通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物提供了用于预防或治疗炎症性肠病的方法。
根据本发明的实施方式，通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物提供了用于预防或治疗阿尔茨海默氏病的方法。
根据本发明的实施方式，通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物提供了用于预防或治疗牙周病的方法。
根据本发明的实施方式，通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物提供了用于预防或治疗糖尿病性视网膜病的方法。
根据本发明的实施方式，通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物提供了用于预防或治疗干燥综合征的方法。
根据本发明的实施方式，通过向需要治疗的受试者施用治疗有效量的香蜂花叶的分步提取物提供了用于预防或治疗青光眼的方法。
根据本发明的实施方式，术语“需要治疗的受试者”是指哺乳动物，包括人，并且术语“施用”是指通过任何适合的方法向患者提供预定物质。在本发明的治疗方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径施用用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的包含本发明的香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物。
根据本发明的实施方式，在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的肥胖症的方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，具体地口服途径施用本发明的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明的实施方式，在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的年龄相关性黄斑变性的方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，具体地口服途径施用本发明的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明的实施方式，在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的银屑病的方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，具体地口服途径施用本发明的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明的实施方式，在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的子宫内膜异位的方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，具体地口服途径施用本发明的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明的实施方式，在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的癌症的方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，具体地口服途径施用本发明的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明的实施方式，在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的动脉硬化的方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，具体地口服途径施用本发明的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明的实施方式，在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的关节炎的方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，具体地口服途径施用本发明的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明的实施方式，在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的炎症性肠病的方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，具体地口服途径施用本发明的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明的实施方式，在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的阿尔茨海默氏病的方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，具体地口服途径施用本发明的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明的实施方式，在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的牙周病的方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，具体地口服途径施用本发明的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明的实施方式，在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的糖尿病性视网膜病的方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，具体地口服途径施用本发明的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明的实施方式，在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的干燥综合征的方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，具体地口服途径施用本发明的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明的实施方式，在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的青光眼的方法中，可以以常规方式，通过口服、直肠、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、胸骨内、透皮、局部、眼内或皮内途径，具体地口服途径施用本发明的香蜂花叶的分步提取物。
根据本发明，术语“治疗有效量的”是指在研究人员、兽医、医学医生或其他临床医师所考虑的组织系统、动物或人中引起生物学或医学反应的有效组分或药物组合物的量，其包括引起要治疗的疾病或病症的症状改善的量。对于本领域技术人员显而易见的是本发明的有效组分的治疗有效的施用剂量和频率将基于所期望的效果而不同。因此，本领域技术人员可以容易地确定要施用的最优剂量，并且可以通过多种因素调整最优剂量，包括疾病类型、疾病严重程度、所述组合物中所包含的有效组分及其他成分的含量、制剂类型和患者年龄、体重、一般健康情况、性别和饮食、所述组合物的施用时间、施用途径和分泌速率、治疗期和相伴药物。
在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的肥胖症的方法中，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量将本发明的香蜂花叶的分步提取物施用于成人。
在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的年龄相关性黄斑变性的方法中，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量将本发明的香蜂花叶的分步提取物施用于成人。
在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的银屑病的方法中，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量将本发明的香蜂花叶的分步提取物施用于成人。
在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的子宫内膜异位的方法中，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量将本发明的香蜂花叶的分步提取物施用于成人。
在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的癌症的方法中，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量将本发明的香蜂花叶的分步提取物施用于成人。
在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的动脉硬化的方法中，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量将本发明的香蜂花叶的分步提取物施用于成人。
在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的关节炎的方法中，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量将本发明的香蜂花叶的分步提取物施用于成人。
在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的炎症性肠病的方法中，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量将本发明的香蜂花叶的分步提取物施用于成人。
在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的阿尔茨海默氏病的方法中，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量将本发明的香蜂花叶的分步提取物施用于成人。
在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的牙周病的方法中，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量将本发明的香蜂花叶的分步提取物施用于成人。
在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的糖尿病性视网膜病的方法中，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量将本发明的香蜂花叶的分步提取物施用于成人。
在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的干燥综合征的方法中，当每天施用一次或数次时，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量将本发明的香蜂花叶的分步提取物施用于成人。
在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的干燥综合征的方法中，对于成人，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量每天施用本发明的香蜂花叶的分步提取物一次至数次。
在用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的青光眼的方法中，对于成人，优选地以0.001mg/kg至50mg/kg的剂量每天施用本发明的香蜂花叶的分步提取物一次至数次。
根据本发明，术语“预防”是指通过施用本发明的香蜂花叶的分步提取物，抑制或延缓血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病，如肥胖症、年龄相关性黄斑变性、银屑病、子宫内膜异位、癌症生长或癌症转移、动脉硬化、关节炎、炎症性肠病、阿尔茨海默氏病、牙周病、糖尿病性视网膜病、干燥综合征和青光眼的任何动作。
根据本发明，术语“治疗”是指通过施用本发明的香蜂花叶的分步提取物，改善或有利地改变血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病，如肥胖症、年龄相关性黄斑变性、银屑病、子宫内膜异位、癌症生长或癌症转移、动脉硬化、关节炎、炎症性肠病、阿尔茨海默氏病、牙周病、糖尿病性视网膜病、干燥综合征和青光眼的任何动作。
包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗血管生 成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的用途
本发明提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的用途。
具体地，提供了如以下所描述的，基于血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的类型，药物组合物用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的肥胖症的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的年龄相关性黄斑变性的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的银屑病的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的子宫内膜异位的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的癌症的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的动脉硬化的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的关节炎的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的炎症性肠病的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的阿尔茨海默氏病的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的牙周病的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的糖尿病性视网膜病的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的干燥综合征的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的青光眼的用途。
包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治 疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的药剂的用途
本发明提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的药剂的用途。
具体地，提供了如以下所描述的，基于血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的类型，包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的药剂的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的肥胖症的药剂的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的年龄相关性黄斑变性的药剂的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的银屑病的药剂的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的子宫内膜异位的药剂的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的癌症的药剂的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的动脉硬化的药剂的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的关节炎的药剂的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的炎症性肠病的药剂的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的阿尔茨海默氏病的药剂的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的牙周病的药剂的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的糖尿病性视网膜病的药剂的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的干燥综合征的药剂的用途。
根据本发明的实施方式，提供了包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物用于制造用于预防或治疗作为血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的实例的青光眼的药剂的用途。
根据本发明的一个实施方式，可以将用于制造用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病的药剂的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物与可接受的载体等混合，并且还可以包含其他试剂。
除非它们互相冲突，否则在本发明的药物组合物、食品组合物、治疗方法和用途中提及的物质同样适用。
【有益效果】
与通过其他提取法提取的香蜂花叶提取物相比，本发明的香蜂花叶的分步提取物对非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪性肝病的预防和治疗显示出优良效果。因此，本发明的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的组合物对于非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪性肝病的预防或治疗可以是有用的，其具有显著较少的副作用并且显示出优良的药理学效果。
具体地，根据本发明的用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过显著抑制纤维化和Col1A2、TGFβ、IL-6和IL-10的蛋白表达水平在预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎中有效。
根据本发明的用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过对肝脂肪积累、血液甘油三酯、血糖和总胆固醇显示出抑制作用在预防或治疗非酒精性脂肪性肝病中有效。
在预防或治疗肥胖症、年龄相关性黄斑变性、银屑病、子宫内膜异位、癌症生长或癌症转移、动脉硬化、关节炎、炎症性肠病、阿尔茨海默氏病、牙周病、糖尿病性视网膜病、干燥综合征和青光眼中，作为有效组分包含在用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的药物组合物中的本发明的香蜂花叶的分步提取物优于通过其他提取法提取的香蜂花叶的分步提取物。因此，本发明的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的药物组合物可以用于预防或治疗肥胖症、年龄相关性黄斑变性、银屑病、子宫内膜异位、癌症生长或癌症转移、动脉硬化、关节炎、炎症性肠病、阿尔茨海默氏病、牙周病、糖尿病性视网膜病、干燥综合征或青光眼，其具有显著较少的副作用并且显示出优良的药理学效果。
具体地，根据本发明的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过显示出体重、血液甘油三酯、血糖和总胆固醇的显著抑制在预防或治疗肥胖症中有效。
根据本发明的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过抑制黄斑变性病变尺寸在预防或治疗年龄相关性黄斑变性中有效。
根据本发明的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过抑制显著表皮厚度、耳组织的炎性细胞浸润以及耳组织中mRNA表达水平，在预防或治疗银屑病中有效。
根据本发明的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过显著减小子宫病变尺寸在预防或治疗子宫内膜异位中有效。
根据本发明的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过显著减小癌性肿瘤尺寸在预防或治疗癌症中有效。
根据本发明的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过显著抑制动脉粥样硬化斑块的增加在预防或治疗动脉硬化中有效。
根据本发明的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过显示出优良的关节炎治疗效果和优良的承重效果在预防或治疗关节炎中有效。
根据本发明的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过显示出低疾病活动指数在预防或治疗炎症性肠病中有效。
根据本发明的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过改善认知功能在预防或治疗阿尔兹海默症中有效。
根据本发明的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过由于前胶原蛋白的表达升高，有效再生牙龈组织在预防或治疗牙周病中有效。
根据本发明的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过对视网膜血管渗漏的优良抑制作用在预防或治疗糖尿病性视网膜病中有效。
根据本发明的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过提高唾液和泪液分泌量在预防或治疗干燥综合征中有效。
根据本发明的用于预防或治疗血管生成相关的疾病或基质金属蛋白酶(MMP)介导的疾病的包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分的药物组合物通过显著降低升高的眼内压在预防或治疗青光眼中有效。
附图说明
图1是检测纤维化的天狼猩红(Picrosirius red)染色结果。
图2是显示肝脏中SMA沉积的图。
图3是显示被称为与肝脏纤维化有关的蛋白的Col1A2的蛋白表达水平的图。
图4是显示被称为与肝脏纤维化有关的蛋白的TGFβ的蛋白表达水平的图。
图5是显示被称为与肝脏纤维化有关的蛋白的IL-6的蛋白表达水平的图。
图6是显示被称为与肝脏纤维化有关的实施方式蛋白的IL-10的蛋白表达水平的图。
图7是显示AST和ALT的血清浓度的图。
图8是显示肝脏中脂肪积累程度的定量的图。
图9显示了迷迭香酸、咖啡酸、RME和EDPA的单一成分具有血管生成抑制作用，其显示在相同浓度下，EDPA的强血管生成抑制作用。
图10确认在包含EDPA的组合物中，血管生成抑制作用随着EDPA含量升高而显著升高。
图11是显示高脂饮食诱导的肥胖大鼠的体重变化的图。
图12是显示高脂饮食诱导的肥胖大鼠的食物摄入变化的图。
图13是显示高脂饮食诱导的肥胖大鼠的血液中甘油三酯浓度变化的图。
图14是显示高脂饮食诱导的肥胖大鼠中的血糖浓度变化的图。
图15是显示高脂饮食诱导的肥胖大鼠中血液总胆固醇浓度变化的图。
图16是显示激光诱导的CNV模型中脉络膜新生血管病变尺寸的图。
图17是显示切除的耳朵组织的表皮厚度的图。
图18是确认其中向处理组施用并且不向对照组施用实施方式所述的香蜂花叶的分步提取物的实验模型中子宫病变体积的图。
图19是显示注射DLD1细胞的裸鼠中肿瘤尺寸的生长曲线的图。
图20是显示在ApoE缺陷型小鼠模型中在主动脉中测量和评价动脉粥样硬化斑块形成结果的图。
图21是比较在胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)模型中对关节炎的治疗效果的图。
图22是在通过MIA诱导的骨关节炎模型中测量承重率的图。
图23是测量通过葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的炎症性肠病动物模型中疾病活动指数(DAI)的图。
图24是显示当施用根据实施方式的香蜂花叶的分步提取物时，在水迷宫测试期间的参考记忆力的图。
图25是显示当施用根据实施方式的香蜂花叶的分步提取物时，在水下迷宫测试期间的探索测试的改善率的图。
图26是显示在通过结扎诱导的牙周病模型中分析表示组织再生的前胶原蛋白基因表达水平的RT-PCR结果的图。
图27是显示在通过链脲佐菌素诱导的糖尿病性视网膜病的大鼠模型中测试视网膜血管渗漏的结果的图。
图28是使用干燥综合征动物模型NOD/ShiLt，分析泪液分泌的量的图。
图29是显示在高渗盐水诱导的疤痕青光眼模型中对眼内压降低的作用的图。
具体实施方式
已在考虑本发明中的功能的同时，尽可能将实施方式中所使用的术语选择为目前广泛使用的一般术语，但是这些术语可以基于本领域技术人员的观念或先例、新技术的出现等而改变。另外，在具体情况下，存在本发明申请人任意选择的术语，并且在这种情况下，将在相应发明描述中详细描述含义。因此，应基于本发明的术语含义和整体内容定义在本发明中使用的术语，而不是简单的术语名称。
除非另外定义，否则本文所使用的所有术语(包括技术或科学术语)具有与本发明所属领域的技术人员通常理解的含义相同的含义。将术语，如在常用词典中定义的那些术语理解为具有与相关领域背景中的含义一致的含义，而不应以理想或过度正式的含义理解，除非在本发明申请中明确定义。
数值范围包括在该范围内定义的值。在整个实施方式中提供的每个最大数值限制包括所有更小的数值限制，就像明确写明更小的数值限制一样。在整个实施方式中提供的每个最小数值限制包括所有更大的数值限制，就像明确写明更大的数值限制一样。在整个实施方式中提供的任何数值限制应包括更宽数值范围内的所有数值范围，就像明确写明较窄的数值限制一样。
提供了实施例和制造实施例以帮助理解本发明。为了更容易理解本发明，仅提供以下实施例和制造实施例，并且未通过实施例和制造实施例限制本发明的内容。
实施例
实施例1.香蜂花叶的分步提取物的制备
使用4000L 75％(v/v)乙醇，在81℃回流提取400.4kg干燥的香蜂花叶(来源：欧洲)4小时，并且在回流提取35分钟后，用10μm筒式过滤器过滤55分钟以获得3100L第一提取物。
使用4000L 75(v/v)％乙醇，在82℃回流提取香蜂花叶残余物4小时，并且在回流提取35分钟后，用10μm筒式过滤器过滤55至65分钟以获得4100L第二提取物。
在混合第一提取物和第二提取物(总计7200L提取物)后，进行浓缩以获得600L第一浓缩物。
<第一浓缩条件>
温度：56～58℃
压力：-0.066至-0.070MPa
时间：9小时
浓缩600L第一浓缩物以获得250L第二浓缩物。
<第二浓缩条件>
温度：56～58℃
压力：-0.063至-0.065MPa
时间：5小时50分钟
将250L第二浓缩物和200L纯水混合以获得混悬液(总计450L)，并且将450L乙酸乙酯加入至所述混悬液以获得900L混合物。
将900L混合物搅拌1小时，然后静置2小时以分离乙酸乙酯层(450L)以获得第一部分。
然后，将450L乙酸乙酯(混合物与乙酸乙酯之比(v/v)＝1：1)加入至剩余混悬液，随后搅拌1小时，然后静置2小时以分离乙酸乙酯层(450L)以获得第二部分。
在将第一部分和第二部分(900L)合并后，对其进行浓缩以获得41L(42.5kg)第三浓缩物。
<第三浓缩条件>
温度：58℃
压力：-0.064MPa
时间：3小时40分钟
在不锈收集器中收集第三浓缩物20分钟(42.5kg)。
此后，使用热风干燥机在80～82℃完全干燥36小时后，将干燥材料(19.1kg，44.94％(w/w)的浓缩物)置于研磨器中并粉碎3小时50分钟以获得香蜂花叶的分步提取物(产率：18.9kg)，它是香蜂花叶的乙醇提取物的乙酸乙酯部分。
实施例2.香蜂花叶的分步提取物的成分
(1)分析方法
在285nm波长下，使用高效液相色谱法(HPLC)分析香蜂花叶的分步提取物的活性成分。将以上所制备的香蜂花叶的分步提取物注入Zorbax Eclipse Plus C18(150×4.6mm)柱，并根据下表1所示比例，以1mL每分钟的流速递送流动相A(5％的甲酸水溶液)和流动相B(甲醇)。
[表1]
Figure BDA0003878953670000771
(2)结果
根据上方分析方法，根据实施例1所获得的香蜂花叶的分步提取物包含咖啡酸、EDPA、RME和迷迭香酸，并且它们的含量如下所示。
咖啡酸：0.96wt％
EDPA：0.71wt％
RME：0.11wt％
迷迭香酸：16.1wt％
另外，在根据实施例1所获得的香蜂花叶的分步提取物的HPLC结果中未显示芦丁。因此，发现根据实施例1所获得的香蜂花叶的分步提取物不包含芦丁。
实验实施例
实验实施例1.香蜂花叶的分步提取物在甲硫氨酸/胆碱缺陷型高脂饮食模型中对 非酒精性脂肪性肝炎的抑制作用
(1)实验方法
在甲硫氨酸/胆碱缺陷型高脂饮食动物模型中评价了根据实施例的香蜂花叶的分步提取物对非酒精性脂肪性肝炎的治疗效果。
使用饲喂甲硫氨酸/胆碱缺陷型高脂饮食(MCD-HFD)的C57Bl/6小鼠进行研究，将小鼠分成施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的处理组和施用0.5％CMC的对照组。
对于施用方法，在饲喂MCD-HFD的同时，以200mg/kg的剂量每天口服施用一次根据实施例的香蜂花叶的分步提取物，并且同时向对照组施用0.5％CMC。施用期为9周。在正常组中，通过饲喂正常饮食未诱导非酒精性脂肪性肝炎。
为了确认肝脏中的纤维化程度，对肝脏组织实施天狼猩红染色。对于天狼猩红染色，将在10％福尔马林中固定的肝脏组织样品包埋在石蜡中，切成5μm切片，并将组织切片在0.5％氨基硫脲中培育10分钟。然后，将其用0.1％的天狼星红F3B在饱和苦味酸中的溶液染色1小时，然后用0.5％乙酸溶液清洗。为了观察作为肝脏纤维化的标志物的成肌纤维细胞，使用α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体进行免疫组织化学测试。将石蜡-包埋的肝脏组织切成4μm切片，连接至用聚L-赖氨酸处理的载玻片上，脱石蜡，并顺序浸没在乙醇中。在3％H2O2/甲醇溶液中处理10分钟以除去内源过氧化物酶后，将其与正常山羊血清在保湿室中反应40分钟以消除非特异性反应，然后用含有0.05％脱脂奶粉和0.3％Triton X-100的0.01M的磷酸盐缓冲盐水溶液(PBS，pH 7.4)清洗。将一抗分别反应1小时，并且将二抗反应60分钟，随后显色。实施免疫印迹以确认Col1A2、TGFβ、IL-6和IL-10的蛋白表达水平。具体地，将肝脏组织溶于含有蛋白酶抑制剂混合物的缓冲液，然后提取蛋白。在使用BCA测定试剂盒定量所提取的蛋白后，将其与SDS凝胶上样缓冲液混合，并在100℃煮沸5分钟进行变性。将在SDS-PAGE凝胶上电泳的蛋白转移到硝化纤维素膜，然后将膜在5％脱脂乳中放置1小时以阻断非特异性蛋白结合。通过处理作为一抗的Col1A2、TGFβ、IL-6、IL-10和β-肌动蛋白抗体实施常规免疫印迹法，然后使用凝胶记录软件测量最终出现的条带强度并作图。
(2)结果
图1是检测纤维化的天狼猩红染色结果。参考图1，在口服施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的处理组中，抑制了通过非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的甲硫氨酸/胆碱缺陷型高脂饮食诱导的纤维化。
图2是显示肝脏中SMA表达的图。参考图2，在口服施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的处理组中，抑制了通过非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的甲硫氨酸/胆碱缺陷型高脂饮食诱导的纤维化。
图3至图6分别是显示Col1A2、TGFβ、IL-6和IL-10的蛋白表达水平的图，这些蛋白是与肝脏纤维化有关的已知蛋白。参考图3至图6，发现对照组中所有这些蛋白增加，并且通过在处理组中用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物处理抑制了这些蛋白升高的表达水平。
实验实施例2.高脂饮食模型中香蜂花叶的分步提取物对非酒精性脂肪性肝病的 抑制作用
(1)实验方法
作为实验动物，在驯化1周后，将30只SD大鼠随机分成3组，每组10只大鼠。
对于3个组中的每一个，将饲喂标准饲料(购自Saeron Bio)的组分为正常组，将饲喂高脂饮食(HFD)并施用实施例所述的香蜂花叶的分步提取物的组分为处理组，并且将饲喂高脂饮食(HFD)并施用0.5％CMC的组分为对照组。
正常组饲喂标准饲料。处理组饲喂HFD而不是标准饲料，并且在饲喂HFD的同时，每天以100mg/kg的剂量口服施用一次根据实施例的香蜂花叶的分步提取物。在对照组中实施与处理组相同的实验，除了施用0.5％CMC而不是实施例所述的香蜂花叶的分步提取物。施用期为10周。
为了分别测量正常组、处理组和对照组的AST和ALT的血清水平，通过大鼠尸体解剖，从腹主动脉采集血液样品。将所采集的血液样品离心以获得血清。使用自动生物化学分析仪测量AST和ALT的血清水平。
从正常组、处理组和对照组中的每一个中随机选择3只大鼠，以确定正常组、处理组和对照组中的每一个的肝脏组织中的脂肪积累程度。在对所选大鼠每个个体的冷冻肝脏组织制备4个油红(Oil red)染色的载玻片后，使用分析程序ImageJ定量肝脏组织中脂肪积累的程度。
(2)结果
图7是正常组、处理组和对照组的AST和ALT的血清水平的测量值(单位：IU/L)。参考图7，确认在正常组中未发生脂肪肝，因为正常组显示出低AST和ALT血清水平。施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的处理组显示出低于对照组的AST和ALT血清水平，从而确认与对照组相比，脂肪肝受到抑制。
图8是显示使用分析程序ImageJ对处理组和对照组中的每一个的脂肪积累程度的定量的图。参考图8，已确认在正常组中肝脏组织中的脂肪积累程度不显著。已确认与施用CMC的对照组相比，施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的处理组抑制肝脏组织中的脂肪积累程度。
实验实施例3.对血管生成的抑制作用
为了确认根据实施例的香蜂花叶的分步提取物对血管生成的抑制作用，使用以下方法实施实验。
(1)实验方法
用200μl 10％基质胶涂覆48-孔板，并在4℃培育。4小时后，将温度升高至37℃，并且1小时后，将下表2和3中所列的测试物质加入至50μg/ml的最终浓度，然后将5×104个HUVEC(人脐静脉内皮细胞)加入至每个孔中，并且在第二天采集照片。
[表2]
样品
1 DMSO
2 RME
3 咖啡酸
4 迷迭香酸
5 EDPA
[表3]
样品 EDPA含量
1 ALS-T20003 0.85％
2 ALS-T20006 0.66％
3 ALS-T20009 0.45％
(2)结果
1)单一成分(迷迭香酸、咖啡酸、RME(迷迭香酸甲酯)和EDPA(乙基2-(3,4-二羟苯 基乙酸酯))对HUVEC管形成的影响，血管生成抑制活性测定
如图9所示，作为包含在香蜂花叶的分步提取物中的单一成分的迷迭香酸、咖啡酸、RME和EDPA在HUVEC管形成测定中具有血管生成抑制活性，并且EDPA通过以相同浓度最大程度抑制管形成，显示出最高血管生成抑制活性。
2)包含EDPA的组合物的血管生成抑制活性
如图10和表4所示，当使用具有不同EDPA含量(参考表3含量)的香蜂花叶的分步提取物测量血管生成抑制活性时，确认EDPA含量越高，则血管生成抑制活性显著升高的越高。
[表4]
Figure BDA0003878953670000831
实验实施例4.MMP抑制活性
实施实验以通过以下方法确认根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的MMP(基质金属蛋白酶)抑制活性。
(1)实验方法
使用荧光分光光度计(PerkinElmer LS50B)测量MMP抑制活性以确定香蜂花叶的分步提取物是否对MMP具有抑制作用。在用于活性测量前，用1mM APMA(p-氨基苯基醋酸汞)激活MMP-2和MMP-9。作为MMP-2和MMP-9的底物，使用MMP-2/MMP-9的荧光底物(Calbiochem)。作为对照，将含有1uM底物的2ml缓冲溶液[50mM Tricine(pH 7.5)、10mMCaCl2、200mM NaCl]加入至2ml比色皿，并向其中加入MMP-2或MMP-9。以2分钟间隔，在室温下使用328nm激发波长和400nm发射波长通过荧光分光光度计测量荧光强度20分钟。就处理组来说，以与对照组相同的方式，将表3中所列的每种测试物质加入至含有底物和MMP的缓冲溶液中至20ug/mL的最终浓度，然后在室温下以2分钟间隔测量荧光强度20分钟。
(2)结果
[表5]
Figure BDA0003878953670000841
参考表5，确认在含有EDPA的组合物中，MMP-2和MMP-9的抑制活性随着EDPA含量升高而显著提高。
实验实施例5.在高脂饮食诱导的肥胖大鼠中的抗肥胖症作用
(1)实验方法
在高脂饮食诱导的肥胖动物模型中评价了根据实施例所述的香蜂花叶的分步提取物的抗肥胖症作用。
通过向雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(JoongAng Experimental Animals Co.,Ltd.)饲喂高脂饮食(Saeron Bio Co.,Ltd.)诱导肥胖症，并且通过分成施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的处理组和施用0.5％羧甲基纤维素(CMC)的对照组进行研究。
在饲喂实验高脂饮食前，使对照组和处理组适应标准饮食(Saeron Bio Co.Ltd.)环境1周，然后饲喂实验饮食10周。
对于施用方法，以100mg/kg的剂量每天口服施用一次根据实施例的香蜂花叶的分步提取物，并且向对照组施用0.5％CMC。每周在同一天测量体重和食物摄入两次。对于食物摄入的测量，在3pm在粉末饲料箱内填充一定量的食物，并测量总重量，并且在第二天3pm测量减少的食物重量。
将其计算为24小时消耗的食物的量，并且不间断进行直至测试结束。在距测试开始日期5和10周收集血液样品。在用乙醚麻醉后，通过其中将肝素处理的玻璃毛细管插入SD大鼠的眼眶静脉丛的眼部放血法收集血液。从所采集的血液测量总胆固醇、甘油三酯和胰岛素浓度。
(2)结果
图11是显示高脂饮食诱导的肥胖大鼠的体重变化的图。参考图11，在对照组中观察到持续体重增加，并且这种体重增加持续直至实验结束的第10周。但是在处理组中，在高脂饮食诱导的肥胖大鼠中，体重显著降低。
图12是显示高脂饮食诱导的肥胖大鼠的食物摄入变化的图。参考图12，在对照组和处理组中未观察到食物摄入的显著变化。
图13是显示高脂饮食诱导的肥胖大鼠的血液中甘油三酯浓度变化的图。参考图13，在处理组中，高脂饮食诱导的肥胖大鼠中血液甘油三酯显著降低。具体地，即使在高脂饮食摄入10周后，实验组中的血液中的甘油三酯水平不升高。
图14是显示高脂饮食诱导的肥胖大鼠中的血糖浓度变化的图。参考图14，在处理组中，高脂饮食诱导的肥胖大鼠中血糖显著降低。
图15是显示高脂饮食诱导的肥胖大鼠中的总胆固醇的血液浓度变化的图。参考图15，在处理组中，高脂饮食诱导的肥胖大鼠中总胆固醇显著降低。
实验实施例6.在激光诱导的脉络膜新生血管(CNV)模型中香蜂花叶的分步提取物 对年龄相关性黄斑变性的抑制作用
(1)实验方法
在激光诱导的脉络膜新生血管(CNV)动物模型中评价了根据实施例的香蜂花叶的分步提取物对年龄相关性黄斑变性的治疗效果。
通过使用二极管绿光激光(532nm，150mW，0.1sec)破坏视网膜视神经区，使用6周大的C57BL/6小鼠制备激光诱导的CNV模型。
在激光诱导的CNV模型中，通过分成施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的处理组和施用0.5％CMC的对照组实施研究。
在激光处理前2天，以100mg/kg的剂量每天口服施用一次根据实施例的香蜂花叶的分步提取物，并且向对照组施用0.5％CMC。在激光处理后，将剂量施用期继续10天。
在激光处理后10天，实施视网膜-脉络膜平埋切片以确认CNV病变尺寸减小效果。使小鼠麻醉并眶后注射25mg/ml FITC-葡聚糖。30分钟后，将小鼠安乐死，除去眼，用10％福尔马林固定，并且除去角膜和晶状体并在盖玻片上平面封固。测量FITC-葡聚糖染色的黄斑变性病变尺寸。
(2)结果
图16是显示激光诱导的CNV模型中黄斑变性病变尺寸的图。参考图16，已表明在激光诱导的脉络膜新生血管模型中，通过激光处理对照组中黄斑变性病变尺寸增加，处理组中新血管形成尺寸显著减小。
实验实施例7.在IL-23诱导的银屑病动物模型中香蜂花叶的分步提取物对银屑病 的抑制作用
(1)实验方法
根据Ma的方法[J.Clin.Cell Immunol.4:6.(2013)]，在IL-23诱导的银屑病动物模型中评价了根据实施例的香蜂花叶的分步提取物对银屑病的作用。
制备了IL-23诱导的银屑病动物模型，其中通过每隔一天向C57BL/6小鼠耳朵皮内注射500ng IL-23 16天，诱导了银屑病。
通过分成施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的处理组，和施用0.5％CMC的对照组，和用PBS而不是IL-23处理的PBS对照组，在IL-23诱导的银屑病动物模型中实施研究。
对于施用方法，以100mg/kg的剂量每天口服施用一次根据实施例的香蜂花叶的分步提取物，并且向对照组施用0.5％CMC。在IL-23注射之前一天开始口服施用并继续总计16天，并且在开始施用后第17天结束实验。
在实验结束后，测量小鼠耳朵厚度，并且结果如图17所示。
(2)结果
图17是显示切除的耳朵组织的表皮厚度的图。参考图17，在处理组中，在IL-23诱导的银屑病动物模型中表皮厚度显著减小。
实验实施例8.在子宫内膜自体移植模型中香蜂花叶的分步提取物对子宫内膜生 长的抑制作用
(1)实验方法
在安置SD大鼠后，为了匹配雌性发情周期，每5天将浸泡雄性尿液的寝具置于雌性笼中，并且在手术前一周，每天进行阴道细胞学研究以确认月经周期。
在手术前，用电动剃刀对手术位点剃毛并用70％乙醇消毒。在从阴道开口制备大约1个0.5cm至1.0cm的切口后，使左侧子宫暴露。用5-0号缝合线，将6cm至8cm的位置处所暴露的左侧子宫的两者部分紧密系牢。将在系紧位置之间的子宫切开并将其置于具有含青霉素(100U/ml)和链霉素(100μg/ml)的100μL PBS的无菌玻璃培养皿中。在除去脂肪后，垂直切开子宫，并切成三个2mm尺寸的片。
在发现肠并从切口位点拉出后，将肠在预先润湿的纱布上铺展，其中识别肠系膜之间的3个动脉并轻轻缝合子宫碎片。然后，将手术的肠插入腹腔，使用缝合线缝合腹壁，并用缝合夹(autoclip)使皮肤闭合。手术后，将热应用于SD大鼠以预防体温降低。用聚维酮对手术位点消毒，并将止痛剂对乙酰氨基酚以2mg/ml与饮用水混合并施用。
在手术后7天，除去缝合夹，并且将根据实施例的香蜂花叶的分步提取物每天一次口服施用至处理组(n＝5)，施用4周。香蜂花叶的分步提取物的施用剂量为100mg/kg。实施组分离，从而每组中子宫病变的平均尺寸相同。
将0.5％CMC口服施用至对照组(n＝5)。
手术后4周，将SD大鼠安乐死并切下腹膜。然后，分离移植到肠系膜的子宫内膜异位病变，并测量尺寸和重量。
(2)结果
图18是确认在实验模型中移植到肠系膜的子宫内膜异位病变体积的图，其中将实施例所述的香蜂花叶的分步提取物施用于处理组并且不施用于对照组。在图18中，描述了处理组和对照组的子宫内膜异位病变的平均体积。
表6显示了移植到处理组和对照组中每一个的肠系膜中的子宫内膜异位病变的尺寸和体积。
[表6]
Figure BDA0003878953670000891
Figure BDA0003878953670000901
参考表6，移植到处理组的肠系膜的子宫内膜异位病变的平均体积为约1.73mm3，并且标准偏差为约0.38。对照组的子宫内膜异位病变的平均体积为约4.83mm3，并且标准偏差为约0.61。参考图18和表6，已确认处理组的子宫内膜异位病变体积显著小于对照组。由于这种情况，可以确认根据实施例的香蜂花叶的分步提取物对子宫内膜组织生长具有优良的抑制作用。
实验实施例9.在裸鼠中在致瘤性模型中香蜂花叶的分步提取物对癌症生长的抑 制作用
(1)实验方法
在裸鼠中，在致瘤性模型中评价了根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的抗癌作用。
在RPMI-1640培养基中培养结肠直肠癌细胞(DLD1)，并且将6周大的雄性裸鼠(Orient Bio)安置在无菌机构中。将所培养的DLD1细胞在DMEM培养基中再混悬，并且将5×106个细胞皮下注入裸鼠右侧腹，将裸鼠分为施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的处理组和施用0.5％CMC的对照组。
对于施用方法，从肿瘤注射当天起，以100mg/kg的剂量每天口服施用一次香蜂花叶的分步提取物，并且向对照组施用0.5％CMC。施用期为28天，并且每3天用卡尺测量肿瘤尺寸。
(2)结果
图19是显示注射DLD1细胞的裸鼠中肿瘤尺寸的生长曲线的图。在对照大鼠中，肿瘤指数生长直至第28天，但是在口服施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的处理组中，肿瘤尺寸显著减小，借此显示出强抗癌作用。
实验实施例10.在脱脂蛋白E(ApoE)缺陷型小鼠模型中香蜂花叶的分步提取物对 动脉硬化的抑制作用
(1)实验方法
在ApoE缺陷型小鼠模型中评价了根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的抗动脉粥样硬化作用。选择了其中通过高脂饮食诱导动脉粥样硬化16周的小鼠，并且将其中通过标准饮食而不是高脂饮食诱导动脉粥样硬化的那些分为正常组。
对照组施用0.5％CMC，并且处理组施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物。
向小鼠无限制提供食物和水16周，并且以100mg/kg的剂量向通过高脂饮食诱导动脉硬化16周的小鼠处理组每天口服施用一次根据实施例的香蜂花叶的分步提取物，并向对照组施用0.5％CMC。
16周后，将小鼠处死，实施从心脏和升主动脉至胸主动脉的切除并在10％中性缓冲甲醛溶液中固定。在用剃刀修整固定组织后，将其包埋在冷冻组织包埋试剂(OCT化合物)中并在深度冷冻机中冷冻。通过用低温恒温切片机将主动脉弓切成10μm厚来制备载玻片。对于脂肪染色，将载玻片浸没在蒸馏水中并用无水丙二醇处理1分钟，在油红溶液中染色16小时，然后在85％丙二醇中处理2分钟。用蒸馏水清洗载玻片，用水性密封剂密封，并在光学显微镜下观察。
(2)结果
图20是显示在ApoE缺陷型小鼠模型中在主动脉中测量和评价动脉粥样硬化斑块形成结果的图。已确认与正常组相比，对照组中动脉粥样硬化斑块形成增加，并且在处理组中显著抑制了动脉粥样硬化斑块增加。
实验实施例11.香蜂花叶的分步提取物在胶原蛋白诱导的关节炎动物模型中的效 力
(1)实验方法
在胶原蛋白诱导的关节炎模型中评价了根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的效力。
通过注射胶原蛋白诱导免疫应答产生了胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)动物模型，所述免疫应答被认为是类风湿性关节炎的原因。
将4mg鸡II型胶原蛋白与1ml 100mM乙酸混合并在4℃溶解一天。将其与1ml含有4mg/ml结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的弗氏不完全佐剂混合，乳化，然后将150μl(300μg)皮内注入6周大Lewis大鼠尾部以进行免疫。在初次免疫后的第7天，通过再次皮内注射鸡II型胶原蛋白诱导二次免疫(加强)反应。在二次免疫后1-2周后，确认了关节炎症状。
对照组施用0.5％CMC，并且处理组施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物。
从诱导二次免疫应答后第二天起，以100mg/kg的剂量每天口服施用一次根据实施例的香蜂花叶的分步提取物，施用47天，并且将0.5％CMC施用于对照组。
为了验证治疗效果，观察每只大鼠爪子的关节和结的肿胀和红斑程度，并且根据下表7中所述的打分指数计算临床得分。
[表7]
得分 临床观察
0 无红斑和肿胀迹象
1 限制在跗骨或踝关节的红斑和轻微肿胀
2 从踝延伸至跗骨的红斑和轻微肿胀
3 从踝延伸至中骨关节的红斑和中度肿胀
4 包括踝、足和足趾的红斑和严重肿胀
(2)结果
图21是比较在胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)模型中的关节炎治疗效力的图。参考图21，在CIA诱导的免疫应答之后约20天出现关节炎症状。在胶原蛋白诱导的关节炎模型中，处理组显示出显著治疗效果。
实验实施例12.香蜂花叶的分步提取物在MIA(碘醋酸一钠盐)诱导的骨关节炎动 物模型中的效力
(1)实验方法
在MIA诱导的骨关节炎模型中评价了根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的效力。
通过将50μl用0.9％的盐水稀释至60mg/ml的浓度的MIA注射至7周大的SD大鼠的右下肢的关节腔中来诱导骨关节炎并进行选择。
将0.5％CMC施用于对照组，并且将根据实施例的香蜂花叶的分步提取物施用于处理组。
对于施用方法，以100mg/kg的剂量每天口服施用一次香蜂花叶的分步提取物，施用21天，并且向对照组施用0.5％CMC。在施用后，以7天间隔测量承重率。将未诱导骨关节炎的组分为正常组。
使用Incapacitance测试器测量后爪承重。在测试器支架中，在无MIA处理的情况下，骨关节炎诱导的大鼠由于疼痛靠正常后爪站立，从而两爪重量不平衡，并且用MIA处理的爪的重量比正常爪的重量相对较轻。当测量爪的重量时，在SD大鼠腹部不接触装置传感器的状态下测量两爪重量(g)。
使用所测量的爪的重量，通过以下方程1计算承重率(％)。
[方程1]
承重率(％)＝[骨关节炎诱导的下肢重量/(两爪下肢重量)]×100
(2)结果
图22是在通过MIA诱导的骨关节炎模型中测量承重率的图。参考图22，已确认随时间流逝，与正常组相比，对照组的承重率(％)统计学显著降低。相反，处理组通过显著提高降低的承重率，显示出优良的承重效果(骨关节炎的治疗效果)。
实验实施例13.香蜂花叶的分步提取物对通过葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的炎症性 肠病的抑制作用
(1)实验方法
在通过葡聚糖硫酸钠诱导的动物模型中评价了根据实施例的香蜂花叶的分步提取物对溃疡性结肠炎的治疗效果。
向7周大的C57BL/6J小鼠(Central Lab.Animal Inc.)无限制提供食物和水，并驯化1周，然后随机分为对照组、正常组和处理组。
在组分离后，以200mg/kg的剂量每天向处理组口服施用一次根据实施例的香蜂花叶的分步提取物。并且向对照组施用0.5％CMC。从组分离第3天起，通过在饮用水中添加3％DSS来代替水以诱导炎症性肠病。另一方面，在正常组中，由于未施用DSS，未诱导炎症性肠病。
在实验期间，通过每天诱导小鼠排便一次，观察粪便外表，并且使用coulterhemoccult单一载玻片观察潜血存在或不存在，并根据下表8中的标准指示得分。
[表8]
得分 粪便浓度 粪便颜色
0 正常 正常有色粪便
1 软，但维持形态 褐色粪便
2 软 微红色粪便
3 非常软 血性便
4 腹泻 严重出血
[公式2]
DAI(疾病活动指数)＝粪便浓度+粪便颜色
(2)结果
图23是测量通过DSS诱导的炎症性肠病动物模型中疾病活动指数(DAI)的图。此时，正常组的DAI表示为0。作为具有通过DSS诱导的溃疡性结肠炎的大鼠的DAI的测量结果，对照组显示出高DAI，然而处理组显示出具有低DAI得分的显著治疗效果。
实验实施例14.在东莨菪碱诱导的痴呆病动物模型中改善认知功能的效力
(1)实验方法
对于认知功能检查，在每个组中使用了5个9周大的雄性ICR小鼠。向处理组施用香蜂花叶的分步提取物，并且向对照组施用生理盐水2周。
以200mg/kg的剂量，每周向处理组口服施用7次，施用2周，并且在测试开始前60分钟，分别以1mg/kg向处理组和对照组口服施用东莨菪碱以诱导记忆力损伤，并且实施水迷宫测试。
在测试开始前一天，在通过使其在无平台的水箱中自由游泳60秒进行驯化后，在水迷宫测试期间实施参考记忆力测试。通过每天测量4至5次，测量5天，找到浸没在水中的平台的逃避时间(单位：秒)，实施参考记忆力测试，并且最大可允许的时间限制在60秒。如果直至测试第二天未找到平台位置，则引导小鼠在60秒的时间限内找到平台，并且当它们爬上平台时，允许其在此停留10秒。
在参考记忆力测试结束后24小时，通过从水箱除去平台并允许它们自由游泳60秒实施探索测试以测量它们处于平台所处位置的时间长度。
在施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物5天后进行参考记忆力测试，并且比较了处理组和对照组找到平台的平均时间。
(2)结果
参考图24，当施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物时，确认了对改善认知功能的效果(37.2±2.1)。
在参考记忆力测试完成后所实施的探索测试中，将对照组中在平台上停留的平均时间与施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的处理组的平均停留时间相比较，并且表示了改善率。
[公式3]
探索测试改善率＝(tA-ts)/ts×100(％)
ts是对照组在平台上停留的平均时间，并且tA是施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的处理组在平台上停留的平均时间。
参考图25，还在探索测试中，处理组在平台上的停留时间比对照组更长，并且与对照组相比，处理组(88.3±9.9％)显示出优良的改善率。
实验实施例15.在结扎线诱导的牙周病模型中对牙周病的抑制作用
(1)实验方法
将7周大的雄性SD大鼠用作实验动物，对其无限制提供一般实验室动物饲料和水并且在驯化1周后，将它们用于实验。
在全身麻醉后，通过用无菌缝合线(3-0，尼龙线)结扎下颌第一磨牙诱导牙周病。在仅确认颈部后，将未结扎的大鼠分为正常组。
在患有诱导的牙周病的组中，将根据实施例的香蜂花叶的分步提取物施用于处理组。
以100mg/kg的剂量每天口服施用一次处理组，并且向对照组施用0.5％CMC。
在处死实验动物后，除去切下的下颌的周围组织，然后确认表示组织再生的前胶原蛋白基因表达水平。
在牙周病中，由胶原蛋白组成的牙周组织的再生和恢复是重要的。通过RT-PCR确认来自牙龈的前胶原蛋白基因表达水平。
使用RT-PCR(反转录酶-聚合酶链反应)，从通过使用Trizol法，用均质机研磨提取的牙龈组织所获得的10μg RNA合成cDNA。下表9显示了每种基因的PCR引物的核苷酸序列。
[表9]
Figure BDA0003878953670000981
Figure BDA0003878953670000991
(2)结果
图26是显示在通过结扎诱导的牙周病模型中分析表示组织再生的前胶原蛋白基因表达水平的RT-PCR结果的图。参考图26，根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的施用提高了前胶原蛋白表达以有效再生牙龈组织，借此显示出对牙周病的显著治疗效果。
实验实施例16.在链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病性视网膜病大鼠模型中香蜂花 叶的分步提取物对糖尿病性视网膜病的抑制作用
(1)实验方法
在链脲佐菌素诱导的糖尿病性视网膜病大鼠模型中评价了根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的治疗效果。
将溶于柠檬酸盐缓冲液(100mM，pH 4.5)的链脲佐菌素溶液(100mM)以150mg/kg注入大鼠腹腔，并且充分提供10％的蔗糖以预防低血糖休克。2天后，使用血糖计测量血糖水平，并且使用其中在1至2周内，将非空腹血糖维持在300mg/dl以上的糖尿病动物。
在糖尿病诱导的大鼠中，将0.5％CMC施用于对照组，并且将根据实施例的香蜂花叶的分步提取物施用于处理组，并且在正常组中未引起糖尿病。
对于施用方法，选择糖尿病诱导的大鼠并且从链脲佐菌素施用之后2周起，以100mg/kg的剂量每天口服施用一次根据实施例的香蜂花叶的分步提取物，施用16周，并且将0.5％CMC施用于对照组。在16周后，为了定量分析视网膜血管渗漏，将1.25mg 500-kDaFITC-葡聚糖(Sigma-Aldrich)注入大鼠左心室，并通过循环血液5分钟染色。摘出眼，并立即用4％多聚甲醛固定45分钟。从固定眼球切下视网膜，切成马耳他十字形，并且将所切下的视网膜置于载玻片，然后使用共聚焦显微镜观察。通过测量从整个视网膜组织流出的FITC-葡聚糖强度定量视网膜血管渗漏。
(2)结果
图27是在链脲佐菌素诱导的糖尿病性视网膜病大鼠模型中测试对视网膜血管渗漏的抑制作用的结果。参考图27，确认在链脲佐菌素诱导的糖尿病性视网膜病大鼠模型中，在对照组中视网膜血管渗漏较高，并且在处理组中显著抑制了视网膜血管渗漏。
实验实施例17.香蜂花叶的分步提取物在干燥综合征动物模型中的效力
(1)实验方法
使用干燥综合征动物模型NOD/ShiLt小鼠进行实验。
在干燥综合征动物模型NOD/ShiLt中，将0.5％CMC施用于对照组，并且将根据实施例的香蜂花叶的分步提取物施用于处理组。
对于施用方法，在以100mg/kg施用香蜂花叶的分步提取物12周后，分析小鼠的泪液分泌。在用异氟烷麻醉NOD/ShiLt小鼠后，根据Zoukhri等人(Exp Eye Res.2007；84:894-904)所述的方法，通过使用在酚红中浸泡的棉花测量泪液分泌。
(2)结果
图28是当使用干燥综合征动物模型NOD/ShiLt小鼠，施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物时，分析泪液分泌的图。参考图28，处理组中泪液分泌显著提高。
通过以上结果，已确认通过施用根据实施例的香蜂花叶的分步提取物提高泪液分泌改善了干燥综合征。
实验实施例18.在高渗盐水诱导的疤痕青光眼模型中香蜂花叶的分步提取物对青 光眼的抑制作用
(1)实验方法
在高渗盐水诱导的疤痕青光眼模型中评价了根据实施例的香蜂花叶的分步提取物的效力。
通过腹膜内注射氯胺酮-赛拉嗪使大鼠麻醉，并将50μl 1.8M高渗盐水注入左眼巩膜外静脉以在小梁网中诱导疤痕组织，其由于对眼房水流出通道的耐受性而引起眼内压升高。将右眼用作对照，并且在青光眼诱导前并且在青光眼诱导后以2天间隔测量左眼和右眼的眼内压，测量2周。
在选择诱导患有青光眼的大鼠后，将0.5％CMC施用于对照组，并且将根据实施例的香蜂花叶的分步提取物施用于处理组，并且在正常组中未引起青光眼。
对于施用方法，从青光眼诱导日起，以100mg/kg的剂量向处理组每天口服施用一次根据实施例的香蜂花叶的分步提取物2周，并且将0.5％CMC施用于对照组。
(2)结果
图29是显示在通过高渗盐水诱导的疤痕青光眼模型中根据实施例的香蜂花叶的分步提取物降低眼内压的图。参考图29，已确认在对照组中，在高渗盐水注射后第6天，眼内压达到最大值并且持续维持，并且在处理组中，在小梁网中具有通过高渗盐水诱导的疤痕的青光眼模型中升高的眼内压显著减轻。

Claims (28)

1.香蜂花叶的分步提取物，其包含咖啡酸、EDPA、RME和迷迭香酸。
2.根据权利要求1所述的香蜂花叶的分步提取物，
所述香蜂花叶的分步提取物包含基于香蜂花叶的总分步提取物，按重量计0.1至5％的咖啡酸、按重量计0.05至6％的EDPA、按重量计0.01至2％的RME和按重量计5至50％的迷迭香酸。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，
通过提取方法获得所述香蜂花叶的分步提取物，所述提取方法包括用50％至100％的醇提取并浓缩香蜂花叶，在水中混悬，并用乙酸乙酯分馏，并且所述香蜂花叶的分步提取物包含按重量计0.05至6％的EDPA(2-(3,4-二羟苯基)乙酸乙酯)。
4.用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物组合物，其包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分。
5.用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的药物组合物，其包含香蜂花叶的分步提取物作为有效组分。
6.根据权利要求4或5中任一项所述的药物组合物，其中所述香蜂花叶的分步提取物包含基于所述香蜂花叶的总分步提取物，按重量计0.1至5％的咖啡酸、按重量计0.05至6％的EDPA、按重量计0.01至2％的RME和按重量计5至50％的迷迭香酸。
7.用于预防或治疗血管生成相关的疾病或MMP(基质金属蛋白酶)介导的疾病的药物组合物，其包含含有咖啡酸、EDPA、RME和迷迭香酸的所述香蜂花叶的分步提取物作为有效组分。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述香蜂花叶的分步提取物包含按重量计0.1至5％的咖啡酸、按重量计0.05至6％的EDPA、按重量计0.01至2％的RME和按重量计5至50％的迷迭香酸。
9.根据权利要求7所述的药物组合物，其中通过提取方法获得所述香蜂花叶的分步提取物，所述提取方法包括用50％至100％的醇提取并浓缩香蜂花叶，在水中混悬，并用乙酸乙酯分馏，并且所述香蜂花叶的分步提取物包含按重量计0.05至6％的EDPA(2-(3,4-二羟苯基)乙酸乙酯)。
10.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是肥胖症。
11.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是年龄相关性黄斑变性。
12.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病可以是银屑病。
13.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是子宫内膜异位。
14.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是癌症生长或癌症转移。
15.根据权利要求14所述的药物组合物，其中所述癌症是以下中的任一种：肺癌、非小细胞肺癌(NSCL)、支气管肺泡细胞肺癌、胃癌、胃肠癌、肝癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼黑素瘤、卵巢癌、直肠癌、结肠直肠癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、阴道癌、外阴癌、食道癌、喉癌、小肠癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、多发性骨髓瘤、慢性或急性白血病、儿童期实体瘤、淋巴瘤、膀胱癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、可收缩肿瘤、脑干神经胶质瘤或垂体腺瘤。
16.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是动脉硬化。
17.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是关节炎。
18.根据权利要求17所述的药物组合物，其中所述关节炎是以下中的任一种：骨关节炎、变性关节炎、脱离性骨软骨炎、关节韧带破坏、牛皮癣关节炎、强直性脊柱炎和类风湿性关节炎。
19.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是炎症性肠病。
20.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是阿尔茨海默氏病。
21.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是牙周病。
22.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是糖尿病性视网膜病。
23.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是干燥综合征。
24.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是青光眼。
25.食品组合物，其包含含有咖啡酸、EDPA、RME和迷迭香酸的香蜂花叶的分步提取物作为有效组分。
26.根据权利要求25所述的食品组合物，其中所述食品组合物包含基于香蜂花叶的总分步提取物，按重量计0.1至5％的咖啡酸、按重量计0.05至6％的EDPA、按重量计0.01至2％的RME和按重量计5至50％的迷迭香酸。
27.根据权利要求25所述的食品组合物，其中所述食品组合物用于预防或改善非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝病或者血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病。
28.根据权利要求27所述的食品组合物，其中所述血管生成相关的疾病或MMP介导的疾病是以下中的另一项：肥胖症、年龄相关性黄斑变性、银屑病、子宫内膜异位、癌症生长或癌症转移、动脉硬化、关节炎、炎症性肠病、阿尔茨海默氏病、牙周病、糖尿病性视网膜病、干燥综合征或青光眼。
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