CN115363051A - 黑曲霉在蜱虫防控中的应用 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了一种黑曲霉在蜱虫防控中的应用，旨在解决蜱虫的化学防控存在药物残留及易产生抗药性的技术问题。本发明研究表明，黑曲霉对长角血蜱幼虫有致死作用；以黑曲霉对蜱虫进行生物防控，效果好，易实施，将其制成含有黑曲霉孢子的蜱虫防控生物制剂，防效持久、无药物残留，不存在环境污染，操作简便、防治成本低，易于推广实施。

Description

黑曲霉在蜱虫防控中的应用
技术领域
本发明涉及生物防控技术领域，具体涉及一种黑曲霉在蜱虫防控中的应用。
背景技术
蜱虫属于寄螨目、蜱总科。蜱虫是许多脊椎动物体表的暂时性寄生虫，是一些人兽共患病病原的传播媒介和贮存宿主。其中，长角血蜱Haemaphysalis Iongicornis(Neumann)，是一种小型蜱，呈黄褐色；无眼，有缘垛；主要生活于温带次生林、山地及丘陵边缘地带，在我国广泛分布。
长角血蜱在吸血过程中分泌的神经毒素可导致宿主肌肉麻痹，严重时还可引起瘫痪；叮咬时宿主一般没有痛痒感觉，很难察觉，并且可能携带并传播病原体如森林脑炎病毒、新型布尼亚病毒、巴贝斯虫、螺旋体，引起一些传染性疾病或寄生虫病。近年来，由蜱虫叮咬人、畜致病、甚至致死事件时有发生，因此，对于此类蜱虫进行有效防控十分必要。
目前，世界各地主要通过喷洒农药如DEET（N,N-二乙基间甲苯甲酰胺）、敌敌畏、毒死蜱等来控制蜱虫；虽然农药对蜱虫具有高效、广谱的特点，但农药易残留在蔬菜、瓜果及土壤环境中，易对生态造成严重危害，并还可能随着食物链的延伸进一步危及人及动物健康；此外，长期使用农药，还会使蜱虫产生耐药性，导致防效不佳。
公开于该背景技术部分的信息仅用于加深对本公开的背景技术的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成本领域技术人员所公知的现有技术。
发明内容
发明人通过长期的研究发现，黑曲霉对长角血蜱幼虫有致死作用，能够在一定程度上实现对长角血蜱的生物防控。
根据本申请公开的一个方面，将黑曲霉或其孢子应用于蜱虫的生物防控当中。
在本公开的一些实施例中，所述蜱虫为长角血蜱。
根据本公开的另一个方面，提供一种含有黑曲霉孢子的蜱虫防控生物制剂。
根据本公开的另一个方面，提供一种蜱虫防控生物制剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）将黑曲霉菌丝或孢子在无菌操作条件接种于SDA（沙氏弱葡萄糖培养基）中，于35～38℃、相对空气湿度75～85%的条件下培养4～7天；
（2）再以吐温水溶液充分洗脱黑曲霉菌孢子，收集孢子，并吐温水溶液配制浓度为1×103个/mL～1×109个/mL的黑曲霉孢子溶液，即成。
在本公开的一些实施例中，在所述步骤（2）中，吐温水溶液选择为体积百分比浓度0.05%的吐温80水溶液。
本申请实施例中提供的一个或多个技术方案，至少具有如下任一技术效果或优点：
1. 黑曲霉对蜱虫的防控效果好，无环境污染，能够实现良好的生物防控。
2. 以黑曲霉实施生物防控，防效持久、无药物残留，操作简便、防治成本低，易于推广实施。
附图说明
图1为本申请一实施例中对照组虫体照片（0.05%吐温80水溶液处理11 天）。
图2为本申请一实施例中实验组虫体照片（左图为1×106个/mL黑曲霉孢子溶液处理 11天；右图为1×107个/mL黑曲霉孢子溶液处理11天）。
具体实施方式
以下实施例中所述涉及的主要实验材料及实验方法：
1. 黑曲霉培养及孢子收获
将黑曲霉菌丝或其孢子在无菌操作台接种于SDA（沙氏弱葡萄糖培养基）中，在37℃，相对湿度80%左右条件下培养6天，用含0.05%（体积百分比）吐温80水充分洗脱孢子，并将其孢子溶液装入2mL无菌离心管中备用。
2. 黑曲霉孢子计数
将上步收获的黑曲霉孢子溶液充分摇匀后，立即用移液器将溶液加入细胞计数板计数室中，置显微镜（10×10）下计数，对于压线的孢子采用“计上不计下，计左不计右”的原则，每份溶液计数3次，计算平均值为该份溶液最终孢子浓度。
3. 黑曲霉孢子溶液配制
以0.05%吐温80水为溶剂，根据上步测算的黑曲霉孢子溶液浓度，计算黑曲霉孢子溶液、0.05%吐温80水添加量以配制不同浓度梯度的黑曲霉孢子溶液，装于50mL无菌烧杯中备用。
4. 黑曲霉孢子对长角血蜱幼虫攻毒实验
在黑曲霉孢子为1×103个/mL～1×109个/mL浓度区间，以不同浓度黑曲霉孢子溶液为试验组，以0.05%吐温80水溶液为对照组，每个试验组及对照组设多个重复，每个试验组接种一定数量长角血蜱幼虫。
用无菌毛刷将长角血蜱幼虫转入黑曲霉孢子溶液或0.05%吐温80水溶液中，浸没15～60s，然后将长角血蜱幼虫转入滤纸上吸取多余液体后，将其转入无菌青霉素瓶中，瓶口用三层灭菌纱布覆盖并以橡皮筋扎紧，随后将瓶子置25～30℃，相对湿度60%～90%温箱中，逐日观察并记录虫体死亡数量。
5. 黑曲霉孢子对长角血蜱致死性评估
计算各组不同时间的虫体平均死亡率，以此评估不同时间、不同黑曲霉孢子浓度对长角血蜱致病性。
虫体在以下状态视为死亡：
在强光照射下观察虫体，虫体不爬行，肢端不活动；
用无菌昆虫针刺激仍不活动者；
虫体体表长出菌丝。
实施例一：黑曲霉防控长角血蜱的验证实验
分别配制黑曲霉孢子溶液作为试验组，使黑曲霉孢子浓度达到1×106个/mL、1×107个/mL、1×108个/mL，另以0.05%吐温80水溶液作为对照组，各试验组及对照分别设3个重复，每个重复20只长角血蜱幼虫。
以无菌毛刷将长角血蜱幼虫转入三种黑曲霉孢子溶液及0.05%吐温80水溶液中，浸没30秒钟，然后将长角血蜱幼虫转入滤纸上吸取多余液体后，将其转入无菌青霉素瓶中，瓶口用三层灭菌纱布覆盖并以橡皮筋扎紧，随后将瓶子置28℃，相对湿度约80%恒温箱中，逐日观察并记录虫体死亡数量。试验结果见表1及图1、图2。
表1不同处理下的长角血蜱幼虫死亡率统计
Figure 117286DEST_PATH_IMAGE001
。
从表1可以看出，黑曲霉孢子对长角血蜱幼虫从接种后第6天开始虫体出现死亡，到接种后8～9天死亡数量超过50%，到接种后第11天虫体全部死亡。实验表明1×106个/mL～1×109个/mL黑曲孢子溶液对长角血蜱幼虫具有致死作用（长角血蜱幼虫体壁尚未发育完善，抵抗力弱，同时具有聚集性特点，黑曲霉孢子黏附在长角血蜱幼虫体表后，在适宜的温度湿度条件下以长角血蜱幼蜱身体为营养基质迅速繁殖，从而将虫体杀灭），且随黑曲霉孢子浓度增加其致死性增强。
从图1中可以看出，以0.05%吐温80水溶液处理11天后，长角血蜱幼虫仍正常聚集或爬行；从图2中可以看出，以1×106个/mL黑曲霉孢子溶液处理11天及以 1×107个/mL黑曲霉孢子溶液处理11天后，长角血蜱幼虫体死亡，体表长出黑曲霉菌丝。
尽管已描述了本发明申请的一些优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本申请进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本申请的这些修改和变型属于本申请权利要求及其等同技术的范围之内，则本实发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (5)

1.黑曲霉或其孢子在蜱虫防控中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述蜱虫为长角血蜱。
3.一种蜱虫防控生物制剂，其特征在于，含有黑曲霉菌丝或/和黑曲霉孢子。
4.权利要求3所述蜱虫防控生物制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将黑曲霉菌丝或在孢子在无菌操作条件接种于沙氏弱葡萄糖培养基中，于35～38℃、相对空气湿度75～85%的条件下培养4～7天；
（2）再以吐温水溶液充分洗脱黑曲霉菌孢子，收集孢子，并吐温水溶液配制浓度为1×103个/mL～1×109个/mL的黑曲霉孢子溶液，即成。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤（2）中，所述吐温水溶液为体积百分比浓度0.05%的吐温80水溶液。
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