CN115340950A - 一种营养促生长的微生物发酵工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明提供的一种营养促生长的微生物发酵工艺，有效提高了微生物发酵生产效果，其解决的技术方案是，包括以下几个步骤：步骤一：配制试管培养基；步骤二：将试管培养基灭菌；步骤三：将微生物菌种接种到试管培养基内部；步骤四：将试管放入冰箱中冷藏；步骤五：取出试管放入生化培养箱中进行培养；步骤六：通过接种操作将试管培养基中的微生物菌种接种到锥形瓶内部；步骤七：将锥形瓶内部的微生物菌种通过接种操作接种到40L种子罐内部；步骤八：将微生物菌种从40L种子罐内部转移到200L种子罐内部；步骤九：将微生物菌种从200L种子罐内部转移到2吨种子罐内部，完成微生物发酵过程，本发明可以培养出高质量的生产种子供发酵生产使用。
Description
技术领域
本发明涉及发酵工艺，特别是一种营养促生长的微生物发酵工艺。
背景技术
菌种的扩大培养是发酵生产的第一道工序，该工序又称之为种子制备，种子制备不仅要使菌体数量增加，更重要的是，经过种子制备培养出具有高质量的生产种子供发酵生产使用，提供发酵产量高、生产性能稳定、数量足够而且不被其他杂菌污染的生产菌种，是种子制备工艺的关键，菌种扩大培养法是对保藏菌种进行活化和逐级繁殖培养，从而为发酵生产提供相当数量代谢旺盛并满足一定生理要求的微生物种子的方法，现代的发酵工业生产规模越来越大，发酵罐的容积一般都在几十至几百立方米，有的甚至可达数千立方米，要使微生物在较短时间内，完成如此巨大的发酵转化任务，必须具备相当数量的微生物种子，因此菌种的扩大培养是任何发酵生产过程都不可或缺的重要环节，菌种扩大培养的过程一般为：保藏菌种首先经过琼脂斜面活化，然后经摇瓶或茄形培养瓶繁殖培养，最后转入种子罐进行扩大培养，种子罐级数可根据种子罐和发酵罐容积以及接种量的要求确定，一般为一级或二级，有些发酵过程如链霉素生产采用三级种子罐进行菌种的扩大培养，但是现有的微生物发酵工艺中，在菌种扩大培养的操作过程中容易出现杂菌污染的情况，影响菌种扩大培养效果，而且使用现有的菌种扩大培养方法培养出的菌种繁殖速度慢代谢较慢，导致菌种数量达不到需求从而影响发酵产量。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明提供了一种营养促生长的微生物发酵工艺，工艺流程全程使用无菌操作有效避免了在菌种扩大培养的操作过程中出现杂菌污染的情况，避免影响菌种扩大培养效果，通过本发明一系列的工艺流程可以培养出高质量的生产种子供发酵生产使用，能够提供发酵产量高、生产性能稳定、数量足够而且不被其他杂菌污染的生产菌种，有利于缩短发酵时间，提高发酵罐的利用率。
其解决的技术方案是，包括以下几个步骤：
步骤一：配制试管培养基，培养基成分由蛋白胨、营养琼脂和牛肉膏组成；
步骤二：将试管培养基放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌，设置高压蒸汽灭菌锅的灭菌温度为121.3℃,灭菌时间设置为30分钟；
步骤三：在超净工作台上进行无菌操作，将微生物菌种接种到试管培养基内部；
步骤四：将接种完毕放置有微生物菌种的试管放入冰箱中冷藏，冷藏温度设置为10℃；
步骤五：取出放置有微生物菌种和培养基的试管放入生化培养箱中进行培养，生化培养箱培养温度设置为30℃，培养时间为24-48小时；
步骤六：取一个锥形瓶并向锥形瓶内部加入营养液，然后将锥形瓶放入高压蒸汽灭菌锅中，设置高压蒸汽灭菌锅的灭菌温度为121.3℃,灭菌时间设置为30分钟，杀灭杂菌，然后通过超净工作台进行接种操作将试管培养基中的微生物菌种接种到锥形瓶内部；
步骤七：将锥形瓶放入水浴恒温振荡器中进行摇瓶培养5-10天，然后将锥形瓶内部的微生物菌种通过接种操作接种到40L种子罐内部，并采用液体深层培养法进行培养，种子罐从罐底部通气，送入的空气由搅拌桨叶分散成微小气泡以促进氧的溶解；
步骤八：将微生物菌种从40L种子罐内部转移到200L种子罐内部，采用液体深层培养法进行培养；
步骤九：将微生物菌种从200L种子罐内部转移到2吨种子罐内部，采用液体深层培养法进行培养，完成微生物发酵过程。
本发明有益效果是：
1.工艺流程全程使用无菌操作有效避免了在菌种扩大培养的操作过程中出现杂菌污染的情况，避免影响菌种扩大培养效果；
2.通过本发明一系列的工艺流程可以培养出高质量的生产种子供发酵生产使用，能够提供发酵产量高、生产性能稳定、数量足够而且不被其他杂菌污染的生产菌种，有利于缩短发酵时间，提高发酵罐的利用率。
附图说明
图1为本发明的工艺流程图。
具体实施方式
以下结合附图1对本发明的具体实施方式做出进一步详细说明。
步骤一：配制试管培养基，培养基成分由蛋白胨、营养琼脂和牛肉膏组成；
微生物的培养基多采用碳源较少而氮源丰富的配方，碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境，不利于菌种孢子的形成，氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成，试管培养基中蛋白胨、营养琼脂和牛肉膏作为有机氮源为微生物提供养分。
步骤二：将试管培养基放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌，设置高压蒸汽灭菌锅的灭菌温度为121.3℃,灭菌时间设置为30分钟；
对试管培养基进行高温高压蒸汽灭菌，杀灭试管表面和内部以及培养基中的杂菌，防止微生物被杂菌污染，避免影响菌种扩大培养效果。
步骤三：在超净工作台上进行无菌操作，将微生物菌种接种到试管培养基内部；
超净工作台内部形成局部无菌无尘环境，使得微生物菌种接种到试管培养基内部时不会收到杂菌和粉尘的污染。
步骤四：将接种完毕放置有微生物菌种的试管放入冰箱中冷藏，冷藏温度设置为10℃；
通过冷冻保藏法使微生物菌种的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，在一定的时间内使其不发生变异而又保持生命力。
步骤五：取出放置有微生物菌种和培养基的试管放入生化培养箱中进行培养，生化培养箱培养温度设置为30℃，培养时间为24-48小时；
30℃为适宜菌种繁殖生长的温度，有利于迅速提高菌种的数量。
步骤六：取一个锥形瓶并向锥形瓶内部加入营养液，然后将锥形瓶放入高压蒸汽灭菌锅中，设置高压蒸汽灭菌锅的灭菌温度为121.3℃,灭菌时间设置为30分钟，杀灭杂菌，然后通过超净工作台进行接种操作将试管培养基中的微生物菌种接种到锥形瓶内部；
对锥形瓶进行高温高压蒸汽灭菌，杀灭锥形瓶表面和内部以及锥形瓶内部的营养液中的杂菌，通过超净工作台内部的局部无菌无尘环境进行接种操作将试管培养基中的微生物菌种接种到锥形瓶内部，避免了接种过程中的杂菌污染，同时这一步操作将固体培养基上培养出的孢子或菌体转入到液体培养基中培养，使其繁殖成大量菌丝或菌体，锥形瓶相当于微缩了的种子罐，使菌种在其内部初步繁殖。
步骤七：将锥形瓶放入水浴恒温振荡器中进行摇瓶培养5-10天，然后将锥形瓶内部的微生物菌种通过接种操作接种到40L种子罐内部，并采用液体深层培养法进行培养，种子罐从罐底部通气，送入的空气由搅拌桨叶分散成微小气泡以促进氧的溶解；
锥形瓶内的微生物菌种经过摇瓶培养后大量繁殖，然后将锥形瓶内的微生物菌种通过40L种子罐上方开设的接种口进行接种操作接种到40L种子罐内部，此时的微生物菌种称为一级种子，为了使一级种子迅速生长和发酵采用液体深层培养法进行培养，40L种子罐从罐底部通气，送入的空气由搅拌桨叶分散成微小气泡以促进氧的溶解，这样就可以按照生产菌种对于代谢的营养要求以及不同生理时期的通气、搅拌、温度与培养基中氢离子浓度等条件，选择最佳培养条件。
步骤八：将微生物菌种从40L种子罐内部转移到200L种子罐内部，采用液体深层培养法进行培养；
40L种子罐内部的微生物菌种大量形成并达到一定生长阶段后，需要在更大的种子罐内才能继续进行生长繁殖，将一级种子从40L种子罐接入体积较大的200L种子罐内，经过培养形成更多的菌丝，这样制备的种子称为二级种子，同样二级种子也采用液体深层培养法进行培养。
步骤九：将微生物菌种从200L种子罐内部转移到2吨种子罐内部，采用液体深层培养法进行培养，完成微生物发酵过程；
将200L种子罐内的二级种子转入2吨种子罐内进行发酵，称为三级发酵，同样继续采用液体深层培养法进行培养，这样就完成了微生物的发酵过程，通过三级发酵的工艺流程可以培养出高质量的生产种子供发酵生产使用，能够提供发酵产量高、生产性能稳定、数量足够而且不被其他杂菌污染的生产菌种，有利于缩短发酵时间，提高发酵罐的利用率。
Claims (1)
1.一种营养促生长的微生物发酵工艺，其特征在于，包括以下几个步骤：
步骤一：配制试管培养基，培养基成分由蛋白胨、营养琼脂和牛肉膏组成；
步骤二：将试管培养基放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌，设置高压蒸汽灭菌锅的灭菌温度为121.3℃,灭菌时间设置为30分钟；
步骤三：在超净工作台上进行无菌操作，将微生物菌种接种到试管培养基内部；
步骤四：将接种完毕放置有微生物菌种的试管放入冰箱中冷藏，冷藏温度设置为10℃；
步骤五：取出放置有微生物菌种和培养基的试管放入生化培养箱中进行培养，生化培养箱培养温度设置为30℃，培养时间为24-48小时；
步骤六：取一个锥形瓶并向锥形瓶内部加入营养液，然后将锥形瓶放入高压蒸汽灭菌锅中，设置高压蒸汽灭菌锅的灭菌温度为121.3℃,灭菌时间设置为30分钟，杀灭杂菌，然后通过超净工作台进行接种操作将试管培养基中的微生物菌种接种到锥形瓶内部；
步骤七：将锥形瓶放入水浴恒温振荡器中进行摇瓶培养5-10天，然后将锥形瓶内部的微生物菌种通过接种操作接种到40L种子罐内部，并采用液体深层培养法进行培养，种子罐从罐底部通气，送入的空气由搅拌桨叶分散成微小气泡以促进氧的溶解；
步骤八：将微生物菌种从40L种子罐内部转移到200L种子罐内部，采用液体深层培养法进行培养；
步骤九：将微生物菌种从200L种子罐内部转移到2吨种子罐内部，采用液体深层培养法进行培养，完成微生物发酵过程。
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