CN115335069A - 包含胡萝卜的地上部分提取物的脱发防止以及生发促进用组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种包含胡萝卜的地上部分提取物，从而可以防止脱发并促进生发的组合物。本发明的包含胡萝卜的地上部分提取物的组合物，可以显著提升真皮乳头细胞的生存能力并抑制5α‑还原酶(5α‑reductase)的表达，从而呈现出优秀的脱发防止以及生发促进的效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种包含胡萝卜的地上部分提取物，从而可以防止脱发并促进生发的组合物。本申请主张以2020年07月20日所申请的韩国专利申请第10-2020-0089738号为基础的优先权，相应申请的说明书以及附图中所记载的所有内容通过引用并入本申请。
背景技术
脱发是指因为在毛囊的生长周期中从退行期或休止期的毛囊生长的毛发的比例大于从生长期的毛囊生长的毛发而导致的非正常脱落的毛发增加的现象。
目前已经得知，导致如上所述的脱发的原因包括与毛发周期调节相关的真皮乳头细胞(dermal papilla cell)以及毛母细胞(germinal matrix cell)的功能降低或增殖抑制、雄性激素的过剩作用、毛囊中的血流量的减少、皮脂分泌过剩、因为过氧化物和细菌等而导致的头皮功能降低、遗传因素、老化以及因为压力而导致的神经症等，多种原因可能会单独或组合作用。
最近因为如大气污染等环境因素以及精神压力等问题，越来越多的现代人遇到了脱发问题且其发生年龄也在逐渐减少。如上所述的脱发症会对当事人造成严重的压力并在人际关系方面造成困难，因此人们对脱发的治疗以及预防方面的关注度也在日益增加。
在脱发治疗中可以使用多种外用剂，目前使用最为广泛的是已经获得美国食品及药物管理局(FDA)批准的厄普约翰(Upjohn)公司的含米诺地尔的制剂，而最近默克(Merck)公司开始销售将具有2型(Type 2)的5α-还原酶抑制效果的非那雄胺(finasteride)作为主成分的保发止(Propecia)。但是，米诺地尔会导致出现如瘙痒以及刺激等副作用的问题，非那雄胺会导致在停止使用之后的两个月之内恢复到原状态的问题和如性欲减退以及阳痿等性功能减退等副作用，而女性因为具有可能产下畸形儿的危险而无法服用。
此外，虽然正在开展以副作用较少的天然物质即如川芎、桑黄菇、金银花以及甘菊等的提取物和如何首乌、菖蒲、石榴以及银杏等的叶提取物等天然提取物为基础的研究活动，但是在将如上所述的生发剂实际应用于临床时作用于头皮的效果名不显著。
在韩国注册专利第10-2065395号中，公开了一种包含如山茶花、辣椒籽、茄子、芦荟、九节草、胡萝卜、菠菜、补骨脂、桑白皮、生姜、莲藕、蒲公英、文珠兰、红花、绿茶、鱼腥草、姜黄、银杏叶以及石菖蒲等的天然提取物的生发剂组合物，而且人们也正在持续开展与由可呈现出如上所述的优秀效果的同时副作用较少的天然物质构成的脱发及或生发剂的研究活动。
先行技术文献
专利文献
(专利文献1)韩国注册专利第10-2065395号
发明内容
为此，本发明人为了开发出可以呈现出优秀的脱发防止以及生发促进的效果的组合物而经过不懈的研究努力，确认了胡萝卜的地上部分提取物中所含有的天然物质的副作用较少且具有优秀的脱发防止以及生发促进效果，从而完成了本发明。
因此，本发明的目的在于提供一种包含胡萝卜的地上部分提取物的脱发防止或生发促进用组合物。
本发明提供一种包含胡萝卜的地上部分提取物的脱发防止或生发促进用组合物。
所述胡萝卜的地上部分可以是叶、花、茎、芽或所述之混合物。
所述胡萝卜的地上部分提取物可以通过将胡萝卜的地上部分利用水、C1～C4的醇或所述之混合物作为溶剂进行提取而获得。
所述胡萝卜的地上部分提取物的浓度可以是0.001～0.02重量％。
所述脱发防止或生发促进用组合物可以抑制5α-还原酶(5α-reductase)。
此外，本发明提供一种包含将胡萝卜的地上部分投入到将水与乙醇以1:9～5:5的重量比进行混合的混合容器中并在常温下进行提取而获得的胡萝卜的地上部分提取物的皮肤外用药学组合物。
此外，本发明提供一种包含将胡萝卜的地上部分投入到将水与乙醇以1:9～5:5的重量比进行混合的混合容器中并在常温下进行提取而获得的胡萝卜的地上部分提取物的化妆品组合物。
本发明的包含胡萝卜的地上部分提取物的组合物，可以显著提升真皮乳头细胞的生存能力并抑制5α-还原酶(5α-reductase)的表达，从而呈现出优秀的脱发防止以及生发促进的效果。
具体实施方式
接下来，将对本发明进行详细的说明。在此之前需要说明的是，在本说明书以及权利要求书中所使用的术语或单词不应该限定于一般的或词典上的含义做出解释，而是应该立足于发明人可以为了以最佳的方法对自己的发明进行说明而对术语的概念做出适当定义的原则，以符合本发明之技术思想的含义以及概念做出解释。因此，在本说明书的实施例中所记载的构成只是本发明的最较佳的一实施例，并不能代表本发明的所有技术思想，应该理解在提交本申请的时间点上可能会有可替代的多种均等物以及变形例。
本发明的脱发防止或生发促进用组合物包含胡萝卜(carrot，Daucus carota)的地上部分提取物。
所述胡萝卜的地上部分可以是叶、花、茎、芽或所述之混合物，较佳地可以包含叶以及茎的提取物。
所述胡萝卜的地上部分提取物可以通过将胡萝卜的地上部分利用水、C1～C4的醇或所述之混合物作为溶剂进行提取而获得，较佳地，可以使用水与乙醇的混合物，更较佳地，可以使用将水与乙醇以1:9～5:5的重量比进行混合的混合溶剂。
所述胡萝卜的地上部分提取物可以通过将胡萝卜的地上部分在常温下进行提取而获得，较佳地，可以在10～30℃，更较佳地，可以在15～25℃的温度范围内进行提取而获得。
所述胡萝卜的地上部分提取物在组合物内的浓度可以是0.001～1重量％，较佳地，其浓度可以是0.005～0.05重量％，最较佳地，其浓度可以是0.01～0.02重量％。
本发明的组合物可以显著提升真皮乳头细胞的生存能力并抑制5α-还原酶(5α-reductase)的表达。
人类的真皮乳头细胞是存在于毛囊的基底部的细胞，通过向构成毛囊的细胞供应氧气和养分而起到促进毛发生长以及毛囊周期调节的作用。因此，可以通过促进真皮乳头细胞的增殖而确保头发健康，并通过促进毛发生长而防止脱发。头发的生长是通过围绕真皮乳头(dermal papilla)的上皮细胞(ephtielial cell)分裂并形成毛干(hair shaft)的过程实现，因此真皮乳头细胞起到对上皮细胞的分裂进行调节的重要作用。此外，在雄性脱发症中，雄性激素作用于毛囊的部位同样是真皮乳头，因此真皮乳头细胞对于生发起到非常重要的作用。
此外，目前已经得知5α-还原酶(5α-reductase)具有一型以及二型的同工酶，其中一型5α-还原酶(5α-reductase-1)主要分布于如真皮乳头细胞、皮脂腺、表皮以及毛囊的角质形成细胞等，而二型5α-还原酶(5α-reductase-2)主要分布于如前列腺、生殖器皮肤、精囊以及附睾丸等。5α-还原酶是通过与睾酮作用而生成诱发脱发的主要因素即二氢睾酮(DHT，Dihydrotestosterone)的酶，目前已经得知人类真皮乳头细胞中的5α-还原酶-1(5α-reductase-1)基因表达的减少会对脱发防止造成影响。
所述组合物在作为皮肤外用药学组合物时，可以是如霜剂、凝胶剂、贴剂、喷雾剂、软膏剂、硬膏剂、洗剂、搽剂、糊剂或泥罨剂等剂型，但是并不限定于此。
此外，所述组合物在作为化妆品组合物时，可以是如生发油、护发素、护发精华、护发洗剂、护发乳液、洗发水、染发液、焗油膏、护发乳、头发滋养霜、头发保湿霜、头发按摩膏、发蜡、头发气溶胶、发膜、头发滋养膜、洗发香皂、洗发泡沫、发油、干发剂、护发剂、染发剂、烫发剂、头发漂白剂、发胶、发釉、美发剂、定型啫喱、滋发露、摩丝或定型液等剂型，但是并不限定于此。
所述组合物除所述胡萝卜的地上部分提取物之外黑可以包含在化妆品组合物中通常使用的成分。例如，可以包含如脂肪类物质、有机溶剂、增溶剂、增稠剂、凝胶化剂、软化剂、抗氧化剂、助悬剂、稳定剂、发泡剂(foaming agent)、芳香剂、表面活性剂、水、离子或非离子乳化剂、填充剂、金属粒子螯合剂、络合剂、防腐剂、维生素、封闭剂、湿润剂、精油、染料、颜料、亲水或亲油活性剂、脂质囊泡或在化妆品中通常使用的任意其他成分等在化妆品学或皮肤科学领域通常使用的辅助剂。所述辅助剂以在化妆品学或皮肤科学领域通常使用的量添加。
接下来，为了对本发明进行具体的说明，将对其实施例以及试验例进行详细的说明。但是，适用本发明的实施例可以便形成多种不同的形态，本发明的范围并不应该解释为因为在下述内容中进行详细说明的实施例而受到限定。本发明的实施例只是为了向具有相关技术领域之平均知识的人员更加完整地说明本发明而提供。
实施例：胡萝卜的地上部分提取物的制造
在将胡萝卜的叶利用蒸馏水进行洗涤之后干燥，接下来通过利用粉碎机进行粉碎而获得微细粉末试料。接下来，以与所述微细粉末试料相比的大约20倍体积的量添加将乙醇与纯净水以7:3的重量比进行混合的溶剂，然后在25℃下进行第一次提取。在执行所述提取之后利用400目的过滤布进行过滤，接下来利用减压浓缩机对所获得的过滤液进行浓缩，然后通过将浓缩液以5mg/mL的浓度溶解到纯净水中而制造出储藏溶液。此外，在下述试验中使用将通过利用纯净水对所述储藏溶液进行稀释而调节至个别浓度的作业溶液。
试验例1：细胞的培养
真皮乳头细胞的培养
从PromoCell购买人真皮乳头细胞(Human Follicle Dermal Papilla Cell)并利用含有胎牛血清(Fetal Calf Serum)、牛垂体提取物(Bovine Pituitary Extract)、碱性成纤维细胞生长因子(Basic Fibroblast Growth Factor)以及胰岛素(Insulin)的人毛囊真皮乳头细胞生长培养基(Human Follicle Dermal Papilla Cell Growth Medium)在37℃下利用5％CO2恒温器进行培养。
MCTT HCETM的培养
MCTT HCETM是一种利用人角膜上皮细胞重现角膜上皮的人角膜模型(组织)，购买并使用了韩国Bio Solutions所制作的组织。将放置在琼脂糖胶上的组织转移到24孔板(24well plate)并在37℃下利用5％CO2恒温器进行预培养。
试验例2：细胞毒性评估
噻唑蓝试验(MTT as say)
噻唑蓝试验(MTT assay)是一种利用噻唑蓝(MTT，3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑)与活细胞的脱氢酶(Dehydrogenase)发生反应而生成紫色的甲臜(formazan)的原理对细胞生存率进行测定的代表性方法。
为了对细胞毒性进行确认，在将人真皮乳头细胞按照1×104细胞(cells)/mL分株到48孔板(well plate)并在达到80％以上时按照下述表1中的浓度对所述实施例的提取物进行处理之后，进行24小时的培养。接下来，向培养基分别投入200μL的经过稀释的噻唑蓝(MTT)0.5mg/mL溶液并在37℃下进行四个小时的培养。去除溶液并投入200μL的二甲基亚砜(DMSO)，接下来在将100μL转移到96孔板(well plate)之后，利用酶标仪对在585nm下的吸光度进行了测定。在计算出各个试料组的平均吸光度值之后，通过与对照组的吸光度值进行比较而对细胞生存率进行了评估。
【表1】
如上述表1所示，可以确认在利用0.02重量％以下的所述实施例的提取物进行处理的情况下并没有呈现出细胞毒性，而在浓度超过0.05重量％的情况下则会因为细胞毒性过大而导致细胞生存率的急剧下降。
试验例3：真皮乳头细胞的细胞生存率
在将所述经过培养的人真皮乳头细胞按照1×104细胞(cells)/mL分株到48孔板(well plate)并在达到80％以上时按照下述表2中的浓度对所述实施例的提取物进行处理。作为阳性对照组，利用10以及50μM浓度的米诺地尔进行处理。在将细胞培养24、48以及72小时之后，向培养基分别投入200μL的经过稀释的噻唑蓝(MTT)0.5mg/mL溶液并在37℃下进行四个小时的培养。去除溶液并投入200μL的二甲基亚砜(DMSO)，接下来在将10μL转移到96孔板(well plate)之后，利用酶标仪对在585nm下的吸光度进行了测定。在计算出各个试料组的平均吸光度值之后，通过与对照组的吸光度值进行比较而对细胞生存率进行了评估。
【表2】
如上述表2所示，可以确认在以0.01～0.02重量％的实施例的提取物进行处理的情况下，与阳性对照组即米诺地尔相比，人真皮乳头细胞的细胞生存率有所上升。
此外，为了对不同溶剂组成下的效果进行确认，在使用水溶剂(比较例1)以及将水与乙醇按照7:3的重量比进行混合的混合溶剂(比较例2)制造出胡萝卜的地上部分提取物之后，按照与上述内容相同的方式执行了人真皮乳头细胞的生存率试验。
【表3】
【表4】
如上述表3所示，可以确认在利用纯净水进行提取的情况下，人真皮乳头细胞的生存率大部分呈现出100％以下的结果只，这表明利用纯净水作为溶剂的胡萝卜的地上部分提取物实际上并没有脱发改善效果。
此外，可以确认所述表4中的9个单元格的比较例1/实施例的比例(％)平均约为78.5％，这表明与使用水溶剂进行提取的情况相比，在利用70重量％的乙醇提取出胡萝卜的地上部分提取物的情况下可以呈现出明显较高的人真皮乳头细胞的生存率。
【表5】
【表6】
可以确认所述表6中的9个单元格的比较例2/实施例的比例(％)平均约为81.2％，这表明与使用30重量％的乙醇进行提取的情况相比，在利用70重量％的乙醇提取出胡萝卜的地上部分提取物的情况下可以呈现出明显较高的人真皮乳头细胞的生存率。
接下来，为了对不同提取温度下的效果进行确认，在使用70重量％的乙醇的同时加热至80℃获取提取物之后(比较例3)，对人真皮乳头细胞的生存比例进行了测定。
【表7】
【表8】
如上述表1所示，在本申请的发明中，人真皮乳头细胞的生存率伴随着时间的经过随之增加，但是在所述表7的比较例3中，通过加热而获取的提取物却呈现出了生存率伴随着时间的经过随之减少的倾向。此外，在对两个结果进行比较的表8中，可以确认加热提取物与常温提取物相比，在经过72小时之后只能呈现出大约85％水准的效果。
借此，可以确认所述实施例的提取物可以通过提升真皮乳头细胞的生存能力而呈现出脱发防止以及头发生长促进效果。
试验例4：5α-还原酶-1(5α-reductase-1)的基因表达评估
实时聚合酶链反应(QRT-PCR)
本试验是利用实时聚合酶链反应对5α-还原酶-1(5α-reductase-1)的基因表达程度进行确认的方法。将从细胞提取出的核糖核酸(RNA)利用逆转录酶转换成互补脱氧核糖核酸(cDNA)之后通过聚合酶链反应进行扩增，从而可以实时且相对地对相应基因的表达量进行比较。
在将所述经过培养的人真皮乳头细胞按照2×105细胞(cells)/mL分株到6孔板(well plate)并在达到90％以上时利用所述实施例的提取物对各个孔(well)进行处理，然后进行24小时的培养。接下来，利用0.05％的胰蛋白酶-乙二胺四乙酸(Trypsin-EDTA，Gibco)进行处理，并利用RNA extraction kit(RNeasy mini kit，Qiagen)对细胞内的总核糖核酸(total RNA)进行提取，然后将所提取出的总核糖核酸(RNA)利用RNA to cDNAEcoDryTM Premix(Oligo dT)(Clontech)合成出互补脱氧核糖核酸(cDNA)。利用所合成出的互补脱氧核糖核酸(cDNA)、Taqman Fast Advanced Master Mix(Applied Biosystems)以及各个靶标的Taqman primer(5α-reductase-1:Hs00971645_g1，Applied Biosystems)执行实时聚合酶链反应，并利用管家基因(housekeeping gene)即甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)(Hs02786624_g1，Applied Biosystems)对各个基因进行了相对定量分析。
在对互补脱氧核糖核酸(cDNA)进行扩增时，通过实时地对其扩增量进行确认而获得扩增曲线与阈值线之间的交叉点即阈值周期(CT)，接下来通过以所述值为基础计算出相对定量值(RQ)而对靶标基因的相对信使核糖核酸(mRNA)表达量进行确认。所述相对定量值(RQ)是通过下述公式进行计算。
【数学式1】
RQ＝2-ΔΔCT
ΔΔCT＝ΔCT(treatment，试验组)-ΔCT(control，对照组)
ΔΔCT＝CT(target gene，靶标基因)-CT(housekeeping gene，管家基因)
-treatment(试验组)：利用实施例处理
-control(对照组)：阴性对照组
-target gene(靶标基因)：5α-还原酶-1(5α-reductase-1)
-housekeeping gene(管家基因)：甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)
【表9】
如上述表9所示，可以确认实施例的胡萝卜的地上部分提取物与阴性对照组相比可以抑制5α-还原酶-1(5α-reductase-1)的基因(信使核糖核酸，mRNA)表达。
Claims (7)
1.一种脱发防止或生发促进用组合物，其特征在于：
包含胡萝卜的地上部分提取物。
2.根据权利要求1所述的脱发防止或生发促进用组合物，其特征在于：
所述胡萝卜的地上部分为叶、花、茎、芽或所述之混合物。
3.根据权利要求1所述的脱发防止或生发促进用组合物，其特征在于：
所述胡萝卜的地上部分提取物是通过将胡萝卜的地上部分利用水、C1～C4的醇或所述之混合物作为溶剂进行提取而获得。
4.根据权利要求1所述的脱发防止或生发促进用组合物，其特征在于：
所述胡萝卜的地上部分提取物的浓度为0.001～0.02重量％。
5.根据权利要求1所述的脱发防止或生发促进用组合物，其特征在于：
所述组合物抑制5α-还原酶。
6.一种皮肤外用药学组合物，其特征在于：
包含胡萝卜的地上部分提取物，
所述胡萝卜的地上部分提取物是通过将胡萝卜的地上部分投入到将水与乙醇以1:9～5:5的重量比进行混合的混合容器中并在常温下进行提取而获得。
7.一种化妆品组合物，其特征在于：
包含胡萝卜的地上部分提取物，
所述胡萝卜的地上部分提取物是通过将胡萝卜的地上部分投入到将水与乙醇以1:9～5:5的重量比进行混合的混合容器中并在常温下进行提取而获得。
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