CN115308422B - 铁相关因子在诊断胆道闭锁中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及铁相关因子在诊断胆道闭锁中的应用。本发明首次公开了包含铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1、乳铁蛋白受体ITLN1中的至少一种的铁相关因子在胆道闭锁诊断或预后评估中的应用，通过ROC曲线可知，包含铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1、乳铁蛋白受体ITLN1中的至少一种的铁相关因子在胆道闭锁诊断或预后评估方面具有较好的效果。

Description

铁相关因子在诊断胆道闭锁中的应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及铁相关因子在诊断胆道闭锁中的应用。
背景技术
胆道闭锁(biliary atresia，BA)发生在婴幼儿围生期(例如，孕28周至出生后4周)，发病率在不同国家和地区从1/5000～1/18000不等。其病因及发病机理至今未明，一般认为由发育和/或环境因素(例如病毒感染等)共同决定，表现为由严重的胆管炎介导的肝外胆管阻塞引发的黄疸和肝衰竭疾病，预后差，病死率高。胆道闭锁的基本病理变化例如为肝内、外胆管进行性炎症、肝纤维化及肝硬化，其肝纤维化/肝硬化的发展比其他成人疾患更快且更具有侵袭性。虽然肝外胆道梗阻通过葛西手术(Kasais operation)能部分缓解症状，延缓病情进展，但大多数患儿仍因术后肝内胆管炎症呈进行性发展，最终导致肝硬化和门脉高压，甚至肝衰竭，成为危及患儿生命的严重疾病。因此，寻找BA早期诊断方法极其重要。
目前胆道闭锁诊断方法较多，但特异性均较差，其方法包括：(1)血清胆红素的动态观察；(2)超声检查；(3)99mTc-diethyl iminodiacetic acid(DIDA)排泄试验；(4)脂蛋白-X(Lp-x)定量测定；(5)胆汁酸定量测定；(6)肝穿刺病理组织学检查；(7)胆道造影检查。虽然胆道造影检查是目前诊断胆道闭锁的“金标准”，但其创伤性太大，实施该检查的患儿年龄普遍偏大，且脱离手术治疗的最佳时机。其他检查方法的特异性均较差。临床上缺乏与胆道闭锁相关的诊断标志物，因此寻找胆道闭锁的诊断标志物更加有助于胆道闭锁的诊断。
发明内容
本发明的第一方面的目的，在于提供检测铁相关因子的物质在制备胆道闭锁诊断或预后评估的产品中的应用。
本发明的第二方面的目的，在于提供用于胆道闭锁诊断或预后评估的标志物组合。
本发明的第三方面的目的，在于提供检测本发明第二方面的标志物的物质在制备胆道闭锁诊断或预后评估的产品中的应用。
本发明的第四方面的目的，在于提供用于胆道闭锁诊断或预后评估的产品。
本发明的第五方面的目的，在于提供胆道闭锁的诊断或预后评估的方法，包括使用本发明第四方面的产品的步骤。
本发明的第六方面的目的，在于提供诊断胆道闭锁或者评估胆道闭锁预后情况的方法，包括对本发明第一方面中的铁相关因子和/或本发明第二方面的标志物组合进行定性或定量或半定量的步骤。
本发明的第七方面的目的，提供一种利用上述第一方面的铁相关因子的物质或者第二方面的标志物组合来诊断胆道闭锁或评估胆道闭锁预后情况的检测系统/诊断系统。
为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一个方面，提供检测铁相关因子的物质在制备胆道闭锁诊断或预后评估的产品中的应用，所述铁相关因子包含铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1、乳铁蛋白受体ITLN1中的至少一种、至少两种、至少三种、至少四种或至少五种。
采用上述铁相关因子的物质，能够区分/准确区分胆道闭锁患者与健康人群，进一步地，能够区分/准确区分胆道闭锁患者与胆道闭锁相似疾病的患者，例如胆总管囊肿患者、胆汁淤积，从而用于制备胆道闭锁诊断或预后评估的产品。
优选地，检测铁相关因子的物质在制备胆道闭锁诊断或预后评估的产品中的应用，所述应用包括区分胆道闭锁与胆道闭锁相似疾病，例如区分胆道闭锁与胆总管囊肿，区分胆道闭锁与胆汁淤积。
进一步优选地，检测铁相关因子的物质在制备区分胆道闭锁与胆总管囊肿的产品中的应用，所述铁相关因子包含铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1、乳铁蛋白受体ITLN1中的至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、或至少五种。
进一步优选地，检测铁相关因子的物质在制备区分胆道闭锁与胆汁淤积的产品中的应用，所述铁相关因子包含铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1、乳铁蛋白受体ITLN1中的一种或一种以上。
优选地，所述铁相关因子包含铁离子。
优选地，所述铁相关因子来自待测对象的体液、血液、组织、细胞、排泄物、皮肤中的至少一种；进一步优选地，所述铁相关因子来自待测对象的血液、组织、排泄物、皮肤中的至少一种。
优选地，所述铁相关因子为铁离子时，所述铁相关因子来自待测对象的血液、组织、排泄物中的至少一种；进一步优选地，所述铁相关因子为铁离子时，所述铁相关因子包含待测对象的血液、待测对象的粪便中的铁离子、待测对象的肝脏组织中的铁离子中的至少一种；更进一步优选地，所述铁相关因子为铁离子时，所述铁相关因子包含待测对象的血液和待测对象的粪便中的铁离子。
优选地，上述血液包括血清、血浆、干血斑、全血中的至少一种。
例如，在一个实施方式中，所述铁相关因子为干血斑铁离子和粪便铁离子，采用干血斑铁离子和粪便铁离子进行胆道闭锁诊断或预后评估。
优选地，所述铁相关因子为铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1和/或乳铁蛋白受体ITLN1时，所述铁相关因子来自待测对象的组织；更进一步优选地，所述铁相关因子为铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1和/或乳铁蛋白受体ITLN1时，所述铁相关因子来自待测对象的肝脏组织和/或肠道组织。
优选地，当待测对象满足（f1）～（f6）中至少一项，则诊断为胆道闭锁疾病患者；
（f1）体液、血液、组织和/或细胞中铁离子相对于参考水平显著升高；
（f2）SLC40A1相对于参考水平显著降低；
（f3）SLC46A1相对于参考水平显著降低；
（f4）SLC11A2相对于参考水平显著升高；
（f5）ITLN1相对于参考水平显著升高；
（f6）排泄物中铁离子相对于参考水平显著降低；
所述参考水平为未患有胆道闭锁疾病的同年龄段受试者的水平。
优选地，所述同年龄段受试者为健康人或患有胆道闭锁相似疾病的患者，例如胆总管囊肿患者、胆汁淤积。
本发明的第二个方面，提供用于胆道闭锁诊断或预后评估的标志物组合，包含：
（g1）铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1、乳铁蛋白受体ITLN1、铁调素中的至少两种。
或
提供用于胆道闭锁诊断或预后评估的标志物组合，包含：
（g2）血液中的铁离子、粪便中的铁离子、肝脏组织中的铁离子中的至少两种。
或
提供用于胆道闭锁诊断或预后评估的标志物组合，包含：
（g3）铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1、乳铁蛋白受体ITLN1、铁调素中的至少一种；和其他胆道闭锁检测指标，所述其他胆道闭锁检测指标包括：
硒离子、叶酸、谷胱甘肽、谷酰胺转移酶、GPX4、SELENOP、MMP7、胆红素、胆红素单葡萄糖醛酸酯、胆红素双葡萄糖醛酸酯、CD177+中性粒细胞、牛磺胆酸、NRF2、4-HNE、ENPP7、APOA4、APOA1中的至少一种。
优选地，所述（g1）包含：铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1 、乳铁蛋白受体ITLN1、铁调素中的至少一种和铁离子。
在一个具体的实施方式中，所述（g1）为铁离子和血红素转运蛋白SLC46A1。
优选地，所述（g1）为：铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1 、乳铁蛋白受体ITLN1中的至少一种和铁调素。
优选地，所述（g1）为：铁离子和铁调素。
在一个具体的实施方式中，所述（g1）为：血液中的铁离子和血液中的铁调素。
在一个具体的实施方式中，所述（g1）为：血液中的铁离子和肝脏组织中的铁调素。
优选地，所述（g2）为：血液中的铁离子和粪便中的铁离子。
优选地，所述（g3）为：铁离子；和
硒离子、叶酸、谷胱甘肽、谷酰胺转移酶、GPX4、SELENOP、MMP7、胆红素、胆红素单葡萄糖醛酸酯、胆红素双葡萄糖醛酸酯、CD177+中性粒细胞、牛磺胆酸、NRF2、4-HNE、ENPP7、APOA4、APOA1中的至少一种。
在一个具体的实施方式中，所述标志物组合为铁离子和叶酸，例如血液中的铁离子和叶酸。
在另一个具体的实施方式中，所述标志物组合为铁离子和硒离子，例如血液中的铁离子和硒离子。
在另一个具体的实施方式中，所述标志物组合为铁离子和谷胱甘肽，例如血液中的铁离子和肝脏组织中的谷胱甘肽。
在一个具体的实施方式中，所述标志物组合为铁离子和MMP7，例如血液中的铁离子和血液中的MMP7。
在一个具体的实施方式中，所述标志物组合为ENPP7和MMP7，例如血液中的ENPP7和血液中的MMP7。
在一个具体的实施方式中，所述标志物组合为铁离子和ENPP7，例如血液中的铁离子和血液中的ENPP7。
在一个具体的实施方式中，所述标志物组合为铁离子、ENPP7和MMP7，例如血液中的铁离子、血液中的ENPP7和血液中的MMP7。
在一个具体的实施方式中，所述标志物组合为铁离子和胆红素单葡萄糖醛酸酯，例如血液中的铁离子和血液中的胆红素单葡萄糖醛酸酯。
在一个具体的实施方式中，所述标志物组合为铁离子和胆红素双葡萄糖醛酸酯，例如血液中的铁离子和经皮胆红素双葡萄糖醛酸酯。
在一个具体的实施方式中，所述标志物组合为铁离子和CD177+中性粒细胞。
在一个具体的实施方式中，所述标志物组合为铁离子和牛磺胆酸（THCA)，例如血液中的铁离子和血液（如干血斑）中的THCA。
在一个具体的实施方式中，所述标志物组合为铁离子和谷酰胺转移酶。
优选地，所述标志物组合为铁离子，和“MMP7、胆红素单葡萄糖醛酸酯、胆红素双葡萄糖醛酸酯、CD177+中性粒细胞、牛磺胆酸、谷酰胺转移酶中的至少两种”联合。
例如，在一个具体的实施方式中，所述标志物组合为铁离子、MMP7和胆红素单葡萄糖醛酸酯。
在另一个具体的实施方式中，所述标志物组合为铁离子、MMP7和CD177+中性粒细胞。
优选地，当待测对象满足（h1）～（h24）中至少一项，则诊断为胆道闭锁疾病患者；
（h1）体液、血液、组织和/或细胞中铁离子相对于参考水平显著升高；
（h2）SLC40A1相对于参考水平显著降低；
（h3）SLC46A1相对于参考水平显著降低；
（h4）SLC11A2相对于参考水平显著升高；
（h5）ITLN1相对于参考水平显著升高；
（h6）排泄物中铁离子相对于参考水平显著降低；
（h7）叶酸相对于参考水平显著降低；
（h8）硒离子相对于参考水平显著降低；
（h9）谷胱甘肽相对于参考水平显著降低；
（h10）铁调素相对于参考水平显著升高；
（h11）GPX4相对于参考水平显著降低；
（h12）SELENOP相对于参考水平显著降低；
（h13）MMP7相对于参考水平显著升高；
（h14）胆红素相对于参考水平显著升高；
（h15）胆红素单葡萄糖醛酸酯相对于参考水平显著升高；
（h16）胆红素双葡萄糖醛酸酯相对于参考水平显著升高；
（h17）CD177+中性粒细胞相对于参考水平显著升高；
（h18）牛磺胆酸相对于参考水平显著升高；
（h19）NRF2相对于参考水平显著降低；
（h20）4-HNE相对于参考水平显著升高；
（h21）ENPP7相对于参考水平显著升高；
（h22）APOA4相对于参考水平显著升高；
（h23）APOA1相对于参考水平显著升高；
（h24）谷酰胺转移酶相对于参考水平显著升高。
所述参考水平为未患有胆道闭锁疾病的同年龄段受试者的水平。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h6）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h10）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h13）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h15）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h16）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h17）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h18）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h21）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h24）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h15）和（h16）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h13）和（h18）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h18）和（h21）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者。
优选地，所述同年龄段受试者为健康人或患有胆道闭锁相似疾病的患者，例如胆总管囊肿患者，胆汁淤积。
因此，采用上述标志物组合可以区分胆道闭锁患者与健康人群、区分胆道闭锁与胆总管囊肿、区分胆道闭锁与胆汁淤积等。
优选地，上述硒离子、叶酸、谷胱甘肽、谷酰胺转移酶、GPX4、SELENOP、MMP7、胆红素、胆红素单葡萄糖醛酸酯、胆红素双葡萄糖醛酸酯、CD177+中性粒细胞、牛磺胆酸、NRF2、4-HNE、ENPP7、APOA4、APOA1来自待测对象的体液、血液、组织、细胞、排泄物、皮肤中的至少一种，进一步优选地，来自于血液和/或肝脏组织。
进一步优选地，上述血液包括血清、血浆、干血斑、全血中的至少一种。
在一个优选的实施例中，胆红素包括经皮胆红素、和/或血清胆红素。
在一个优选的实施例中，牛磺胆酸为血液牛磺胆酸，例如干血斑牛磺胆酸。
在一个优选的实施例中，MMP-7为血清MMP-7。
本发明的第三个方面，提供检测本发明第二个方面的标志物组合的物质在制备胆道闭锁诊断或预后评估的产品中的应用。
优选地，所述应用包括将标志物组合使用在胆道闭锁诊断或预后评估的产品中，并且根据标志物或者产品选择的方法不同加入相应的物质，例如使用色谱方法的产品或者使用免疫荧光检测方法的产品中，在产品中加入检测所需要的辅助物质，作为一个示例，在包括本发明第二方面的标志物组合的胆道闭锁诊断或预后评估的产品中，包括了标志物组合或其相应的抗体以及标记的免疫荧光剂等。
优选地，所述检测硒离子的物质包含定量检测硒离子的物质。
优选地，所述检测硒离子的物质是用于选自以下一种或多种方法中的物质：比色法、化学发光法、原子吸收分光光度法、高效液相色谱法。
优选地，所述检测叶酸的物质包含定量检测叶酸的物质。
优选地，所述检测叶酸的物质是用于选自以下一种或多种方法中的物质：比色法、化学发光法、原子吸收分光光度法、高效液相色谱法。
优选地，所述检测谷胱甘肽的物质包含定量检测谷胱甘肽的物质。
优选地，所述检测谷胱甘肽的物质是用于选自以下一种或多种方法中的物质：比色法、化学发光法、原子吸收分光光度法、高效液相色谱法。
优选地，所述检测铁调素的物质包含定量检测铁调素的物质。
优选地，所述检测铁调素的物质是用于选自以下一种或多种方法中的物质：比色法、化学发光法、原子吸收分光光度法、高效液相色谱法。
优选地，所述检测GPX4的物质包含定量检测GPX4的物质。
优选地，所述检测GPX4的物质包含在基因水平和/或蛋白质水平上检测GPX4的物质。
优选地，所述检测GPX4的物质选自以下一种或多种检测技术或方法中的物质：免疫组织化学法、Western印迹法、Northern印迹法、PCR、生物芯片法。
优选地，所述免疫组织化学法选自：免疫荧光法、免疫酶标法（ELISA）和免疫胶体金法。
优选地，所述检测GPX4的物质选自：对GPX4具有特异性的物质、GPX4特异性的探针、基因芯片、PCR引物等。
优选地，所述对GPX4具有特异性的物质为（i1）~（i3）中的任一种：
（i1）特异性结合GPX4的抗体；
（i2）特异性结合GPX4的配体蛋白或多肽；
（i3）特异性识别GPX4的非蛋白类化合物。
优选地，所述的抗体包括多克隆抗体、单克隆抗体、单链抗体、功能性抗体片段、抗体Fab区，纳米抗体、嵌合抗体、多特异性抗体中的至少一种。
优选地，所述检测SELENOP的物质包含定量检测SELENOP的物质。
优选地，所述检测SELENOP的物质包含在基因水平和/或蛋白质水平上检测SELENOP的物质。
优选地，所述检测SELENOP的物质选自以下一种或多种检测技术或方法中的物质：免疫组织化学法、Western印迹法、Northern印迹法、PCR、生物芯片法。
优选地，所述免疫组织化学法选自：免疫荧光法、免疫酶标法（ELISA）和免疫胶体金法。
优选地，所述检测SELENOP的物质选自：对SELENOP具有特异性的物质、SELENOP特异性的探针、基因芯片、PCR引物等。
优选地，所述对SELENOP具有特异性的物质为（j1）~（j3）中的任一种：
（j1）特异性结合SELENOP的抗体；
（j2）特异性结合SELENOP的配体蛋白或多肽；
（j3）特异性识别SELENOP的非蛋白类化合物。
优选地，所述的抗体包括多克隆抗体、单克隆抗体、单链抗体、功能性抗体片段、抗体Fab区，纳米抗体、嵌合抗体、多特异性抗体中的至少一种。
优选地，当待测对象满足（h1）～（h24）中至少一项，则诊断为胆道闭锁疾病患者；
（h1）体液、血液、组织和/或细胞中铁离子相对于参考水平显著升高；
（h2）SLC40A1相对于参考水平显著降低；
（h3）SLC46A1相对于参考水平显著降低；
（h4）SLC11A2相对于参考水平显著升高；
（h5）ITLN1相对于参考水平显著升高；
（h6）排泄物中铁离子相对于参考水平显著降低；
（h7）叶酸相对于参考水平显著降低；
（h8）硒离子相对于参考水平显著降低；
（h9）谷胱甘肽相对于参考水平显著降低；
（h10）铁调素相对于参考水平显著降低；
（h11）GPX4相对于参考水平显著降低；
（h12）SELENOP相对于参考水平显著降低；
（h13）MMP7相对于参考水平显著升高；
（h14）胆红素相对于参考水平显著升高；
（h15）胆红素单葡萄糖醛酸酯相对于参考水平显著升高；
（h16）胆红素双葡萄糖醛酸酯相对于参考水平显著升高；
（h17）CD177+中性粒细胞相对于参考水平显著升高；
（h18）牛磺胆酸相对于参考水平显著升高；
（h19）NRF2相对于参考水平显著降低；
（h20）4-HNE相对于参考水平显著升高；
（h21）ENPP7相对于参考水平显著升高；
（h22）APOA4相对于参考水平显著升高；
（h23）APOA1相对于参考水平显著升高；
（h24）谷酰胺转移酶相对于参考水平显著升高。
所述参考水平为未患有胆道闭锁疾病的同年龄段受试者的水平。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h6）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h10）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h13）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h15）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h16）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h17）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h18）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h21）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h24）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h15）和（h16）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h13）和（h18）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者。
在一个具体实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h18）和（h21）时，则诊断为胆道闭锁疾病患者。
优选地，所述同年龄段受试者为健康人或患有与胆道闭锁相似疾病的患者，例如胆总管囊肿患者，胆汁淤积。
因此，采用上述标志物组合或产品可以区分胆道闭锁患者与健康人群、区分胆道闭锁与胆总管囊肿、区分胆道闭锁与胆汁淤积等。
优选地，上述硒离子、叶酸、谷胱甘肽、谷酰胺转移酶、GPX4、SELENOP、MMP7、胆红素、胆红素单葡萄糖醛酸酯、胆红素双葡萄糖醛酸酯、CD177+中性粒细胞、牛磺胆酸、NRF2、4-HNE、ENPP7、APOA4、APOA1来自待测对象的体液、血液、组织、细胞、排泄物、皮肤中的至少一种，进一步优选地，来自于血液和/或肝脏组织。
进一步优选地，上述血液包括血清、血浆、干血斑、全血中的至少一种。
在一个优选的实施例中，胆红素包括经皮胆红素、和/或血清胆红素。
在一个优选的实施例中，牛磺胆酸为血液牛磺胆酸，例如干血斑牛磺胆酸。
在一个优选的实施例中，MMP-7为血清MMP-7。
本发明的第四方面的目的，在于提供用于胆道闭锁诊断或预后评估的产品，包含检测本发明第二个方面的标志物组合的物质。
优选地，所述检测硒离子的物质包含定量检测硒离子的物质。
优选地，所述检测硒离子的物质是用于选自以下一种或多种方法中的物质：比色法、化学发光法、原子吸收分光光度法、高效液相色谱法。
优选地，所述检测叶酸的物质包含定量检测叶酸的物质。
优选地，所述检测叶酸的物质是用于选自以下一种或多种方法中的物质：比色法、化学发光法、原子吸收分光光度法、高效液相色谱法。
优选地，所述检测谷胱甘肽的物质包含定量检测谷胱甘肽的物质。
优选地，所述检测谷胱甘肽的物质是用于选自以下一种或多种方法中的物质：比色法、化学发光法、原子吸收分光光度法、高效液相色谱法。
优选地，所述检测铁调素的物质包含定量检测铁调素的物质。
优选地，所述检测铁调素的物质是用于选自以下一种或多种方法中的物质：比色法、化学发光法、原子吸收分光光度法、高效液相色谱法。
优选地，所述检测GPX4的物质包含定量检测GPX4的物质。
优选地，所述检测GPX4的物质包含在基因水平和/或蛋白质水平上检测GPX4的物质。
优选地，所述检测GPX4的物质选自以下一种或多种检测技术或方法中的物质：免疫组织化学法、Western印迹法、Northern印迹法、PCR、生物芯片法。
优选地，所述免疫组织化学法选自：免疫荧光法、免疫酶标法（ELISA）和免疫胶体金法。
优选地，所述检测GPX4的物质选自：对GPX4具有特异性的物质、GPX4特异性的探针、基因芯片、PCR引物等。
优选地，所述对GPX4具有特异性的物质为（i1）~（i3）中的任一种：
（i1）特异性结合GPX4的抗体；
（i2）特异性结合GPX4的配体蛋白或多肽；
（i3）特异性识别GPX4的非蛋白类化合物。
优选地，所述的抗体包括多克隆抗体、单克隆抗体、单链抗体、功能性抗体片段、抗体Fab区，纳米抗体、嵌合抗体、多特异性抗体中的至少一种。
优选地，所述检测SELENOP的物质包含定量检测SELENOP的物质。
优选地，所述检测SELENOP的物质包含在基因水平和/或蛋白质水平上检测SELENOP的物质。
优选地，所述检测SELENOP的物质选自以下一种或多种检测技术或方法中的物质：免疫组织化学法、Western印迹法、Northern印迹法、PCR、生物芯片法。
优选地，所述免疫组织化学法选自：免疫荧光法、免疫酶标法（ELISA）和免疫胶体金法。
优选地，所述检测SELENOP的物质选自：对SELENOP具有特异性的物质、SELENOP特异性的探针、基因芯片、PCR引物等。
优选地，所述对SELENOP具有特异性的物质为（j1）~（j3）中的任一种：
（j1）特异性结合SELENOP的抗体；
（j2）特异性结合SELENOP的配体蛋白或多肽；
（j3）特异性识别SELENOP的非蛋白类化合物。
优选地，所述的抗体包括多克隆抗体、单克隆抗体、单链抗体、功能性抗体片段、抗体Fab区，纳米抗体、嵌合抗体、多特异性抗体中的至少一种。
优选地，当待测对象满足（h1）～（h24）中至少一项，则诊断为胆道闭锁疾病患者；
（h1）体液、血液、干血斑、组织和/或细胞中铁离子相对于参考水平显著升高；
（h2）SLC40A1相对于参考水平显著降低；
（h3）SLC46A1相对于参考水平显著降低；
（h4）SLC11A2相对于参考水平显著升高；
（h5）ITLN1相对于参考水平显著升高；
（h6）排泄物中铁离子相对于参考水平显著降低；
（h7）叶酸相对于参考水平显著降低；
（h8）硒离子相对于参考水平显著降低；
（h9）谷胱甘肽相对于参考水平显著降低；
（h10）铁调素相对于参考水平显著升高；
（h11）GPX4相对于参考水平显著降低；
（h12）SELENOP相对于参考水平显著降低；
（h13）MMP7相对于参考水平显著升高；
（h14）胆红素相对于参考水平显著升高；
（h15）胆红素单葡萄糖醛酸酯相对于参考水平显著升高；
（h16）胆红素双葡萄糖醛酸酯相对于参考水平显著升高；
（h17）CD177+中性粒细胞相对于参考水平显著升高；
（h18）牛磺胆酸相对于参考水平显著升高；
（h19）NRF2相对于参考水平显著降低；
（h20）4-HNE相对于参考水平显著升高；
（h21）ENPP7相对于参考水平显著升高；
（h22）APOA4相对于参考水平显著升高；
（h23）APOA1相对于参考水平显著升高；
（h24）谷酰胺转移酶相对于参考水平显著升高。
所述参考水平为未患有胆道闭锁疾病的同年龄段受试者的水平。
优选地，所述同年龄段受试者为健康人或患有与胆道闭锁相似疾病的患者，例如胆总管囊肿患者，胆汁淤积。
因此，采用上述标志物组合或产品可以区分胆道闭锁患者与健康人群、区分胆道闭锁与胆总管囊肿、区分胆道闭锁与胆汁淤积等。
在一个优选的实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h7）中至少一项，则诊断为胆道闭锁疾病患者。
在另一个优选的实施方式中，当待测对象满足（h1）和（h8）中至少一项，则诊断为胆道闭锁疾病患者。
在另一个优选的实施方式中，当待测对象满足（h1），以及（h7）至（h24）中的至少一项，则诊断或辅助诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在另一个优选的实施方式中，当待测对象满足（h1），以及（h7）至（h24）中的一项，则诊断或辅助诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在另一个优选的实施方式中，当待测对象满足（h1），以及（h7）至（h24）中的两项，则诊断或辅助诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
在另一个优选的实施方式中，当待测对象满足（h1），以及（h7）至（h24）中的三项，则诊断或辅助诊断为胆道闭锁疾病患者或胆道闭锁高风险人群。
本发明的第五方面的目的，在于提供胆道闭锁的诊断或预后评估的方法，包括使用本发明第四个方面的产品的步骤。
本发明的第六方面的目的，在于提供诊断胆道闭锁或者评估胆道闭锁预后情况的方法，包括对本发明第一个方面中的铁相关因子和/或本发明第二个方面的标志物组合进行定性或定量或半定量的步骤。
例如，采用本发明中所述的检测方法定量或半定量检测所述对象或样本的铁相关因子的物质或者标志物组合的表达水平，分析所述表达水平进行疾病的判断或辅助判断或者风险评估或者预后效果评估。例如风险评估结论可以用于检测对象的患有胆道闭锁或将患胆道闭锁疾病的风险高低。
所述分析可以与参考水平相比较，参考水平可以是与检测表达水平相同的检测方法时健康人群的截断值。
根据风险评估的高低，还可以进一步临床诊断以确定检测对象是否患有胆道闭锁。
作为具体的实施方式，在本发明公开内容或启示下采用的检测方法和检测条件测定的参考水平（或截断值）进行胆道闭锁疾病诊断或风险评估，而本发明的检测方法只是作为示例，采用其他检测方法同样可以用于本发明的方法或者检测产品。
本发明的第七方面的目的，提供一种利用上述第一方面的铁相关因子的物质或者第二方面的标志物组合来诊断胆道闭锁或评估胆道闭锁预后情况的检测系统/诊断系统，包括：
（1）用于接收检测对象的检测样本的模块；
（2）检测铁相关因子或标志物组合的表达水平的数据的模块；
其中铁相关因子包括铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1、乳铁蛋白受体ITLN1中的至少一种；
其中标志物组合包括上述（g1）～（g3）中任一种或者上述发明的第一方面至第四方面中所述的标志物组合；
（3）基于输入的铁相关因子或标志物组合的参考水平或截断值来产生风险评分的模块。
在一个优选的实施方式中，诊断胆道闭锁或评估胆道闭锁预后情况的检测系统/诊断系统，包括：
（1）用于接收检测对象的检测样本的模块；
（2）检测铁相关因子或标志物组合的表达水平的数据的模块；
其中铁相关因子包括铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1、乳铁蛋白受体ITLN1中的至少一种；
其中标志物组合包括上述（g1）～（g3）中任一种或者上述发明的第一方面至第四方面中所述的标志物组合；
（3）基于输入的铁相关因子或标志物组合的参考水平或截断值来产生风险评分的模块，进行风险评估是将检测样本中铁相关因子或标志物组合的表达水平参考水平相比较，高于参考水平或截断值可认为是检测对象患有胆道闭锁或具有胆道闭锁的高风险。
本发明的第五方面和第六方面中的产品、标志物组合、铁相关因子、诊断或判断方法等，与本发明的第一方面至第四方面中的描述相同。
本发明的有益效果是：
本发明首次公开了包含铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1 、乳铁蛋白受体ITLN1中的至少一种的铁相关因子在胆道闭锁诊断或预后评估中的应用，通过ROC曲线可知，包含铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1 、乳铁蛋白受体ITLN1中的至少一种的铁相关因子在胆道闭锁诊断或预后评估方面具有优异的效果。
本发明进一步公开了标志物组合，包含：1）铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1 、乳铁蛋白受体ITLN1、铁调素中的至少两种；或2）血液中的铁离子、粪便中的铁离子、肝脏组织中的铁离子中的至少两种；或3）铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1 、乳铁蛋白受体ITLN1、铁调素中的至少一种；和硒离子、叶酸、谷胱甘肽、谷酰胺转移酶、GPX4、SELENOP、MMP7、胆红素、胆红素单葡萄糖醛酸酯、胆红素双葡萄糖醛酸酯、CD177+中性粒细胞、牛磺胆酸、NRF2、4-HNE、ENPP7、APOA4、APOA1中的至少一种；通过实验结果结合ROC曲线可知，上述标志物组合在胆道闭锁诊断或预后评估方面具有优异的效果。
附图说明
图1是胆道闭锁（BA）和胆总管囊肿(CC)患者的肠道内铁离子转运蛋白SLC11A2和SLC40A1表达量的结果图。
图2是小鼠血清、肝脏、小肠、以及粪便铁离子浓度结果（肝脏、小肠中的铁离子浓度以铁蛋白相对于组织蛋白中的含量表示结果图：*表示p＜0.05；**表示p＜0.01；***表示p＜0.001。
图3是胆道闭锁（BA）和胆总管囊肿(CC)患者的免疫组化检测SLC46A1的表达部位的结果图。
图4是胆道闭锁（BA）和胆总管囊肿(CC)患者的免疫荧光检测ITLN1表达量的结果图；***表示p＜0.001。
图5是胆道闭锁（BA）和胆总管囊肿(CC)患者的血清中铁离子浓度对比图以及血清中铁离子浓度在区分BA和非BA受试者的预测性能的接受者操作特征（ROC）曲线图：其中，A是胆道闭锁（BA）和胆总管囊肿(CC)患者的血清中铁离子浓度对比图；B是血清中铁离子浓度在区分BA和非BA受试者的预测模型的接受者操作特征（ROC）曲线图；*表示p＜0.05；**表示p＜0.01；***表示p＜0.001。
图6是胆道闭锁（BA）和胆总管囊肿(CC)患者的肝脏中铁离子浓度对比图以及肝脏中铁离子浓度在区分BA和非BA受试者的预测性能的接受者操作特征（ROC）曲线图：其中，A是胆道闭锁（BA）和胆总管囊肿(CC)患者的肝脏中铁离子浓度对比图；B是肝脏中铁离子浓度在区分BA和非BA受试者的预测模型的接受者操作特征（ROC）曲线图； **表示p＜0.01。
图7是胆道闭锁（BA）和健康人群的粪便中铁离子浓度对比图以及粪便中铁离子浓度在区分BA和健康人群（非BA受试者）的预测性能的接受者操作特征（ROC）曲线图：其中，A是胆道闭锁（BA）和健康人群的粪便中铁离子浓度对比图；B是粪便中铁离子浓度在区分BA和健康人群（非BA受试者）的预测性能的接受者操作特征（ROC）曲线图；*表示p＜0.05；**表示p＜0.01；***表示p＜0.001。
图8是胆道闭锁（BA）和健康人群（control）的血浆中铁离子浓度对比图：其中；*表示p＜0.05；**表示p＜0.01；***表示p＜0.001，****表示p＜0.0005。
具体实施方式
以下通过具体的实施例对本发明的内容作进一步详细的说明。
现将详细地提供本发明实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
因此，旨在本发明覆盖落入所附权利要求的范围及其等同范围中的此类修改和变化。本发明的其它对象、特征和方面公开于以下详细描述中或从中是显而易见的。本领域普通技术人员应理解本讨论仅是示例性实施方式的描述，而非意在限制本发明更广阔的方面。
对于本发明提及的“胆道闭锁”，本领域技术人员应当理解，胆道闭锁( biliaryatresia，BA) 是婴儿期常见的严重肝胆系统疾病之一，以肝内、外胆管进行性炎症和纤维化为特征; 如不及时治疗，晚期会出现胆汁性肝硬化、门静脉高压、肝衰竭，是一种病因不明的波及肝内、外胆管闭塞性病变，导致胆汁淤积及进行性肝纤维化直至肝硬化并危及患儿生命的疾病。临床表现为：( 1) 生后黄疸延迟消退( 足月儿大于2 周，早产儿大于3 周)，或消退后再次出现，并持续性加重；( 2) 粪便颜色逐渐变浅至白陶土色，尿色加深至浓茶色；( 3) 腹部膨隆，肝脾肿大，腹壁静脉曲张等；( 4) 由于脂溶性维生素吸收障碍导致营养不良或生长发育迟缓。
对于本发明提及的“妊娠期”，本领域技术人员应当理解，妊娠期是指受孕后至分娩前的生理时期，亦称怀孕期。自成熟卵受精后至胎儿娩出，一般为266天左右。为便于计算，妊娠通常是从末次月经第一天算起，足月妊娠约为280天(40周)。在妊娠期间母体的新陈代谢、消化系统、呼吸系统、血管系统、神经系统、内分泌系统、生殖系统、骨关节韧带及乳房均发生相应的改变。妊娠期全过程共分为3个时期：妊娠13周末以前称早期妊娠；第14～27周末称中期妊娠；第28周及其后称晚期妊娠。
对于本发明提及的“围产期”，本领域技术人员应当理解，围产期是指怀孕28周到产后一周这一分娩前后的时期。
对于本发明提及的“哺乳期”，本领域技术人员应当理解，哺乳期是指产后产妇用自己的乳汁喂养婴儿的时期，即开始哺乳到停止哺乳的这段时间，一般长约10个月至2年左右。
对于本发明提及的“标记物”，生物标志物（Biomarker）是指可以标记系统、器官、组织、细胞及亚细胞结构或功能的改变或可能发生的改变的生化指标，具有非常广泛的用途。生物标志物可用于疾病诊断、判断疾病分期或者用来评价新药或新疗法在目标人群中的安全性及有效性。本领域技术人员应当理解，对于疾病研究，生物标志物一般是指可供客观测定和评价的一个普通生理或病理或治疗过程中的某种特征性的生化指标，通过对它的测定可以获知机体当前所处的生物学过程中的进程。检查一种疾病特异性的生物标志物，对于疾病的鉴定、早期诊断及预防、治疗过程中的监控可能起到帮助作用。
本发明中提及的“诊断”不仅包含诊断疾病、辅助诊断疾病，还包括预测或评估患病风险，例如包括新生儿胆道闭锁风险的评估。
本发明中所述的铁相关因子的检测，不仅涉及直接的铁离子和铁相关因子本身的检测，还涉及通过各种其他因子（可能不包含在本发明中的其他因子）的检测从而体现这些铁离子和铁相关因子水平的间接检测，例如，在本发明中，不仅可以直接检测谷胱甘肽GSH的水平，或直接检测GPX4的水平，还可以通过检测谷胱甘肽GSH来间接体现或检测GPX4的水平，这样的方式不仅在这一种方式中体现，同样地，举例来说，在本发明中，不仅可以直接检测SELENOP的水平，或直接检测硒的水平，还可以通过检测硒来间接体现或检测SELENOP的水平。不仅可以直接检测铁离子的水平，或者直接检测ITLN1（乳铁蛋白的受体）、或SLC40A1的水平，还可以通过检测铁离子来体现或检测ITLN1（乳铁蛋白的受体）、或SLC40A1的水平。
本发明中所述的铁相关因子的检测，可以通过检测待测对象的体液、血液、组织、细胞、排泄物、干血斑等介质的铁相关因子水平进行检测，这些介质作为一种取样对象的介绍而非对于铁相关因子的呈现形式的限制，例如，叶酸作为本发明中的一种铁相关因子，可以通过血液作为取样对象进行检测，但是这并不是一种对于叶酸呈现形式的限定，在血液中检测的叶酸，可以通过血浆叶酸水平、血清叶酸水平、红细胞叶酸水平等形式来呈现。
对于本发明提及的“铁离子”，本领域技术人员应当理解，铁离子（ferri ion）是一种金属阳离子，离子符号为Fe3+/ Fe2+，优选地，Fe为+2价，即Fe2+。
本发明中所述的铁离子包含包括3价铁离子和2价铁离子中的至少一种或至少两种；例如包含2价铁离子。
检测铁离子的物质包含定量检测铁离子的物质。
所述检测铁离子的物质是用于选自以下一种或多种方法中的物质：比色法、化学发光法、原子吸收分光光度法、高效液相色谱法。
对于本发明提及的“SLC46A1”，本领域技术人员应当理解，SLC46A1为质子耦合叶酸转运蛋白。
优选地，所述检测血红素转运蛋白SLC46A1的物质包含定量检测血红素转运蛋白SLC46A1的物质。
优选地，所述检测血红素转运蛋白SLC46A1的物质包含在基因水平和/或蛋白质水平上检测血红素转运蛋白SLC46A1的物质。
优选地，所述检测血红素转运蛋白SLC46A1的物质选自以下一种或多种检测技术或方法中的物质：免疫组织化学法、Western印迹法、Northern印迹法、PCR、生物芯片法。
优选地，所述免疫组织化学法选自：免疫荧光法、免疫酶标法（ELISA）和免疫胶体金法。
优选地，所述检测血红素转运蛋白SLC46A1的物质选自：对SLC46A1具有特异性的物质、SLC46A1特异性的探针、基因芯片、PCR引物等。
优选地，所述对SLC46A1具有特异性的物质为（c1）~（c3）中的任一种：
（c1）特异性结合SLC46A1的抗体；
（c2）特异性结合SLC46A1的配体蛋白或多肽；
（c3）特异性识别SLC46A1的非蛋白类化合物。
优选地，所述的抗体包括多克隆抗体、单克隆抗体、单链抗体、功能性抗体片段、抗体Fab区，纳米抗体、嵌合抗体、多特异性抗体中的至少一种。
对于本发明提及的“SLC11A2”，本领域技术人员应当理解，SLC11A2是溶质转运蛋白11 成员2，又叫作天然抗性相关巨噬细胞蛋白2( Nramp2) 或二价阳离子/金属离子转运蛋白( DCT1 /DMT1) ，是哺乳动物中重要的二价金属离子转运蛋白，可以传输Fe2+，Cu2+，Mn2 +，Co2+，Zn2+，Cd2+，Ni2+和Pb2+ 等金属离子，并且传输金属离子的能力与pH 值有关。Slc11a2广泛分布于哺乳动物、鱼类、果蝇、细菌、鸟类和植物等的细胞中，并且在小肠、胸腺、脑、肾、肺、骨髓、结肠、睾丸、胃、肝、心脏、脾和骨骼肌中都有表达。
根据本发明的所有方面，所述检测铁离子转运蛋白SLC11A2的物质包含定量检测铁离子转运蛋白SLC11A2的物质。
优选地，所述检测铁离子转运蛋白SLC11A2的物质包含在基因水平和/或蛋白质水平上检测铁离子转运蛋白SLC11A2的物质。
优选地，所述检测铁离子转运蛋白SLC11A2的物质选自以下一种或多种检测技术或方法中的物质：免疫组织化学法、Western印迹法、Northern印迹法、PCR、生物芯片法。
优选地，所述免疫组织化学法选自：免疫荧光法、免疫酶标法（ELISA）和免疫胶体金法。
优选地，所述检测铁离子转运蛋白SLC11A2的物质选自：对SLC11A2具有特异性的物质、SLC11A2特异性的探针、基因芯片、PCR引物等。
优选地，所述对SLC11A2具有特异性的物质为（a1）~（a3）中的任一种：
（a1）特异性结合SLC11A2的抗体；
（a2）特异性结合SLC11A2的配体蛋白或多肽；
（a3）特异性识别SLC11A2的非蛋白类化合物。
优选地，所述的抗体包括多克隆抗体、单克隆抗体、单链抗体、功能性抗体片段、抗体Fab区，纳米抗体、嵌合抗体、多特异性抗体中的至少一种。
对于本发明提及的“SLC40A1”，本领域技术人员应当理解，SLC40A1是铁转运蛋白，是目前已知的唯一调控铁转出的蛋白，参与铁外排机制，是调节细胞内外铁平衡的非常关键的蛋白。
优选地，所述检测铁离子转运蛋白SLC40A1的物质包含定量检测铁离子转运蛋白SLC40A1的物质。
优选地，所述检测铁离子转运蛋白SLC40A1的物质包含在基因水平和/或蛋白质水平上检测铁离子转运蛋白SLC40A1的物质。
优选地，所述检测铁离子转运蛋白SLC40A1的物质选自以下一种或多种检测技术或方法中的物质：免疫组织化学法、Western印迹法、Northern印迹法、PCR、生物芯片法。
优选地，所述免疫组织化学法选自：免疫荧光法、免疫酶标法（ELISA）和免疫胶体金法。
优选地，所述检测铁离子转运蛋白SLC40A1的物质选自：对SLC40A1具有特异性的物质、SLC40A1特异性的探针、基因芯片、PCR引物等。
优选地，所述对SLC40A1具有特异性的物质为（b1）~（b3）中的任一种：
（b1）特异性结合SLC40A1的抗体；
（b2）特异性结合SLC40A1的配体蛋白或多肽；
（b3）特异性识别SLC40A1的非蛋白类化合物。
优选地，所述的抗体包括多克隆抗体、单克隆抗体、单链抗体、功能性抗体片段、抗体Fab区，纳米抗体、嵌合抗体、多特异性抗体中的至少一种。
对于本发明提及的“硒离子”，本领域技术人员应当理解，硒离子，是一种非金属阴离子。
对于本发明提及的“ITLN1”，本领域技术人员应当理解，ITLN1为乳铁受体蛋白。
优选地，所述检测乳铁蛋白受体ITLN1的物质包含定量检测乳铁蛋白受体ITLN1的物质。
优选地，所述检测乳铁蛋白受体ITLN1的物质包含在基因水平和/或蛋白质水平上检测乳铁蛋白受体ITLN1的物质。
优选地，所述检测乳铁蛋白受体ITLN1的物质选自以下一种或多种检测技术或方法中的物质：免疫组织化学法、Western印迹法、Northern印迹法、PCR、生物芯片法。
优选地，所述免疫组织化学法选自：免疫荧光法、免疫酶标法（ELISA）和免疫胶体金法。
优选地，所述检测乳铁蛋白受体ITLN1的物质选自：对ITLN1具有特异性的物质、ITLN1特异性的探针、基因芯片、PCR引物等。
优选地，所述对ITLN1具有特异性的物质为（d1）~（d3）中的任一种：
（d1）特异性结合ITLN1的抗体；
（d2）特异性结合ITLN1的配体蛋白或多肽；
（d3）特异性识别ITLN1的非蛋白类化合物。
优选地，所述的抗体包括多克隆抗体、单克隆抗体、单链抗体、功能性抗体片段、抗体Fab区，纳米抗体、嵌合抗体、多特异性抗体中的至少一种。
对于本发明提及的“叶酸”，本领域技术人员应当理解，为叶酸（PTEROYLMONOGLUTAMATE），或包括其所有功能等价物，以及其衍生物，一种或多种叶基聚谷氨酸盐，其中叶酸或多谷氨酸的蝶呤部分的吡嗪环被还原成二氢叶酸或四氢叶酸的化合物，或所有上述化合物的衍生物，其中N-5或N-10位在各种氧化水平上携带一个碳单元，或其药学上相容的盐或其两种或多种的组合。特别是指叶酸，以游离叶酸(蝶酰谷氨酸)或亚叶酸(甲酰四氢叶酸) 形式存在。此外，叶酸的等价物或衍生物可选：亚叶酸，二氢叶酸，四氢叶酸，5-甲基四氢叶酸，5，10-亚甲基四氢叶酸，5，10-亚甲基四氢叶酸，5，10-甲酰亚氨基四氢叶酸，5-甲酰四氢叶酸（隐叶素），10-甲酰四氢叶酸，10-甲基四氢叶酸，其药学上可接受的盐，或其两种或多种的组合。
对于本发明中提及的“谷胱甘肽”，本领域技术人员应当理解，谷胱甘肽是一种由三个氨基酸组成的小分子肽，它作为体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。
对于本发明中提及的“铁调素”，本领域技术人员应当理解，铁调素是肝脏合成并分泌的富含半胱氨酸的抗菌多肽，在免疫过程中能够大量表达参与免疫反应;在机体内铁平衡的调节中起到负性调节的作用。
对于本发明中提及的“GPX4”，本领域技术人员应当理解，GPX4又称磷脂过氧化氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)，是含硒GPX家族的第四位成员。GPX4分子量约为19kDa，约由170个氨基酸组成，其表现出对于膜脂过氧化氢产物的清除能力。
对于本发明中提及的“SELENOP”，本领域技术人员应当理解，SELENOP（硒蛋白P）为双功能蛋白，硒蛋白家族主要成员之一，主要由肝脏合成后分泌到外周血中，进而运输硒到非肝脏组织供其利用，用以合成其他硒蛋白；同时SELENOP还具有抗氧化酶的活性，在保护机体免受氧化损伤中起着重要作用。
本发明中提及的“MMP-7”，即基质金属蛋白酶7(Matrix metalloproteinases-7，MMP-7)在慢性肝脏疾病中与肝纤维化形成有关，有报道发现MMP-7可激活BA胆管上皮先天性免疫反应并参与胆管的炎性损伤，可以用于胆道闭锁的检测，例如采用酶联免疫方法检测血清中MMP-7的水平进行胆道闭锁的诊断或辅助诊断或与其他指标联合诊断。
本发明中提及的“胆红素”，是人胆汁中分泌的主要色素，是临床判断黄疸和肝功能的主要依据。血清胆红素水平升高≥300mg/ml，和/或直接胆红素水平占总胆红素50%以上时，可怀疑胆道闭锁。目前，检测游离胆红素和结合胆红素的生化法主要有：重氮盐改良J-G法、胆红素氧化酶法、化学氧化法、钒酸法以及经皮测胆法、液相色谱-串联质谱法。
本发明中提及的“胆红素单葡萄糖醛酸酯”、和“胆红素双葡萄糖醛酸酯”是属于结合胆红素，是由间接胆红素进入肝后受肝内葡萄糖醛酸基转移酶的作用与葡萄糖醛酸结合生成的，关于胆红素单葡萄糖醛酸酯、和胆红素双葡萄糖醛酸酯的检测方法和基于其诊断或联合诊断胆道闭锁的方法，可以参考WO2022/127933A1。
本发明中提及的“谷酰胺转移酶（GGT）”是胆管系统损伤敏感指标，GGT增高可表示胆管梗阻，是可以用于联合诊断胆道闭锁的指标。目前，常用的检测GGT的方法包括IFCC和Szasz法，二者均是以γ谷氨酰-3-羧基-4-对硝基苯胺和双甘肽为底物的酶动力。
本发明中提及的“CD177+中性粒细胞”，即白细胞分化抗原177阳性(CD177+)细胞，有研究表明，其通过促进中性粒细胞胞外陷阱(NET)的形成在胆道闭锁病程启动中起到了重要作用，可以用于胆道闭锁的诊断或联合诊断。目前，可以采用流式细胞仪技术、免疫组织化学法、或者参考专利CN111983216A、CN112080560A中的方法进行检测或者判断。
本发明中提及的“牛磺胆酸(Taurohyocholic acid，THCA)”，是一种初级胆汁酸，有研究者发现胆道闭锁患儿初级结合胆汁酸增高，并且牛磺胆酸浓度及总胆汁酸浓度明显高于新生儿黄疸及正常对照组的患儿，认为患儿生后胆汁酸增高有可能提示胆道闭锁，牛磺胆酸成为新生儿早期胆道闭锁筛查指标。目前，关于牛磺胆酸(Taurohyocholic acid，THCA)的检测方法可以采用酶联免疫吸附试验法，液相色谱法、液质联用法等。
本发明中提及的“NRF2”，血清核因子相关因子2，已发现在胆管相关疾病中显著升高，进一步地，发明人在胆道闭锁患者中发现，其升高可以作为胆道闭锁诊断（辅助诊断）或联合诊断的判断指标之一。目前，可以采用ELISA法、免疫荧光化学法等进行检测或判断。
本发明中提及的“4-HNE”，不饱和羟基烯醛，是一种氧化/亚硝化应激生物标志物。4-Hydroxynonenalal 是 ALDH2 的底物和抑制剂，在BA患者中观察到氧化应激标志物水平升高，并且发明人在胆道闭锁BA中也观察到4-HNE的升高，指示其可以作为胆道闭锁诊断或联合诊断的判断指标之一。目前，可以采用免疫组化方法、酶联免疫分析方法（ELISA）等进行检测。
本发明中提及的“ENPP7”，即外核苷酸焦磷酸酶7（ectonucleotide pyrophosphatasephosphodiesterase 7），发明人发现，其在胆道闭锁中升高，在BA和正常患者中高度差异表达，可以用作胆道闭锁诊断（包含辅助诊断）或联合诊断的指标之一。目前，可以采用免疫组化方法、酶联免疫分析方法（ELISA）等进行检测。
本发明中提及的“APOA4”和“APOA1”，分别为人载脂蛋白A-IV和人载脂蛋白A-I，都是一种脂肪酸吸收相关的基因，发明人发现，它们在BA患者中高表达并且在BA患者和正常患者中差异表达，可以用作胆道闭锁诊断（包含辅助诊断）或联合诊断的指标之一。目前，可以采用双向电泳-质谱技术、蛋白质芯片、疫组化方法等方法进行检测。
对于本发明中所述的基因/蛋白，本领域技术人员知晓，基因和蛋白的表达是对应的，因此，在证明基因具有一种功能时候，也说明其对应的蛋白也具有相应功能；反之亦然。
优选地，（g1）中所述铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1和/或乳铁蛋白受体ITLN1包括蛋白质和mRNA。
优选地，（g3）中所述铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1、GPX4、SELENOP和/或乳铁蛋白受体ITLN1包括蛋白质和mRNA。
优选地，（g1）中所述铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1、铁调素和/或乳铁蛋白受体ITLN1来自待测对象的体液、血液、组织、细胞、排泄物、干血斑中的至少一种；进一步优选地，（g1）中所述铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1、铁调素和/或乳铁蛋白受体ITLN1来自待测对象的血液、组织、排泄物、干血斑中的至少一种。
优选地，（g3）中所述铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1 、乳铁蛋白受体ITLN1、硒离子、叶酸、谷胱甘肽、GPX4、SELENOP和/或铁调素来自待测对象的体液、血液、组织、细胞、排泄物、干血斑中的至少一种；进一步优选地，（g3）中所述铁离子、铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1 、乳铁蛋白受体ITLN1、硒离子、叶酸、谷胱甘肽、GPX4、SELENOP和/或铁调素来自待测对象的血液、组织、排泄物、干血斑中的至少一种。
优选地，（g1）或（g3）中所述铁离子来自待测对象的血液、干血斑、组织、排泄物中的至少一种；进一步优选地，（g1）或（g3）中所述铁离子来自待测对象的血液或干血斑。
优选地，（g3）中所述硒离子、叶酸来自待测对象的血液、干血斑、细胞、排泄物中的至少一种。
优选地，（g3）中所述硒离子来自待测对象的血液或干血斑。
优选地，（g3）中所述叶酸来自自待测对象的血液、干血斑、红细胞、粪便中的至少一种。
优选地，（g1）中所述铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1 、铁调素和/或乳铁蛋白受体ITLN1来自待测对象的组织。
优选地，（g3）中所述铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1 、GPX4、SELENOP、谷胱甘肽和/或乳铁蛋白受体ITLN1来自待测对象的组织。
优选地，所述组织包括肝脏、肠道中的至少一种。
优选地，所述排泄物包括粪便、尿液中的至少一种；进一步为粪便。
优选地，所述血液包含全血、血清、血浆、干血斑中的至少一种；进一步为血浆或干血斑。
在一个具体的实施方式中，所述血液为足跟血或指尖血，或者以足跟血或指尖血指标的干血斑。
优选地，所述待测对象为成人或儿童。
对于本发明提及的“儿童”，本领域技术人员应当理解，儿童是指18岁以下的任何人，优选地，其为出生28天内的新生儿、1岁以内的婴儿、1-6岁的幼儿、以及6岁以上18岁以下的儿童。
对于本发明提及的“成人”，本领域技术人员应当理解，成人是指18岁以上的任何人，优选地，所述成人为妊娠期的女性成年人、围产期的女性成年人或哺乳期的女性成年人。
本实施例中所使用的材料、试剂等，如无特别说明，为从商业途径得到的试剂和材料。
本发明中提及的“产品”包含试剂、试剂盒、试纸、芯片、检测系统中的至少一种。
为了探索铁离子转运蛋白SLC11A2、SLC40A1和铁离子、SLC46A1、乳铁蛋白受体ITLN1等铁相关因子以及铁相关因子与其他因子（包括铁调素、谷胱甘肽、叶酸、硒、MMP7、ENPP7、4-HNE、NRF2等）联合是否能在BA的诊断中起到积极作用，因此进一步进行以下实验。本发明中所述的“显著性”是一个统计学名词，它是统计学上对数据差异性的评价。通常情况下，P<0.05的水平表明数据之间具备了显著性差异（显著性升高或降低）。本发明中的统计方法或检验方法采用常规方法进行即可，例如T检验、曼惠特尼检验等。
实施例1 铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1在诊断胆道闭锁中的应用
1、临床标本以及数据的收集：
胆道闭锁及对照组胆总管囊肿患儿各20例。
BA患儿肠道标本的取得：取做Kasai手术造瘘口的肠管，放入组织保存液，在冰盒内转运至实验室。实验室接收标本后，将标本分成三份，一份固定送石蜡包埋病理切片；一份液氮速冻，转至-80℃冰箱冻存；第三部分剪碎放入含10mL胶原酶消化液（胶原酶II，DNA酶抑制剂，胎牛血清，RPMI1640培养基）的摇瓶中37℃摇床进行消化，进行过滤和红细胞裂解，最后重悬在PBS中，进行流式细胞学染色。取得对照疾病患儿胆总管囊肿肠道标本，并经历相同的标本处理步骤得到标本。
2、免疫荧光的具体方法如下：
免疫荧光所用的荧光二抗Goat anti-Mouse 488，Goat anti-Mouse 594, Goatanti-Mouse 633, Goat anti-Rabbit 488, Goat anti-Rabbit 594, Goat anti-Rat488, Goat anti-Rat 594，DAPI均购买于life technology公司。
DAPI染色及其步骤如下：
Buffer 配置：封闭液为含0.3% Triton X100和5%山羊血清的PBS，抗体稀释液为0.3% Triton X100和1% BSA的PBS；待检测细胞准备好后，弃细胞上清，用PBS洗涤；弃上清，4% PFA固定15分钟；弃上清，用PBS洗涤3次，每次5分钟；弃上清，封闭液封闭1小时；弃上清，将待检测蛋白的抗体用相应Buffer 1:500稀释（其中，抗人SLC11A2抗体选自Thermo，货号：PA535136；抗人SLC40A1抗体选自Novus，货号：NBP1-21502），4℃孵育过夜；弃上清，用PBS洗涤3次，每次5分钟；加入稀释好的荧光二抗（1:1000稀释），室温孵育2小时；PBS洗涤三次，每次5分钟；弃上清，用含抗淬灭剂和DAPI的封片液封片，备用。
3、实验结果：
图1为荧光染色后BA患儿肠道内铁离子转运蛋白SLC11A2（绿色）和SLC40A1（红色）的表达情况图，在BA患儿肠道中参与铁离子排出的SLC40A1（红色）表达减少，而参与铁离子摄取的SLC11A2（绿色）表达增加；在CC对照患儿肠道中，参与铁离子排出的SLC40A1（红色）表达增加，而参与铁离子摄取的SLC11A2（绿色）表达减少，由此可见，铁离子转运蛋白SLC11A2和铁离子转运蛋白SLC40A1的表达情况可以作为区分BA和CC的检测标志物。
ROC曲线（receiver operating characteristic curve，受试者工作特征曲线）是用于评价，比较诊断性实验的效果，是否有应用价值；或者选择适合的截断值，用于诊断实验。ROC曲线纵坐标为真阳性率（灵敏度），横坐标为假阳性率（特异度）。ROC曲线下面积，简称AUC，介于0.1和1之间，用于评价诊断能力或价值，越大意味着应用或诊断价值越高。
进一步对上述结果进行预测模型的ROC曲线（receiver operatingcharacteristic curve，受试者工作特征曲线）验证，结果显示，铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、铁离子转运蛋白SLC11A2和铁离子转运蛋白SLC40A1的组合能够非常有效地区分 BA 受试者与CC 病例(AUC>0.6，特异度强、灵敏度高)，表明铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、铁离子转运蛋白SLC11A2和铁离子转运蛋白SLC40A1的组合可以作为BA的诊断或辅助诊断的标志物。
实施例2 铁离子在诊断胆道闭锁中的应用
1、胆道闭锁动物模型的建立：
(1)动物：成年BALB/c孕鼠，无特定病原体级（SPF级）。待孕鼠产下新生小鼠（每只孕鼠平均产8只新生鼠），平均体重1.5 g，根据实验分组随机选取新生小鼠进行实验。本实验动物处置方法符合动物伦理学标准。
(2)造模方法：将新生的BALB/c小鼠，于出生24小时内腹腔注射猴MMU18006 轮状病毒(下称“RRV”)20 μL（滴度1.0×106 PFU），建立BA 小鼠动物模型。
2、铁离子诊断的效果实验
在出生24小时内感染恒河猴轮状病毒（RRV）建立BA模型，在已建立的急性胆道闭锁小鼠模型上，根据实验要求进行配对实验，将BA模型分为不同实验组别： 1）对照小鼠组（Control，腹腔给与同等体积的PBS，n=9）；2）RRV诱导BA小鼠模型组（RRV，具体方法同步骤1，n=7）；实验终止后利用索莱宝公司的组织铁检测试剂盒，将研磨的肝脏/肠道组织样品直接加入检测体系试剂，最后显色，通过比色计算组织含铁量。同时通过BCA蛋白定量试剂盒（BCA Protein Assay Kit）测定组织蛋白含量，将组织含铁量进行标准化。粪便的检测取0.05g粪便溶于30uL的无菌PBS后取25uL用于铁离子的检测，方法同肝脏/肠道组织铁的检测。
图2为小鼠血清、肝脏、小肠、以及粪便铁离子浓度结果（肝脏、小肠中的铁离子浓度以铁蛋白相对于组织蛋白中的含量表示，粪便中的铁离子浓度以铁离子的重量占粪便的重量表示）情况图。
与对照组相比，患有 BA 的婴儿表现出全身性（血清、肝和小肠活检）铁超负荷，但管腔（粪便）缺铁。
此外，进一步进行BA患者与非BA患者的血液（血清）、肝脏、粪便的铁离子浓度对比以及血液（血清）、肝、粪便的铁离子浓度在区分BA患者与非BA患者的预测性能的ROC曲线验证。
取对照胆总管囊肿（67例，其中，年龄小于等于9个月的胆总管囊肿患者（=＜9monCC）为24例，年龄大于9个月的胆总管囊肿患者（＞9mon CC）为43例）和BA患者（106例）的血液（血清）检测铁离子浓度，结果如图5所示：BA患者的血液（血清）中铁离子浓度显著高于胆总管囊肿患者（p<0.05），尤其，BA患者的血液（血清）中铁离子浓度极显著高于CC（p<0.001），血液（血清）中铁离子浓度能够有效地区分 BA 受试者与CC 病例(AUC=0.714)。
取对照胆总管囊肿（36例）和BA患者（51例）的肝脏检测铁离子浓度，结果如图6所示：BA患者的肝脏中铁离子浓度显著高于胆总管囊肿患者（p<0.01），肝脏中铁离子浓度能够有效区分BA 受试者与CC 病例(AUC=0.7008)。
取同龄对照（健康人群，12例）和BA患者（19例）的粪便检测铁离子浓度，结果如图7所示：对照（健康人群）的粪便中铁离子浓度显著高于BA患者，粪便中的铁离子浓度能够有效区分BA患者和健康人群。
取同龄对照（健康人群，16例）和BA患者（20例）的血浆检测铁离子浓度，结果如图8所示：对照（健康人群）的血浆中铁离子浓度极显著低于BA患者，血浆中的铁离子浓度能够有效区分BA患者和健康人群。
因此，血浆、血清、全血、肠道、肝脏和/或粪便内铁离子含量或浓度可以作为胆道闭锁疾病的诊断或辅助诊断的有效标志物，且当检测到血浆、血清、全血、肠道、肝脏内铁离子含量或浓度相对于未患有胆道闭锁疾病的同年龄段受试者相应指标的水平较高时，和/或当检测到粪便中铁离子含量或浓度相对于未患有胆道闭锁疾病的同年龄段受试者相应指标的水平较低时，则可认为样本所来自个体患有胆道闭锁或将来罹患胆道闭锁的可能性较高（预测风险）。
实施例3 血红素转运蛋白SLC46A1在诊断胆道闭锁中的应用
1、实验方法：
取对照胆总管囊肿的肠道组织（12例）和 BA 患者的肠道组织（12例）石蜡切片（本部分临床样本与实施例一中相同），依次将载玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精，一般在每个试剂中放10min，脱蜡后在清水中冲洗一段时间，加入3%H2O2浸泡10min，从而除去内源性的过氧化氢酶，然后倒掉H2O2，在清水中洗两次，再加入柠檬酸缓冲液，放入微波炉中蒸煮3min（中火），一般刚到沸腾即可，冷却至室温，将柠檬酸缓冲液倒掉，水洗2次，并将载玻片置于PBS中5min，洗2次，擦干组织周围的PBS液，马上加上100µL山羊血清封闭液，封闭1小时；用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围的封闭液，加抗人 SLC46A1 单克隆抗体（1:250，封闭液稀释，abcam，货号：ab25134）于4℃冰箱中保存过夜；第二天将玻片放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上二抗（荧光（FITC）标记羊抗兔IgG（abcam,ab6717），荧光（Cy3）标记羊抗小鼠IgG（abcam,ab6939）），室温放置半小时；放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上链霉亲和素-生物素复合物（SABC），然后置于37℃温箱中半小时；SABC稀释100倍（990µLPBS：10µLSABC）；放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上显色剂；（显色剂的配置：在1mL水中加1滴显色剂A（DAB），摇匀，然后加1滴显色剂B（H2O2），摇匀，再加1滴显色剂C（磷酸缓冲液），摇匀）；复染：将显色后的片子用清水冲洗一段时间后，浸泡于苏木精中染色30秒；将复染后的片子置于水中冲洗后，依次将载玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯；每个试剂中放置2min，最后浸泡在二甲苯中，搬到通风柜中；用中性树胶封片并置于通风柜中晾干。免疫荧光检测SLC46A1在各类型肠道上皮细胞分布的位置。
2、实验结果：
结果如图3所示：胆道闭锁（BA）和同龄对照患者胆总管囊肿(CC)的肠道组织中，SLC46A1（棕色）基因亚群细胞均主要分布在肠道绒毛上皮细胞干性较强的的隐窝或者肠腺部位；因此，肠道上皮该部位也成为血红素被吸收的主要部位；同时，与对照组的肠道相比，BA肠道中SLC46A1（棕色）的表达水平显著降低，即SLC46A1可以作为区分BA和其他临床上难以区分的疾病（如CC、胆汁淤积）的诊断或辅助诊断的标志物。
进一步对上述结果进行预测模型的ROC曲线验证，结果显示，结果显示血红素转运蛋白SLC46A1能够非常有效地区分 BA 受试者与CC 病例(AUC>0.6，特异度强、灵敏度高)，表明血红素转运蛋白SLC46A1可以作为BA的诊断或辅助诊断的标志物。
实施例4 乳铁蛋白受体ITLN1在诊断胆道闭锁中的应用
取对照胆总管囊肿（8例）和 BA 患者（8例）的隐窝绒毛，通过实施例1的免疫荧光方法检测ITLN1的表达量，结果如图4所示：ITLN1在BA 患者中表达显著增加，即ITLN1可以作为区分BA和其他临床上难以区分的疾病（如CC、胆汁淤积）的诊断或辅助诊断的标志物之一。
进一步对上述预测结果进行ROC曲线验证，结果显示。ITLN1能够非常有效地区分BA 受试者与CC 病例(AUC>0.6，特异度强、灵敏度高)，表明ITLN1可以作为BA的诊断或辅助诊断的标志物。
实施例5 NRF2在诊断胆道闭锁中的应用
分别取对照健康人群（12例）和 BA 患者（12例）的小肠和肝脏，通过市售的NRF2检测试剂盒进行检测，结果发现，NRF2在BA患者的小肠和肝脏中的表达都显著降低，并且在BA患者和健康人群中差异表达。
进一步进行ROC曲线验证，结果显示，NRF2能够非常有效地区分 BA 受试者(AUC>0.6，特异度强、灵敏度高)，表明NRF2可以作为BA的诊断或辅助诊断的标志物，并且可以用于联合诊断指标。
实施例6 4-HNE在诊断胆道闭锁中的应用
取对照胆总管囊肿（12例）和 BA 患者（12例）的小肠，通过市售的4-HNE检测试剂盒进行检测，结果发现，4-HNE在BA患者的小肠中显著升高，并且在BA患者和对照中差异表达。
进一步进行ROC曲线验证，结果显示，4-HNE能够非常有效地区分 BA 受试者(AUC>0.6，特异度强、灵敏度高)，表明4-HNE可以作为BA的诊断或辅助诊断的标志物，并且可以用于联合诊断指标。
实施例7 叶酸和铁相关因子在诊断胆道闭锁中的应用
取对照胆总管囊肿（12例）和 BA 患者（12例）的血浆（本部分临床样本与实施例1中的一中相同），通过检测血浆中铁离子及叶酸（铁离子检测方法与实施例1相同，叶酸检测试剂盒（Novus，货号：NBP2-59966-1Kit）的方法进行检测：在酶标包被板上设标准品孔10孔，设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL（样品最终稀释度为5倍）。用封板膜封板后置37℃温育30分钟。弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外。温育30分钟，洗涤液洗涤。每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。每孔加终止液50μL，终止反应（此时蓝色立转黄色）。以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。）的含量。
结果显示：铁离子在BA 患者中含量增加，叶酸在BA患者中含量降低，即铁离子和/或叶酸可以作为区分BA和其他临床上难以区分的疾病（如CC、胆汁淤积）的诊断或辅助诊断的标志物。进一步对上述预测结果进行ROC曲线验证，结果显示铁离子、或叶酸、或铁离子和叶酸的组合能够非常有效地区分 BA 受试者与CC 病例（AUC>0.75），表明铁离子、或叶酸、或铁离子和叶酸的组合可以作为BA的诊断或辅助诊断的标志物。
实施例8 硒离子和铁相关因子在诊断胆道闭锁中的应用
取对照胆总管囊肿（12例）和 BA 患者（12例）的血浆（本部分临床样本与实施例1中相同），通过检测血浆中铁离子及硒离子（铁离子检测方法与实施例1相同，硒离子采用本领域常规方法检测）的含量。
结果显示：铁离子在BA 患者中含量增加，硒离子在BA患者中含量降低，即铁离子和/或硒离子可以作为区分BA和其他临床上难以区分的疾病（如CC、胆汁淤积）的诊断或辅助诊断的标志物。
进一步对上述预测结果进行ROC曲线验证，结果显示铁离子和/或硒离子能够非常有效地区分 BA 受试者与CC 病例（AUC>0.7、特异度强、灵敏度高），表明铁离子和/或硒离子可以作为BA的诊断或辅助诊断的标志物，并且硒离子和铁离子联用的诊断效果显著优于铁离子或硒离子单独诊断的效果。
实施例9 谷胱甘肽和铁相关因子在诊断胆道闭锁中的应用
取对照胆总管囊肿（12例）和 BA 患者（12例）的血浆、肝脏，通过检测血浆中铁离子及肝脏中谷胱甘肽（铁离子检测方法与实施例1相同，谷胱甘肽采用双抗体夹心法检测）的含量。
结果显示：血浆中铁离子在BA 患者中含量显著增加，谷胱甘肽在BA患者中含量显著降低，即铁离子和/或谷胱甘肽可以作为区分BA和其他临床上难以区分的疾病（如CC、胆汁淤积）的诊断或辅助诊断的标志物。
进一步对上述预测结果进行ROC曲线验证，结果显示铁离子和/或谷胱甘肽能够非常有效地区分 BA 受试者与CC 病例（AUC>0.7、特异度强、灵敏度高），表明铁离子和/或谷胱甘肽可以作为BA的诊断或辅助诊断的标志物，并且铁离子和谷胱甘肽联用的诊断效果显著优于铁离子或谷胱甘肽单独诊断的效果。
实施例10 铁调素和铁相关因子在诊断胆道闭锁中的应用
取对照胆总管囊肿（12例）和 BA 患者（12例）的血浆、肝脏，通过检测血浆中铁离子及肝脏中的铁调素（铁离子检测方法与实施例1相同，铁调素采用本领域常规方法检测）的含量。
结果显示：血浆中铁离子在BA 患者中含量增加，铁调素在BA患者中含量增加，即铁离子和/或铁调素可以作为区分BA和其他临床上难以区分的疾病（如CC、胆汁淤积）的诊断或辅助诊断的标志物。
进一步对上述预测结果进行ROC曲线验证，结果显示铁离子和/或铁调素能够非常有效地区分 BA 受试者与CC 病例（AUC>0.7、特异度强、灵敏度高），表明铁离子和/或铁调素可以作为BA的诊断或辅助诊断的标志物，并且铁离子和铁调素联用的诊断效果显著优于铁离子或铁调素单独诊断的效果。
实施例11MMP7和铁相关因子在诊断胆道闭锁中的应用
取对照胆总管囊肿（12例）和 BA 患者（12例）的血液，通过检测血液铁离子及MMP7（铁离子检测方法与实施例1相同，MMP7采用本领域常规方法检测例如ELISA方法）的含量。
结果显示：血液中铁离子在BA 患者中含量增加，MMP7在BA患者中含量增加，即铁离子和/或MMP7可以作为区分BA和其他临床上难以区分的疾病（如CC、胆汁淤积）的诊断或辅助诊断的标志物。
进一步对上述预测结果进行ROC曲线验证，结果显示铁离子和/或MMP7能够非常有效地区分 BA 受试者与CC 病例（AUC>0.96、准确度高、特异度强、灵敏度高），表明铁离子和/或MMP7可以作为BA的诊断或辅助诊断的标志物，并且铁离子和MMP7联用的诊断效果显著优于铁离子或MMP7单独诊断的效果。
实施例12MMP7、ENPP7和铁相关因子在诊断胆道闭锁中的应用
取对照胆总管囊肿（12例）和 BA 患者（12例）的血液，通过检测血液铁离子及MMP7、ENPP7（铁离子检测方法与实施例1相同，MMP7、ENPP7采用本领域常规方法检测例如ELISA方法）的含量。
结果显示：血液中铁离子在BA 患者中含量增加，MMP7在BA患者中含量增加，ENPP7含量增加，即铁离子和/或MMP7和/或ENPP7可以作为区分BA和其他临床上难以区分的疾病（如CC、胆汁淤积）的诊断或辅助诊断的标志物。
进一步对上述预测结果进行ROC曲线验证，结果显示铁离子、MMP7和/或ENPP7能够非常有效地区分 BA 受试者与CC 病例（AUC>0.99、准确度高、特异度、灵敏度高），表明铁离子、MMP7和/或ENPP7可以作为BA的诊断的标志物，并且铁离子、MMP7和ENPP7中任意两种或三种联用的诊断效果显著优于铁离子、MMP7或ENPP7单独诊断的效果。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (27)

1.检测标志物的物质在制备胆道闭锁诊断产品中的应用，其特征在于，所述标志物包括铁离子；所述铁离子包括血液中的铁离子、粪便中的铁离子、组织中的铁离子中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述标志物还包括其他胆道闭锁检测指标中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述其他胆道闭锁检测指标包括（a）类检测指标：铁相关因子；所述铁相关因子包含铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1、乳铁蛋白受体ITLN1、铁调素中的至少一种。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述其他胆道闭锁检测指标包括（b）类检测指标；所述（b）类检测指标包括硒离子、叶酸、谷胱甘肽、谷酰胺转移酶、GPX4、SELENOP、MMP7、胆红素、胆红素单葡萄糖醛酸酯、胆红素双葡萄糖醛酸酯、CD177+中性粒细胞、牛磺胆酸、NRF2、4-HNE、ENPP7、APOA4、APOA1中的至少一种。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述标志物包括铁离子和铁调素。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述标志物包括铁离子，和胆红素单葡萄糖醛酸酯、胆红素双葡萄糖醛酸酯、CD177+中性粒细胞、牛磺胆酸、谷酰胺转移酶中的至少一种。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述标志物包括铁离子，和叶酸、硒离子、谷胱甘肽、MMP7、ENPP7中的至少一种。
8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述标志物包括铁离子、ENPP7和MMP7。
9.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述标志物包括铁离子、（a）类检测指标及（b）类检测指标；
其中，所述（a）类检测指标为铁相关因子，所述铁相关因子包含铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1、乳铁蛋白受体ITLN1、铁调素中的至少一种；
其中，所述（b）类检测指标包括硒离子、叶酸、谷胱甘肽、谷酰胺转移酶、GPX4、SELENOP、MMP7、胆红素、胆红素单葡萄糖醛酸酯、胆红素双葡萄糖醛酸酯、CD177+中性粒细胞、牛磺胆酸、NRF2、4-HNE、ENPP7、APOA4、APOA1中的至少一种。
10.根据权利要求2-9中任一所述的应用，其特征在于，所述标志物的检测样本包含血液、组织、排泄物中的至少一种。
11.根据权利要求3、5或9所述的应用，其特征在于，所述铁离子或铁调素来自待测对象的血液、排泄物中的至少一种，所述排泄物为粪便。
12.根据权利要求1-9中任一项所述的应用，其特征在于，所述铁离子包括血液中的铁离子、粪便中的铁离子、组织中的铁离子中的至少两种。
13.根据权利要求1-9中任一项所述的应用，其特征在于，所述铁离子为血液中的铁离子和粪便中的铁离子。
14.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述铁离子转运蛋白SLC11A2、铁离子转运蛋白SLC40A1、血红素转运蛋白SLC46A1和/或乳铁蛋白受体ITLN1来自待测对象的组织。
15.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述GPX4或SELENOP来自待测对象的组织。
16.根据权利要求14或15所述的应用，其特征在于，所述组织包括肝脏组织和/或肠道组织。
17.根据权利要求4或9所述的应用，其特征在于，所述硒离子、叶酸、谷胱甘肽、MMP7、胆红素、胆红素单葡萄糖醛酸酯、胆红素双葡萄糖醛酸酯、CD177+中性粒细胞、牛磺胆酸、谷酰胺转移酶、NRF2、4-HNE、ENPP7、APOA4、APOA1来自待测对象的血液、排泄物、皮肤中的至少一种。
18.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述血液包括血清、血浆、干血斑、全血中的至少一种。
19.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述血液包括血清、血浆、干血斑、全血中的至少一种。
20.根据权利要求4或9所述的应用，其特征在于，所述胆红素包括经皮胆红素和/或血清胆红素。
21.根据权利要求4、6或9所述的应用，其特征在于，所述牛磺胆酸包含血斑牛磺胆酸。
22.根据权利要求4、7-9中任一项所述的应用，其特征在于，所述MMP7包含血清MMP7。
23.根据权利要求1-9中任一所述的应用，其特征在于，所述标志物的待测对象为儿童或成人。
24.根据权利要求1-9中任一项所述的应用，其特征在于，所述产品包含试剂、试剂盒、试纸、芯片、检测系统中的至少一种。
25.根据权利要求1-9中任一项所述的应用，其特征在于，所述检测标志物的物质是用于选自以下一种或多种方法中的物质：比色法、化学发光法、原子吸收分光光度法、高效液相色谱法、免疫组织化学法、Western印迹法、Northern印迹法、PCR、生物芯片法。
26.根据权利要求1-9中任一项所述的应用，其特征在于，当待测对象满足（h1），则诊断为胆道闭锁疾病患者；
（h1）血液和/或组织中的铁离子相对于参考水平显著升高；
所述参考水平为未患有胆道闭锁疾病的同年龄段受试者的水平。
27.根据权利要求26所述的应用，其特征在于，当待测对象还满足（h2）～（h24）中至少一项，则诊断为胆道闭锁疾病患者；
（h2）SLC40A1相对于参考水平显著降低；
（h3）SLC46A1相对于参考水平显著降低；
（h4）SLC11A2相对于参考水平显著升高；
（h5）ITLN1相对于参考水平显著升高；
（h6）粪便中的铁离子相对于参考水平显著降低；
（h7）叶酸相对于参考水平显著降低；
（h8）硒离子相对于参考水平显著降低；
（h9）谷胱甘肽相对于参考水平显著降低；
（h10）铁调素相对于参考水平显著升高；
（h11）GPX4相对于参考水平显著降低；
（h12）SELENOP相对于参考水平显著降低；
（h13）MMP7相对于参考水平显著升高；
（h14）胆红素相对于参考水平显著升高；
（h15）胆红素单葡萄糖醛酸酯相对于参考水平显著升高；
（h16）胆红素双葡萄糖醛酸酯相对于参考水平显著升高；
（h17）CD177+中性粒细胞相对于参考水平显著升高；
（h18）牛磺胆酸相对于参考水平显著升高；
（h19）NRF2相对于参考水平显著降低；
（h20）4-HNE相对于参考水平显著升高；
（h21）ENPP7相对于参考水平显著升高；
（h22）APOA4相对于参考水平显著升高；
（h23）APOA1相对于参考水平显著升高；
（h24）谷酰胺转移酶相对于参考水平显著升高；
所述参考水平为未患有胆道闭锁疾病的同年龄段受试者的水平。
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