CN115287242A - 一种快速培养嗜冷菌的培养基和应用及其制备方法和装置 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种快速培养嗜冷菌的培养基和应用及其制备方法和装置，属于微生物技术领域，用于快速培养嗜冷菌，培养基组分包括酵母浸粉、脱脂奶粉、葡萄糖、胰蛋白胨、3号胆盐、氯化钠、乳糖、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化锰、结晶紫、TTC、琼脂，pH值为6.8‑7.2，制备方法为将以上所有组分加到一种搅拌加热一体锅中，将加热溶解好的培养基通过锅底外部自带的冷却通道冷却至40℃‑60℃后灌装至一次性无菌平皿中，待培养基凝固后进行电子束辐照灭菌，本培养基配方简单，能实现嗜冷菌的快速培养并计数，培养周期缩短为3天，便于观察分析，且制备方法相比传统灭菌工艺节约灭菌和冷却时间，降低能耗，利于推广应用。

Description

一种快速培养嗜冷菌的培养基和应用及其制备方法和装置
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种快速培养嗜冷菌的培养基和应用及其制备方法和装置。
背景技术
嗜冷菌是一类菌的总称。这类菌是能够在-20℃至15℃低温下生长和繁殖的微生物，最适生长温度一般不超过15℃，由于这个温度与其它菌最适宜生长温度相比要冷许多（普通细菌适应生长温度为25℃~40℃），故此得名嗜冷菌。嗜冷菌是低温储藏牛乳和食品中最活跃的一类微生物，与其他微生物相比，其细胞膜中含有大量的多不饱和脂肪酸，熔点降低，使细胞膜在低温下能有良好的流动性；此外，嗜冷菌中还含有抗冻蛋白和冷休克蛋白，这些特性有利于嗜冷菌在低温下生长。
嗜冷菌的存在严重影响了乳制品的产品质量和保质周期，同时也是冰箱冷藏可生长感染菌，可以引起食物中毒等不良反应，急性甚至能够导致死亡。因此，快速培养并检测这类菌有利于食品安全检测把控，和临床上快速诊断。
传统的平板检测法是取样品稀释液接种至琼脂培养基，在5℃~6.5℃恒温培养10天后计数。平板检测嗜冷菌具有简单、观察方便、计数准确等优点，局限是耗时比较长。
目前还有一些较先进的快速检测方法，如间接检测蛋白酶活性法，直接荧光过滤法，电阻抗法，PCR 法，流动血细胞法，酶联免疫吸附技术等，其优点是快速、准确，局限是操作步骤繁琐、成本过高。
综上所述，现有的培养基培养周期太长，无法满足嗜冷菌的快速培养，和检测这类细菌，而较先进的快速检测方法操作繁琐、成本过高，不利于食品安全检测把控和临床上的快速诊断。
发明内容
为解决现有技术存在的以上问题，本发明提供了一种快速培养嗜冷菌的培养基和应用及其制备方法和装置，本发明可以提供一个简便、直观、成本低的快速检测方法，适用于快速、高密度培养嗜冷菌的培养基及其制备方法和应用。
本发明所采用的技术方案为：
一种快速培养嗜冷菌的培养基，其特征在于：
每升培养基中含有2-4g酵母浸粉、0.5-1g脱脂奶粉、1-3g葡萄糖、18-22g胰蛋白胨、1-2g 3号胆盐、4-6g乳糖、4-6g氯化钠、3-5g磷酸氢二钾、1-3g磷酸二氢钾、2-6g氯化锰、0.001-0.005g结晶紫、0.01-1g TTC、12-15g琼脂，pH值为6.8-7.2。
一种快速培养嗜冷菌的培养基的制备方法，其特征在于：
（1）首先，称量2-4g所述酵母浸粉、0.5-1g所述脱脂奶粉、1-3g所述葡萄糖、18-22g所述胰蛋白胨、1-2g 所述3号胆盐、4-6g所述乳糖、4-6g所述氯化钠、3-5g所述磷酸氢二钾、1-3g所述磷酸二氢钾、2-6g所述氯化锰、0.001-0.005g所述结晶紫、0.01-1g 所述TTC、12-15g所述琼脂；
（2）将步骤（1）中各组分加到搅拌加热一体锅中，加入1000mL去离子水，并额外加入5%-10%去离子水以补充加热所蒸发的水分；
（3）利用所述磷酸氢二钾和磷酸二氢钾调节步骤（2）中的混合液pH值为6.8-7.2；
（4）打开搅拌加热一体锅开关，边搅拌边加热至100℃煮沸13-17分钟；
（5）打开锅体下部的管道开关，将步骤（4）的混合液经过设置在搅拌加热一体锅中的冷却装置冷却至40-60℃后，灌装至一次性无菌培养皿中，10-50kGy电子束辐照灭菌，制得所述嗜冷菌培养基。
一种制备快速培养嗜冷菌的培养基用的搅拌加热一体锅，包括锅盖和锅体，其结构特点在于：锅盖上设有搅拌装置，搅拌装置的转速为10-20r/min，锅体内壁上设有容纳腔，容纳腔内电连接有加热管，锅体底部设有管道，冷却装置设置在管道的外表面。
进一步优选的方案：搅拌装置包括设置在锅盖上且伸入锅体内腔中的搅拌轴，锅盖上安装有驱动搅拌轴转动的驱动电机，搅拌轴的下部设有下搅拌叶片，所述下搅拌叶片的侧部及底部均设有能与锅体内壁及底壁接触的橡胶刮板，所述搅拌轴的上部环设有多个向不同方向延伸的侧搅拌叶片。
进一步优选的方案：所述冷却装置包括环设在管道外壁的套管，所述套管上环设有冷却腔，套管上部设有与冷却腔连通的冷却液出管，套管下部设有与冷却腔连通的冷却液进管。
快速培养嗜冷菌的培养基的应用，其特征在于：应用在快速培养嗜冷菌中。
一种应用培养基快速培养嗜冷菌的方法，其特征在于：将临床采集的样本或冰箱冷藏中保存的疑似样本进行制备、梯度稀释，加入到所述的快速培养嗜冷菌的培养基中进行培养，实现嗜冷菌的快速培养。
进一步优选的方案：培养温度为11-13℃，培养周期为3天。
本发明有益效果：
（1）本发明所述的一种快速培养嗜冷菌的培养基，通过采用酵母浸粉、脱脂奶粉、葡萄糖、胰蛋白胨、乳糖、氯化钠、3号胆盐、氯化锰、结晶紫、2，3，5－三苯基氯化四氮唑（TTC）、琼脂为原料并进行适当重量配比，其中脱脂奶粉、酵母浸粉、葡萄糖、胰蛋白胨和乳糖为嗜冷菌提供快速生长所需的营养物质，氯化钠可维持稳定的渗透压，3号胆盐和结晶紫能选择性抑制革兰氏阳性菌，TTC和氯化锰能够有效的防止嗜冷菌在增殖过程中的聚集，避免了嗜冷菌接触抑制，有利于嗜冷菌的快速培养，培养周期平均为3天。
（2）本发明所述的快速嗜冷菌培养基，配方简单，嗜冷菌生长迅速，便于观察分析，相比传统灭菌工艺制备操作较方便，节约灭菌和冷却时间，降低能耗，有利于推广应用。
（3）搅拌加热一体锅可以对培养基进行加热及均匀搅拌，而且在橡胶刮板的作用下，还能避免培养基粘锅现象的发生，加热搅拌后的培养基在流出锅体时，还可以通过冷却装置进行降温，使流出的培养基迅速冷却至可灌装温度，缩短冷却时间，提高工作效率。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为嗜冷菌培养基的制备流程图。
图2为实施例1中培养3天平板培养基的菌落图。
图3为实施例1嗜冷菌的生长曲线。
图4为实施例2中培养3天平板培养基的菌落图。
图5为实施例3中培养3天平板培养基的菌落图。
图6为实施例4中培养3天平板培养基的菌落图。
图7为对照组培养3天平板培养基的菌落图。
图8为不同实施例制备的培养基培养嗜冷菌单个菌落中经稀释的嗜冷菌个数的对比图。
图9为搅拌加热一体锅的结构示意图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施病例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
以下实施例中试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
胰蛋白胨、酵母浸粉作为氮源，提供嗜冷菌生长所需的氮源；乳糖、葡萄糖作为碳源，为嗜冷菌的生长提供所需碳源；3号胆盐、结晶紫可选择性抑制革兰氏阳性菌；磷酸氢二钾和磷酸二氢钾用来调节培养基的pH，琼脂作为凝固剂，是固体培养基的基本组分；脱脂奶粉为嗜冷菌提供快速生长所需的营养物质，TTC和氯化锰能够有效的防止嗜冷菌在增殖过程中的聚集，避免了嗜冷菌接触抑制，有利于嗜冷菌的快速培养。
一种快速培养嗜冷菌的培养基配方和嗜冷菌的培养方法如下：
1、培养基配方如下：
2-4g酵母浸粉、0.5-1g脱脂奶粉、1-3g葡萄糖、18-22g胰蛋白胨、1-2g 3号胆盐、4-6g乳糖、4-6g氯化钠、3-5g磷酸氢二钾、1-3g磷酸二氢钾、2-6g氯化锰、0.001-0.005g结晶紫、0.01-1g TTC、12-15g琼脂，磷酸氢二钾和磷酸二氢钾调节pH值为6.8-7.2，溶剂为去离子水。
2、培养方法
（1）制作培养基
称取2-4g酵母浸粉、0.5-1g脱脂奶粉、1-3g葡萄糖、18-22g胰蛋白胨、1-2g 3号胆盐、4-6g乳糖、4-6g氯化钠、3-5g磷酸氢二钾、1-3g磷酸二氢钾、2-6g氯化锰、0.001-0.005g结晶紫、0.01-1g TTC、12-15g琼脂于搅拌加热一体锅中，加入1000mL去离子水，并额外加入5%-10%去离子水以补充加热所蒸发的水分。利用磷酸氢二钾和磷酸二氢钾调节混合液的pH值为6.8-7.2，打开搅拌加热一体锅开关，搅拌转速为10-20r/min，边搅拌边加热至100℃煮沸13-17分钟。混合液经过冷却装置冷却至40-60℃后，无菌灌装至一次性无菌培养皿中，10-50kGy电子束辐照灭菌，制得嗜冷菌培养基。
（2）培养
将临床采集的样本或冰箱冷藏中保存的疑似样本进行制备、梯度稀释，加入到所述的快速培养嗜冷菌的培养基中进行培养，恒温12℃，培养周期为3天。
实施例1
1、本实施例提供一种快速培养嗜冷菌的培养基，采用如下方法制得：
（1）称取3.1g酵母浸粉、0.6g脱脂奶粉、2.0g葡萄糖、19.1g胰蛋白胨、1.5g 3号胆盐、5.2g乳糖、5.6g氯化钠、4.5g磷酸氢二钾、2.1g磷酸二氢钾、4.6g氯化锰、0.003g结晶紫、0.8g TTC、13.6g琼脂。
（2）将各组分加入搅拌加热一体锅中，加入1000mL去离子水，并额外加入5%去离子水以补充加热所蒸发的水分。
（3）利用磷酸氢二钾和磷酸二氢钾调节混合液的pH值为7.0。
（4）打开搅拌加热一体锅开关，搅拌转速为20r/min，边搅拌边加热至100℃煮沸15分钟。
（5）打开锅体下部管道阀门，混合液经过冷却装置冷却至40℃后，无菌灌装至一次性无菌培养皿中，25kGy电子束辐照灭菌，制得快速培养嗜冷菌的培养基。
2、嗜冷菌的培养
将临床采集的样本或冰箱冷藏中保存的疑似样本进行制备、梯度稀释，加入到所述的快速培养嗜冷菌的培养基中进行培养，恒温12℃，培养周期为3天。
实施例1制备的培养基培养嗜冷菌的结果如图2所示。
3、设置对照
以嗜冷菌计数琼脂培养基为对照，将临床采集的样本或冰箱冷藏中保存的疑似样本进行制备、梯度稀释，加入到嗜冷菌计数琼脂培养基中进行培养，恒温12℃，培养3天。
以上对照组未注明之处与本发明实施例1均相同。对照组培养嗜冷菌的结果如图7所示。
将嗜冷菌培养3天后的单个菌落进行稀释，根据显微镜观察计数单个菌落稀释液中嗜冷菌生长数量曲线如图3所示，嗜冷菌能够快速增殖，并在3天内能够达到较高数量以至肉眼可进行菌落计数，极大的缩短了嗜冷菌的培养周期。对照组培养结果可以看出，在12℃条件下培养3天，培养基上未长出易于计数和观察的菌落，不利于嗜冷菌的快速培养。
通过图8结果对比可知，本实施例1为本发明的最佳实施例。
实施例2
1、本实施例提供一种快速培养嗜冷菌的培养基，采用如下方法制得：
（1）称取2.1g酵母浸粉、0.5g脱脂奶粉、1.8g葡萄糖、18.1g胰蛋白胨、1.9g 3号胆盐、4.2g乳糖、4.6g氯化钠、3.5g磷酸氢二钾、1.1g磷酸二氢钾、3.6g氯化锰、0.004g结晶紫、0.5g TTC、12.6g琼脂，溶于去离子水中。
（2）将各组分加入搅拌加热一体锅中，加入1000mL去离子水，并额外加入5%-10%去离子水以补充加热所蒸发的水分。
（3）利用磷酸氢二钾和磷酸二氢钾调节混合液的pH值为7.0。
（4）打开搅拌加热一体锅开关，搅拌转速为20r/min，边搅拌边加热至100℃煮沸15分钟。
（5）打开锅体下部管道阀门，混合液经过冷却装置冷却至40℃后，无菌灌装至一次性无菌培养皿中，25kGy电子束辐照灭菌，制得快速培养嗜冷菌的培养基。
2、嗜冷菌的培养
将临床采集的样本或冰箱冷藏中保存的疑似样本进行制备、梯度稀释，加入到所述的快速培养嗜冷菌的培养基中进行培养，恒温12℃，培养周期为3天。
实施例2制备的培养基培养嗜冷菌的结果如图4所示。
3、设置对照
以嗜冷菌计数琼脂培养基为对照，将临床采集的样本或冰箱冷藏中保存的疑似样本进行制备、梯度稀释，加入到嗜冷菌计数琼脂培养基中进行培养，恒温12℃，培养3天。
以上对照组未注明之处与本发明实施例1均相同。对照组培养嗜冷菌的结果如图7所示。
本实施例结果可以看出，本发明配制的培养基中嗜冷菌能够快速增殖，并在3天内能够达到较高数量以至肉眼可进行菌落计数，极大的缩短了嗜冷菌的培养周期。对照组培养结果可以看出，在12℃条件下培养3天，培养基上未长出易于计数和观察的菌落，不利于嗜冷菌的快速培养。
实施例3
1、本实施例提供一种快速培养嗜冷菌的培养基，采用如下方法制得：
（1）称取2.5g酵母浸粉、0.7g脱脂奶粉、2.7g葡萄糖、20.3g胰蛋白胨、1.7g 3号胆盐、5.4g乳糖、5.3g氯化钠、4.2g磷酸氢二钾、1.8g磷酸二氢钾、4.2g氯化锰、0.001g结晶紫、0.01g TTC、12.3g琼脂，溶于去离子水中。
（2）将各组分加入搅拌加热一体锅中，加入1000mL去离子水，并额外加入5%-10%去离子水以补充加热所蒸发的水分。
（3）利用磷酸氢二钾和磷酸二氢钾调节混合液的pH值为7.0。
（4）打开搅拌加热一体锅开关，搅拌转速为20r/min，边搅拌边加热至100℃煮沸15分钟。
（5）打开锅体下部管道阀门，混合液经过冷却装置冷却至40℃后，无菌灌装至一次性无菌培养皿中，25kGy电子束辐照灭菌，制得快速培养嗜冷菌的培养基。
2、嗜冷菌的培养
将临床采集的样本或冰箱冷藏中保存的疑似样本进行制备、梯度稀释，加入到所述的快速培养嗜冷菌的培养基中进行培养，恒温12℃，培养周期为3天。
实施例3制备的培养基培养嗜冷菌的结果如图5所示。
3、设置对照
以嗜冷菌计数琼脂培养基为对照，将临床采集的样本或冰箱冷藏中保存的疑似样本进行制备、梯度稀释，加入到嗜冷菌计数琼脂培养基中进行培养，恒温12℃，培养3天。
以上对照组未注明之处与本发明实施例1均相同。对照组培养嗜冷菌的结果如图7所示。
本实施例结果可以看出，本发明配制的培养基中嗜冷菌能够快速增殖，并在3天内能够达到较高数量以至肉眼可进行菌落计数，极大的缩短了嗜冷菌的培养周期。对照组培养结果可以看出，在12℃条件下培养3天，培养基上未长出易于计数和观察的菌落，不利于嗜冷菌的快速培养。
实施例4
1、本实施例提供一种快速培养嗜冷菌的培养基，采用如下方法制得：
（1）称取4g酵母浸粉、0.9g脱脂奶粉、1.5g葡萄糖、18.0g胰蛋白胨、2.0g 3号胆盐、5.9g乳糖、5.8g氯化钠、3.2g磷酸氢二钾、2.6g磷酸二氢钾、5.8g氯化锰、0.005g结晶紫、0.9g TTC、14.9g琼脂，溶于去离子水中。
（2）将各组分加入搅拌加热一体锅中，加入1000mL去离子水，并额外加入5%-10%去离子水以补充加热所蒸发的水分。
（3）利用磷酸氢二钾和磷酸二氢钾调节混合液的pH值为7.0。
（4）打开搅拌加热一体锅开关，搅拌转速为20r/min，边搅拌边加热至100℃煮沸15分钟。
（5）打开锅体下部通道阀门，混合液经过冷却装置冷却至40℃后，无菌灌装至一次性无菌培养皿中，25kGy电子束辐照灭菌，制得快速培养嗜冷菌的培养基。
2、嗜冷菌的培养
将临床采集的样本或冰箱冷藏中保存的疑似样本进行制备、梯度稀释，加入到所述的快速培养嗜冷菌的培养基中进行培养，恒温12℃，培养周期为3天。
实施例4制备的培养基培养嗜冷菌的结果如图6所示。
3、设置对照
以嗜冷菌计数琼脂培养基为对照，将临床采集的样本或冰箱冷藏中保存的疑似样本进行制备、梯度稀释，加入到嗜冷菌计数琼脂培养基中进行培养，恒温12℃，培养3天。
以上对照组未注明之处与本发明实施例1均相同。对照组培养嗜冷菌的结果如图7所示。
本实施例结果可以看出，与实施例1-3相比，本实施例的培养效果略差，菌落较小，但嗜冷菌仍能快速增殖，并在3天内能够达到一定数量以至肉眼可进行菌落计数，极大的缩短了嗜冷菌的培养周期。对照组培养结果可以看出，在12℃条件下培养3天，培养基上未长出易于计数和观察的菌落，不利于嗜冷菌的快速培养。
综上所述，实施例1-4采用本发明的快速培养嗜冷菌的培养基，能够快速、高密度地培养嗜冷菌；与实施例2-4相比，实施例1的配方制备的培养基培养嗜冷菌的效果最好，培养周期为3天。嗜冷菌的快速培养，能够有效的检测这类细菌，有利于食品安全检测把控和临床上的快速诊断。
如图9所示，一种制备快速培养嗜冷菌的培养基用的搅拌加热一体锅，包括锅盖10和锅体20，锅体为不锈钢材质，锅盖10上设有搅拌装置，本实施例中搅拌装置包括设置在锅盖10上且伸入锅体20内腔中的搅拌轴11，锅盖10上安装有驱动搅拌轴11转动的驱动电机100。搅拌轴11的下部设有下搅拌叶片12，下搅拌叶片12的侧部及底部均设有能与锅体20内壁及底壁接触的橡胶刮板13，橡胶刮板13耐高温100℃以上，橡胶刮板13可以将粘在锅体20内壁及底壁上的附着物刮起，避免粘锅壁，搅拌轴11的上部环设有多个向不同方向延伸的侧搅拌叶片14，侧搅拌叶片14可以提高搅拌的均匀度。本实施例中搅拌轴11的转速为10-20r/min，该转速有利于橡胶刮板13将锅体内壁及底壁上的附着物缓慢刮起使之溶解充分并防止沸溅。
如图9所示，锅体20内壁上设有容纳腔，容纳腔内电连接有加热管30，加热管30可以对锅体20进行加热，从而对培养基进行加热。锅体20底部设有管道40，冷却装置设置在管道40的外表面，本实施例中冷却装置包括环设在管道40外壁的套管50，套管50上环设有冷却腔60，套管50上部设有与冷却腔60连通的冷却液出管51，套管50下部设有与冷却腔60连通的冷却液进管52，培养基在锅体20内加热并搅拌均匀后，使锅体20倾斜，并使培养基从管道40中流出，培养基在流经管道40时，冷却液从冷却液进管52进入冷却腔60，使流出的培养基迅速冷却至可灌装温度，缩短冷却时间，然后冷却液再从冷却液出管51流出。
该结构中锅体20上设置电气控制系统，驱动电机100、加热管30均与电气控制系统电连接，该连接方式为现有技术，在此不再赘述。另外，管道40、冷却液进管52和冷却液出管51上均设置阀门，阀门可控制培养基和冷却液的流动，阀门的设置方式为现有技术，在此不再赘述。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

Claims (8)

1.一种快速培养嗜冷菌的培养基，其特征在于：每升培养基中含有2-4g酵母浸粉、0.5-1g脱脂奶粉、1-3g葡萄糖、18-22g胰蛋白胨、1-2g 3号胆盐、4-6g乳糖、4-6g氯化钠、3-5g磷酸氢二钾、1-3g磷酸二氢钾、2-6g氯化锰、0.001-0.005g结晶紫、0.01-1g TTC、12-15g琼脂，pH值为6.8-7.2。
2.一种如权利要求1所述的快速培养嗜冷菌的培养基的制备方法，其特征在于：
（1）首先，称量2-4g所述酵母浸粉、0.5-1g所述脱脂奶粉、1-3g所述葡萄糖、18-22g所述胰蛋白胨、1-2g 所述3号胆盐、4-6g所述乳糖、4-6g所述氯化钠、3-5g所述磷酸氢二钾、1-3g所述磷酸二氢钾、2-6g所述氯化锰、0.001-0.005g所述结晶紫、0.01-1g 所述TTC、12-15g所述琼脂；
（2）将步骤（1）中各组分加到搅拌加热一体锅中，加入1000mL去离子水，并额外加入5%-10%去离子水以补充加热所蒸发的水分；
（3）利用所述磷酸氢二钾和磷酸二氢钾调节步骤（2）中的混合液pH值为6.8-7.2；
（4）打开搅拌加热一体锅开关，边搅拌边加热至100℃煮沸13-17分钟；
（5）打开锅体下部的管道开关，将步骤（4）的混合液经过设置在搅拌加热一体锅中的冷却装置冷却至40-60℃后，灌装至一次性无菌培养皿中，10-50kGy电子束辐照灭菌，制得所述嗜冷菌培养基。
3.一种制备如权利要求1所述的快速培养嗜冷菌的培养基用的搅拌加热一体锅，包括锅盖（10）和锅体（20），其特征在于：锅盖（10）上设有搅拌装置，搅拌装置的转速为10-20r/min，锅体（20）内壁上设有容纳腔，容纳腔内电连接有加热管（30），锅体（20）底部设有管道（40），管道（40）的外表面设有冷却装置。
4.根据权利要求3所述的制备快速培养嗜冷菌的培养基用的搅拌加热一体锅，其特征在于：搅拌装置包括设置在锅盖（10）上且伸入锅体（20）内腔中的搅拌轴（11），锅盖（10）上安装有驱动搅拌轴（11）转动的驱动电机（100），搅拌轴（11）的下部设有下搅拌叶片（12），所述下搅拌叶片（12）的侧部及底部均设有能与锅体（20）内壁及底壁接触的橡胶刮板（13），所述搅拌轴（11）的上部环设有多个向不同方向延伸的侧搅拌叶片（14）。
5.根据权利要求4所述的制备快速培养嗜冷菌的培养基用的搅拌加热一体锅，其特征在于：所述冷却装置包括环设在管道（40）外壁的套管（50），所述套管（50）上环设有冷却腔（60），套管（50）上部设有与冷却腔（60）连通的冷却液出管（51），套管（50）下部设有与冷却腔（60）连通的冷却液进管（52）。
6.根据权利要求1所述的快速培养嗜冷菌的培养基的应用，其特征在于：应用在快速培养嗜冷菌中。
7.一种应用如权利要求1所述的培养基快速培养嗜冷菌的方法，其特征在于：将临床采集的样本或冰箱冷藏中保存的疑似样本进行制备、梯度稀释，加入到所述的快速培养嗜冷菌的培养基中进行培养，实现嗜冷菌的快速培养。
8.根据权利要求7所述的快速培养嗜冷菌的方法，其特征在于：培养温度为11-13℃，培养周期为3天。
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