CN115261289B - 硝基还原假单胞菌PNr-1及其制品和对草莓叶部病害防治的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及微生物植物保护应用技术领域，具体涉及一种硝基还原假单胞菌PNr‑1及其制品和对草莓叶部病害防治的应用。硝基还原假单胞菌（Pseudomonas nitroreducens）PNr‑1已于2022年07月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.25354。该硝基还原假单胞菌PNr‑1及其制品对草莓叶部病害具有明显生物防治作用，尤其能有效抑制草莓灰霉病、草莓炭疽病、草莓叶枯病、草莓轮斑病和草莓花叶病毒病病原，对草莓的生产栽培具有重大应用价值。

Description

硝基还原假单胞菌PNr-1及其制品和对草莓叶部病害防治的 应用

技术领域

本发明涉及微生物植物保护应用技术领域，具体涉及一种硝基还原假单胞菌PNr-1及其制品和对草莓叶部病害防治的应用。

背景技术

草莓为蔷薇科草莓属浆果类多年生草本植物，在全世界已有300多年的栽培历史。其果实果肉鲜美，风味独特，富含维生素、矿物质、茶多酚、花青素等，营养价值、保健功效和经济价值皆高，且生长周期短、方便管理，已成为世界上广泛栽培的重要经济作物之一。其栽培面积和产量在世界浆果类水果生产中位居第二。我国近年来已成为世界草莓生产和消费第一大国，种植面积超过140千公顷，其中东部地区种植面积占比43.4%，中部地区种植面积占比26.4%，西部地区占比19.4%，东北地区占比10.9%。随着对草莓需求量的增加与栽培面积的不断扩大，一系列的影响草莓生产的病害的发生。其中，尤以草莓叶部病害发生影响最为严重，对草莓产量和品质造成严重的影响。

叶部病害是草莓上最严重的病害之一，会造成草莓的大幅减产甚至绝收。目前针对草莓叶部病害主要采用化学防治的方法，农药的过量滥用容易引起人畜中毒，环境污染，伤害有益生物，长期使用农药还会使得病原产生抗药性。另一方面，随着生活水平的日益提高，人们对食品安全的重视日益增强，农药高残留和残留造成的环境污染问题，食品安全问题和人类健康问题，引起各国的重视，相继加强农药管理。因此，生物防治替代化学农药成了当前研究的热点。

生物防治是借助拮抗微生物或者其次生代谢物质来防治病害的一种防治方法。近年来，有益微生物防控植物病害是替代化学农药的主要方法之一。目前，常见的生物防治菌有假单胞菌、芽孢杆菌、酵母菌、链霉菌、巴氏杆菌、木霉等。其中，有益假单胞菌是植物根际最普遍的微生物种类，具有分布广﹑数量多﹑营养需要简单﹑繁殖快﹑竞争定殖力强等特点，是主要的生物防治因子之一，其丰富的种类提供了多样的保护作用机制。它能保护作物根部不受病原等侵害，也能减除部分土壤污染，同时它可作为一种改善植物健康的替代物，是近年来生物防治的热点之一。有益假单胞菌具有对生态环境友好、施用方法便捷、不会产生抗药性等优点，逐渐成为国内外防治作物病害的研究热点。

为解决草莓生产种植中化学农药施用带来的环境污染、人畜安全等问题，同时利于可持续农业的发展，提供一种能够用于草莓叶部病害防治的有益假单胞菌，对于草莓产业的绿色生产十分重要。

发明内容

针对草莓叶部病害防治中因化学农药过量施用对果实污染导致的食品安全隐患问题，本发明提供一种硝基还原假单胞菌PNr-1及其制品和对草莓叶部病害防治的应用，该硝基还原假单胞菌PNr-1及其制品对草莓叶部病害具有明显生物防治作用，尤其能有效抑制草莓灰霉病、草莓炭疽病、草莓叶枯病、草莓轮斑病和草莓花叶病毒病病原，减少化学保护剂的使用，从而节约大量成本，使草莓生产效益最大化，对草莓的生产栽培具有重大应用价值。

第一方面，本发明提供一种硝基还原假单胞菌（Pseudomonas nitroreducens）PNr-1，该菌株已于2022年07月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.25354。

第二方面，本发明提供一株硝基还原假单胞菌PNr-1的菌剂，制备方法为向硝基还原假单胞菌PNr-1的发酵液中加入硅藻土，吸附结束后干燥，即得。

进一步的，将活化的硝基还原假单胞菌PNr-1接种于液体LB培养基中震荡培养至对数期，获得用于发酵的种子液Ⅰ，将种子液Ⅰ接种至发酵培养基Ⅰ中培养，得到硝基还原假单胞菌发酵液；

发酵培养基Ⅰ包括如下组分：豆粕粉35g/L、蛋白胨10g/L、葡萄糖35g/L、NaCl 3g/L、CaCl₂ 1g/L、MgSO₄·7H₂O 0.8g/L、K₂HPO₄·3H₂O 0.5g/L、KH₂PO₄ 1.5g/L和FeSO₄·7H₂O0.1g/L，余量为水；

发酵条件为32~34℃，通气保压0.05~0.1MPa，含氧量保持25%，转速160~180r/min，发酵过程中保持发酵液pH7.0~7.5，培养36~40h后至稳定期检测活菌总量，活菌计数浓度不低于1.3×10¹⁰cfu/mL，发酵结束。

第三方面，本发明提供一种硝基还原假单胞菌PNr-1或其菌剂在抑制草莓灰霉病、草莓炭疽病、草莓叶枯病或草莓轮斑病上的应用。

进一步的，应用方法为将硝基还原假单胞菌PNr-1或其菌剂的稀释液喷施草莓茎叶部。

第四方面，本发明提供一种硝基还原假单胞菌PNr-1的代谢产物，制备方法为过滤硝基还原假单胞菌PNr-1的发酵液，收集上清液并加入乙酸乙酯萃取，取下层，经超低温真空冷冻干燥，即得。

进一步的，将活化的硝基还原假单胞菌PNr-1接种于液体LB培养基中震荡培养10h，获得用于发酵的种子液Ⅱ，将种子液Ⅱ接种至发酵培养基Ⅱ中培养，得到硝基还原假单胞菌发酵液；

发酵培养基Ⅱ包括如下组分：酵母浸膏提取物5g/L、大豆蛋白胨10g/L和NaCl10g/L，余量为水；

发酵条件为30~32℃，通气保压0.05~0.1MPa，含氧量保持25%，摇床转速160r/min，发酵培养48h，发酵结束。

第五方面，本发明提供一种硝基还原假单胞菌PNr-1的代谢产物在抑制草莓花叶病毒病上的应用。

进一步的，应用方法为将硝基还原假单胞菌PNr-1的代谢产物的稀释液喷施草莓茎叶部。

第六方面，本发明提供一种草莓叶部病害防治剂，包括硝基还原假单胞菌PNr-1的菌剂、硝基还原假单胞菌PNr-1的代谢产物。

进一步的，还包括草炭土、羧甲基纤维素钠、甲聚糖和木质素硫酸钠；硝基还原假单胞菌PNr-1的菌剂、硝基还原假单胞菌PNr-1的代谢产物、草炭土、羧甲基纤维素钠、甲聚糖和木质素硫酸钠的质量比为92~94：1：2~2.5：1.5~2：0.5~1：1~1.5。

进一步的，制备方法为将硝基还原假单胞菌PNr-1的菌剂、硝基还原假单胞菌PNr-1的代谢产物、草炭土、羧甲基纤维素钠、甲聚糖和木质素硫酸钠充分混合，通过气流粉碎机，混合物粉碎至Φ=45μm以下，即得。

进一步的，硝基还原假单胞菌PNr-1的活菌浓度不低于1.2×10¹¹cfu/g，代谢产物浓度不低于1.0wt%，室温条件下半年后活菌数目不低于6.0×10¹⁰cfu/g。

进一步的，草莓叶部病害防治剂的剂型为可湿性粉剂。

第七方面，本发明提供一种草莓叶部病害防治剂在抑制草莓灰霉病、草莓炭疽病、草莓叶枯病、草莓轮斑病或草莓花叶病毒病上的应用。

进一步的，应用方法为将草莓叶部病害防治剂的稀释液喷施草莓茎叶部。

本发明的有益效果在于：

本发明提供的硝基还原假单胞菌PNr-1及其制品对草莓灰霉病、草莓炭疽病、草莓叶枯病、草莓轮斑病和草莓花叶病毒病等草莓叶部病害防治效果良好，防效优于常规化学农药（如甲霜灵、病毒A等），为探究该应用方向的微生物源农药的研发提供新的思路。

同时，本发明硝基还原假单胞菌PNr-1制品的制备方法简单，田间施用方便。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

具体实施方式中所使用的硝基还原假单胞菌PNr-1已于2022年07月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.25354。

实施例1 硝基还原假单胞菌PNr-1对草莓灰霉病、草莓炭疽病、草莓叶枯病、草莓轮斑病的抑制研究

在PDA培养基条件下，28℃倒置培养草莓灰霉病病原菌、草莓炭疽病病原菌、草莓叶枯病病原菌、草莓轮斑病病原菌3d，待菌丝生长，备用。

挑取硝基还原假单胞菌PNr-1单菌落接种至LB液体培养基，获得培养液，用LB液体培养基调整培养液浓度至1.0×10⁸cfu/mL。离心培养液，取下层菌体用等体积的LB液体培养基重新悬浮作为菌体悬浮液组，取上层清液分别稀释10倍、50倍和100倍作为10倍稀释培养液组﹑50倍稀释培养液组和100倍稀释培养液组。同时设置清水处理组和培养液上清组。

将新鲜草莓叶片置于各处理组（每组5mL）中，叶片背面朝上，接种Φ=5mm的病原菌菌体块，5d后观察统计其结果，研究硝基还原假单胞菌PNr-1对草莓灰霉病病原菌、草莓炭疽病病原菌、草莓叶枯病病原菌、草莓轮斑病病原菌的降解作用。结果如表1所示。

表1 各处理组的抑制作用（单位：mm）

可以看出，在含有硝基还原假单胞菌PNr-1菌体的四个处理组中，接种草莓灰霉病病原菌、草莓炭疽病病原菌、草莓叶枯病病原菌、草莓轮斑病病原菌的叶片接种点没有扩大，随着处理时间的增长叶片仍保持健康。在处理后5d后，菌体悬浮液组﹑10倍稀释培养液组和50倍稀释培养液组的叶片的接种点处观察不到菌丝，接种处形成枯斑；100倍稀释培养液组的叶片的接种点处形成枯斑，观察到少许菌丝的存在，接种点处有0.3~0.5mm的菌点。

实施例2 硝基还原假单胞菌PNr-1的菌剂的制备

（1）将-80℃保存的硝基还原假单胞菌PNr-1菌株接种至固体LB培养基进行活化，在30℃恒温条件下倒置培养16h（过夜培养），挑取平皿中的单菌落并接种于液体LB培养基，30℃恒温摇床中震荡培养至对数期（约12h），获得用于发酵的种子液Ⅰ，种子液Ⅰ浓度不低于1.0×10⁸cfu/mL；

（2）室温条件下，将种子液Ⅰ以体积比1:10的接种量接种至发酵培养基Ⅰ，保证发酵培养体系中硝基还原假单胞菌PNr-1菌体初始浓度均不低于1.0×10⁷cfu/mL；

发酵培养基Ⅰ包括如下组分：豆粕粉35g/L、蛋白胨10g/L、葡萄糖35g/L、NaCl 3g/L、CaCl₂ 1g/L、MgSO₄·7H₂O 0.8g/L、K₂HPO₄·3H₂O 0.5g/L、KH₂PO₄ 1.5g/L和FeSO₄·7H₂O0.1g/L，余量为水；发酵培养基Ⅰ的pH值为7.0~7.5，配制后在0.1Mpa、121℃条件下，连同发酵罐一起灭菌60min，自然冷却到常温；

发酵条件为32~34℃，通气保压0.05~0.1MPa，含氧量保持25%，转速160r/min，发酵过程中保持发酵液pH7.0~7.5，培养40h后至稳定期检测活菌总量，活菌计数浓度不低于1.3×10¹⁰cfu/mL，发酵结束；

（3）将步骤（2）发酵完毕的发酵液按照200g/L添加硅藻土，充分混匀，进行喷雾干燥，即得。

本实施例所制备的菌剂中，豆粕粉、蛋白胨的作用是为硝基还原假单胞菌提供氮源，葡萄糖的作用是为硝基还原假单胞菌提供碳源，NaCl、CaCl₂等培养基成分的作用是为硝基还原假单胞菌提供微量元素源，上述物质对于草莓叶部病原无抑制作用；硅藻土能够作为载体吸附硝基还原假单胞菌，避免菌株在喷雾干燥过程中被吹飞，硅藻土不具备抑制草莓叶部病原的作用；菌剂中包含硝基还原假单胞菌PNr-1活菌，菌剂的主要作用由硝基还原假单胞菌PNr-1活菌提供，当对出现病害的草莓施用本菌剂时，硝基还原假单胞菌PNr-1活菌能够有效抑制草莓灰霉病病原菌、草莓炭疽病病原菌、草莓叶枯病病原菌、草莓轮斑病病原菌。

实施例3 硝基还原假单胞菌PNr-1的代谢产物的制备

（1）将-80℃保存的硝基还原假单胞菌PNr-1菌株接种至固体LB培养基进行活化，在30℃恒温条件下倒置培养16h（过夜培养），挑取平皿中的单菌落并接种于液体LB培养基，30℃恒温摇床中震荡培养10h，获得用于发酵的种子液Ⅱ；

（2）室温条件下，将发酵种子液Ⅱ以体积比1:20的接种量接种至发酵培养基Ⅱ；

发酵培养基Ⅱ包括如下组分：酵母浸膏提取物5g/L、大豆蛋白胨10g/L和NaCl10g/L，余量为水；发酵培养基Ⅱ的pH值为7.0~7.5，配制后在0.1Mpa、121℃条件下，连同发酵罐一起灭菌60min，自然冷却到常温；

发酵条件为30~32℃，通气保压0.05~0.1MPa，含氧量保持25%，摇床转速160r/min，发酵培养48h，发酵结束；

（3）将步骤（2）发酵完毕的发酵液经Φ=45μm过滤网处理，收集发酵上清液，加入等体积乙酸乙酯萃取，取下层，经超低温真空冷冻干燥，得到硝基还原假单胞菌PNr-1的代谢产物。

实施例4 硝基还原假单胞菌PNr-1的代谢产物对草莓花叶病毒病的抑制研究

准确称取实施例3制备的代谢产物0.50g，并加入100mL体积的无菌水，超声震荡充分溶解，最终配置成浓度为5000mg/L的母液；取上述母液用无菌水分别稀释为10×、100×和500×（浓度分别为500mg/L﹑50mg/L和10mg/L）。

采用半叶枯斑法测定代谢产物对烟草花叶病毒（TMV）的抗性。选择生长旺盛、健康的真叶期三生烟，右半叶接种含有TMV和少量二氧化硅以及不同浓度的代谢产物（TMV和代谢产物体积比为1∶1）各100μL为处理组，左半叶接种等浓度含有TMV、二氧化硅和无菌水组成的混合物为清水对照组，完成接种后用清水冲洗干净，每棵烟草处理1片叶子，每处理6株，重复3次，3~5d后观察统计左右半叶的枯斑数目，并计算抑制率。

抑制率=（对照平均枯斑数－处理平均枯斑数）/对照平均枯斑数×100%。

同时，另选择生长旺盛、健康的真叶期三生烟，右半叶接种含有TMV和少量二氧化硅以及600倍稀释的病毒A可湿性粉剂的混合物100μL为药剂对照组，左半叶接种含有等浓度TMV、二氧化硅和无菌水组成的混合物对照，完成接种后用清水冲洗干净，每棵烟草处理1片叶子，每处理6株，重复3次，3~5d后观察统计左右半叶的枯斑数目，并计算阳性对照的抑制率。结果如表2所示。

表2 各处理组对草莓花叶病毒病的抑制作用

结果显示，代谢产物为母液浓度时，对烟草花叶病毒的抑制率接近100%；浓度为10×母液时，对烟草花叶病毒的抑制率接近100%；浓度为100×母液时，对烟草花叶病毒的抑制率达到95%以上；浓度为500×母液时，对烟草花叶病毒的抑制率超过85%。这表明硝基还原假单胞菌PNr-1的代谢产物对烟草花叶病毒有很好的抑制效果。另外，由表2可知，硝基还原假单胞菌PNr-1的代谢产物抑制效果较常见化学药剂相仿或略优，并且安全性高。

实施例5 草莓叶部病害防治剂的制备

以重量份数计，取92份实施例2制备的菌剂、2.5份草炭土、2份羧甲基纤维素钠、1份甲聚糖和1.5份木质素硫酸钠，和1份实施例3制备的代谢产物充分混合，通过气流粉碎机，混合物粉碎至Φ=45μm以下，即得草莓叶部病害防治剂。

该草莓叶部病害防治剂的剂型为可湿性粉剂，硝基还原假单胞菌PNr-1活菌浓度不低于1.2×10¹¹cfu/g，硝基还原假单胞菌PNr-1代谢产物浓度不低于1.0wt%，室温条件下半年后硝基还原假单胞菌PNr-1活菌数目不低于6.0×10¹⁰cfu/g。

实施例6 草莓叶部病害防治剂的制备

以重量份数计，取94份实施例2制备的菌剂、2份草炭土、1.5份羧甲基纤维素钠、0.5份甲聚糖和1份木质素硫酸钠，和1份实施例3制备的代谢产物充分混合，通过气流粉碎机，混合物粉碎至Φ=45μm以下，即得草莓叶部病害防治剂。

该草莓叶部病害防治剂的剂型为可湿性粉剂，硝基还原假单胞菌PNr-1活菌浓度不低于1.2×10¹¹cfu/g，硝基还原假单胞菌PNr-1代谢产物浓度不低于1.0wt%，室温条件下半年后硝基还原假单胞菌PNr-1活菌数目不低于6.0×10¹⁰cfu/g。

实施例7 草莓叶部病害防治剂的应用

试验按农业部药检所田间试验准则设计，试验地点为山东鲁青园艺示范园的设施田地，试验地土壤为深褐土，土壤肥力中上，具有灌溉条件，该设施农田常年种植草莓，并于2020~2021年生产种植过程中爆发过草莓灰霉病、草莓炭疽病、草莓叶枯病、草莓轮斑病和草莓花叶病毒病；供试作物为草莓“白雪姬”；试验时间分别为2022年1月，试验肥料用量与施用方法、田间栽培管理按当地最佳措施进行。

草莓种植设置6个处理，实施例5草莓叶部病害防治剂的100倍稀释液、200倍稀释液和500倍稀释液分别作为处理组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，50%甲霜灵750倍稀释液，病毒A可湿性粉剂600倍稀释液以及清水对照。

各处理每间隔7天喷施一次团棵期草莓茎叶部，连续施用3次。每处理0.04亩，各3次重复，共18个小区面积2.16亩，各小区留2行保护行。随机区组设计，选取15d进行田间调查。每小区采用双对角线固定5点取样，每点调查6株，记录调查对象的生长情况，发病情况及病级（病级调查后将发病病株除去）。

草莓叶部病害发病现象如下：

（一）真菌引发的草莓叶部病害（草莓灰霉病、草莓炭疽病、草莓叶枯病、草莓轮斑病）

主要危害团棵期株苗，植株感染后叶片背面气孔处零散生长白色菌丝。随着病情的发展病叶背面布满菌丝，正面病处褪绿，严重时叶片枯死掉落，并感染新生叶片。

真菌引发的草莓叶部病害的病级分级标准参考E. K. Ligoxigakis. and D. J.Vaiounakis的分级标准，具体如下：

（1）叶片病情分级标准为：0级，无病斑；1级，病斑面积占整张叶片面积的5%以下；3级，病斑面积占整张叶片面积的6%~10%；5级，病斑面积占整张叶片面积的11~25%；7级，病斑面积占整张叶片面积的26~50%；9级，病斑面积占整张叶片面积的51%以上。

（2）叶柄和匍匐茎的病情分级标准为：0级，无病；1级，发病部出现浅红色和褪色晕圈或红褐色斑点，病斑平均长度≤2.0毫米；3级，病斑沿叶柄或匍匐茎方向向两侧扩大呈梭形、黑褐色凹陷病痕，病斑平均长度为2.1~5.0毫米；5级，出现典型的纺锤型病斑，病斑平均长度为5.1~9.0毫米；7级，病斑扩大，其平均长度为9.1~15.0毫米；9级，叶柄或匍匐茎发病部呈黑色抽缩状，发病叶柄的叶片伴随出现萎蔫，病斑平均长度>15.0毫米。

（二）病毒引发的草莓叶部病害（草莓花叶病毒病）

草莓花叶病毒病的病情严重度分级指标参考中华人民共和国行业标准（NY/T1464-2007）病害分级标准，以整株为单位进行分级，具体如下：

0级：无病株；1级：明脉，轻花叶；3级：心叶及中部叶片花叶；5级：心叶及中部叶片花叶，少数叶片畸形、皱缩或植株轻度矮化；7级：重花叶，多数叶片畸形、皱缩或植株矮化；9级：重花叶，叶片明显畸形，植株严重矮化，甚至死亡。

发病率、病情指数、相对防效的计算公式如下：

发病率（%）=（发病植株数/调查植株数）×100%；

病情指数=100´S（各级病叶数´相对病级）/（调查总叶数´最高病级）；

相对防效（%）=［（对照区病指-处理区病指）/对照区病指］×100%。

利用EXCEL2010和SPSS19.0软件对数据进行统计分析，多重比较采用邓肯氏新复极差检验法，试验结果如下表3、4所示。

表3 草莓叶部病害防治剂对真菌引发的草莓叶部病害的防治效果

表4 草莓叶部病害防治剂对病毒引发的草莓叶部病害的防治效果

可以看出，相较清水对照，喷施处理组的草莓的发病均明显下降，施用100倍稀释液喷施时，对草莓灰霉病、草莓炭疽病、草莓叶枯病、草莓轮斑病的防治效果最佳，相对防效优于化学保护剂甲霜灵的相对防效；对草莓花叶病毒病的防效最佳，相对防效优于化学保护剂病毒A可湿性粉剂。这说明本发明草莓叶部病害防治剂能够明显抑制草莓灰霉病、草莓炭疽病、草莓叶枯病、草莓轮斑病和草莓花叶病毒病发病，为后续草莓旺长期、花果期的生长提供保护，保障其结实。

尽管通过优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一株硝基还原假单胞菌（Pseudomonas nitroreducens）PNr-1，其特征在于，该菌株已于2022年07月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.25354。

2.一种如权利要求1所述的硝基还原假单胞菌PNr-1在抑制草莓灰霉病、草莓炭疽病、草莓叶枯病或草莓轮斑病上的应用。

3.一种如权利要求1所述的硝基还原假单胞菌PNr-1的菌剂，其特征在于，制备方法为向硝基还原假单胞菌PNr-1的发酵液中加入硅藻土，吸附结束后干燥，即得。

4.如权利要求3所述的菌剂，其特征在于，将活化的硝基还原假单胞菌PNr-1接种于液体LB培养基中震荡培养至对数期，获得用于发酵的种子液Ⅰ，将种子液Ⅰ接种至发酵培养基Ⅰ中培养，得到硝基还原假单胞菌发酵液；

发酵培养基Ⅰ包括如下组分：豆粕粉35g/L、蛋白胨10g/L、葡萄糖35g/L、NaCl 3g/L、CaCl₂ 1g/L、MgSO₄·7H₂O 0.8g/L、K₂HPO₄·3H₂O 0.5g/L、KH₂PO₄ 1.5g/L和FeSO₄·7H₂O0.1g/L，余量为水；

发酵条件为32~34℃，通气保压0.05~0.1MPa，含氧量保持25%，转速160~180r/min，发酵过程中保持发酵液pH7.0~7.5，培养36~40h后至稳定期检测活菌总量，活菌计数浓度不低于1.3×10¹⁰cfu/mL，发酵结束。

5.一种如权利要求3所述的菌剂在抑制草莓灰霉病、草莓炭疽病、草莓叶枯病或草莓轮斑病上的应用。

6.一种如权利要求1所述的硝基还原假单胞菌PNr-1的代谢产物，其特征在于，制备方法为过滤硝基还原假单胞菌PNr-1的发酵液，收集上清液并加入乙酸乙酯萃取，取下层，经超低温真空冷冻干燥，即得。

7.如权利要求6所述的代谢产物，其特征在于，将活化的硝基还原假单胞菌PNr-1接种于液体LB培养基中震荡培养10h，获得用于发酵的种子液Ⅱ，将种子液Ⅱ接种至发酵培养基Ⅱ中培养，得到硝基还原假单胞菌发酵液；

发酵培养基Ⅱ包括如下组分：酵母浸膏提取物5g/L、大豆蛋白胨10g/L和NaCl 10g/L，余量为水；

发酵条件为30~32℃，通气保压0.05~0.1MPa，含氧量保持25%，摇床转速160r/min，发酵培养48h，发酵结束。

8.一种如权利要求6所述的代谢产物在抑制草莓花叶病毒病上的应用。

9.一种草莓叶部病害防治剂，其特征在于，包括如权利要求3所述的菌剂和如权利要求6所述的代谢产物。

10.一种如权利要求9所述的草莓叶部病害防治剂在抑制草莓灰霉病、草莓炭疽病、草莓叶枯病、草莓轮斑病或草莓花叶病毒病上的应用。