CN115245564A

CN115245564A - 免疫刺激剂

Info

Publication number: CN115245564A
Application number: CN202210413708.4A
Authority: CN
Inventors: 中村友惠
Original assignee: Mitsubishi Gas Chemical Co Inc
Current assignee: Mitsubishi Gas Chemical Co Inc
Priority date: 2021-04-27
Filing date: 2022-04-15
Publication date: 2022-10-28
Also published as: JP2022169350A

Abstract

本发明的课题在于提供一种免疫刺激剂，其通过增强IL‑12产生且使细胞性免疫活化，从而能够提高对由感染性微生物引起的疾病的抵抗。该免疫刺激剂包含干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)LC‑23菌株。

Description

免疫刺激剂

技术领域

本发明涉及一种包含干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)LC-23菌株的免疫刺激剂(免疫賦活剤)。

背景技术

免疫是指用于保护生物体远离细菌、病毒或体内产生的肿瘤等的系统。生物体通过免疫反应而应对细菌、病毒等的感染、肿瘤、细胞损伤等，该免疫应答通过免疫担当细胞间的各种相互作用进行调节。而且，在免疫应答的调节中，淋巴细胞、巨噬细胞等产生的白细胞介素、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等细胞因子起到重要的作用。

在淋巴细胞、巨噬细胞等产生的细胞因子中，白细胞介素12(以下，简记为“IL-12”)具有从辅助T前体细胞(ThO)向辅助T细胞型1(Th1)的分化诱导、自然杀伤细胞(NK细胞)的活化等作用。辅助T细胞有Th1细胞和Th2细胞，Th1细胞通过产生白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(抑制IFN-γ、IgE抗体的产生)、TNF-α、TNF-β、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-3，从而提高T细胞、单核细胞等吞噬细胞的活性，提高对细菌等的感染的抵抗。另外，自然杀伤细胞(NK细胞)具有特异性杀死癌细胞、病毒感染细胞等的能力。因此，通过增强IL-12的产生，可期待对病毒感染的抵抗力增强、癌的预防等。这些作用由于白细胞、淋巴细胞等免疫细胞直接杀死、吞噬病原体的作用，因此被称为细胞性免疫，与基于抗体产生的免疫作用(体液免疫)相区别。

另一方面，细胞性免疫和体液免疫关系处于平衡关系，如果细胞性免疫活化，则可见体液免疫被抑制的现象。现代人认为平衡倾向于抗体产生(体液免疫)侧，认为是花粉症、过敏症增加的一个原因。通过IL-12的增强，也可期待这些症状的缓和。

近年来，调节该免疫系统的食品成分备受关注。作为这样的成分，已知有乳酸菌、曲霉或酵母等食用微生物、它们的细胞壁成分以及香菇、姬松茸所代表的担子菌类的多糖类等。

关于调节免疫系统的乳酸菌，最近进行了各种研究。到目前为止，公开了以德氏乳杆菌“Lactobacillus delbrueckii”作为主成分的免疫刺激剂(专利文献1)、以乳杆菌属、乳球菌属等乳酸菌的菌体作为有效成分的IL-12产生促进剂(专利文献2)、以属于来自植物的乳杆菌属的乳酸菌和属于来自植物的明串珠菌属的乳酸菌作为有效成分的免疫功能调节剂(专利文献3)、以选自属于乳杆菌属、乳球菌属和链球菌属中的1种以上的乳酸菌体的破碎物作为有效成分的、具有维持或促进白细胞介素10产生的作用和维持或抑制IL-12产生的作用的白细胞介素产生调节剂(专利文献4)、包含具有免疫调节作用的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)的组合物(专利文献5)等。

专利文献1：日本特开平7-228536号公报

专利文献2：日本特开平10-139674号公报

专利文献3：日本特开2007-70249号公报

专利文献4：日本特开2007-269737号公报

专利文献5：日本特表2008-501013号公报

发明内容

但是，公开了以包含乳杆菌属、乳球菌属等的乳酸菌作为有效成分的调节免疫功能的试剂、医药品等，另一方面，并没有公开增强IL-12产生的能力且在免疫抑制处理小鼠和普通小鼠中具有白细胞吞噬活性、NK细胞活性之类的细胞性免疫活性的菌株。

本发明的课题在于提供一种通过增强IL-12产生且使细胞性免疫活化，从而能够提高对由感染性微生物引起的疾病的抵抗的免疫刺激剂。

本发明人等为了解决上述课题反复进行了深入研究，其结果发现干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)LC-23菌株提高IL-12产生且使细胞性免疫活化，完成了本发明。

即，本发明如下所述。

[1]一种免疫刺激剂，包含干酪乳杆菌LC-23菌株。

[2]根据[1]所述的免疫刺激剂，包含干酪乳杆菌LC-23菌株的死菌体。

[3]根据[1]或[2]所述的免疫刺激剂，包含所述干酪乳杆菌LC-23菌株的死菌体0.1～99重量％和糊精1～99.9重量％。

根据本发明，能够提供一种通过增强IL-12产生且使细胞性免疫活化，从而能够提高对由感染性微生物引起的疾病的抵抗。

具体实施方式

以下，对本发明的实施方式(以下，称为“本实施方式”)详细地进行了说明，但本发明并不限于此，可以在不脱离其主旨的范围内进行各种变形。

本实施方式的免疫刺激剂包含干酪乳杆菌LC-23菌株(以下，简称为“菌体”)。本实施方式的免疫刺激剂中使用的干酪乳杆菌LC-23菌株可以包含死菌体。

本发明人等从乳制品、来自人的许多乳酸菌中选定应用于食品时香味、物性均优异的菌株，能够选择干酪乳杆菌LC-23菌株。本发明人等进行了研究，结果可知通过摄入干酪乳杆菌LC-23菌株，IL-12的产生提高。因此，通过摄入干酪乳杆菌LC-23菌株，从而细胞性免疫活化，可期待对由感染性微生物引起的疾病的抵抗。

另外，本实施方式的免疫刺激剂由于使用作为乳酸菌的干酪乳杆菌LC-23菌株，因此具有安全性极高的效果。

培养干酪乳杆菌LC-23菌株的培养基可以使用乳培养基或包含乳成分的培养基、不包含这些成分的半合成培养基等各种培养基。作为这样的培养基，可以例示将脱脂乳还原并进行加热杀菌的还原脱脂乳培养基。

这些培养干酪乳杆菌LC-23菌株的培养法通过静置培养或者将pH控制为恒定的中和培养而进行，但只要是菌良好地生长的条件，则培养法没有特别限制。菌体可以依照乳酸菌培养的常规方法进行培养，可以直接使用通过离心分离等集菌手段从得到的培养物分离出的菌体。

另外，死菌体通常可以通过加热菌体而得到。加热条件只要是在菌体被杀死的条件就没有特别限定，一般而言，通过90℃、30分钟左右的加热能够得到充分的结果。

本实施方式的免疫刺激剂中不仅可以混入单纯作为菌体分离出的菌体，还可以混入培养物、悬浮物、其它菌体含有物、使用酶、物理手段对菌体进行了处理的细胞质、细胞壁级分。因此，作为干酪乳杆菌LC-23菌株的死菌体，可以为培养物或该培养物中所含的菌体本身。此时，包含本实施方式的免疫刺激剂的饮品食品中可以配合培养物或该培养物中所含的菌体本身。

另外，在本实施方式的免疫刺激剂中，可以将菌体与糊精进行混合而容易处理。此时，本实施方式的免疫刺激剂可以用作包含干酪乳杆菌LC-23菌株的死菌体0.1～99质量％和糊精1～99.9重量％。

干酪乳杆菌LC-23菌株和/或其死菌体可以作为免疫刺激剂配合于任意的饮食品，也可以在饮食品的制造工序中添加于原料。作为饮食品的例子，可举出乳饮料、发酵乳、果汁饮料、果冻、糖果、乳制品、蛋黄酱等鸡蛋加工品、黄油蛋糕等糕点·面包类等。

另外，干酪乳杆菌LC-23菌株和/或其死菌体、培养物可以作为家畜用饲料中所含的免疫刺激剂配合于任意的饲料，也可以在饲料的制造工序中添加于原料。

作为本实施方式的免疫刺激剂，以干酪乳杆菌LC-23菌株死菌体作为有效成分，除此之外没有特别限制，在其制剂化时，可以适当地混合制剂上可允许的赋形剂、稳定剂、矫味剂等，如常规方法那样进行制剂化。

另外，本实施方式的免疫刺激剂也可以在不妨碍菌体、培养物的作用的范围内混合赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫味矫臭剂、悬浮剂、包衣剂、其它任意的药剂进行制剂化。

作为本实施方式的免疫刺激剂的剂形，可以为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、粉剂、糖浆剂等，优选将它们口服给药。

为了发挥免疫刺激作用，在成人的情况下，只要将干酪乳杆菌LC-23菌株死菌体以能够摄入0.1～10g、优选0.5～5g/每天的方式调整配合量等即可。乳酸菌的含量比例没有特别限定，只要根据制造的容易性、优选的一日给药量等适当地调节即可。

实施例

以下，示出实施例和试验例对本发明更详细地进行说明，但它们仅是例示，本发明并不受它们任何限定。

[制造例1](乳酸菌的培养)

在市售培养基中培养干酪乳杆菌LC-23菌株。通过离心分离而集菌后，加入水进行再悬浮，进行离心分离而得到浓缩菌体溶液。将其在105℃以上进行杀菌处理30分钟。然后，对浓缩菌体溶液进行喷雾干燥而得到死菌体粉末。将该粉末和糊精(San-eiSucrochemical公司制NSD300)混合而得到10质量％死菌体粉末。

[实施例1]干酪乳杆菌LC-23菌株菌体溶液的制备

将制造例1中得到的死菌体粉末以死菌体重量成为1％的方式悬浮于于蒸馏水，再次在121℃进行杀菌处理20分钟，制备乳酸菌悬浮液。

[比较例1]副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)Shield乳酸菌(森永乳业公司制·含糊精75％)的制备

将副干酪乳杆菌Shield乳酸菌的死菌体粉末以死菌体重量成为1％的方式悬浮于蒸馏水，在121℃进行杀菌处理20分钟，制备乳酸菌悬浮液。

[基于巨噬细胞的白细胞介素12的产生促进试验]

细胞培养用的培养基使用包含RPMI1640(GIBCO)、10％胎牛血清和抗生素(青霉素链霉素：GIBCO)的培养基。培养以37℃、5％CO₂进行。ELISA中的清洗使用含0.05％Tween20的PBS缓冲液，使用洗板机(EIO-RAD公司制，Immuno Wash1575)进行。

将来自小鼠的类巨噬细胞的细胞株J774.1细胞以4.0×10⁴细胞/孔接种于96孔板(IWAKI)，培养2小时后，作为检体，乳酸菌悬浮液以在培养基中最终浓度成为150ug/ml的方式进行添加，培养48小时。

ELISA测定

在96孔免疫板(Thermo公司制430341)中添加0.8ug/ml的抗小鼠IL-12B单克隆抗体(SIN Sino Biological公司制)100μl，在4℃静置一夜进行固相化。清洗后，添加5％脱脂牛奶(Wako公司制)350ul，在4℃静置一夜进行封闭。清洗后，将培养上清液50ul添加到该板中并在37℃反应2小时，清洗后，添加0.8ug/ml生物素标记抗小鼠IL-12B单克隆抗体(MABMabtech AB公司制)100ul，在37℃标记2小时。清洗后，添加0.8ug/ml的HRP-链霉亲和素复合体(Amersham公司制)100ul，在室温下反应1小时。清洗后，添加TMB底物(Sera Care公司制)100ul，进行发生酶反应后，添加0.3M硫酸100ul使反应停止。利用读板仪(Perkin Elmer公司制，ARVO X3)，从450nm的吸收检测IL-12(p40)。另外，IL-12的产生量由使用IL-12p40标准品(SIN Sino Biological公司制)制成的标准曲线算出。

将测定结果示于表1。将实验检体无添加作为对照。

[表1]

结果可知，干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)LC-23菌株诱导IL-12产生，其活性比市场中占有广泛份额的副干酪乳杆菌副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)Shield乳酸菌高。由此可知，干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)LC-23菌株死菌体能够用作细胞性免疫刺激剂。

产业上的可利用性

本发明作为免疫刺激剂具有产业上的可利用性。

Claims

1.一种免疫刺激剂，包含干酪乳(Lactobacillus casei)LC-23菌株。

2.根据权利要求1所述的免疫刺激剂，包含所述干酪乳杆菌LC-23菌株的死菌体。

3.根据权利要求1或2所述的免疫刺激剂，包含所述干酪乳杆菌LC-23菌株的死菌体0.1～99质量％和糊精1～99.9重量％。