CN115216494A - 一种通过微生物发酵来提高杜仲中杜仲胶含量及提取率的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种通过微生物发酵来提高杜仲中杜仲胶含量及提取率的方法,涉及天然橡胶制备技术领域。其特征包括,首先将杜仲皮进行原料清洗并干燥,粉碎备用。依次用氢氧化钠溶液和纤维素酶对粉碎后的杜仲皮进行处理和酶解。然后用微生物进行微生物发酵,最后使用溶剂对发酵产物进行杜仲胶提取得到粗胶,干燥包装后得到产品杜仲胶。发酵后的杜仲皮提取的杜仲胶含量提高了1.9倍—2.5倍,同时杜仲胶提取率提高了1.4倍—1.6倍。使杜仲的使用价值大大提升。
Description
技术领域
本发明涉及天然橡胶制备技术领域,具体为一种通过微生物发酵来提高杜仲中杜仲胶含量及提取率的方法。
背景技术
杜仲树是我国特有绿色资源,经过几十年的努力,我国已经在杜仲树的种植,杜仲胶的提取以及综合利用等方面取得了长足的进步。杜仲树的树叶,树皮和果皮中均富含一种白色的天然的杜仲胶,因其特殊的橡塑二重性,优良的共混性和集成性等特性,使得杜仲以及杜仲胶的综合开发成为学界广泛关注的课题。杜仲胶是天然三叶橡胶的同分异构体,属于非弹性体的硬性橡胶其熔点较低,易于加工,且具有很好的电绝缘性,主要用作海底电缆,高尔夫球的原料。在医疗方面,由于杜仲胶坚柔耐磨,对人体副作用小的优点,也可以用来制作人造关节。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足,本发明提供了一种通过微生物发酵来提高杜仲中杜仲胶含量及提取率的方法,通过微生物的发酵作用,使得发酵后的杜仲皮的杜仲胶含量提高了1.9倍—2.5倍,杜仲胶提取率提高了1.4倍—1.6倍。提升了杜仲的使用价值。
(二)技术方案
为实现以上目的,本发明通过以下技术方案予以实现:一种通过微生物发酵来提高杜仲中杜仲胶含量及提取率的方法,包括以下步骤:
S1.首先将中药杜仲皮进行原料清洗并干燥,粉碎后备用。
S2.将粉碎的杜仲皮原料和3.0%(w/w)的氢氧化钠水溶液混合,搅拌下于85-90℃处理3h,过滤取固,水洗至中性;
S3.将S2步骤所得中间品和0.25%(w/w)纤维素酶水溶液混合,搅拌下于45-50℃用纤维素酶酶解3-5h,后于65-75℃烘箱干燥;
S4.将培养所需仪器设备进行清洗消毒并晾干,接着将S3步骤中制得的杜仲粉末放入培养容器内,然后加入60-90ml的纯水,搅拌20-30min混合均匀,静置20-30min;
S5.向S4步骤中培养容器中加入微生物并密封摇匀,然后将培养容器放入培养箱中进行发酵,发酵结束后高温灭活,烘箱干燥;
S6.将S5步骤所得杜仲发酵产物用石油醚(60-90)加热回流提取,干燥后得到杜仲胶产品;
优选的,所述S5步骤中微生物为米根霉菌,酵母菌,植物乳杆菌,嗜热链球菌中的一种。
优选的,所述微生物和杜仲的添加比例为微生物:杜仲=20ml(0.5%,w/w):30g。
优选的,所述S5步骤中培养箱的温度在27--40℃内,培养时间在5天。
优选的,所述发酵液灭活干燥步骤为:首先需将发酵液加热至95-105℃灭菌30min,然后65-75℃干燥。
优选的,所述步骤S2中粉碎的杜仲皮原料处理方法包括以下步骤:
a、将粉碎的杜仲皮原料经过过滤处理,然后将为经过过滤装置的重新进行粉碎,从而保证所有粉碎的杜仲皮原料为尺寸规格为粒径相近;
b、将粉碎的杜仲皮原料和3.0%(w/w)的氢氧化钠水溶液混合,搅拌下于85-90℃处理3h,之后再水清洗;
c、通过冲洗的方式对杜仲皮颗粒进行清洗,然后对清洗的废水进行ph检测,直到检测出废水呈ph中性值时,表示冲洗干净。
优选的,在过滤时,通过多级过滤的方式,首先将粉碎的杜仲皮原料通过一级过滤,然后将未过滤的进行重新进行粉碎;
通过一级过滤的杜仲皮原料进行二级过滤,然后将未通过二级过滤的杜仲皮原料进行重新进行粉碎;
同样的方式进行多次过滤和粉碎后使杜仲皮原料为尺寸规格相近。
(三)有益效果
本发明提供了一种通过微生物发酵来提高杜仲中杜仲胶含量及提取率的方法。具备以下有益效果:
1、本发明通过微生物的发酵,能较大幅度的提高杜仲中杜仲胶的含量,提高了杜仲胶的提取率。从而提高了杜仲的使用价值,具有较好的经济价值。减少了大量有机溶剂的使用,从而还避免了有机溶剂对环境的污染,同时该方法中的微生物品种易得,使用成本低,并且微生物发酵具有高效性和可重复性,无论是实验室小试制备还是工厂大规模生产,都有着成本上的优势。
2、通过微生物的发酵作用,使得发酵后的杜仲皮的杜仲胶含量提高了1.9倍—2.5倍,杜仲胶提取率提高了1.4倍—1.6倍。提升了杜仲的使用价值。
3、采用多级过滤的方式可以是杜仲皮充分破碎,而且过滤和粉碎同时进行,保证杜仲皮粉碎和过滤的效果更好。
具体实施方式
下面,结合实施例对本发明的技术方案进行说明,但是,本发明并不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例为杜仲皮原料的杜仲胶直接提取实施例。
称取粉碎好的杜仲皮粉末30g,加入到150ml石油醚(60-90)中,搅拌下加热至回流,保持回流状态提取2h,过滤取液,滤渣加入150ml石油醚(60-90)再次提取一次,过滤取液。合并提取液,干燥后得到杜仲胶产品。
实施例2
本实施例为杜仲皮经米根霉菌发酵的对比实施例。
所有器具清洗后消毒,将杜仲皮原材料打粉备用。取杜仲皮粉末50.0g,加入3.0%(w/w)氢氧化钠水溶液250ml中,混合均匀。于85-90℃搅拌处理3h,过滤取固,水洗固体至水洗液中性。于45-50℃水浴中,将该固体加入到100ml的0.25%(w/w)的纤维素酶水溶液中,搅拌下酶解5h。酶解液在65℃下烘箱干燥,得到中间品A。
取干燥好的中间品A粉末30g,加入纯水60ml,搅拌30min使之混合均匀。加入0.5%(W/W)的米根霉菌水溶液20ml。密封摇匀。置于27℃--30℃的培养箱中发酵5d。将发酵液加热至105℃灭菌30min,65℃烘箱干燥,得到中间品B。
称取干燥好的中间品B粉末30g,加入到150ml石油醚(60-90)中,搅拌下加热至回流,保持回流状态提取2h,过滤取液,滤渣加入150ml石油醚(60-90)再次提取一次,过滤取液。合并提取液,干燥后得到杜仲胶产品。
实施例3
本实施例为杜仲皮经酵母菌发酵的对比实施例。
所有器具清洗后消毒,将杜仲皮原材料打粉备用。取杜仲皮粉末50.0g,加入3.0%(w/w)氢氧化钠水溶液250ml中,混合均匀。于85-90℃搅拌处理3h,过滤取固,水洗固体至水洗液中性。于45-50℃水浴中,将该固体加入到100ml的0.25%(w/w)的纤维素酶水溶液中,搅拌下酶解5h。酶解液在65℃下烘箱干燥,得到中间品A。
取干燥好的中间品A粉末30g,加入纯水60ml,搅拌30min使之混合均匀。加入0.5%(W/W)的酵母菌水溶液20ml。密封摇匀。置于27℃--30℃的培养箱中发酵5d。将发酵液加热至105℃灭菌30min,65℃烘箱干燥,得到中间品B。
称取干燥好的中间品B粉末30g,加入到150ml石油醚(60-90)中,搅拌下加热至回流,保持回流状态提取2h,过滤取液,滤渣加入150ml石油醚(60-90)再次提取一次,过滤取液。合并提取液,干燥后得到杜仲胶产品。
实施例4
本实施例为杜仲皮经植物乳杆菌发酵的对比实施例。
所有器具清洗后消毒,将杜仲皮原材料打粉备用。取杜仲皮粉末50.0g,加入3.0%(w/w)氢氧化钠水溶液250ml中,混合均匀。于85-90℃搅拌处理3h,过滤取固,水洗固体至水洗液中性。于45-50℃水浴中,将该固体加入到100ml的0.25%(w/w)的纤维素酶水溶液中,搅拌下酶解5h。酶解液在65℃下烘箱干燥,得到中间品A。
取干燥好的中间品A粉末30g,加入纯水60ml,搅拌30min使之混合均匀。加入0.5%(W/W)的植物乳杆菌水溶液20ml。密封摇匀。置于27℃--30℃的培养箱中发酵5d。将发酵液加热至105℃灭菌30min,65℃烘箱干燥,得到中间品B。
称取干燥好的中间品B粉末30g,加入到150ml石油醚(60-90)中,搅拌下加热至回流,保持回流状态提取2h,过滤取液,滤渣加入150ml石油醚(60-90)再次提取一次,过滤取液。合并提取液,干燥后得到杜仲胶产品。
所述步骤S2中粉碎的杜仲皮原料处理方法包括以下步骤:
a、将粉碎的杜仲皮原料经过过滤处理,然后将为经过过滤装置的重新进行粉碎,从而保证所有粉碎的杜仲皮原料为尺寸规格相近;
b、将粉碎的杜仲皮原料和3.0%(w/w)的氢氧化钠水溶液混合,搅拌下于85-90℃处理3h,之后再水清洗;
c、通过冲洗的方式对杜仲皮颗粒进行清洗,然后对清洗的废水进行ph检测,直到检测出废水呈ph中性值时,表示冲洗干净。在过滤时,通过多级过滤的方式,首先将粉碎的杜仲皮原料通过一级过滤,然后将未过滤的进行重新进行粉碎;通过一级过滤的杜仲皮原料进行二级过滤,然后将未通过二级过滤的杜仲皮原料进行重新进行粉碎;
同样的方式进行多次过滤和粉碎后使杜仲皮原料为尺寸规格相近。
杜仲胶产品含量检测
依据GB/T8086-2019中有关天然生胶的检测方法,对实施例1—实施例4的杜仲胶产品进行检测。检测结果为:
表1杜仲胶检测结果
以实施例1中杜仲皮直接提取杜仲胶的数据为基础,对比实施例2—实施例4的杜仲胶提取率数据如表2所示:
表2杜仲胶提取率数据
综合杜仲皮发酵前后的杜仲胶含量检测结果可以看出,实施例2—实施例4经过微生物发酵的杜仲皮提取的杜仲胶粗胶和实施例1中的杜仲皮原材料提取的杜仲胶粗胶相比,胶的含量从38.14%分别提高到了72.87%,91.59%,93.98%,分别是杜仲皮原材料提取杜仲粗胶的1.9倍,2.4倍和2.5倍;而以实施例1中杜仲皮直接提取杜仲胶相比,实施例2—实施例4微生物发酵后的杜仲胶的提取率分别为实施例1的1.6倍,1.4倍和1.5倍。
如上所述,即可较好地实现本发明,上述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述,并非对本发明的范围进行限定,在不脱离本发明设计精神的前提下,本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种改变和改进,均应落入本发明确定的保护范围内。
Claims (9)
1.一种通过微生物发酵来提高杜仲中杜仲胶含量及提取率的方法。其特征在于:包括以下步骤:
S1.首先将中药杜仲皮进行原料清洗并干燥,粉碎后备用;
S2.将粉碎的杜仲皮原料和3.0%(w/w)的氢氧化钠水溶液混合,搅拌下于85-90℃处理3h,过滤取固并水洗至中性;
S3.将S2步骤所得中间品和0.25%(w/w)纤维素酶水溶液混合,搅拌下于45-50℃用纤维素酶酶解3-5h,后于65-75℃烘箱干燥;
S4.将培养所需仪器设备进行清洗消毒并晾干,接着将S3步骤中制得的杜仲粉末放入培养容器内,然后加入60-90ml的纯水,搅拌20-30min混合均匀,静置20-30min;
S5.向S4步骤中培养容器中加入微生物并密封摇匀,然后将培养容器放入培养箱中进行发酵,发酵结束后高温灭活,烘箱干燥;
S6.将S5步骤所得杜仲发酵产物用石油醚(60-90)加热回流提取,干燥后得到杜仲胶产品。
2.根据权利要求1所述的一种通过微生物发酵来提高杜仲中杜仲胶含量及提取率的方法,其特征在于,发酵所用微生物为米根霉菌,酵母菌,植物乳杆菌,嗜热链球菌中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种通过微生物发酵来提高杜仲中杜仲胶含量及提取率的方法,其特征在于,微生物和杜仲的添加比例为微生物:杜仲=20ml(0.5%,w/w):30g。
4.根据权利要求1所述的一种通过微生物发酵来提高杜仲中杜仲胶含量及提取率的方法,其特征在于:所述S5步骤中培养箱的温度在27--40℃,培养时间在5天。
5.根据权利要求1所述的一种通过微生物发酵来提高杜仲中杜仲胶含量及提取率的方法,其特征在于:所述发酵液灭活干燥步骤为:首先需将发酵液加热至95-105℃灭菌30min,然后65-75℃干燥。
6.根据权利要求1所述的一种通过微生物发酵来提高杜仲中杜仲胶含量及提取率的方法,其特征在于:所述步骤S4和S5中纯水为:重蒸水。
7.根据权利要求1所述的一种通过微生物发酵来提高杜仲中杜仲胶含量及提取率的方法,其特征在于:所述步骤S6中石油醚(60-90)提取方法是:杜仲发酵产物和石油醚(60-90)的比例为30g:150ml,提取时间2h,加热回流提取两次。
8.根据权利要求1所述的一种通过微生物发酵来提高杜仲中杜仲胶含量及提取率的方法,其特征在于:所述步骤S2中粉碎的杜仲皮原料处理方法包括以下步骤:
a、将粉碎的杜仲皮原料经过过滤处理,然后将为经过过滤装置的重新进行粉碎,从而保证所有粉碎的杜仲皮原料为尺寸规格相近;
b、将粉碎的杜仲皮原料和3.0%(w/w)的氢氧化钠水溶液混合,搅拌下于85-90℃处理3h,之后再水清洗;
c、通过冲洗的方式对杜仲皮颗粒进行清洗,然后对清洗的废水进行ph检测,直到检测出废水呈ph中性值时,表示冲洗干净。
9.根据权利要求8所述的一种通过微生物发酵来提高杜仲中杜仲胶含量及提取率的方法,其特征在于:在过滤时,通过多级过滤的方式,首先将粉碎的杜仲皮原料通过一级过滤,然后将未过滤的进行重新进行粉碎;
通过一级过滤的杜仲皮原料进行二级过滤,然后将未通过二级过滤的杜仲皮原料进行重新进行粉碎;
同样的方式进行多次过滤和粉碎后使杜仲皮原料为尺寸规格相近。
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