CN115211463B - 一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液及其制备方法 - Google Patents

一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液及其制备方法 Download PDF

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Abstract

一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液及其制备方法，它属于保鲜技术领域。本发明要解决的技术问题为提高保鲜的效果。本发明主要由酵母菌或酵母菌胞内产物、海藻酸钠、魔芋精粉、羧甲基纤维素钠、无菌水制成，其质量分数分别为酵母菌或酵母菌胞内产物10‑30wt％，海藻酸钠1‑2wt％、魔芋精粉0.5‑1.5wt％、羧甲基纤维素钠0.5‑1.5wt％、余量为无菌水。本发明酵母菌的基础上添加了由海藻酸钠、魔芋甘聚糖和羧甲基纤维素钠混合而成的复合涂膜，在油豆角的保鲜实验中获得了更加良好的效果，发挥了酵母菌和复合膜的双重优势，保证油豆角在常温贮藏13d后失重率维持在60％左右。

Description

一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液及其制备 方法
技术领域
本发明属于保鲜技术领域；具体涉及一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液及其制备方法。
背景技术
通过近些年的发展，采后保鲜的技术呈现出多种方式，包括传统的化学方法，比如双胍盐、苯菌灵等化学合成保鲜剂，对芒果、龙眼、柑橘等具有良好的保鲜效果。化学方法虽然具有方便、保鲜效果好、易推广等诸多优势，但是就食品安全方面仍存有一定的隐患，长期使用会对人体造成不可逆的损伤，提高致癌的风险。冷藏及气调贮藏也是现在采后保鲜的主要方式之一，相比于化学方法，冷藏和气调贮藏更安全，对人体不会有负面的影响，但冷库和气调贮藏的劣势体现在投入成本、管控成本过高，对电力依赖性大，容错率极低。还有一些新兴的保鲜技术，比如静电保鲜技术，超声波保鲜技术等，在越来越多采后保鲜技术的涌出，生物防治的采后保鲜也走进了大众的视野内，利用生物技术方法，对采后病害进行控制，降低果蔬的腐烂率，开发高效、安全的新型生防菌剂得到了广泛关注。许多生防真菌、生防细菌以及生防酵母菌被研究开发制成新型生物菌剂，其中酵母菌因其具有高安全性、广谱抑菌性、繁殖速度快、遗传稳定、营养要求低、对化学药物抗性高，同时与其他方法配合使用等特点得到更多的研究。
发明内容
本发明目的是提供了一种保鲜性能好的含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液及其制备方法。
本发明通过以下技术方案实现：
一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液，所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液主要由酵母菌或酵母菌胞内产物、海藻酸钠、魔芋精粉、羧甲基纤维素钠、无菌水制成，其质量分数分别为酵母菌或酵母菌胞内产物10-30wt%，海藻酸钠1-2wt%、魔芋精粉0.5-1.5wt%、羧甲基纤维素钠0.5-1.5wt%、余量为无菌水。
本发明所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液，所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液为20wt%的酵母菌，1wt%的海藻酸钠，1wt%的魔芋精粉，1.5wt%的羧甲基纤维素钠，余量为无菌水。
本发明所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液，所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液为20wt%的酵母菌胞内产物，1wt%的海藻酸钠，1wt%的魔芋精粉，1.5wt%的羧甲基纤维素钠，余量为无菌水。
本发明所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液，所述的酵母菌为浅白隐球酵母菌(Cryptococcus albidus)，简称Ca63，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.18014。
本发明所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，包括如下步骤：
步骤1、制备酵母菌种子液；
步骤2、制备酵母菌发酵液；
步骤3、制备酵母菌细胞悬浮液；
步骤4、制备酵母菌胞内产物粗提物；
步骤5、制备涂膜溶液；
步骤6、将步骤3制备的酵母菌细胞悬浮液或步骤4制备的酵母菌胞内产物粗提物按照质量比与步骤5制备的涂膜溶液混合均匀，得到所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液。
本发明所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，步骤1制备酵母菌种子液的方法为将负80℃冰箱内酵母菌菌种接种于PDB培养基中活化，次日划线于PDA培养皿上，挑取单菌落转接于YPD液体培养基中，置于恒温摇床28℃下200r/min培养24h，放于4℃冰箱中作为种子液备用。
本发明所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，步骤2制备酵母菌细胞悬浮液的方法为将步骤1制备的酵母菌种子液以2%v/v接种到YPD培养基，28℃、200r/min摇瓶培养36h，得到酵母菌发酵液。
本发明所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，步骤3制备酵母菌细胞悬浮液的方法为取一定量的步骤2制备的酵母菌发酵液于高速离心机10000r/min离心15min，收集菌体，PH6.8磷酸缓冲溶液将菌体重悬，重复三次，将重悬后的菌体与PH6.8磷酸缓冲溶液按1g:20ml配置成酵母菌细胞悬浮液。
本发明所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，步骤4制备酵母菌胞内产物粗提物的方法为取一定量的步骤2制备的酵母菌发酵液置于超声细胞破碎仪中进行破碎，破碎后再次使用高速离心机10000r/min，离心15min，弃菌体，取上清液即为酵母菌胞内产物粗提物。
本发明所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，步骤5制备涂膜溶液的方法包括如下步骤：
步骤5.1、按照质量比将海藻酸钠、魔芋精粉、羧甲基纤维素钠溶于蒸馏水中，得到混合物，待用；
步骤5.2、将步骤5.1得到的混合物使用磁力搅拌器600r/min均匀搅拌2h，使其完全溶解，然后使用超声清洗仪进行超声脱气，去泡，得到涂膜溶液。
本发明的有益效果为：
本发明所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液，通过正交优化实验得出最佳涂膜溶液配方为：海藻酸钠：魔芋甘聚糖：羧甲基纤维素钠：投菌量=1%：1%：1.5%：20%。
本发明所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，通过正交优化实验得出最佳酵母菌最佳破碎条件为：酵母菌Ca63为破碎时间15min、破碎功率100W、辐射时间7s和伸入液面下深度2cm。
本发明所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液，酵母菌及其胞内产物复合涂膜对油豆角贮藏保鲜的积极作用明显，表观保鲜效果：酵母菌复合涂膜>酵母菌胞内产物复合涂膜>空白涂膜>酵母菌菌悬液>酵母胞内产物提取液>空白对照，酵母菌复合涂膜、酵母菌胞内产物复合涂膜和空白涂膜处理组较对照组显著（P<0.05）降低了油豆角贮藏期间失重率、腐烂率、锈斑指数和色泽指数，说明油豆角表面形成的致密薄膜对油豆角水分的流失和病原菌的入侵起到一定的阻隔作用，在生理指标方面，酵母菌复合涂膜>酵母菌胞内产物复合涂膜>酵母菌菌悬液>酵母胞内产物提取液>空白涂膜>空白对照，含有酵母菌及其胞内产物的处理组对油豆角贮藏期间生理指标有一定积极的作用，其中超氧化物歧化酶（SOD）、维生素E（VE）较其他处理组前期升高程度明显，随着贮藏时期下降更缓慢，叶绿素含量下降缓慢，有效抑制了丙二醛（MDA）含量的上升。说明酵母菌及其胞内产物对油豆角采后生理活动起到了一定的诱导抗性的作用。
本发明所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液，酵母菌的基础上添加了由海藻酸钠、魔芋甘聚糖和羧甲基纤维素钠混合而成的复合涂膜，在油豆角的保鲜实验中获得了更加良好的效果，发挥了酵母菌和复合膜的双重优势。实验结果表明，酵母菌及其胞内产物复合涂膜对油豆角的保鲜效果要明显优于单独酵母菌及胞内产物或单独的复合涂膜，复合涂膜处理的油豆角失重率、腐烂率、锈斑指数及色泽指数均有明显的下降，可以保证油豆角在常温贮藏13d后失重率维持在60%左右，包括腐烂率、锈斑指数和色泽指数的综合感官指数与对照组相比明显下降（P<0.05），说明可以有效地延长油豆角的货架期，增加油豆角的商品价值，并且不会对其本身品质产生影响。
附图说明
图1为具体实施方式二所述的一种含有酵母菌的保鲜涂膜溶液的SEM照片；
图2为具体实施方式三所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的SEM照片；
图3为具体实施方式二和三制备的所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的油豆角保鲜效果对比照片；
图4为具体实施方式二和三制备的所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的油豆角失重率对比曲线；
图5为具体实施方式二和三制备的所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的油豆角腐烂率对比曲线；
图6为具体实施方式二和三制备的所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的油豆角锈斑指数对比曲线；
图7为具体实施方式二和三制备的所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的油豆角色泽指数对比曲线；
图8为具体实施方式二和三制备的所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的油豆角SOD活性对比曲线；
图9为具体实施方式二和三制备的所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的油豆角MDA含量对比曲线；
图10为具体实施方式二和三制备的所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的油豆角叶绿素含量对比曲线；
图11为具体实施方式二和三制备的所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的油豆角维生素E含量对比曲线；
说明书附图中A1为Ca63复合涂膜；A2为Ca63胞内产物复合涂膜；A3为Ca63菌悬液；A4为Ca63胞内产物提取液； KM为空白复合涂膜；CK为空白对照。
具体实施方式
具体实施方式一：
一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，包括如下步骤：
步骤1、制备酵母菌种子液；
步骤2、制备酵母菌发酵液；
步骤3、制备酵母菌细胞悬浮液；
步骤4、制备酵母菌胞内产物粗提物；
步骤5、制备涂膜溶液；
步骤6、将步骤3制备的酵母菌细胞悬浮液或步骤4制备的酵母菌胞内产物粗提物按照质量比与步骤5制备的涂膜溶液混合均匀，得到所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液。
本实施方式所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液主要由酵母菌或酵母菌胞内产物、海藻酸钠、魔芋精粉、羧甲基纤维素钠、无菌水制成，其质量分数分别为酵母菌或酵母菌胞内产物10-30wt%，海藻酸钠1-2wt%、魔芋精粉0.5-1.5wt%、羧甲基纤维素钠0.5-1.5wt%、余量为无菌水所述的酵母菌为浅白隐球酵母菌(Cryptococcus albidus)，简称Ca63，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.18014。
本实施方式所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，步骤1制备酵母菌种子液的方法为将负80℃冰箱内酵母菌菌种接种于PDB培养基中活化，次日划线于PDA培养皿上，挑取单菌落转接于YPD液体培养基中，置于恒温摇床28℃下200r/min培养24h，放于4℃冰箱中作为种子液备用。
本实施方式所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，步骤2制备酵母菌细胞悬浮液的方法为将步骤1制备的酵母菌种子液以2%v/v接种到YPD培养基，28℃、200r/min摇瓶培养36h，得到酵母菌发酵液。
本实施方式所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，步骤3制备酵母菌细胞悬浮液的方法为取一定量的步骤2制备的酵母菌发酵液于高速离心机10000r/min离心15min，收集菌体，PH6.8磷酸缓冲溶液将菌体重悬，重复三次，将重悬后的菌体与PH6.8磷酸缓冲溶液按1g:20ml配置成酵母菌细胞悬浮液。
本实施方式所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，步骤4制备酵母菌胞内产物粗提物的方法为取一定量的步骤2制备的酵母菌发酵液置于超声细胞破碎仪中进行破碎，破碎后再次使用高速离心机10000r/min，离心15min，弃菌体，取上清液即为酵母菌胞内产物粗提物。
本实施方式所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，步骤5制备涂膜溶液的方法包括如下步骤：
步骤5.1、按照质量比将海藻酸钠、魔芋精粉、羧甲基纤维素钠溶于蒸馏水中，得到混合物，待用；
步骤5.2、将步骤5.1得到的混合物使用磁力搅拌器600r/min均匀搅拌2h，使其完全溶解，然后使用超声清洗仪进行超声脱气，去泡，得到涂膜溶液。
本实施方式所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，研发的过程及制备的所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的性能测试结果分析如下：
表 1超声破碎工艺优化试验因素水平表
表1为制备酵母菌胞内产物粗提物的超声破碎工艺的四因素三水平正交实验表。
表 2 Ca63超声破碎条件优化正交试验设计
多糖含量越大说明酵母破碎程度越高，从表2可知，通过正交实验得到的结论为Ca63酵母菌的最佳破碎条件为：破碎时间为15min，破碎功率为100W，辐射时间为7s，伸入液面下深度为2cm。
表 3涂膜溶液成膜性正交试验结果
注：“+”表示可以成膜，“-”表示不成膜
从表3按照正交试验设计将三种物质与酵母菌菌悬液混合，所得膜溶液倒在亚克力板上流延成膜，晾干。结果表示试验编号2（1）、4（2）、7（3）号配比可以成功形成薄膜。所制得薄膜呈透明状，透光率良好，2号和4号延展性和抗拉伸性良好；7号抗拉伸性差、易断，均易溶于水。通过TEM测试2号和4号配方薄膜的超微结构良好，表面有少许凸起，放大30K倍后，表面光滑程度下降，凸起更为明显，放大50k倍后，表面仍有多个不规则凸起，并有较大的裂缝。而2号薄膜超微结构紧致，表面光滑，无明显不规则的空隙，放大30K倍后，仍未观察到凸起或裂缝，放大50K倍后可以看出细致、孔隙度均匀的空隙。综上所述，选择2号配方为最佳膜溶液的配比。
具体实施方式二：
根据具体实施方式一方法制备的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液，所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液为20wt%的酵母菌，1wt%的海藻酸钠，1wt%的魔芋精粉，1.5wt%的羧甲基纤维素钠，余量为无菌水。
具体实施方式三：
根据具体实施方式一方法制备的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液，所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液为20wt%的酵母菌胞内产物，1wt%的海藻酸钠，1wt%的魔芋精粉，1.5wt%的羧甲基纤维素钠，余量为无菌水。
具体实施方式二制备的酵母菌的保鲜涂膜溶液的涂膜SEM照片如图1所示，具体实施方式三制备的酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的涂膜SEM照片如图2所示。
具体实施方式二、具体实施方式三制备的保鲜涂膜溶液，用于保鲜性能的测试，挑选大小一致，无病害、无机械损伤的市售油豆角，购回后立即进行保鲜效果实验。将油豆角表面清洗干净，并使用75%酒精对油豆角表面进行消毒处理，晾干。将油豆角浸于配制的涂膜溶液中2min，置于常温下自然晾干，使豆角表面形成一层薄膜，使用清水作为对照室温下贮藏，以13d为贮藏周期，每天对油豆角失重率进行测定，每两天对不同处理组进行感官调查，包括腐烂率、锈斑指数和色泽指数，并对油豆角各项生理指标进行测定，每组实验至少重复三次。
测试方法如下：油豆角贮藏试验失重率及感官指数的测定
A、失重率的测定：采用称重的方式测定，处理后24h开始测定，之后每天测定一次。
失重率=（油豆角原始重量-测定重量）/油豆角原始重量×100%
B、腐烂率：将果实按腐烂面积分为4级：
0级，无腐烂；1级，腐烂面积小于果实面积20%；2级，腐烂面积占果实面积20-50%；3级，腐烂面积大于果实面积50%
腐烂率=Σ（腐烂级别×该级豆荚个数）/（最高腐烂级别×总豆荚个数）×100%
C、锈斑指数：按豆角表面锈斑的发生程度分为 0～3 级：
0 级—无锈斑；1 级—锈斑较少，具有商品价值； 2 级—锈斑较多，没有商品价值； 3 级—锈斑严重，失去食用品质。
锈斑指数=Σ（锈斑级别×级别样品数量）/（最高级别×样品总数量）×100%
D、色泽指数
按豆角及颜色变化分为4级：0级，鲜绿色；1级，轻微褪色；2级，严重褪色；3级，黄白色。
色泽指数：Σ（色泽级别×级别样品数量）/（最高级别×样品总数量）×100%
感官综合指数=0.4×腐烂率+0.3×锈斑指数+0.3×色泽指数
油豆角贮藏试验生理生化指标的测定
A、植物叶绿素含量的测定
使用苏州科铭植物叶绿素试剂盒（微量法）进行测定。
取240ml蒸馏水和960ml丙酮，充分混匀，作为提取液待用。称取各处理组样品0.1g，剪碎，加入1ml蒸馏水和50mg试剂一，在黑暗或弱光下充分研磨，转入10ml玻璃管，用提取液冲洗研钵，将所有冲洗液转入玻璃管，用提取液补充至10ml，玻璃试管用锡纸包裹浸提3h，直至试管底部组织完全变白，取浸提液200μL于96孔酶标板，提取液调零，测定663nm和645nm处吸光值，分别记为A663和A645。
叶绿素 a 含量（mg/g 鲜重）=（12.7× A663 – 2.69 × A645）×V 提×D÷m÷1000
叶绿素 b 含量（mg/g 鲜重）=（22.9× A645 – 4.68 × A663）×V 提×D÷m÷1000
叶绿素总含量（mg/g 鲜重）=（20.21× A645 + 8.02 × A663）×V 提×D÷m÷1000
V 提：提取液体积，10mL；D：稀释倍数；m：样本质量，g。
B、维生素E含量测定
取各处理组样品0.1g，加入1mL提取液，匀浆，定至在漩涡混匀仪上震荡 5min，于25℃，5000g 离心 10min，取上层清液于96孔酶标板，无水乙醇调零，测定530nm处吸光值。
计算公式：
V反总：反应总体积；V样：加入样本体积；V样总：加入提取液体积；W：样本质量。
表4维生素E含量的测定
C、 SOD活性的测定
取各处理组样品0.1g，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，8000g4℃离心10min，取上清液于96孔酶标板，560nm测定吸光值。
1、抑制百分率的计算 抑制百分率＝(A 对照管－A 测定管)/A 对照管× 100%
2、计算公式：
V反总：反应体系总体积；V样：加入反应体系中样本体积；V样总：加入提取液体积；W：样本质量。
表5 SOD活性的测定
D、 MDA含量的测定
取各处理组样品0.1g，加入1ml提取液，进行冰浴匀浆，8000g4℃离心10min，取上清，置于冰上待测。取0.3mL试剂一于1.5mL试管中，再加入 0.1mL样品，混匀，95℃水浴中保温 30min，置于冰浴中冷却，10000g，25℃，离心 10min，吸取 200μL上清液于96 孔酶标板中，测定532nm 和600nm 处的吸光度， 记为 A532和A600，ΔA=A532-A600。
MDA含量计算公式：
V 反总：反应体系总体积；ε：丙二醛摩尔消光系数，155×103 L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积；V样总：加入提取液体积；W：样本质量。
测试结果如下：
图3为具体实施方式二和三制备的所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的油豆角保鲜效果对比照片，其中A1为Ca63复合涂膜；A2为Ca63胞内产物复合涂膜；A3为Ca63菌悬液；A4为Ca63胞内产物提取液； KM为空白复合涂膜；CK为空白对照，不同处理对油豆角保鲜效果的影响，第一次拍照取样为处理前，第二次拍照取样为处理后24h，之后每两天拍照取样一次，我们可以直接看出，A1在第七次拍照取样出现了黄化现象，在最后一次拍照取样可以看出油豆角有较为明显的黄化现象，失去了一定的商品价值，A2处理组相对来说黄化现象发生的较晚，最后一次拍照取样黄化现象并不明显，并具有一定的商品价值。A3、A4在第五次拍照取样时就可以看出变白发黄的趋势，在最后一次拍照取样时，可以明显看出油豆角出现黄化现象，并干瘪严重。KM处理组虽然黄化现象的发生较晚，在第6次拍照取样可以看出油豆角已经出现黄化现象，但同时也出现了病斑，有腐烂的趋势，最后一次拍照取样，油豆角病斑进一步扩大，黄化现象明显，基本失去商品价值，对照组在第3期拍照取样即已经有黄化现象出现，并在第6次拍照取样时基本完全黄化，失水干瘪严重，已经失去商品价值，在第7次拍照取样到最后一次拍照取样无其他显著变化，说明在第7次拍照取样后对照组内的油豆角已经基本停止了呼吸、代谢等生理活动。
图4为具体实施方式二和三制备的所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的油豆角失重率对比曲线，常温贮藏下，干燥的环境以及油豆角自身蒸腾作用和呼吸作用，使油豆角水分流失严重。根据图4可知，A1处理后油豆角的失重率在实验周期内始终优于其他处理组及对照组，处理13d后平均失重率为65.8%，A2处理后13d后平均失重率为68.54%，相较于对照组明显降低了23.59%的失重率，KM处理13d后的失重率为73.68%，较对照组降低了15.71%，而没有加入复合涂膜溶液的A3、A4处理组13d后平均失重率分别为78.4%和80.48%，失重率要明显高于加入复合涂膜溶液的处理组，说明复合涂膜处理组因其表面形成的薄膜可以更加有效地阻挡水分的流失，但与对照组相比失重率有所下降，说明酵母菌及其胞内产物本身对油豆角的失重率也有一定的积极影响。
表6 贮藏末期不同处理对油豆角感官综合指数的影响
图5、图6、图7为不同处理对油豆角贮藏期间腐烂率、锈斑指数、色泽指数的观察统计结果，不同处理对油豆角贮藏期间腐烂率、锈斑指数、色泽指数的观察统计结果，从表6和图5-7可知，不同处理组处理后的油豆角比于对照组在腐烂率、锈斑指数及色泽指数上均有明显改善，其中A1处理和A2处理组改善情况最为明显，显著降低了油豆角在贮藏期间的腐烂率、锈斑指数和色泽指数。由图中可知，对照组在油豆角贮藏7d后腐烂率快速上升，在贮藏末期腐烂率达到了52.78%，KM处理后的油豆角在腐烂率较其他处理组也有明显上升，贮藏末期达到了42.78%，其他处理组在整个贮藏期腐烂率上升平缓，在贮藏末期腐烂率基本维持在20%-25%。在锈斑指数方面，与腐烂率相似，对照组在贮藏7d后锈斑指数快速上升，在贮藏末期达到了55%，KM处理组达到了45%，其他处理组在贮藏末期基本维持在20%-35%左右，A1-A4处理组，锈斑指数维持在17%-25%。色泽指数方面，同样对照组在7d后快速上升，贮藏末期放缓，最后达到了84.43%，色泽指数越高说明油豆角黄化越严重，对照组油豆角在9d后色泽指数上升放缓，说明对照组在9d左右大部分已经黄化，失去了商品价值。KM处理组与未涂膜的各处理组基本一致，贮藏后期色泽指数在55%左右。而酵母菌及其胞内产物复合涂膜处理后明显优于其他处理组，贮藏后期色泽指数在30%-40%之间。
由图8可知，各处理组与对照SOD活性均呈先上升后下降的总体趋势，在第3天SOD活性达到最大值，其中A3处理组SOD活性上升程度最大，分别达到1071.91 U/g，处理三天后各处理组及对照组SOD活性开始下降，直至贮藏末期。Ca63菌株的不同处理方式在处理的第5天SOD酶活均显著高于对照组，并且下降趋势与对照组相比明显放缓。KM处理组在处理后7d内与对照组变化基本一致，在第7天后SOD活性下降速度变缓。结合上图，可以说明空白涂膜溶液对油豆角SOD活性的影响并不明显，主要还是酵母菌及其胞内产物对SOD酶活起到了一定促进作用。
由图9可知，MDA是氧自由基作用于脂质不饱和酸，生成过氧化脂质后逐渐分解的产物，MDA是反映脂质氧化重要指标，也是反映植物老化程度的重要生理指标。在油豆角贮藏前9天内，其中A1、A2处理组增长量均保持在2200nmol/L-2700nmol左右。在贮藏9天后，对照组及KM处理组MDA含量迅速增加，尤其是对照组，在第9天到第13天内，MDA含量增加了8051.62nmol/L，相比于第9天增长了163%，KM处理组增加了4632.26nmol/L，相比于第9天增加了110%，Ca63酵母菌复合涂膜处理组的MDA含量增长速度并未明显升高，到贮藏末期平均MDA含量约为对照组MDA含量的47.86%，而Ca63未添加涂膜溶液的各处理组MDA含量约为对照组MDA含量的52.5%，KM处理组MDA含量为对照组MDA含量的67.72%，结果与SOD活性较为一致，Ca63对油豆角抗氧化性有明显的促进作用，复合涂膜处理使其效果更为明显，单独的涂膜溶液对油豆角也有一定的保护效果，但结合酵母菌效果最好。
由图10可知，油豆角贮藏期间叶绿素含量变化各处理组与对照组均呈现下降趋势，但下降速率有所不同，对照组在第3天开始快速下降，于第5天从26.73 mg/100g迅速下降到16.79mg/100g，A1、A2处理组在第9天才下降到16mg/100g左右，与对照组相差4天，并且整体下降过程较为平缓，A3、A4处理组在第7天后迅速下降。在贮藏末期，对照组在贮藏期间叶绿素含量减少了92.73%。KM处理组的叶绿素含量减少量处在复合涂膜与未复合涂膜的处理组之间，在贮藏末期KM处理组叶绿素含量较初始含量减少了84.33%，未涂膜的各处理组叶绿素含量较初始含量平均减少了88.38%，复合涂膜的各处理组叶绿素含量较初始含量平均减少了79.77%，说明复合涂膜对油豆角叶绿素含量的减少有一定的促进作用。
由图11可知，维生素E是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是生物体内主要的抗氧化剂之一，因此维生素E的存在能维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能，它的含量也能反映出植物衰老进程。不同处理组和对照组维生素E含量整体呈先上升后下降趋势，可能是由于在油豆角贮藏初期，植物体本身的抗逆反应促进了维生素E的合成，从而防止油豆角过快的衰老，在图中可以观察到，每个含有酵母菌及其破碎提取液的处理组，维生素E含量均显著高于KM处理组和对照组，各处理组和对照组维生素E含量均在第5d达到最大值，其中A1-A4处理组的维生素E含量平均增加了44.89%，显著高于KM处理组的20.27%和对照组20.14%。在第5天后，各处理组及对照组维生素E含量快速下降，A3、A4、处理组在第7天的维生素E含量与KM处理组和对照组相差无几，其他处理组维生素E含量仍显著高于KM和对照组。在贮藏末期，对照组维生素E含量已下降到0.18μg/g，KM处理组与未涂膜的各处理组维生素E含量几乎持平，约在4.49μg/g，复合涂膜的各处理组维生素E含量显著高于其他处理组，约在7.07μg/g，由此可以看出，复合涂膜处理对油豆角维生素E含量的减少有一定的积极的影响。
具体实施方式四：
一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液，所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液主要由酵母菌或酵母菌胞内产物、海藻酸钠、魔芋精粉、羧甲基纤维素钠、无菌水制成，其质量分数分别为酵母菌或酵母菌胞内产物10-30wt%，海藻酸钠1-2wt%、魔芋精粉0.5-1.5wt%、羧甲基纤维素钠0.5-1.5wt%、余量为无菌水。
本实施方式所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液，酵母菌的基础上添加了由海藻酸钠、魔芋甘聚糖和羧甲基纤维素钠混合而成的复合涂膜，在油豆角的保鲜实验中获得了更加良好的效果，发挥了酵母菌和复合膜的双重优势。实验结果表明，酵母菌及其胞内产物复合涂膜对油豆角的保鲜效果要明显优于单独酵母菌及胞内产物或单独的复合涂膜，复合涂膜处理的油豆角失重率、腐烂率、锈斑指数及色泽指数均有明显的下降，可以保证油豆角在常温贮藏13d后失重率维持在60%左右，包括腐烂率、锈斑指数和色泽指数的综合感官指数与对照组相比明显下降（P<0.05），说明可以有效地延长油豆角的货架期，增加油豆角的商品价值，并且不会对其本身品质产生影响。
具体实施方式五：
根据具体实施方式四所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液，所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液为20wt%的酵母菌，1wt%的海藻酸钠，1wt%的魔芋精粉，1.5wt%的羧甲基纤维素钠，余量为无菌水。
具体实施方式六：
根据具体实施方式四所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液，所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液为20wt%的酵母菌胞内产物，1wt%的海藻酸钠，1wt%的魔芋精粉，1.5wt%的羧甲基纤维素钠，余量为无菌水。
具体实施方式七：
根据具体实施方式四所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液，所述的酵母菌为浅白隐球酵母菌(Cryptococcus albidus)，简称Ca63，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.18014。
具体实施方式八：
根据具体实施方式四至七所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，包括如下步骤：
步骤1、制备酵母菌种子液；
步骤2、制备酵母菌发酵液；
步骤3、制备酵母菌细胞悬浮液；
步骤4、制备酵母菌胞内产物粗提物；
步骤5、制备涂膜溶液；
步骤6、将步骤3制备的酵母菌细胞悬浮液或步骤4制备的酵母菌胞内产物粗提物按照质量比与步骤5制备的涂膜溶液混合均匀，得到所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液。
具体实施方式九：
根据具体实施方式八所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，步骤1制备酵母菌种子液的方法为将负80℃冰箱内酵母菌菌种接种于PDB培养基中活化，次日划线于PDA培养皿上，挑取单菌落转接于YPD液体培养基中，置于恒温摇床28℃下200r/min培养24h，放于4℃冰箱中作为种子液备用。
具体实施方式十：
根据具体实施方式八所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，步骤2制备酵母菌细胞悬浮液的方法为将步骤1制备的酵母菌种子液以2%v/v接种到YPD培养基，28℃、200r/min摇瓶培养36h，得到酵母菌发酵液。
具体实施方式十一：
根据具体实施方式八所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，步骤3制备酵母菌细胞悬浮液的方法为取一定量的步骤2制备的酵母菌发酵液于高速离心机10000r/min离心15min，收集菌体，PH6.8磷酸缓冲溶液将菌体重悬，重复三次，将重悬后的菌体与PH6.8磷酸缓冲溶液按1g:20ml配置成酵母菌细胞悬浮液。
具体实施方式十二：
根据具体实施方式八所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，步骤4制备酵母菌胞内产物粗提物的方法为取一定量的步骤2制备的酵母菌发酵液置于超声细胞破碎仪中进行破碎，破碎后再次使用高速离心机10000r/min，离心15min，弃菌体，取上清液即为酵母菌胞内产物粗提物。
具体实施方式十三：
根据具体实施方式八所述的一种含有酵母菌或酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，步骤5制备涂膜溶液的方法包括如下步骤：
步骤5.1、按照质量比将海藻酸钠、魔芋精粉、羧甲基纤维素钠溶于蒸馏水中，得到混合物，待用；
步骤5.2、将步骤5.1得到的混合物使用磁力搅拌器600r/min均匀搅拌2h，使其完全溶解，然后使用超声清洗仪进行超声脱气，去泡，得到涂膜溶液。

Claims (4)

1.一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液，其特征在于：所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液主要由酵母菌胞内产物、海藻酸钠、魔芋精粉、羧甲基纤维素钠、无菌水制成，其质量分数分别为酵母菌胞内产物20wt%，海藻酸钠1wt%、魔芋精粉1wt%、羧甲基纤维素钠1.5wt%、余量为无菌水；
所述的酵母菌为浅白隐球酵母菌(Cryptococcus albidus)，简称Ca63，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.18014；
所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，包括如下步骤：
步骤1、制备酵母菌种子液；
步骤2、制备酵母菌发酵液；
步骤3、制备酵母菌胞内产物粗提物；
步骤4、制备涂膜溶液；
步骤5、步骤3制备的酵母菌胞内产物粗提物按照质量比与步骤4制备的涂膜溶液混合均匀，得到所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液；
步骤3制备酵母菌胞内产物粗提物的方法为取一定量的步骤2制备的酵母菌发酵液置于超声细胞破碎仪中进行破碎，破碎后再次使用高速离心机10000r/min，离心15min，弃菌体，取上清液即为酵母菌胞内产物粗提物。
2.根据权利要求1所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，其特征在于，步骤1制备酵母菌种子液的方法为将负80℃冰箱内酵母菌菌种接种于PDB培养基中活化，次日划线于PDA培养皿上，挑取单菌落转接于YPD液体培养基中，置于恒温摇床28℃下200r/min培养24h，放于4℃冰箱中作为种子液备用。
3.根据权利要求2所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，其特征在于，步骤2制备酵母菌细胞发酵液的方法为将步骤1制备的酵母菌种子液以2%v/v接种到YPD培养基，28℃、200r/min摇瓶培养36h，得到酵母菌发酵液。
4.根据权利要求3所述的一种含有酵母菌胞内产物的保鲜涂膜溶液的制备方法，其特征在于：步骤4制备涂膜溶液的方法包括如下步骤：
步骤4.1、按照质量比将海藻酸钠、魔芋精粉、羧甲基纤维素钠溶于蒸馏水中，得到混合物，待用；
步骤4.2、将步骤4.1得到的混合物使用磁力搅拌器600r/min均匀搅拌2h，使其完全溶解，然后使用超声清洗仪进行超声脱气，去泡，得到涂膜溶液。
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