CN115165763A - 一种适于田间高色价辣椒群体快速筛选评价的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种适于田间高色价辣椒群体快速筛选评价的方法,包括:通过肉眼初步筛选颜色为深红及以上的辣椒资源;将初步筛选的辣椒资源清洗后晾干;将晾干后的辣椒资源采用分段干燥进行干燥;将分段干燥法后的辣椒资源去掉果柄和种子;将去除果柄和种子的辣椒资源粉碎成辣椒粉;通过实验室快速测定的方法获取辣椒色价E值。根据所述辣椒色价E值对田间高色价辣椒群体进行筛选评价。本发明提供的方法,通过肉眼初步筛选的方式结合实验室快速检测的方法,大大提高了在高红色素辣椒品种选育过程中对高红色素资源的快速鉴定。该方法快捷简单准确,重复性好,且比液相色谱法操作简便,可用于高色价辣椒资源的快速筛选评价。

Description

一种适于田间高色价辣椒群体快速筛选评价的方法
技术领域
本发明涉及辣椒品种选育技术领域,尤其涉及一种适于田间高色价辣椒群体快速筛选评价的方法。
背景技术
辣椒红色素被广泛应用于食品添加剂、化妆品和医药等领域,国内外市场需求很大。在我们所收集的辣椒资源中,一般辣椒资源的色价仅为10左右,色价高于18以上的资源极为稀少。高色价辣椒资源的筛选,为进行深加工专用型高色价辣椒品种的选育提供了十分珍贵的物质基础。
在开展高色价辣椒回交转育研究的过程中,面对庞大的回交群体,以及每年新引进的众多资源,如何快速有效的筛选高色价辣椒以及检测辣椒色素含量成为了摆在我们面前的一道难题。目前,辣椒色素含量分析方法最常用的液相色谱法,然而,该方法存在着设备昂贵、操作步骤复杂、花费高、耗时长等问题,不适于庞大的辣椒群体资源的快速筛选。
发明内容
本发明的目的在于解决上述现有技术存在的缺陷,提供一种适于田间高色价辣椒群体快速筛选评价的方法。
一种适于田间高色价辣椒群体快速筛选评价的方法,包括:
步骤一:通过肉眼初步筛选颜色为深红及以上的辣椒资源;
步骤二:将初步筛选的辣椒资源清洗后晾干;
步骤三:将晾干后的辣椒资源采用分段干燥进行干燥;
步骤四:将分段干燥法后的辣椒资源去掉果柄和种子;
步骤五:将去除果柄和种子的辣椒资源粉碎成辣椒粉;
步骤六:通过实验室快速测定的方法获取辣椒色价E值;
步骤七:根据所述辣椒色价E值对田间高色价辣椒群体进行筛选评价。
进一步地,如上所述的方法,所述步骤六包括:
在锥形瓶中加入辣椒粉和丙酮并密封,在摇床上对锥形瓶进行摇晃,摇晃条件为:温度24-28℃、转速为150-170rpm/min,时间为:15-20min;摇晃结束后静置暗培养不少于16小时;
吸取上清液,在波长OD460nm下测其OD值;根据所述OD值计算辣椒色价E值=(0D值*164)/16.4。
进一步地,如上所述的方法,所述步骤一包括:
先观察辣椒果实表皮颜色,按照果皮颜色分级标准进行初选,选择深红及以上的作为待筛选辣椒资源;
再用刀将待筛选辣椒资源的果实纵切划开,观察果肉纵切面的颜色,按照果肉颜色分级标准,入选果肉颜色呈深红以上的资源作为所述初步筛选的辣椒资源;
所述果肉颜色分级标准包括:1级:橙黄;2级:橘红;3级:鲜红;4级:深红;5级:暗红。
进一步地,如上所述的方法,所述步骤二包括:
将初步筛选的辣椒资源清洗后平铺于吸水纸上,吸干水分;然后均匀铺放在瓷盘上,厚度在2.8-3.5公分进行晾干。
进一步地,如上所述的方法,步骤三中所述分段干燥包括:
第一阶段:温度设定为55℃,烘干时间2-2.5小时,烘干不排湿;
第二阶段:温度设定为75℃,同时开始排湿,时间为4-6小时;
第三阶段:温度设定为65℃,时间4小时,继续排湿;
第四阶段:温度58-60℃,时间为2-4小时;每30-45min测定一次含水量,至果实含水量为11-12%。
进一步地,如上所述的方法,步骤五中所述辣椒粉为经过0.4mm至0.6mm筛网过筛的辣椒粉。
本发明提供的适于田间高色价辣椒群体快速筛选评价的方法,通过肉眼初步筛选的方式结合实验室快速检测的方法,大大提高了在高红色素辣椒品种选育过程中对高红色素资源的快速鉴定。该方法快捷简单准确,重复性好,且比液相色谱法操作简便,可用于高色价辣椒资源的快速筛选评价。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例:
本发明提供一种适于田间高色价辣椒群体快速筛选评价的方法,该方法将感官评价与实验室法相结合来进行评价,包括如下步骤:
初步筛选:感官鉴定法
感官鉴定是指“看”。
步骤1:采收待测资源的红熟果实;
步骤2:以铁板椒(色价14.5)为对照,将所有资源顺序排好,将对照品种放在中间;
步骤3:先观察果实表皮颜色,按照果皮颜色分级标准进行初选,深红及以上的可能会是高红色素资源;
步骤4:再用刀将初入选资源的果实纵切划开,按照果肉颜色分级标准,观察果肉纵切面的颜色,入选果肉颜色呈深红以上的资源,通过“看”粗筛,然后将入选的资源进行实验室检测。
红色素资源评价鉴定标准
果皮及果肉颜色分为5级:
1级:橙黄;2级:橘红;3级:鲜红;4级:深红;5级:暗红。
实验室快速鉴定:
原料制备方法:
步骤5:将田间初步入选资源流水冲洗2-3遍。
步骤6:将辣椒资源平铺于吸水纸上,吸干水分。均匀铺放在瓷盘上,厚度在2.8-3.5公分左右。
步骤7:采用分段干燥法,首先温度设定为55℃,烘干时间2-2.5小时,烘干不排湿,下一阶段温度设定为75℃,开始排湿,时间为4-6小时;进入下一阶段温度设定为65℃,时间4小时,继续排湿;最后进入收尾阶段时间为2-4小时,温度58-60℃,在收尾期间,每30-45min测定一次含水量,至果实含水量为11-12%(传统的原料制备方法是阴干,但有些材料含水量较高,阴干时间长,且在过程中容易变质,因此采用烘干方法)。
步骤8:去掉烘干果实的果柄和种子(红色素主要是存在于果皮或果肉中)。
步骤9:采用小型粉碎机磨碎辣椒,过程不少于2分钟。
步骤10:选用孔径介于0.4mm至0.6mm之间的土壤筛过滤辣椒粉,进行过筛,其目的是期望尽可能的统一原料的颗粒大小,确保试验结果的准确性。
步骤11:称取0.05g辣椒粉倒入100ml的锥形瓶中,再加入50ml丙酮,用封口膜封口。
步骤12:将锥形瓶放在摇床,调至温度24-28℃,150-170rpm/min摇晃15-20min,使其充分混合,然后静置,暗培养,不少于16小时。
步骤13:吸取上清液,在波长OD460nm下测其OD值,代入公式计算辣椒色价即色价E值=(0D值*164)/16.4。
本发明提供的方法,通过感官鉴定结合实验室快速检测的方法尤其适用于在高红色素辣椒品种选育过程中对高红色素资源的快速鉴定。
本发明提供的评价方法,通过步骤3、4先观察果实表皮颜色,按照果皮颜色分级标准进行初选,深红及以上的可能会是高红色素资源;再用刀将初入选资源的果实纵切划开,按照果肉颜色分级标准,观察果肉纵切面的颜色,入选果肉颜色呈深红以上的资源,通过“看”粗筛。首次果皮与果肉观察相结合,缩小了粗筛范围,大大降低后续试验的工作量。
本发明提供的评价方法,通过步骤6将辣椒资源平铺于吸水纸上,吸干水分。均匀铺放在瓷盘上,厚度在2.8-3.5公分左右(铺放厚度尽量一致,太薄,透气性虽好,风阻小,但热空气与辣椒的接触时间缩短,热利用率低;太厚,热空气无法穿透辣椒,烘干效果差)。
由于传统的辣椒风干的方式为阴干或自然风干,但有些材料含水量较高,阴干、风干时间长(一个月左右),不能抑制微生物的生长,在过程中容易变质;且通过自然风干,辣椒的颜色较浅,色泽不均;而本发明的采用低温分段烘干法,不仅大大提高了烘干效率,而且辣椒的颜色深而油亮,从而可以真实得体现辣椒本来的色阶。
本发明提供的适于田间高色价辣椒群体快速筛选评价的方法,通过将辣椒果实分段干燥,首先通过第一阶段:温度设定为55℃,烘干时间2-2.5小时,烘干不排湿的措施,可以初步稳定辣椒理化性质,确保辣椒红色素的精准测定;其次通过第二阶段:温度设定为75℃,开始排湿,时间为4-6小时的措施,使得辣椒与以往60℃烘干相比,具有烘干时间缩短、干燥速率快、其脆度更高的优势。
再通过第三阶段:温度设定为65℃,时间4-6小时,继续排湿的措施,使得烘干的辣椒与以往8小时相比,具有缩短了连续排湿时间、抗氧化活性得到提高,果实品质也得到提升的优势。
最后,通过第四阶段:温度58-60℃,时间为2-4小时;每30-45min测定一次含水量,至果实含水量为11-12%的措施,使得收尾阶段的辣椒仍保持低温干燥,实现了保持色泽、香味上乘的目的。
本发明提供的评价方法,通过步骤8去掉烘干果实的果柄和种子(红色素主要是存在于果皮或果肉中,确定检测部位,不同于传统的整个辣椒果实样品,使结果更精准)。
本发明提供的评价方法,通过步骤10选用孔径介于0.4mm至0.6mm之间的土壤筛过滤辣椒粉,进行过筛,其目的是期望尽可能的统一原料的颗粒大小,确保试验结果的准确性。(分析筛的“目数”国标GB/T 22299—2008中选用的是孔径0.63mm,韩国科技人员选用的是0.5mm筛,而在我们实际工作中可能某些材料要同时进行色素和辣素含量的测定。关于辣素检测的文献资料中很多都选用了孔径40目(即0.42mm),国标GB/T 21266-2007中选用的是0.391mm。总的原则是越细越有利于色素的最大程度检测)
本发明提供的评价方法,通过步骤12将锥形瓶放在摇床,调至温度24-28℃,150-170rpm/min摇晃15-20min,使其充分混合,然后静置,暗培养,不少于16小时。利于下一步OD值的精准测定。
本发明提供的评价方法,测定的色价值基本与感官评价相对应,因此,依据实验室测定的色价值与感官评价相结合,可以将辣椒色价筛选划分为以下5个等级:1级:橙黄小于4.9,2级:橘红5-9.9,3级:鲜红10-14,4级:深红14-17,5级:暗红大于17。此分类方法快捷简单准确,重复性好,且比液相色谱法操作简便,可用于高色价辣椒资源的快速筛选评价。
试验安排
供试材料:试验材料选用云南省农业科学院园艺作物研究所收集的65份辣椒种质资源材料,详见下表1。
表1辣椒种质资源
辣椒材料编号 辣椒材料编号 辣椒材料编号 辣椒材料编号 辣椒材料编号
0313963 0313970 03181280 03181289 03161136
0313965 0313973 03181283 03181290 0313960
03181271 03161123-2 0311746 03181294 03181265
0399059-1 0399243 0311734 03181295 03181266
0399059-2 0305348-2-1 0311753 03181296 03181275
0399059-3 0311750 0312833 03181285 03181276
0399060-2 0305348-2-2 03161132 03181287 0313894
0399145-1 0311754 03161131-2 0312831 0313967
0399163-S 0311793 03181278 0312832 03161135
0399237-S 0313883 03181281 0313877 03161131
0399241-S 0313891 0311756 0313890 03181288
0313959 0313905 03181284 0313892 03151025
078-2-3混 0313958 03181286 0313893 铁板椒(对照)
试验方法:试验主要在云南省农科院园艺作物研究所安宁基地进行。试验材料于2020年2月19日在元江播种育苗,2012年5月13日大棚定植。采取随机区组设计,3次重复,小区面积3.5m2,每小区定植16穴,每穴单株。整个生育期采用常规管理。
高色价辣椒资源的快速评价:
(1)感官测定
进入红熟期后,从各小区植株上随机选取待测资源的成熟果实,以铁板椒(色价14.5)为对照,将所有资源顺序排好,将对照品种放在中间;然后观察果实表皮颜色,按照果皮颜色分级标准进行初选,深红及以上的可能会是高红色素资源;最后再用刀将初入选资源的果实纵切划开,按照果肉颜色分级标准(果皮及果肉颜色分为5级:1级:橙黄2级:橘红3级:鲜红4级:深红5级:暗红),观察果肉纵切面的颜色,入选果肉颜色呈深红以上的资源,通过“看”粗筛,然后将入选的资源进行实验室检测。
(2)实验室快速测定
原料制备方法:将田间初步入选资源流水冲洗3遍,将其平铺于吸水纸上,吸干水分。均匀铺放在瓷盘上,厚度大约2.8公分。采用分段干燥法,首先温度设定为55℃,烘干时间2-2.5小时,烘干不排湿;下一阶段温度设定为75℃,开始排湿,时间为4-6小时;进入下一阶段温度设定为65℃,时间4小时,继续排湿;最后进入收尾阶段时间为2-4小时,温度58-60℃,在收尾期间,每30-45min测定一次含水量,至果实含水量为11-12%。去掉烘干果实的果柄和种子(红色素主要是存在于果皮或果肉中)。采用小型粉碎机磨碎辣椒,过程不少于2分钟。选用孔径介于0.4mm至0.6mm之间的土壤筛过滤辣椒粉,进行过筛,其目的是期望尽可能的统一原料的颗粒大小,确保试验结果的准确性。
实验室测定:称取0.05g辣椒粉倒入100ml的锥形瓶中,再加入50ml丙酮,用封口膜封口。将锥形瓶放在摇床,调至温度26℃,160rpm/min摇晃15-20min,使其充分混合,然后静置,暗培养,不少于16小时。最后,吸取上清液,在波长OD460nm下测其OD值,代入公式计算辣椒色价即色价E值=(0D值*164)/16.4。
结果与分析:如下表2所示,依据实验室测定的色价值与感官评价相结合,我们可以将64份辣椒材料色价分为5个等级,具体如下:1级:橙黄小于4.9,2级:橘红5-9.9,3级:鲜红10-14,4级:深红14-17,5级:暗红大于17。其中,符合4级、5级的辣椒资源有29份,包括:0311734、0311753、0312833、03161132、03161131-2、03181278、03181281、0311756、03181284、03181286、03181289、03181290、03181294、03181295、03181296、03181285、03181287、0312831、0312832、0313877、0313890、0313892、0313893、0313894、0313967、03161135、03161131、03181288、03151025,可以作为培育高色素辣椒品种的候选材料。通过表2可以看出,本发明提供的方法可以很好的证明辣椒色价的筛选分类标准,试验结果也在范围内。
本发明提供的适于田间高色价辣椒群体快速筛选评价的方法,快捷简单准确,重复性好,且比液相色谱法操作简便。
表2辣椒种质资源的色阶鉴定
Figure BDA0003790035240000081
Figure BDA0003790035240000091
最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (6)

1.一种适于田间高色价辣椒群体快速筛选评价的方法,其特征在于,包括:
步骤一:通过肉眼初步筛选颜色为深红及以上的辣椒资源;
步骤二:将初步筛选的辣椒资源清洗后晾干;
步骤三:将晾干后的辣椒资源采用分段干燥进行干燥;
步骤四:将分段干燥法后的辣椒资源去掉果柄和种子;
步骤五:将去除果柄和种子的辣椒资源粉碎成辣椒粉;
步骤六:通过实验室快速测定的方法获取辣椒色价E值;
步骤七:根据所述辣椒色价E值对田间高色价辣椒群体进行筛选评价。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤六包括:
在锥形瓶中加入辣椒粉和丙酮并密封,在摇床上对锥形瓶进行摇晃,摇晃条件为:温度24-28℃、转速为150-170rpm/min,时间为:15-20min;摇晃结束后静置暗培养不少于16小时;
吸取上清液,在波长OD460nm下测其OD值;根据所述OD值计算辣椒色价E值=(0D值*164)/16.4。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤一包括:
先观察辣椒果实表皮颜色,按照果皮颜色分级标准进行初选,选择深红及以上的作为待筛选辣椒资源;
再用刀将待筛选辣椒资源的果实纵切划开,观察果肉纵切面的颜色,按照果肉颜色分级标准,入选果肉颜色呈深红以上的资源作为所述初步筛选的辣椒资源;
所述果肉颜色分级标准包括:1级:橙黄;2级:橘红;3级:鲜红;4级:深红;5级:暗红。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤二包括:
将初步筛选的辣椒资源清洗后平铺于吸水纸上,吸干水分;然后均匀铺放在瓷盘上,厚度在2.8-3.5公分进行晾干。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤三中所述分段干燥包括:
第一阶段:温度设定为55℃,烘干时间2-2.5小时,烘干不排湿;
第二阶段:温度设定为75℃,同时开始排湿,时间为4-6小时;
第三阶段:温度设定为65℃,时间4小时,继续排湿;
第四阶段:温度58-60℃,时间为2-4小时;每30-45min测定一次含水量,至果实含水量为11-12%。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤五中所述辣椒粉为经过0.4mm至0.6mm筛网过筛的辣椒粉。
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