CN115154512B - 一种抑菌剂及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本申请提供了一种抑菌剂及其制备方法和用途。本申请的抑菌剂,由柑橘提取物、维生素B3和水组成;所述柑橘提取物、维生素B3和水的质量比为1:(0.5‑2):(800‑1200)。本申请的抑菌剂,抑菌效果起效迅速,抑菌率高达99.9%,具有较强的抑菌效果,且无毒无刺激,稳定性好。进一步的,本申请的抑菌剂,具有原料种类少、成本低、制备工艺简便等优势。本申请的抑菌剂,可用于制备鼻腔抑菌护理液,用于鼻腔护理,对鼻腔具有抑菌作用,以保持鼻腔清洁,从而可以用于预防或改善鼻炎症状;进一步地,本申请的抑菌剂用于鼻腔护理,无刺激,更安全。
Description
技术领域
本申请涉及抑菌技术领域,特别是涉及一种抑菌剂及其制备方法和用途。
背景技术
治疗鼻炎需要对鼻腔进行抑菌消炎,口服药物的有效成分不能直接到达鼻部,症状改善速度慢,效果差,因此能够直接作用于鼻腔的抑菌剂越来越受到重视。目前常用的抑菌剂分为三类:有机抑菌剂、无机抑菌剂以及复合抑菌剂,其中,有机抑菌剂包括化学合成有机抑菌剂和天然抑菌剂;无机抑菌剂包括:含金属离子的抑菌剂(如银离子抑菌剂);复合抑菌剂为上述有机抑菌剂和无机抑菌剂复合而成的抑菌剂。化学合成的有机抑菌剂,如盐酸羟甲唑啉,长时间使用一方面会导致药物的疗效逐渐减退,另一方面会对鼻腔黏膜表面纤毛造成一定程度的损伤和破坏,影响鼻腔粘膜的正常生理功能,导致继发性血管扩张甚至会导致药物性鼻炎。天然抑菌剂通常以天然植物提取物作为主要成分,以其绿色无副作用的优点,得到了用户的普遍欢迎。但天然抑菌剂存在抑菌率低、起效慢等问题。
发明内容
本申请的目的在于提供一种抑菌剂及其制备方法和用途,以增加抑菌剂的抑菌率,提高抑菌剂的起效速度。具体技术方案如下:
本申请的第一方面提供一种抑菌剂,由柑橘提取物、维生素B3和水组成;所述柑橘提取物、维生素B3和水的质量比为1:(0.5-2):(800-1200)。
本申请的第二方面提供一种本申请的抑菌剂的制备方法,包括:将水加热至45-55℃,将柑橘提取物和维生素B3加入水中,混合,静置,过滤,即得所述抑菌剂;其中,所述柑橘提取物、维生素B3和水的质量比为1:(0.5-2):(800-1200)。
本申请的第三方面提供本申请第一方面的抑菌剂或根据本申请第二方面的制备方法制得的抑菌剂用于制备鼻腔抑菌护理液的用途。
本申请的抑菌剂,抑菌效果起效迅速,抑菌率高达99.9%,具有较强的抑菌效果,且无毒无刺激,稳定性好,解决了天然抑菌剂的抑菌率低、起效速度慢等问题。进一步的,本申请的抑菌剂,具有原料种类少、成本低、制备工艺简便等优势。本申请的抑菌剂,可用于制备鼻腔抑菌护理液,用于鼻腔护理,对鼻腔具有抑菌作用,以保持鼻腔清洁,从而可以用于预防或改善鼻炎症状;进一步地,本申请的抑菌剂用于鼻腔护理,无刺激,更安全。
具体实施方式
下面将结合本申请实施例,对本申请的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例,本领域普通技术人员基于本申请所获得的所有其他实施例,都属于本申请保护的范围。
本申请的第一方面提供一种抑菌剂,由柑橘提取物、维生素B3和水组成;所述柑橘提取物、维生素B3和水的质量比为1:(0.5-2):(800-1200)。
发明人在研究中意外地发现,本申请将柑橘提取物、维生素B3和水以特定比例混合,获得的抑菌剂的抑菌率可达到99.9%,抑菌效果好,起效迅速,且该抑菌剂稳定性好,无毒无刺激,是一种可被广泛使用的抑菌剂。
本申请所述“柑橘”,指的是柑橘属植物的果实。在本申请第一方面的一些实施方式中,所述柑橘提取物,选自红橘提取物、血橙提取物、甜橙提取物、丑柑提取物或脐橙提取物中的至少一种。
在本申请第一方面的一些实施方式中,所述柑橘提取物,基于所述柑橘提取物的总重量,包括:150-400mg/g的橙皮苷、5-50mg/g的新橙皮苷、1-25mg/g的柠檬苦素、2-50mg/g的柠檬酸、2-50mg/g的柠檬烯、50-300mg/g的果胶、5-50mg/g的吖啶酮、40-200mg/g的维生素C和5-50mg/g的维生素P。
本申请对所述柑橘提取物的提取方式没有特别限制,本领域技术人员可以通过现有的任意方式获取柑橘提取物,例如可以用乙醇水溶液或甲醇水溶液等有机溶剂对柑橘进行回流提取、超声提取、渗漉提取等方式。
本申请所述的水,可以为纯化水。进一步的,纯化水可以为《中国药典》2015年版中规定的纯化水。
在本申请第一方面的一些实施方式中,所述抑菌剂的pH值为3.0-6.8。
在本申请第一方面的一些实施方式中,所述抑菌剂的抑菌率大于等于99.9%。
本申请的第二方面提供一种本申请的抑菌剂的制备方法,包括:将水加热至45-55℃,将柑橘提取物和维生素B3加入水中,混合,静置,过滤,即得所述抑菌剂;其中,所述柑橘提取物、维生素B3和水的质量比为1:(0.5-2):(800-1200)。
本申请对混合方法不做限定,只要能实现本发明的目的即可,例如可以是搅拌5-15min。
本申请对静置的时间不做限定,只要能实现本发明的目的即可,例如可以静置3-5h。
在本申请第二方面的一些实施方式中,所述过滤包括采用180-300目筛网过滤1-3次。
优选地,本申请的抑菌剂的制备方法,包括:将水加热至45-55℃,将柑橘提取物和维生素B3加入水中,搅拌5-15min混合,静置3-5h,采用180-300目筛网过滤1-3次,即得所述抑菌剂;其中,所述柑橘提取物、维生素B3和水的质量比为1:(0.5-2):(800-1200)。
在本申请第二方面的一些实施方式中,所述柑橘提取物,基于所述柑橘提取物的总重量,包括:150-400mg/g的橙皮苷、5-50mg/g的新橙皮苷、1-25mg/g的柠檬苦素、2-50mg/g的柠檬酸、2-50mg/g的柠檬烯、50-300mg/g的果胶、5-50mg/g的吖啶酮、40-200mg/g的维生素C和5-50mg/g的维生素P。
本申请的第三方面提供本申请第一方面的抑菌剂或根据本申请第二方面的制备方法制得的抑菌剂用于制备鼻腔抑菌护理液的用途。本申请的抑菌剂用于鼻腔护理,对鼻腔具有抑菌作用,以保持鼻腔清洁,从而可以用于预防或改善鼻炎症状;进一步地,本申请的抑菌剂用于鼻腔护理,无刺激,更安全。
本文所用的术语,如未明确说明或定义,则它们具有本领域技术人员公知的一般含义。
下述实施例中所用实验材料和方法,如无特别说明,均为常规材料和方法。
实施例1
称取清洗后的丑柑100kg,并将清洗后的丑柑分为等重的两份,每份50kg。将其中一份丑柑晾干后粉碎,过50目筛得到粗粉,将粗粉装入渗漉筒,向渗漉筒内加入与粗粉等体积的、体积分数为60%的乙醇水溶液,浸渍48h后,以2ml/kg·min-1的流速收集渗漉液,回收渗漉液中的乙醇,减压浓缩。
将另一份50kg的丑柑,皮肉分离,取果皮清洗后粉碎为直径2mm的颗粒,将粉碎后的颗粒倒入沸水中浸泡5min杀酶。将杀酶后的颗粒倒入40℃的纯化水中,并浸泡30min,再加热到90℃,保温5min,过滤得到滤渣。将得到的滤渣倒入夹层锅中,加入滤渣重量的4倍的纯化水,并用工业盐酸调pH至1.5。将调pH值后的滤渣和纯化水的混合物加热到95℃,恒温60min并持续搅拌;再加入质量为所述滤渣和纯化水的混合物总重量2%的、浓度为0.3%的六偏磷酸钠搅拌,在冷却至50℃之前过滤得果胶萃取液;将所述果胶萃取液冷却至50℃,加入基于果胶萃取液重量1%的淀粉酶,在酶作用终了时,再加热至80℃,保温5min杀酶。
将浓缩后的渗漉液与杀酶后的果胶溶液混合,得到丑柑的柑橘提取物。经过液相色谱-质谱联用技术测量,柑橘提取物中各成分及各成分的含量如下:基于柑橘提取物的总重量,包括:206mg/g的橙皮苷、10mg/g的新橙皮苷、21mg/g的柠檬苦素、8mg/g的柠檬酸、6mg/g的柠檬烯、82mg/g的果胶、28mg/g的吖啶酮、60mg/g的维生素C和10mg/g的维生素P。
称取90kg纯化水、0.1kg制得的柑橘提取物和0.2kg维生素B3,将纯化水加热至50℃,将柑橘提取物和维生素B3加入水中,搅拌8分钟充分混合均匀,测得pH值为3.3,静置4小时后,用180目筛网过滤,静置30分钟后再次使用180目筛网过滤,得到抑菌剂。
实施例2
称取清洗后的脐橙100kg,并将清洗后的脐橙分为等重的两份,每份50kg。将其中一份脐橙晾干后粉碎,过50目筛得到粗粉,将粗粉装入渗漉筒,向渗漉筒内加入与粗粉等体积的、体积分数为60%的乙醇水溶液,浸渍48h后,以2ml/kg·min-1的流速收集渗漉液,回收渗漉液中的乙醇,减压浓缩。
将另一份50kg的脐橙,皮肉分离,取果皮清洗后粉碎为直径2.5mm的颗粒,将粉碎后的颗粒倒入沸水中浸泡5min杀酶。将杀酶后的颗粒倒入40℃的纯化水中,并浸泡30min,再加热到90℃,保温5min,过滤得到滤渣。将得到的滤渣倒入夹层锅中,加入滤渣重量的4倍的纯化水,并用工业盐酸调pH至1.7。将调pH值后的滤渣和纯化水的混合物加热到95℃,恒温60min并持续搅拌;再加入质量为所述滤渣和纯化水的混合物总重量2%的、浓度为0.35%的六偏磷酸钠搅拌,在冷却至50℃之前过滤得果胶萃取液;将所述果胶萃取液冷却至50℃,加入基于果胶萃取液重量1.5%的淀粉酶,在酶作用终了时,再加热至80℃,保温5min杀酶。
将浓缩后的渗漉液与杀酶后的果胶溶液混合,得到脐橙的柑橘提取物。经过液相色谱-质谱联用技术测量,柑橘提取物中各成分及各成分的含量如下:基于柑橘提取物的总重量,包括:365mg/g的橙皮苷、41mg/g的新橙皮苷、12mg/g的柠檬苦素、33mg/g的柠檬酸、41mg/g的柠檬烯、172mg/g的果胶、15mg/g的吖啶酮、117mg/g的维生素C和40mg/g的维生素P。
称取100kg纯化水、0.1kg制得的柑橘提取物和0.12kg维生素B3,将纯化水加热至50℃,将柑橘提取物和维生素B3加入水中,搅拌10分钟充分混合均匀,测得pH值为4.9,静置4小时后,用200目筛网过滤,静置30分钟后再次使用200目筛网过滤,得到抑菌剂。
实施例3
称取清洗后的甜橙100kg,并将清洗后的甜橙分为等重的两份,每份50kg。将其中一份甜橙晾干后粉碎,过50目筛得到粗粉,将粗粉装入渗漉筒,向渗漉筒内加入与粗粉等体积的、体积分数为60%的乙醇水溶液,浸渍48h后,以2ml/kg·min-1的流速收集渗漉液,回收渗漉液中的乙醇,减压浓缩。
将另一份50kg的甜橙,皮肉分离,取果皮清洗后粉碎为直径3mm的颗粒,将粉碎后的颗粒倒入沸水中浸泡5min杀酶。将杀酶后的颗粒倒入40℃的纯化水中,并浸泡30min,再加热到90℃,保温5min,过滤得到滤渣。将得到的滤渣倒入夹层锅中,加入滤渣重量的4倍的纯化水,并用工业盐酸调pH至2.0。将调pH值后的滤渣和纯化水的混合物加热到95℃,恒温60min并持续搅拌;再加入质量为所述滤渣和纯化水的混合物总重量3%的、浓度为0.4%的六偏磷酸钠搅拌,在冷却至50℃之前过滤得果胶萃取液;将所述果胶萃取液冷却至50℃,加入基于果胶萃取液重量2%的淀粉酶,在酶作用终了时,再加热至80℃,保温5min杀酶。
将浓缩后的渗漉液与杀酶后的果胶溶液混合,得到甜橙的柑橘提取物。经过液相色谱-质谱联用技术测量,柑橘提取物中各成分及各成分的含量如下:基于柑橘提取物的总重量,包括:318mg/g的橙皮苷、27mg/g的新橙皮苷、5mg/g的柠檬苦素、37mg/g的柠檬酸、24mg/g的柠檬烯、242mg/g的果胶、39mg/g的吖啶酮、181mg/g的维生素C和22mg/g的维生素P。
称取120kg纯化水、0.1kg制得的柑橘提取物和0.08kg维生素B3,将纯化水加热至50℃,将柑橘提取物和维生素B3加入水中,搅拌13分钟充分混合均匀,测得pH值为6.4,静置4小时后,用250目筛网过滤,静置30分钟后再次使用250目筛网过滤,得到抑菌剂。
对比例1
取专利201710979404.3中实施例1制备的柑橘抑菌液。
对比例2
取专利201710979404.3中实施例2制备的柑橘抑菌液。
对比例3
取专利201710979404.3中实施例3制备的柑橘抑菌液。
实施例4抑菌率检测
以无菌操作分别取5mL实施例1制备的抑菌剂,分别标记为样品1、样品2、样品3;以无菌操作分别取5mL实施例2制备的抑菌剂,分别标记为样品4、样品5、样品6;以无菌操作分别取5mL实施例3制备的抑菌剂,分别标记为样品7、样品8、样品9。
将金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)的24h斜面培养物用磷酸盐缓冲液洗下,制备成浓度为1×106cfu/ml的菌悬液。另外,制备无菌的浓度为0.03mol/L、pH为7.2的磷酸盐缓冲液1000L。分别将100μL金黄色葡萄球菌的菌悬液滴入样品1-9中,充分混合后,开始计时,在作用时长为30s、1min、2min、5min、10min以及20min时,分别测试各个样品的抑菌率,结果如表1所示。抑菌率的测试方法依照《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979-2002附录C中规定的方法。
按照上述方法,分别测试样品1-9对大肠杆菌(ATCC 11229)的抑菌率,结果如表2所示。
按照上述方法,分别测试样品1-9对白色念珠菌(ATCC 10231)的抑菌率,结果如表3所示。
表1样品1-9对金黄色葡萄球菌的抑菌率
表2样品1-9对大肠杆菌的抑菌率
表3样品1-9对白色念珠菌的抑菌率
根据表1-3结果可知,本申请的抑菌剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的抑菌率,在作用时长30s、1min、2min、5min、10min、20min,均达到了99.9%,表明本申请抑菌剂的抑菌效果较强;在作用30s时,本申请的抑菌剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的抑菌率即达到了99.9%,表明本申请的抑菌剂,抑菌效果起效迅速。
实施例5急性吸入毒性检测
动式染毒法是采用机械通风装置,连续不断地将含有一定浓度受试物的空气均匀不断地送入染毒柜,并排出等量的染毒气体,维持相对稳定的染毒浓度。毒性浓度10000mg/m3,即每立方米含有本申请的抑菌剂10ml(相当于10g)。
取20只SPF级KM小鼠(由南方医科大学提供,动物合格证号:44002100014737),雌雄各半,采用动式染毒法,以实施例1制备的抑菌剂的毒性浓度10000mg/m3,一次吸入染毒2h,然后对每只小鼠进行单独全面的记录,观察小鼠的中毒表现和死亡情况,每天至少进行一次仔细检查,并分别于染毒后第0天、第7天和第14天称量体重。14天观察期内所有小鼠未见明显中毒症状或死亡,急性吸入毒性检测结果如表4所示。
按照上述方法,分别对实施例2和实施例3制备的抑菌剂进行急性吸入毒性检测,结果如表4所示。
表4急性吸入毒性检测结果
根据表4结果可知,各小鼠一次2h吸入染毒浓度10000mg/m3实施例1-3的抑菌剂,在14天内均无死亡,可判定LC50大于10000mg/m3。LC50 2h大于10000mg/m3,属于实际无毒。表明本申请的抑菌剂属于实际无毒。
实施例6急性经口毒性检测
取5mL(相当于5g)实施例1制备的抑菌剂,加入无菌水定容到20mL,混匀,得受试溶液。
取20只SPF级KM小鼠(由南方医科大学提供,动物合格证号:44002100013051),雌雄各半。试验前,小鼠禁食过夜,不限制饮水。试验时,称量小鼠体重,一次给予受试溶液经口染毒,每只小鼠灌胃量为0.2ml/10g体重,剂量为5000mg/kg体重,染毒后禁食3-4h。染毒后对每只小鼠进行单独全面的记录,观察小鼠的中毒表现和死亡情况,每天至少进行一次仔细检查,并分别于染毒后第0天、第7天和第14天称量体重。14天观察期内所有小鼠未见明显中毒症状或死亡,急性经口毒性检测结果如表5所示。
按照上述方法,分别对实施例2和实施例3制备的抑菌剂进行急性经口毒性检测,结果如表5所示。
表5急性经口毒性检测结果
根据表5结果可知,各小鼠一次灌胃剂量5000mg/kg体重的实施例1-3的抑菌剂,在14天内均无死亡,可判定LD50大于5000mg/kg体重。LD50大于5000mg/kg体重,属于实际无毒。表明本申请的抑菌剂属于实际无毒。
实施例7急性眼刺激性检测
检测本申请的抑菌剂对实验动物眼睛的急性刺激和腐蚀作用,为人类眼和粘膜接触该抑菌剂的潜在危害提供信息。
取6只普通级新西兰兔(由广州市花都区花东信华实验动物养殖场提供,动物合格证号:44007600004771),试验前24h,对各新西兰兔的两只眼睛进行常规检查。试验时,轻轻拉开各新西兰兔一侧眼睛的下眼睑,吸取实施例1制备的抑菌剂0.1ml,滴入结膜囊中,眼被动闭合4s,以防止抑菌剂丢失,30s后用生理盐水冲洗,充分去除残留。另一侧眼睛以生理盐水作为正常对照。于滴眼后1h、24h、48h、72h、7天、14天和21天,分别对新西兰兔角膜、虹膜或结膜进行评分,计算每只新西兰兔在三个不同观察时间(24h、48h和72h)角膜损害、虹膜损害、结膜充血和结膜水肿四个方面的平均评分。并根据平均评分和恢复时间评价,进行眼刺激性反应分级,眼刺激性反应分级标准参见《消毒技术规范(2002)》中的“消毒产品毒理学实验技术规范”部分。如果72小时内未出现刺激反应,或第7天或第14天,眼睛刺激反应完全恢复,即可提前终止实验。
观察到72小时内未出现刺激反应,提前终止实验,急性眼刺激性检测中角膜损害、虹膜损害、结膜充血和结膜水肿四个方面的平均评分结果如表6所示。
按照上述方法,分别对实施例2、实施例3、对比例1、对比例2、对比例3的抑菌剂进行急性眼刺激性检测,结果如表6所示。
表6急性眼刺激性检测结果
注:急性眼刺激反应的评分标准参见《消毒技术规范(2002)》中的“消毒产品毒理学实验技术规范”部分。
根据表6结果可知,滴加实施例1-3的抑菌剂后,各新西兰兔的角膜损害、虹膜损害、结膜充血和结膜水肿四个方面的平均评分均为0,眼刺激性反应分级为无刺激性。表明本申请的抑菌剂对眼无刺激性、无腐蚀性。根据表6结果可知,滴加对比例1-3的抑菌剂后,各新西兰兔在1-48h均出现了结膜充血呈鲜红色,在1-24h均出现了轻微水肿,而本申请的抑菌剂在72小时内均未出现刺激反应,证明本申请的抑菌剂的急性眼刺激性检测结果更好,表明本申请的抑菌剂无刺激,更安全,更适用于鼻腔护理。
实施例8稳定性检测
将实施例4中样品1-9在37℃、相对湿度75%条件下存放90天,按实施例4中抑菌率的测试方法,分别测试样品1-9对金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠杆菌(ATCC 11229)和白色念珠菌(ATCC 10231)的抑菌率,结果均大于99.0%,表明本申请的抑菌剂稳定性好。
综上,本申请的抑菌剂,抑菌效果起效迅速,抑菌率高达99.9%,具有较强的抑菌效果,且无毒无刺激,稳定性好。进一步的,本申请的抑菌剂,具有原料种类少、成本低、制备工艺简便等优势。本申请的抑菌剂,可用于制备鼻腔抑菌护理液,用于鼻腔护理,对鼻腔具有抑菌作用,以保持鼻腔清洁,从而可以用于预防或改善鼻炎症状;进一步地,本申请的抑菌剂用于鼻腔护理,无刺激,更安全。
以上所述仅为本申请的较佳实施例,并非用于限定本申请的保护范围。凡在本申请的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等,均包含在本申请的保护范围内。
Claims (4)
1.一种用于鼻腔护理的抑菌剂,其由柑橘提取物、维生素B3和水组成;所述柑橘提取物、维生素B3和水的质量比为1:(0.5-2):(800-1200);
其中,所述柑橘提取物,选自甜橙提取物、丑柑提取物或脐橙提取物中的至少一种;所述柑橘提取物,基于所述柑橘提取物的总重量,包括:150-400mg/g的橙皮苷、5-50mg/g的新橙皮苷、1-25mg/g的柠檬苦素、2-50mg/g的柠檬酸、2-50mg/g的柠檬烯、50-300mg/g的果胶、5-50mg/g的吖啶酮、40-200mg/g的维生素C和5-50mg/g的维生素P;
所述抑菌剂的pH值为3.0-6.8;
所述抑菌剂的制备方法,包括:将水加热至45-55℃,将柑橘提取物和维生素B3加入水中,混合,静置,过滤,即得所述抑菌剂。
2.根据权利要求1所述的抑菌剂,其中,所述抑菌剂的抑菌率大于等于99.9%。
3.根据权利要求1所述的抑菌剂,其中,所述过滤包括采用180-300目筛网过滤1-3次。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抑菌剂用于制备鼻腔抑菌护理液的用途。
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