CN115128263A - 一种量子点食物耐受不耐受检测试纸条及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种量子点食物耐受不耐受检测试纸条及检测方法，属于生物检测技术领域，包括底板，所述底板的前端正面粘贴有样品垫，样品垫的末端搭接结合垫的前端，结合垫的下侧粘贴在底板上，结合垫的末端搭接包被膜的前端，包被膜的下侧粘贴在底板上，底板的末端粘贴有吸水垫，吸水垫的前端搭接在包被膜的末端上，包被膜上设置有五条检测线和一条质控线，每条检测线上包含有量子点标记的一种的标志物抗原。本发明通过在同一检测线上包被不同的识别物抗原，实现了统一检测线能够检测多种食物抗体，从而减少了标本量的使用和采集。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，具体为一种量子点食物耐受不耐受检测试纸条及检测方法。
背景技术
食物不耐受指的是一种复杂的变态反应性疾病，人的免疫系统把进入人体内的某种或多种食物当成有害物质，从而针对这些物质产生过度的保护性免疫反应，产生食物特异性IgY抗体，IgY抗体与食物颗粒形成免疫复合物（Ⅲ型变态反应），可引起所有组织（包括血管）发生炎症反应，并表现为全身各系统的症状与疾病。食物不耐受的研究是当前欧洲各国的研究热点，其应用正在世界范围内迅速普及。
公认口服激发试验中的双盲安慰剂对照食物激发试验时诊断食物不耐受的金标准，但临床实际应用较为困难，基本无可操作性。早先主要通过酶联免疫分析法（ELISA）检测IgY抗体来反应食物不耐受状况。酶联免疫分析法（ELISA）是将抗原、抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的一种免疫分析方法。后来在酶联免疫吸附技术（ELISA）方法基础上发展了酶联免疫印迹法。酶联免疫印迹法需要将检测的抗原固定于膜上，再用抗体检测，酶联免疫印迹法可同时检测多种食物抗原，即将多个食物抗原以划线的方式固定于膜上，加入待检血清反应后，再与酶标抗体结合，最后通过底物液显色程度判断结果。但是酶联免疫印迹法的操作步骤复杂，反应时间长，检测时间长，结果精确度存在误差，而且采用大型的仪器设备进行检验。
发明内容
本发明的目的在于提供一种量子点食物耐受不耐受检测试纸条，以解决现有技术存在的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种量子点食物耐受不耐受检测试纸条，包括底板，所述底板的前端正面粘贴有样品垫，样品垫的末端搭接结合垫的前端，结合垫的下侧粘贴在底板上，结合垫的末端搭接包被膜的前端，包被膜的下侧粘贴在底板上，底板的末端粘贴有吸水垫，吸水垫的前端搭接在包被膜的末端上，包被膜上设置有五条检测线和一条质控线，每条检测线上包含有量子点标记的一种的标志物抗原，五条所述检测线上的标志物抗原为牛肉抗原、鸡肉抗原、鳕鱼抗原、玉米抗原、螃蟹抗原、鸡蛋抗原、蘑菇抗原、牛奶抗原、猪肉抗原、大米抗原、虾抗原、大豆抗原、西红柿抗原、小麦抗原、鲑鱼抗原、豌豆抗原、酵母抗原、黄豆抗原中的任意五种。
进一步地，检测线上有两种标志物微球，一种是鸡IgY偶联的量子点微球，用于独立质控线，另一种是鼠抗人IgG抗体偶联的量子点微球，用于5条检测线上特异性的IgG抗体的检测。
进一步地，所述量子点的发射波长为525～655nm。
进一步地，相邻的两个检测线之间的间隔距离为2-4mm，线与质控线之间间隔距离为2-4mm，质控线位于靠近吸水垫一侧。
进一步地，所述样品垫、结合垫为玻璃纤维材质，包被膜为硝酸纤维素膜材质，底板为PVC胶板材质，吸水垫为吸水纸材质。
进一步地，质控线包被有羊抗鸡IgY多克隆抗体，浓度为0 .5～1 .5mg/mL，划膜量为1ul/cm。
本发明的优点在于：本发明通过在同一检测线上包被不同的识别物抗原，实现了统一检测线能够检测多种食物抗体，从而减少了标本量的使用和采集。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的立体结构示意图。
附图标记：1样品垫，2结合垫，3包被膜，4吸水垫，5底板，6检测线，7质控线。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
参照图1，一种量子点食物耐受不耐受检测试纸条，包括底板5，所述底板5的前端正面粘贴有样品垫1，样品垫1的末端搭接结合垫2的前端，结合垫2的下侧粘贴在底板5上，结合垫2的末端搭接包被膜3的前端，包被膜3的下侧粘贴在底板5上，底板5的末端粘贴有吸水垫4，吸水垫4的前端搭接在包被膜3的末端上，包被膜3上设置有五条检测线6和一条质控线7，每条检测线6上包含有量子点标记的一种的标志物抗原，五条所述检测线6上的标志物抗原为牛肉抗原、鸡肉抗原、鳕鱼抗原、玉米抗原、螃蟹抗原、鸡蛋抗原、蘑菇抗原、牛奶抗原、猪肉抗原、大米抗原、虾抗原、大豆抗原、西红柿抗原、小麦抗原、鲑鱼抗原、豌豆抗原、酵母抗原、黄豆抗原中的任意十五种。
检测线6上有两种标志物微球，一种是鸡IgY偶联的量子点微球，用于独立质控线7，另一种是鼠抗人IgG抗体偶联的量子点微球，用于5条检测线6上特异性的IgG抗体的检测。所述量子点的发射波长为525～655nm。相邻的两个检测线6之间的间隔距离为3-5mm，线与质控线7之间间隔距离为3-5mm，质控线7位于靠近吸水垫4一侧。所述样品垫1、结合垫2为玻璃纤维材质，包被膜3为硝酸纤维素膜材质，底板5为PVC胶板材质，吸水垫4为吸水纸材质。质控线7包被有羊抗鸡IgY多克隆抗体，浓度为0 .5～1 .5mg/mL，划膜量为1ul/cm。
所述食物耐受不耐受检测试纸条的制作方法，所述方法包括：
S1.量子点标记抗体
采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液（1uM）和EDC溶液（10mg/ml）按照按1:5 1:~10比例混合，并常温避光活化；然后加入过量待标记抗体，调整反应pH在6 10之间，避光反应1h；将反应结束的液体进行超滤，在10000rpm下离心20min，吸出超滤后的标记抗体，用含20mM Tris、15%蔗糖、1%BSA，pH7.5 8.5的溶液复溶至原体积，即为制备好的量子点标记抗体。
S2.结合垫2的制备
将复溶后的量子点标记抗体用专用设备按4 8μl/cm喷涂在玻璃纤维上，置于烘箱~中37℃鼓风干燥1.5小时，制作结合垫2。
S3.包被膜3的制备
将5类不同食物性抗原（Ag）——包括牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、螃蟹、鸡蛋、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦、鲑鱼、豌豆、酵母的任意5种，分别用20mM PBS（pH7.07.8）调节至浓度为0.8～1.8mg/mL，1ul/cm划线，5条检测线6按顺序在NC膜的检测（T）区排布；将羊抗鸡IgY用20mM PBS（pH7.0 7.8）调节至浓度为0.5～1.5mg/mL，1ul/cm划线在NC膜的质控线7（C）处；检测线6之间间隔距离为2mm，检测线6与质控线7之间间隔距离为3mm，检测线6在质控线7的下方。划线完毕后置于烘箱中37℃鼓风干燥1小时，制作包被膜3。
S4.样品垫1的制备
将含有10mM Tris、1.5%PEG、0.5%NaCl、1%Brij35，pH8.0～10.0的处理液均匀涂布在玻璃纤维上，置于空气湿度低于40%的条件下，室温自然晾干，制作样品垫1。
S5.大板组装
在底板5上按顺序依次相互搭接地粘贴样品垫1、结合垫2、包被膜3和吸水垫4，进行大板组装，并用专用切条机切割成所需宽度的试纸条。
一种量子点食物耐受不耐受检测试纸条的检测方法，先将检测卡置于干净平坦的台面上，然后垂直缓慢滴加100ul人血液样本于试纸的样品垫1处，等待15分钟后，插入配套仪器进行判读，根据检测线6和质控线7的荧光情况判读结果。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (7)
1.一种量子点食物耐受不耐受检测试纸条，其特征在于：包括底板，所述底板的前端正面粘贴有样品垫，样品垫的末端搭接结合垫的前端，结合垫的下侧粘贴在底板上，结合垫的末端搭接包被膜的前端，包被膜的下侧粘贴在底板上，底板的末端粘贴有吸水垫，吸水垫的前端搭接在包被膜的末端上，包被膜上设置有五条检测线和一条质控线，每条检测线上包含有量子点标记的一种的标志物抗原，五条所述检测线上的标志物抗原为牛肉抗原、鸡肉抗原、鳕鱼抗原、玉米抗原、螃蟹抗原、鸡蛋抗原、蘑菇抗原、牛奶抗原、猪肉抗原、大米抗原、虾抗原、大豆抗原、西红柿抗原、小麦抗原、鲑鱼抗原、豌豆抗原、酵母抗原、黄豆抗原中的任意五种。
2.根据权利要求1所述的一种量子点食物耐受不耐受检测试纸条，其特征在于：检测线上有两种标志物微球，一种是鸡IgY偶联的量子点微球，另一种是鼠抗人IgG抗体偶联的量子点微球。
3.根据权利要求1所述的一种量子点食物耐受不耐受检测试纸条，其特征在于：所述量子点的发射波长为525～655nm。
4.根据权利要求1所述的一种量子点食物耐受不耐受检测试纸条，其特征在于：相邻的两个检测线之间的间隔距离为3-5mm，线与质控线之间间隔距离为3-5mm，质控线位于靠近吸水垫一侧。
5.根据权利要求1所述的一种量子点食物耐受不耐受检测试纸条，其特征在于：所述样品垫、结合垫为玻璃纤维材质，包被膜为硝酸纤维素膜材质，底板为PVC胶板材质，吸水垫为吸水纸材质。
6.根据权利要求1所述的一种量子点食物耐受不耐受检测试纸条，其特征在于：质控线包被有羊抗鸡IgY多克隆抗体，浓度为0 .5～1 .5mg/mL，划膜量为1ul/cm。
7.一种量子点食物耐受不耐受检测试纸条的检测方法，其特征在于：先将检测卡置于干净平坦的台面上，然后垂直缓慢滴加100ul人血液样本于试纸的样品垫处，等待15分钟后，插入配套仪器进行判读，根据检测线和质控线的荧光情况判读结果。
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