CN115094071B

CN115094071B - 一种Na+/磷酸根协同转运体基因PvPTB在富集砷和/或吸收利用磷元素中的应用

Info

Publication number: CN115094071B
Application number: CN202210753249.4A
Authority: CN
Inventors: 曹越; 张祥; 孙丹; 汤叶涛; 仇荣亮
Original assignee: Sun Yat Sen University
Current assignee: Sun Yat Sen University
Priority date: 2022-06-29
Filing date: 2022-06-29
Publication date: 2023-05-19
Anticipated expiration: 2042-06-29
Also published as: CN115094071A

Abstract

本发明公开了一种Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB在富集砷和/或吸收利用磷元素中的应用。在蜈蚣草中提取出2个Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示，为PvPTB1和PvPTB2基因。PvPTB1和PvPTB2基因是常见的高等植物中未存在的一类磷转运蛋白基因，将其转运到EY917酵母突变株，使酵母具有砷和磷转运功能。在拟南芥中表达所述PvPTB基因，提高了其地上部的砷富集能力90％～110％，总磷积累量12％～46％。在工程植物或微生物中过表达PvPTB基因，用于修复环境中的砷污染和提高磷利用效率。

Description

一种Na+/磷酸根协同转运体基因PvPTB在富集砷和/或吸收利用磷元素中的应用

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体地，涉及一种Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB在富集砷和/或吸收利用磷元素中的应用。

背景技术

砷是一种在自然界中广泛存在的类金属元素，砷及其可溶性化合物都具有很强的毒性。砷污染的水源、土壤、沉积物是许多国家饮用水和食物链污染的主要来源，对植物、动物等多种生命形态都有很大的危害。土壤中的砷积累达到一定程度，会直接影响植物的生长发育、降低农业产量，并可能进入蔬果的可食用组织及水稻、小麦等农作物的籽粒中。经饮用水或饮食暴露，人体摄入一定量的砷易造成各类皮肤癌症、肾脏损伤和心血管疾病等不可逆损害。加强土壤砷污染的治理与修复，对于改善土壤环境质量具有重要意义。

重金属土壤污染修复方法主要是工程治理措施和物理化学修复方法，但成本相对较高、对环境扰动大，且有可能造成土壤的二次污染。近年来兴起的植物修复技术因具有成本低、操作简单、生态效益高、对环境扰动较小和无二次污染等优点，展现出在土壤修复方面的优势和发展前景。其中，植物提取修复是当前应用最为广泛且最有前景的植物修复方式。

蜈蚣草是世界上最强的砷超富集植物、是砷污染土壤植物提取修复的最重要植物材料。其中含有大量与砷超富集相关的关键基因能够用于构建砷提取修复工程植物。但是，目前已报道的一些蜈蚣草基因，特别是在高等(显花)植物中存在高度同源性的基因，基因工程应用中效果并不显著。可能由于序列具有较高同源性，工程植物自身的条件系统会限制其发挥功能。而将一些高等(显花)植物中没有的基因类型进行基因工程应用，往往具有较好效果。目前，缺少对蜈蚣草特有的砷超富集相关关键基因的研究与利用关键基因进行土壤污染修复的应用。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的上述不足，提供一种Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB在富集砷和/或吸收利用磷元素中的应用。

本发明的第一个目的是提供一种Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB。

本发明的第二个目的是提供一种Na⁺/磷酸根协同转运体蛋白PvPTB。

本发明的第三个目的是提供一种重组载体。

本发明的第四个目的是提供一种重组工程菌。

本发明的第五个目的是提供所述Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB在提高微生物和/或植物富集和/或吸收砷和/或磷元素中的应用。

本发明的第六个目的是提供所述Na⁺/磷酸根协同转运体蛋白PvPTB在提高微生物和/或植物富集和/或吸收砷和/或磷元素中的应用。

本发明的第七个目的是提供所述重组载体在提高微生物和/或植物富集和/或吸收砷和/或磷元素中的应用。

本发明的第八个目的是提供所述重组工程菌在提高微生物和/或植物富集和/或吸收砷和/或磷元素中的应用。

本发明的第九个目的是提供一种富集和/或吸收砷和/或磷元素的方法。

本发明的第十个目的是提供一种构建富集砷和/或磷元素微生物和/或植物的方法。

为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：

一种Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB，所述Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB的核苷酸序列如SEQ ID NO：7和/或SEQ ID NO：8所示。

一种Na⁺/磷酸根协同转运体蛋白PvPTB，所述Na⁺/磷酸根协同转运体蛋白PvPTB的氨基酸序列如SEQ ID NO：16和/或SEQ ID NO：17所示。

一种重组载体，所述重组载体中含有所述Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB。

一种重组工程菌，所述重组工程菌中含有所述Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB。

优选地，所述微生物为酵母菌。

优选地，所述植物为拟南芥植物。

所述Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB在提高微生物和/或植物富集和/或吸收砷和/或磷元素中的应用。

优选地，所述微生物为酵母菌。

优选地，所述植物为拟南芥植物。

优选地，所述Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。

优选地，所述植物为拟南芥植物地上部分。

所述Na⁺/磷酸根协同转运体蛋白PvPTB在提高微生物和/或植物富集和/或吸收砷和/或磷元素中的应用。

优选地，所述微生物为酵母菌。

优选地，所述植物为拟南芥植物。

优选地，所述Na⁺/磷酸根协同转运体蛋白PvPTB的氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示。

优选地，所述植物为拟南芥植物地上部分。

所述重组载体在提高微生物和/或植物富集和/或吸收砷和/或磷元素中的应用。

优选地，所述微生物为酵母菌。

优选地，所述植物为拟南芥植物。

优选地，所述重组载体中含有所述Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。

优选地，所述植物为拟南芥植物地上部分。

所述重组工程菌在提高微生物和/或植物富集和/或吸收砷和/或磷元素中的应用。

优选地，所述微生物为酵母菌。

优选地，所述植物为拟南芥植物。

优选地，所述重组工程菌中含有所述Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示。

优选地，所述植物为拟南芥植物地上部分。

一种富集和/或吸收砷和/或磷元素的方法，在微生物和/或植物中过表达核苷酸序列如SEQ ID NO：7和/或SEQ ID NO：8所示的Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB。

优选地，所述微生物为酵母菌。

优选地，所述植物为拟南芥植物。

优选地，在微生物和/或植物中过表达核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示的Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB。

一种构建富集砷和/或磷元素微生物和/或植物的方法，在微生物和/或植物中过表达核苷酸序列如SEQ ID NO：7和/或SEQ ID NO：8所示的Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB。

优选地，所述微生物为酵母菌。

优选地，所述植物为拟南芥植物。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

附图说明

图1为蜈蚣草PvPTB的进化分析和组织表达模式；A为蜈蚣草PvPTB1和PvPTB2的系统发育树分析图；B为基于定量PCR分析的蜈蚣草PvPTB1和PvPTB2基因在根系和地上部的相对表达模式。

图2为酵母系统研究蜈蚣草PvPTB的磷转运功能结果，具体为不同磷酸盐梯度(1mM、2mM、5mM、10mM和20mM)的酵母打点实验结果。

图3为酵母系统研究蜈蚣草PvPTB的砷转运功能结果，具体为在1mM的Na₂HAsO₄·7H₂O条件下，转入PvPTB的酵母对砷的抗性实验结果。

图4为酵母系统研究蜈蚣草PvPTB的砷转运功能结果，具体为转入PvPTB的酵母对砷的吸收积累结果。

图5为PvPTB1转基因拟南芥的组培实验中对砷和磷的吸收转运情况，其中A为PvPTB1转基因拟南芥地上部对砷积累量；B为PvPTB1转基因拟南芥根对砷积累量；C为PvPTB1转基因拟南芥地上部对总磷的积累量；D为PvPTB1转基因拟南芥根对总磷的积累量。不同字母的标注代表显著差异p<0.05。

图6为PvPTB2转基因拟南芥的组培实验中对砷和磷的吸收转运情况，其中A为PvPTB2转基因拟南芥地上部对砷积累量；B为PvPTB2转基因拟南芥根对砷积累量；C为PvPTB2转基因拟南芥地上部对总磷的积累量；D为PvPTB2转基因拟南芥根对总磷的积累量。不同字母的标注代表显著差异p<0.05。

图7为组培PvPTB1和PvPTB2转基因拟南芥在加砷条件下的生长状况，其中A为缺磷加砷条件下的野生型(WT)、PvPTB1转基因拟南芥(Ex1-2和Ex1-10)、PvPTB2转基因拟南芥(Ex2-2和Ex2-3)，B为加磷加砷条件下的野生型(WT)、PvPTB1转基因拟南芥(Ex1-2和Ex1-10)、PvPTB2转基因拟南芥(Ex2-2和Ex2-3)。

具体实施方式

下面结合说明书附图及具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。

实施例1蜈蚣草PvPTB1和PvPTB2的克隆

一、实验方法

提取蜈蚣草根系RNA(NCBI登录号为Taxonomy ID：13821)，并反转录为cDNA，分别使用克隆引物PvPTB1-PCR-F(SEQ ID NO：1)、PvPTB1-PCR-R(SEQ ID NO：2)和PvPTB2-PCR-F(SEQ ID NO：3)、PvPTB2-PCR-R(SEQ ID NO：4)进行PCR扩增获得克隆产物。

将克隆产物使用擎科公司的凝胶回收试剂盒(TSINGKE TSP601-200,China)进行纯化回收，得到纯化产物，并将纯化产物用pClone007 Blunt Vector Kit(TSINGKE,China)连接克隆载体，最终转入大肠杆菌感受态细胞DH5αChemically Competent Cell(TSINGKE,China)中，利用测序引物M13F(SEQ ID NO：5)及M13R(SEQ ID NO：6)进行测序，引物具体核苷酸序列见表1。

表1 引物核苷酸序列表

二、实验结果

克隆载体的测序结果显示，所获得的克隆产物与预测的PvPTB1和PvPTB2序列完全一致，表明成功克隆获得了核苷酸序列分别如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示的PvPTB1和PvPTB2基因序列(编码区CDS序列区域)。

实施例2蜈蚣草PvPTB1和PvPTB2的生物信息学分析和表达模式鉴定

一、实验方法

(1)蜈蚣草的培养

蜈蚣草孢子采集自广东省广州市番禺区，于实验室内进行繁殖。将蜈蚣草孢子(0.01～0.02g)均匀地撒在盛营养土的塑料盆中，盖上薄膜，定期浇水，摆放在温室中育苗。待蜈蚣草幼苗长至5～6叶，移至1/5霍格兰营养液(HNS)中曝气培养，每周换一次营养液，预培养两周。所有植株均生长在光照14h、昼/夜温度26/20℃、相对湿度60％、光强3000lx的温室中。

(2)RNA提取和转录分析

为了鉴定蜈蚣草中核苷酸序列分别如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示的PvPTB1和PvPTB2基因的组织表达模式，用FastPure Plant total RNA Isolation Kit试剂盒(Vazyme Biotech,Nanjing,China)，以水培的蜈蚣草为材料，并进行加磷、缺磷、加磷加砷三种处理，提取不同处理组的蜈蚣草RNA。将得到的RNA使用HiScript II一步RT-PCR试剂盒(Vazyme Biotech,Nanjing,China)反转录成cDNA。

以PvActin基因(SEQ ID NO：9)作为蜈蚣草PvPTB1和PvPTB2基因的内参，并以所得cDNA作为模板，使用SYBR Green PCR Master Mix试剂盒(Vazyme Biotech,Nanjing,China)进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)，结果采用2^-ΔΔCT法进行统计。定量引物信息见表1。

表2 qRT-PCR引物列表

序号	引物名称	序列
			SEQ ID NO：10	qRT-PvActin-F	GGGCAGTATTTCCAAGCATAGTGGG
SEQ ID NO：11	qRT-PvActin-R	TGCCTCGCTTTGATTGAGCCTCATC
			SEQ ID NO：12	PvPTB1_Q_F	ACCGCAGCCTTATTTTCCCA
SEQ ID NO：13	PvPTB1_Q_R	AACGTCATTCTCGTACCGCA
			SEQ ID NO：14	PvPTB2_Q_F	GACATCCCGCTTCACGATCT
SEQ ID NO：15	PvPTB2_Q_R	CAGGGCATCGACAGAGTGTT

(3)系统进化树的构建

利用DNAMAN软件翻译核苷酸序列分别如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示的PvPTB1和PvPTB2基因序列，获得氨基酸序列分别如SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17所示的PvPTB1和PvPTB2蛋白序列，作为植物基因研究的模式植物，我们在NCBI网站上获得了水稻中的13个Pht1基因和拟南芥中的9个Pht1基因(见表3)，并得到了它们的氨基酸序列。在水稻和拟南芥中利用NCBI网站检索对比PvPTB的同源基因，但并未得到结果。

通过对蜈蚣草中的PvPTB1和PvPTB2蛋白、模式植物水稻中的Pht1家族蛋白和模式植物拟南芥中的Pht1家族蛋白的氨基酸序列进行分析和对比，利用MEGAX的Neighbor-Joining(邻接法)构建系统发育树。

表3 水稻和拟南芥中的Pht1家族蛋白的基因的NCBI编号

二、实验结果

图1A反映了在本研究中发现的2个Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB与常见的模式植物中的磷酸盐转运蛋白并不属于同一分支，且NCBI的同源基因的比对结果显示，本发明的PvPTB1和PvPTB2基因在显花植物中丢失，是常见的高等植物中未存在的一类磷转运蛋白。

通过qRT-PCR对蜈蚣草中的PvPTB1和PvPTB2基因进行分析，发现PvPTB1和PvPTB2基因在蜈蚣草的根系种特异性表达，且缺磷与加砷处理并不会下调该基因的表达，说明该基因可在砷暴露条件下持续发挥砷吸收功能(图1B)。

实施例3利用酵母系统研究PvPTB1和PvPTB2的砷和磷转运功能

一、实验方案

(1)酵母表达载体的构建

为构建酵母表达载体，分别以PvPTB1和PvPTB2克隆载体为模板，利用诺维赞公司CE Design在线设计网站设计的引物，将同源臂分别克隆到核苷酸序列分别如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示的PvPTB1和PvPTB2基因的CDS序列两端。克隆获得的PCR产物经凝胶纯化，通过一步法快速克隆试剂盒(Hieff

Plus One Step Cloning Kit,Yesen)同源重组到pAG426GPD-ccdB表达载体的SpeI和HindIII限制性酶切位点之间，构建的重组载体被命名为pAG426::PvPTB1和pAG426::PvPTB2。

将重组载体转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，挑取阳性单克隆，经PCR验证及测序通过后，保存菌液，分别提取PvPTB1和PvPTB2重组载体质粒，备用。

(2)酵母突变株的转化及阳性转化子的鉴定

利用酵母快速转化试剂盒(Yeast Transformation Kit,coolaber)将空载体pAG426-v与重组载体pAG426::PvPTB1和pAG426::PvPTB2分别转入酵母突变株EY917中，于SD-U选择培养基平板筛选阳性单克隆，获得PvPTB1酵母转化株和PvPTB2酵母转化株。EY917酵母突变株缺失了酵母内源全部5个磷转运体(Δpho84(NCBI登录号：854916)、Δpho89(NCBI登录号：852599)、Δpho87(NCBI登录号：850403)、Δpho90(NCBI登录号：853241)、Δpho91(NCBI登录号：4838906))，完全失去了对磷(Pi)的吸收和转运功能。挑取于30℃恒温培养箱中生长4～7天后大小适宜的酵母阳性单克隆，200mM、30℃摇床中培养至OD600约为1.0，富集菌体，使用酵母质粒提取试剂盒(Yeast DNA Extraction Kit,thermo)提取表达酵母质粒并回转到大肠杆菌中进行二次测序验证。测序通过后，-80℃保存酵母表达菌株，备用。

(3)酵母平板生长实验

设置不同的磷酸盐浓度(1mM、2mM、5mM、10mM和20mM)处理，进行酵母打点实验，30℃培养3天，拍摄。

(4)酵母砷抗性实验

将OD600约1.0的PvPTB1和PvPTB2酵母转化株，以3000rpm转速离心富集5min，清洗两次后用少量无菌水重悬，得到PvPTB1酵母转化株重悬液和PvPTB2酵母转化株重悬液。

将PvPTB1酵母转化株重悬液分装至含有0μM Na₂HAsO₄·7H₂O(As-)和1mMNa₂HAsO₄·7H₂O(As+)的30mL SD-U酵母液体培养基中，酵母初始OD600约为0.2。酵母细胞在200rpm、30℃的摇床中摇动培养，每隔一段时间测定波长为600nm处酵母细胞液的吸光度，绘制酵母生长曲线。PvPTB2酵母转化株培养操作与PvPTB1酵母转化株相同。

(5)酵母砷积累实验

将PvPTB1酵母转化株重悬液分装至含有0μM Na2HAsO4·7H2O、500μMNa₂HAsO₄·7H₂O和1mM Na₂HAsO₄·7H₂O的SD-U酵母液体培养基中，使培养液初始OD600介于0.8～1.0之间。

酵母细胞在200rpm、30℃的摇床中摇动培养，3h后，以3000rpm转速离心富集5min，用4℃超纯水清洗菌体4次并离心，保存菌体及最后一次洗脱液，待检测其中的总砷含量。

总砷含量的测定采用使用USEPA 3050B的浓硝酸-过氧化氢体系(10mL 1:1(w/v)HNO₃和2mL 30％ H₂O₂)，于石墨炉消解仪中105℃消解酵母菌体。利用铟(In)内标法，使用电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)测定样品中的总砷含量。PvPTB2酵母转化株培养、总砷含量测定操作与PvPTB1酵母转化株相同。

二、实验结果

图2的酵母平板生长实验的结果显示，在低磷(Pi)浓度条件下，酵母并不能正常生长，而在磷(Pi)浓度达到5mM时，酵母可正常生长，且PvPTB1酵母转化株生长优于PvPTB2酵母转化株，所以PvPTB1及PvPTB2可以在高磷(Pi)环境回补EY917酵母突变株的磷吸收能力，具有低亲和磷(Pi)转运功能。

图3的酵母砷抗性实验结果显示，PvPTB1和PvPTB2酵母转化株在砷的胁迫下，生长受到了抑制，这表明在酵母中表达PvPTB1和PvPTB2蛋白能够增强酵母菌株对砷的吸收转运能力，进而证明PvPTB1和PvPTB2蛋白具有砷转运能力。

图4的酵母砷积累实验结果表明，在添加500μM As和1mM As的酵母培养基中培养固定时间与相同生长状态的PvPTB1和PvPTB2酵母转化株，PvPTB1和PvPTB2酵母转化株能够吸收培养基中的As，且随着培养基中砷浓度的提高，As吸收量也会有所上身，所以PvPTB1和PvPTB2蛋白具备砷转运能力。

因此，PvPTB蛋白同时具备磷酸盐和砷酸盐转运功能。

实施例4构建PvPTB1和PvPTB2转基因拟南芥植株

一、实验方法

1.拟南芥转基因载体的构建和阳性转基因拟南芥株系的鉴定

将核苷酸序列分别如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示的PvPTB1和PvPTB2基因序列转入植物表达载体pSN1305中，构建pSN1305-PvPTB1和pSN1305-PvPTB2重组载体。将重组载体pSN1305-PvPTB1和pSN1305-PvPTB2导入农杆菌菌株GV3101中。

通过农杆菌转化法构建转基因拟南芥株系，具体的实验方案为：

将构建好的含有重组载体pSN1305-PvPTB1和pSN1305-PvPTB2的农杆菌菌株GV3101划线培养，用含kana和RIF抗性的LB培养基扩培含有重组载体pSN1305-PvPTB1和pSN1305-PvPTB2的农杆菌，在农杆菌摇至活性最佳OD(0.8～1.0)后富集菌体，转移进入侵染液(质量比5％蔗糖，体积比0.02％sliwet77)。

在基质土中种植培养野生型拟南芥，在拟南芥出现绿色花苞后，将拟南芥的未开花絮(稍微露点白色比较好)浸泡在上述含有农杆菌的侵染液中45s，继续种植培养待拟南芥成熟后收种。

通过种植培养收获转基因株系T1代拟南芥种子，在添加30mg/L潮霉素的1/2MS培养基上萌发T1代拟南芥幼苗，筛选出阳性转化植株。筛选出阳性苗后在含有30mg/L潮霉素的1/2MS培养基上继续培养，等到其生物量达到一定量之后，收集植物组织，提取植物RNA，进行qRT-PCR鉴定PvPTB1和PvPTB2转基因拟南芥株系。

二、实验结果

通过潮霉素筛选和qRT-PCR鉴定，PvPTB1转基因拟南芥筛选出两个生长状态良好的拟南芥株系(Ex1-2和Ex1-10)，PvPTB2转基因拟南芥筛选出两个生长状态良好的拟南芥株系(Ex2-2和Ex2-3)。

实施例5组培环境下PvPTB1和PvPTB2转基因拟南芥对磷和砷吸收利用的情况

一、实验方法

(1)拟南芥的组培和处理方法

为了明确实施例4得到的PvPTB1和PvPTB2转基因拟南芥对磷和砷吸收的能力，对组培PvPTB1和PvPTB2转基因拟南芥植株和野生型拟南芥植株中总磷和砷的含量进行测定。

将实施例4获得的阳性PvPTB1转基因拟南芥株系(Ex1-2和Ex1-10)和PvPTB2转基因拟南芥株系(Ex2-2和Ex2-3)的种子在含有30mg/L潮霉素的无菌1/2MS培养基上萌发，在同时间和半天后分别在不含抗生素的无菌1/2MS培养基上萌发野生型拟南芥株系(WT)，5天后，将长势一致的拟南芥幼苗分别移入CK(未添加AsⅤ)和含有50μM AsⅤ两种处理的1/2MS培养基上处理。2周后，分离拟南芥的根系和地上部组织于液氮中速冻，随后保存于-80℃环境中备用。

(2)总磷含量的测定

用低温冷冻干燥机冻干拟南芥的根系和地上部组织，称取约0.05g经干燥粉碎后的植物组织于消解管中，用USEPA3050B的浓硝酸-过氧化氢体系(10mL 1：1(w/v)HNO₃和2mL30％ H₂O₂)，于石墨炉消解仪中105℃消解植物组织。用钼酸盐比色法测定样品植物组织总磷含量。

(3)砷含量的测定

用步骤(2)的方法得到消解植物组织，用铟(In)内标法，电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)，测定样品植物组织中的总砷含量。

二、实验结果

与野生型相比，PvPTB1转基因拟南芥地上部的砷含量显著增加了90％～110％，其中Ex1-2转基因株系的效果最好，地上部的砷含量增加了110％；Ex1-10转基因株系地上部的砷含量增加90％，根系中的砷含量没有显著差异，说明转入PvPTB1基因促进拟南芥对砷的吸收和向地上部的转运(图5A、图5B)。

与野生型相比，PvPTB1转基因拟南芥地上部的总磷含量显著增加了12％～46％，其中Ex1-2转基因株系的地上部的总磷含量增加了46％；Ex1-10转基因株系地上部的总磷含量增加12％，根系的总磷含量不变，说明转入PvPTB1基因促进拟南芥对磷的吸收(图5C、图5D)。

与野生型相比，PvPTB2转基因拟南芥地上部的砷含量显著增加了27～51％，其中Ex2-3转基因株系的效果最好，地上部的砷含量增加了51％；Ex2-2转基因株系地上部的砷含量增加27％，根系中的砷含量没有显著差异，说明转入PvPTB2基因促进拟南芥对砷的吸收和向地上部的转运(图6A、图6B)。与野生型相比，PvPTB2转基因拟南芥地上部的总磷含量并未发生显著变化，根系的总磷含量不变(图6C、图6D)。

与野生型相比，PvPTB1和PvPTB2转基因拟南芥能够提高地上部的砷积累量，但从图7中拟南芥的表型可以看出，更高的砷积累量并不会影响拟南芥的生长。

以上结果说明，转入PvPTB1和PvPTB2基因促进了拟南芥地上部对砷和磷的吸收和积累，其中转基因拟南芥株系Ex1-2对拟南芥地上部对砷和磷的吸收和积累的促进效果最好，而且这种对砷的富集作用并不会影响拟南芥本身的生长。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

序列表

<110> 中山大学

<120> 一种Na+/磷酸根协同转运体基因PvPTB在富集砷和/或吸收利用磷元素中的应用

<160> 17

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

ctaattcttt ctagctggcg 20

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

acaggtgttg gcataactc 19

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ttacaggagt agtacgtggt 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

agagaagctc tgtagtgagt 20

<210> 5

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gtaaaacgac ggccagt 17

<210> 6

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

caggaaacag ctatgac 17

<210> 7

<211> 1902

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

atggcggtgc tgggggaata cctgtggctg gtggtggttg gcgctttagg agctttcgga 60

tttggctggg gcaccggggc caacgatgtg gccaatgcat tcggtacgtc catcggcagc 120

aaggccctca ctttgaagca ggctacgatc atagccgcga tttttgagtt tgctggagca 180

ctggtgttgg ggagggtgtc aactaacacc attgcaggag gcattgcaga ccttagtagt 240

ttcagtcgtg agcctgaggt ttatgcctat ggcatggttt gtgcacttgg tgttggcact 300

gtttggcttg ccatcacatc gtacctcgaa ctcaatgttt cttcaacgca caccatcatt 360

gggggcatca tcgggtttgc gctggtgtac aacgggagcg atggcgtcaa ctgggcagac 420

aaagatccta acagcttccc tccctacaag ggcgtgctgc ccatcgtgct gggctggttc 480

atcgccccta tcctcacagg tgctgcagcc gccttcttct tcttcatcct ccgcaccctc 540

gtcctccgcc gcaagaatgc cttccagctc tccttctggg tgcttccgcc cgtcgtcttc 600

gccgtcacca tggtcaacat gtacttcgtc tttaccaagg gagccaagaa gtacttaaca 660

gaagagggca aggattggag tgacaagacg tccacatggg tctctgcagt cattgctgcc 720

accctcttcc tcctcaccgc cgcagttgca gtgccttggt tgaaacatat ggtggataag 780

cgtattagaa gggaaaagga agctgccgaa atggtgacca tggaaagtgt acctgagctg 840

ccccaggggg cagtagatgc tgatgcagaa gctgctgatg ggaaaccaag cttttttaaa 900

cgaatggtca agatagccac acatggagtc aatgtggatg tgcacaaagt tgtcaaacag 960

gatccaatag tgggccagat acatgaagcg gctgagaaat tcgaccccca tgtcgaatat 1020

gtgttcgctt acctgcaggt tttctctgcc atttgtgtca tctttgctca tggagcaggt 1080

gaggtggggt acatggcagg tcctttggca accatttggg atgtctatat caatggcaag 1140

ctatcaagca aagtggttcc tcctatttgg attattctca taggtgcttt cggtcttgtc 1200

attggattgg ccacgtatgg ctataatgtc acacgtgcca tgggggtcaa gcttgcaaaa 1260

ctgtcgccca cgagaggaat gtgtgcagaa ttggccaccg catttgtcat tatgataggt 1320

gcacaatttg ggcttcccac ttcgtcaagt caatgcatca ctggagcgat cgtcggcatt 1380

gggatcatgg aaggcatcaa gggtgttaat tggaaggtat ttggtgagca attcgcctcg 1440

tgggtgtcaa ctttggtggt cattggattg tgcaccgcag ccttattttc ccaaggagta 1500

tattctccct ccgtcgtcgc agggaaaagt ttagtgcggt acgagaatga cgttacccaa 1560

atctccaagg acattctagt gaatttcgac tccaacttgc agagctatca acaggctagc 1620

ctacaaaatg cagtaccgga gctctccagc acgacatggc tggaattgaa caagaccgtc 1680

aatgacatca agatttacaa ttccaccaag aacccaactg tggatgcgga tgtcataatc 1740

gggcagcttc gttctgcact agctctagtg caagactacg ctgttgatgc gctgggccaa 1800

agcagggtat atccgggagc ccccctgtgc aacacaaaca caacggtcaa taacgcaacg 1860

gcttcgagcc cttgtagatc ccctttactt gtaaagacct ag 1902

<210> 8

<211> 1908

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

atggcggaag ctgtgatggg ggagtacctg tggctggtgg tggctggagc ttttgcagct 60

tttggatttg gctggggcac aggggccaac gatgtggcca atgcattcgg tacgtccatc 120

ggcagcaagg ccctcacttt gaagcaggct acgatcattg ctgcaatatt tgagtttgct 180

ggagcgttgg tgttgggaag ggtctcaaca aacacgattg caggaggcat cgcgaaagtt 240

aatagcttca gccaagagcc tgaagtttat gcatatggca tggtttgcgc gcttggtgtt 300

ggcactgttt ggcttgcaat cacgtcctac ttcggactca atgtttcttc aacacatagt 360

atcattgggg gcatcatcgg gtttgcgctg gtgtacaacg ggagcgatgg cgtcaactgg 420

gcggacaaag atccaaagag ctttccaccc tacaagggcg tgctccccat cgtgatgggc 480

tggttcatcg cccctatcct cacaggtgct acagctgcct tcttcttctt catcctccga 540

acaatcgtcc tccgccgcag gaatgccttt cagctctctt tctgggtgct tcccccagta 600

gtcttcgcag tcaccatggt caacatatac ttcgtcttca ccaagggagc caaaaagtac 660

ttatcagata agggcgagga ttggagtgac aagaagtcca catgggtctc tgcagtcatt 720

gctaccggcc tcttcatcct cactgccgca attgcagtgc cttggctgaa atttatggtt 780

aataagcgca ttacacgtga aaaggaagct gccgaaatgg tgaccatgga caatgtacct 840

gagctgcccc aggggccagc agatgctgat ggagaagctg ctgttgtgaa accaagcatt 900

ttcaaacgaa tgttcaagat agccacacat ggagtcaatg tggatattca caaagttgtc 960

aaacaggatc tggtagtggg ccagatacat gaagcagctg agaaattcga cccccatgtc 1020

gaatatgtgt ttgcttacct gcaggtgttc tctgccattt gtgtcatctt tgcacatgga 1080

gccggtgaag tagggtacat ggcaggtcct ttagcaacta tttgggatgt ctatttaaat 1140

ggcaagctaa gagaaaaagt gttgccccca gtttggatta ttcttatagg tgcttttggt 1200

cttgtcatcg gtttggctac gtatggttac aatgtgacac gtgccatggg agtcaagctg 1260

gccaaactgt cgcccacgag aggaatgtgt gcagaaatgg caaccgcgtt cgttattatg 1320

ataggtgcac aatttgggct tcccacttca tcaagtcaat gcgtcacagg agcaatcgtt 1380

ggtattggga tcatggaagg aatcaagggt gtaaattgga aggtatttgg tgagcaattc 1440

gcatcgtggg tctcgacttt ggtggtcatt ggattgtgca ccgcagccgt cttctctcaa 1500

ggagtatatg ctccctctat cactgcaggg aacagtgtca ggcactacga ggatgacatt 1560

tctggcatct ccaaggccat gcttcagaat ttcaactcca gcttgcagag ctatcaacag 1620

gctagtctcc aaaatgcagt accggagctc aacgccacaa catggatggc gttgaacaag 1680

actgtctatg acatcccgct tcacgatctt gccaagaacc caagtgtgga tgcagatgtc 1740

ataatcggac agcttcgcac catactggct ctagtgcaag aacactctgt cgatgccctg 1800

ggccaaacca gggtttaccc aggagccctt atatgcaaca ccaacataac agctaataac 1860

agcacggctt cgagcccttg taaacccccg tttctcatcg agacctag 1908

<210> 9

<211> 1134

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

atggcagatc aaggggagga ggtggcgcct ctggtgtgcg acaatggatc gggaatggtc 60

aaggctggat ttgcagggga tgatgcaccg agggcagtat ttccaagcat agtgggacga 120

cctagacata caggtgtaat ggttggcatg ggacagaagg atgcatatgt gggggatgag 180

gctcaatcaa agcgaggcat tttgacactc aagtatccga tagaccatgg cattgttacc 240

aattgggatg acatgcaaaa ggtgtggcac catactttct tcaatgagct tagggttgca 300

ccagaagagc acccagttct cttgacagaa gctccactta acccaaaggc aaatcgtgag 360

aagatgacac aaatcatgtt tgagaccttc tacgttcctg ctatgtacgt ggccattcaa 420

gccgttctct ctctctatgc tagcggtcgt actacaggta ttgtgcttga ttctggagat 480

ggggtgacac acacagtgcc tatctatgaa gggtatgcgc tgccacatgc gatactgagg 540

ctggacctgg cggggcgaga cttgacggat gcgctgatga agatactgac ggagaggggg 600

tacgcgttca ccacgacggc ggagcgggag atcgtgcggg acatgaagga gaagctggcg 660

tacgtggcgc tggactttga gaaggagctg gccaccgccg cctccacctc cgccctcgac 720

aagagctacg agctccccga tggccaaatc ctcactgtcg gcgccgagcg cttcaggtgt 780

ccagaagtgt tgttccaacc gtcaatgatt gggatggaag gggcaggcat ccatgagacc 840

acatacaact ccatcatgag gtgtgatatg gacattagga aagacctcta ctcaaacatt 900

gtgctcagtg gaggatcaac gatgtttcca ggcattgcag agcgcatgaa tcgtgaaata 960

accgcccttg caccatcatc catgaaggtt aaggtcgttg cacctccaga gcgcaagtat 1020

agtgtttgga tcggaggttc aattcttgct tccttaagca cattccaaca gatgtggata 1080

tcaaaggatg agtacgatga gacggggcct tccattgtcc ataggaaatg cttt 1134

<210> 10

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

gggcagtatt tccaagcata gtggg 25

<210> 11

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

tgcctcgctt tgattgagcc tcatc 25

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

accgcagcct tattttccca 20

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

aacgtcattc tcgtaccgca 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

gacatcccgc ttcacgatct 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

cagggcatcg acagagtgtt 20

<210> 16

<211> 633

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

Met Ala Val Leu Gly Glu Tyr Leu Trp Leu Val Val Val Gly Ala Leu

1 5 10 15

Gly Ala Phe Gly Phe Gly Trp Gly Thr Gly Ala Asn Asp Val Ala Asn

20 25 30

Ala Phe Gly Thr Ser Ile Gly Ser Lys Ala Leu Thr Leu Lys Gln Ala

35 40 45

Thr Ile Ile Ala Ala Ile Phe Glu Phe Ala Gly Ala Leu Val Leu Gly

50 55 60

Arg Val Ser Thr Asn Thr Ile Ala Gly Gly Ile Ala Asp Leu Ser Ser

65 70 75 80

Phe Ser Arg Glu Pro Glu Val Tyr Ala Tyr Gly Met Val Cys Ala Leu

85 90 95

Gly Val Gly Thr Val Trp Leu Ala Ile Thr Ser Tyr Leu Glu Leu Asn

100 105 110

Val Ser Ser Thr His Thr Ile Ile Gly Gly Ile Ile Gly Phe Ala Leu

115 120 125

Val Tyr Asn Gly Ser Asp Gly Val Asn Trp Ala Asp Lys Asp Pro Asn

130 135 140

Ser Phe Pro Pro Tyr Lys Gly Val Leu Pro Ile Val Leu Gly Trp Phe

145 150 155 160

Ile Ala Pro Ile Leu Thr Gly Ala Ala Ala Ala Phe Phe Phe Phe Ile

165 170 175

Leu Arg Thr Leu Val Leu Arg Arg Lys Asn Ala Phe Gln Leu Ser Phe

180 185 190

Trp Val Leu Pro Pro Val Val Phe Ala Val Thr Met Val Asn Met Tyr

195 200 205

Phe Val Phe Thr Lys Gly Ala Lys Lys Tyr Leu Thr Glu Glu Gly Lys

210 215 220

Asp Trp Ser Asp Lys Thr Ser Thr Trp Val Ser Ala Val Ile Ala Ala

225 230 235 240

Thr Leu Phe Leu Leu Thr Ala Ala Val Ala Val Pro Trp Leu Lys His

245 250 255

Met Val Asp Lys Arg Ile Arg Arg Glu Lys Glu Ala Ala Glu Met Val

260 265 270

Thr Met Glu Ser Val Pro Glu Leu Pro Gln Gly Ala Val Asp Ala Asp

275 280 285

Ala Glu Ala Ala Asp Gly Lys Pro Ser Phe Phe Lys Arg Met Val Lys

290 295 300

Ile Ala Thr His Gly Val Asn Val Asp Val His Lys Val Val Lys Gln

305 310 315 320

Asp Pro Ile Val Gly Gln Ile His Glu Ala Ala Glu Lys Phe Asp Pro

325 330 335

His Val Glu Tyr Val Phe Ala Tyr Leu Gln Val Phe Ser Ala Ile Cys

340 345 350

Val Ile Phe Ala His Gly Ala Gly Glu Val Gly Tyr Met Ala Gly Pro

355 360 365

Leu Ala Thr Ile Trp Asp Val Tyr Ile Asn Gly Lys Leu Ser Ser Lys

370 375 380

Val Val Pro Pro Ile Trp Ile Ile Leu Ile Gly Ala Phe Gly Leu Val

385 390 395 400

Ile Gly Leu Ala Thr Tyr Gly Tyr Asn Val Thr Arg Ala Met Gly Val

405 410 415

Lys Leu Ala Lys Leu Ser Pro Thr Arg Gly Met Cys Ala Glu Leu Ala

420 425 430

Thr Ala Phe Val Ile Met Ile Gly Ala Gln Phe Gly Leu Pro Thr Ser

435 440 445

Ser Ser Gln Cys Ile Thr Gly Ala Ile Val Gly Ile Gly Ile Met Glu

450 455 460

Gly Ile Lys Gly Val Asn Trp Lys Val Phe Gly Glu Gln Phe Ala Ser

465 470 475 480

Trp Val Ser Thr Leu Val Val Ile Gly Leu Cys Thr Ala Ala Leu Phe

485 490 495

Ser Gln Gly Val Tyr Ser Pro Ser Val Val Ala Gly Lys Ser Leu Val

500 505 510

Arg Tyr Glu Asn Asp Val Thr Gln Ile Ser Lys Asp Ile Leu Val Asn

515 520 525

Phe Asp Ser Asn Leu Gln Ser Tyr Gln Gln Ala Ser Leu Gln Asn Ala

530 535 540

Val Pro Glu Leu Ser Ser Thr Thr Trp Leu Glu Leu Asn Lys Thr Val

545 550 555 560

Asn Asp Ile Lys Ile Tyr Asn Ser Thr Lys Asn Pro Thr Val Asp Ala

565 570 575

Asp Val Ile Ile Gly Gln Leu Arg Ser Ala Leu Ala Leu Val Gln Asp

580 585 590

Tyr Ala Val Asp Ala Leu Gly Gln Ser Arg Val Tyr Pro Gly Ala Pro

595 600 605

Leu Cys Asn Thr Asn Thr Thr Val Asn Asn Ala Thr Ala Ser Ser Pro

610 615 620

Cys Arg Ser Pro Leu Leu Val Lys Thr

625 630

<210> 17

<211> 635

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

Met Ala Glu Ala Val Met Gly Glu Tyr Leu Trp Leu Val Val Ala Gly

1 5 10 15

Ala Phe Ala Ala Phe Gly Phe Gly Trp Gly Thr Gly Ala Asn Asp Val

20 25 30

Ala Asn Ala Phe Gly Thr Ser Ile Gly Ser Lys Ala Leu Thr Leu Lys

35 40 45

Gln Ala Thr Ile Ile Ala Ala Ile Phe Glu Phe Ala Gly Ala Leu Val

50 55 60

Leu Gly Arg Val Ser Thr Asn Thr Ile Ala Gly Gly Ile Ala Lys Val

65 70 75 80

Asn Ser Phe Ser Gln Glu Pro Glu Val Tyr Ala Tyr Gly Met Val Cys

85 90 95

Ala Leu Gly Val Gly Thr Val Trp Leu Ala Ile Thr Ser Tyr Phe Gly

100 105 110

Leu Asn Val Ser Ser Thr His Ser Ile Ile Gly Gly Ile Ile Gly Phe

115 120 125

Ala Leu Val Tyr Asn Gly Ser Asp Gly Val Asn Trp Ala Asp Lys Asp

130 135 140

Pro Lys Ser Phe Pro Pro Tyr Lys Gly Val Leu Pro Ile Val Met Gly

145 150 155 160

Trp Phe Ile Ala Pro Ile Leu Thr Gly Ala Thr Ala Ala Phe Phe Phe

165 170 175

Phe Ile Leu Arg Thr Ile Val Leu Arg Arg Arg Asn Ala Phe Gln Leu

180 185 190

Ser Phe Trp Val Leu Pro Pro Val Val Phe Ala Val Thr Met Val Asn

195 200 205

Ile Tyr Phe Val Phe Thr Lys Gly Ala Lys Lys Tyr Leu Ser Asp Lys

210 215 220

Gly Glu Asp Trp Ser Asp Lys Lys Ser Thr Trp Val Ser Ala Val Ile

225 230 235 240

Ala Thr Gly Leu Phe Ile Leu Thr Ala Ala Ile Ala Val Pro Trp Leu

245 250 255

Lys Phe Met Val Asn Lys Arg Ile Thr Arg Glu Lys Glu Ala Ala Glu

260 265 270

Met Val Thr Met Asp Asn Val Pro Glu Leu Pro Gln Gly Pro Ala Asp

275 280 285

Ala Asp Gly Glu Ala Ala Val Val Lys Pro Ser Ile Phe Lys Arg Met

290 295 300

Phe Lys Ile Ala Thr His Gly Val Asn Val Asp Ile His Lys Val Val

305 310 315 320

Lys Gln Asp Leu Val Val Gly Gln Ile His Glu Ala Ala Glu Lys Phe

325 330 335

Asp Pro His Val Glu Tyr Val Phe Ala Tyr Leu Gln Val Phe Ser Ala

340 345 350

Ile Cys Val Ile Phe Ala His Gly Ala Gly Glu Val Gly Tyr Met Ala

355 360 365

Gly Pro Leu Ala Thr Ile Trp Asp Val Tyr Leu Asn Gly Lys Leu Arg

370 375 380

Glu Lys Val Leu Pro Pro Val Trp Ile Ile Leu Ile Gly Ala Phe Gly

385 390 395 400

Leu Val Ile Gly Leu Ala Thr Tyr Gly Tyr Asn Val Thr Arg Ala Met

405 410 415

Gly Val Lys Leu Ala Lys Leu Ser Pro Thr Arg Gly Met Cys Ala Glu

420 425 430

Met Ala Thr Ala Phe Val Ile Met Ile Gly Ala Gln Phe Gly Leu Pro

435 440 445

Thr Ser Ser Ser Gln Cys Val Thr Gly Ala Ile Val Gly Ile Gly Ile

450 455 460

Met Glu Gly Ile Lys Gly Val Asn Trp Lys Val Phe Gly Glu Gln Phe

465 470 475 480

Ala Ser Trp Val Ser Thr Leu Val Val Ile Gly Leu Cys Thr Ala Ala

485 490 495

Val Phe Ser Gln Gly Val Tyr Ala Pro Ser Ile Thr Ala Gly Asn Ser

500 505 510

Val Arg His Tyr Glu Asp Asp Ile Ser Gly Ile Ser Lys Ala Met Leu

515 520 525

Gln Asn Phe Asn Ser Ser Leu Gln Ser Tyr Gln Gln Ala Ser Leu Gln

530 535 540

Asn Ala Val Pro Glu Leu Asn Ala Thr Thr Trp Met Ala Leu Asn Lys

545 550 555 560

Thr Val Tyr Asp Ile Pro Leu His Asp Leu Ala Lys Asn Pro Ser Val

565 570 575

Asp Ala Asp Val Ile Ile Gly Gln Leu Arg Thr Ile Leu Ala Leu Val

580 585 590

Gln Glu His Ser Val Asp Ala Leu Gly Gln Thr Arg Val Tyr Pro Gly

595 600 605

Ala Leu Ile Cys Asn Thr Asn Ile Thr Ala Asn Asn Ser Thr Ala Ser

610 615 620

Ser Pro Cys Lys Pro Pro Phe Leu Ile Glu Thr

625 630 635

Claims

1.一种Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB，其特征在于，所述Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB的核苷酸序列如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8所示。

2.一种Na⁺/磷酸根协同转运体蛋白PvPTB，其特征在于，所述Na⁺/磷酸根协同转运体蛋白PvPTB的氨基酸序列如SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：17所示。

3.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体中含有权利要求1所述Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB。

4.一种重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌中含有权利要求1所述Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB。

5.权利要求1所述Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB在提高微生物或植物富集和/或吸收砷元素中的应用。

6.核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示的Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB在提高微生物或植物富集和/或吸收磷元素中的应用。

7.权利要求2所述Na⁺/磷酸根协同转运体蛋白PvPTB在提高微生物或植物富集和/或吸收砷元素中的应用。

8.氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的Na⁺/磷酸根协同转运体蛋白PvPTB在提高微生物或植物富集和/或吸收磷元素中的应用。

9.权利要求3所述重组载体在提高微生物或植物富集和/或吸收砷元素中的应用。

10.含有核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示的Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB的重组载体在提高微生物或植物富集和/或吸收磷元素中的应用。

11.权利要求4所述重组工程菌在提高微生物或植物富集和/或吸收砷元素中的应用。

12.含有核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示的Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB的重组工程菌在提高微生物或植物富集和/或吸收磷元素中的应用。

13.一种富集和/或吸收砷元素的方法，其特征在于，在微生物或植物中过表达核苷酸序列如SEQ ID NO：7和/或SEQ ID NO：8所示的Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB。

14.一种富集和/或吸收磷元素的方法，其特征在于，在微生物或植物中过表达核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示的Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB。

15.一种构建富集和/或吸收砷元素的微生物或植物的方法，其特征在于，在微生物或植物中过表达核苷酸序列如SEQ ID NO：7和/或SEQ ID NO：8所示的Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB。

16.一种构建富集和/或吸收磷元素的微生物或植物的方法，其特征在于，在微生物或植物中过表达核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示的Na⁺/磷酸根协同转运体基因PvPTB。