CN115087726A

CN115087726A - 含有谷胱甘肽和醛脱氢酶的宿醉消除剂

Info

Publication number: CN115087726A
Application number: CN202180014206.8A
Authority: CN
Inventors: 权兴泽
Original assignee: Peak Bio Enzyme Technology Co ltd
Current assignee: Peak Bio Enzyme Technology Co ltd
Priority date: 2020-02-18
Filing date: 2021-02-17
Publication date: 2022-09-20
Also published as: WO2021167279A1; KR102650218B1; US20210254023A1; CN114867840A; KR20220150232A; US11618889B2; KR102460532B1; KR20210105194A; EP3868866A1; JP2021129558A

Abstract

本发明涉及一种含有生产谷胱甘肽和醛脱氢酶的酶的干燥粉末、裂解物或提取物的宿醉消除组合物。具体而言，本发明涉及一种含有同时生产谷胱甘肽和醛脱氢酶的酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）Kwon P‑1 KCTC 13925BP和酿酒酵母Kwon P‑2 KCTC14122BP及酿酒酵母Kwon P‑3 KCTC14123BP酵母的干燥粉末、裂解物或提取物的宿醉消除组合物。

Description

含有谷胱甘肽和醛脱氢酶的宿醉消除剂

技术领域

本发明涉及一种含有谷胱甘肽(GSH)和醛脱氢酶(下称“ALDH”)的宿醉消除剂。具体而言，本发明涉及一种同时含有源自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Kwon P-1KCTC 13925BP和酿酒酵母Kwon P-2KCTC14122BP或酿酒酵母Kwon P-3KCTC14123BP酵母的谷胱甘肽和醛脱氢酶的宿醉消除剂。

背景技术

酒虽然是伴随人类历史的趣味食品，但过量饮酒将达到感到身体、精神不适的宿醉状态，引起恶心、呕吐、眩晕、口渴、无力、困倦、头痛，导致脑神经系统的不正常(AlcoholUse Disorder,AUD)(Shao-Cheng Wang et al,2020)，成为引起严重的重度症状(AlcoholAddiction)和精神恐慌障碍的社会问题。(Choe Songsig 2013)。

饮酒之后，酒精在口腔中吸收5％，在胃中吸收10-15％，在小肠中吸收80％之后流入血液中，并在肺中分解2至4％，在肾脏中分解2至4％，通过汗液分解2至6％，在肝脏中分解90％。

在肝脏中，酒精分解是被醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase，ADH)氧化转换为乙醛(Acetaldehyde)，再被醛脱氢酶(Aldehyde dehydrogenase，ALDH)氧化变得无毒。

但是，报道称醛脱氢酶不足或天生具有醛脱氢酶的对立基因(ALDH2*2)的亚洲人的15％至50％，因无法分解饮酒时产生的乙醛，出现脸部变红的酒精脸红综合征(AlcoholFlushing Syndrome)(Brooks,P.J.et al.2009)现象，且因乙醛的积蓄，患酒精中毒或肝脏疾病的概率高(Larson,H.N et al，2007)。因乙醛无法分解而残留于人体中，引起因酒精性肝病(Alcohol hepatitis)或肝硬化(liver cirrhosis)的死亡或障碍。(Gilpin，N.W.etal，2008)

另外，曾有报道称因酒精的摄入生成的体内醛(Aldehyde)的过量残留，将导致心血管系统疾病、糖尿、神经退行性疾病、上部消化及呼吸器官癌、放射线皮肤炎、范科尼贫血、末梢神经损伤、炎症、骨质疏松症及老化等氧化作用引起的疾病(Chen et al.2014)。

另外，报道称在大部分国家，饮酒造成的社会经济损失规模占相对于GDP的约0.5-2.7％，在韩国的情况下，2000年一年内，因饮酒造成的社会经济损失预计达到14兆9,352亿韩元，其中，因疾病、事故、宿醉造成的生产性减少及损失额预计达到6兆2,845亿韩元(JeogWujinet al.2006)。

为解决这样的社会问题，进行对能够减轻乙醇的毒性或阻碍毒性的表达的各种物质研究和实验，其结果开发成各种健康辅助食品相关产品。流入体内的酒精在胃中或小肠中被吸收并进入血管内，转移至肝脏被分解和解毒。

存在于肝细胞的醇脱氢酶(ADH，Alcohol Dehydrogenase)首先将酒精氧化为乙醛(Acetaldehyde)，则乙醛再被存在于肝细胞的乙醛脱氢酶(ALDH，ALdehydeDeHydrogenase)分解成醋酸(Acetate)并转移至全身的肌肉或脂肪组织，最终分解成二氧化碳和水。作为乙醇最初代谢产物的乙醛，较之乙醇反应性非常高，毒性强，成为宿醉及酒精性肝病的主要原因。

报告称存在于人体的醛脱氢酶有19种(Marchitti et al.2007，2008)，其中主要存在于线粒体的醛脱氢酶2(Acetaldehyde Dehydrogenase2)，通过酶工程学分析的结果表明，将乙醛作为酶的基质进行分析时，较之将其他种类的醛作为基质的情况，表现出最低的Km值(～0.2μM)，能最好地氧化去除源自酒精的乙醛。

将生物体内乙醇代谢中生成的作为宿醉致因物质的乙醛，利用醋酸进行有效转换以去除醛，对人体健康非常重要(Eriksson et al.1977)。另外，醛脱氢酶2不仅用于乙醛，而且还用于脂肪醛、芳香醛、多环醛等醛的代谢过程，以去除体内毒性物质(Klyosovetal.1996)。

代表性的例子有起到去除作为在氧化应激过程中产生的氧化醛物质的4-hydroxy-2-nonenal(4-HNE)和malondialdehyde(MDA)，去除从烟气和汽车尾气产生的丙烯醛(acrolein)的作用(Chen et al.2010,Yoval-Sanchezet al.2012)。人体内醛脱氢酶2的表达少或该酶的第487个氨基酸残基从谷氨酸变异为赖氨酸的人，表现出脸部变红的脸红现象等，不仅对少量的酒精也产生敏感反应，而且因为无法进行转换，饮酒时血液中乙醛的浓度高(Yoshidaet al.1984)。

尤其是，在具有作为醛脱氢酶2的纯合子ALDH2-2的情况下，酒量少，而上述遗传变异在西方人身上几乎不出现，而在韩国人、中国人、日本人中，整体人口的50％的人身上都可以发现。(Brookset al.2009)

对醛脱氢酶2的研究开发，虽然作为医疗用目的对体内醛脱氢酶2的促进剂及抑制剂的研究开展得比较多，从而醛脱氢酶2的重要性得到提高(Budaset al.2009，Chenetal.2014，M.zelet al.2018)，但对醛脱氢酶2的过量生产微生物育种或大量生产技术的研究还不尽如人意。

曾有报道称过量生产醛脱氢酶2的菌株的开发，利用以大肠菌(E.coli)作为宿主的蛋白质表达系统表达人类醛脱氢酶1和2蛋白质，其中30％左右表达为具有活性的可用性形式的酶，以生产2至4mg/L的蛋白质(Zhenget al.1993)，而在大鼠(Rat)醛脱氢酶2的情况下，虽然95％表达为有活性的可用性蛋白质，但只生产出1至2mg/L的非常少的蛋白质(Jenget al.1991)。

但是，利用因法律限制少而容易适用的突变方法的醛脱氢酶2的生产量增加案例，还没有被报道过。因此，为扩大醛脱氢酶2的使用范围，亟需开发出利用突变方法的高活性醛脱氢酶2的微生物。

吸收至体内的乙醇在氧化为乙醛的过程中，受ADH(alcohol dehydrogenase)酶的作用，而在由乙醇氧化生成的乙醛的分解/氧化过程中，受ALDH(aldehyde dehydrogenase)酶的作用，分解成二氧化碳、水排出至体外。

ALDH不仅分解Acetaldehyde，还分解向人体施加氧化应激的Nonenal(4-hydroxy-2-nonenal)、HNE(4-hydroxy-trans-2-nonenal)、Malondialdehyde,DOPAL(3,4-dihydroxy-phenylacetaldehyde)、DOPEGAL(3,4-dihydroxy-phenylglycolaldehyde)、5-HIAL(5-hydroxy indole-acetaldehyde)、Retinaldehyde(Arnold SL et al,2015)等。

上述各种种类的醛破坏人体内的DNA(Garaycoechea，JI et al，2018)，导致作为细胞的重要能量生成器官的线粒体的功能障碍(Mitochondrial dysfunction)(Gomes，KMet al，2014)，从而引起严重的疾病。

为分解这邪恶各种醛，主要使用源自作为酵母的Saccharomyces的ALDH。根据酵母的基因组Genome Database，Saccharomyces中有约6个种类的ALDH(Datta S.et al，2017)。

其中，ALDH2的辅酶NAD的结合部位结构上与人类ALDH相似(Mukhopadhyay，A.etal，2013)，将NAD作为辅酶，不仅用在线粒体，而在酵母中还用于线粒体之外的细胞质(Cytoplasm)。酶的比活(Specific activity)也是酵母ALDH(yALDH)较之人类ALDH(hALDH)高20倍以上(M.-F.Wang et al，2009)，因此，在用于人体时，可期待好的效果。

从米中固体培养生产的现有的源自米的酵母ALDH虽然就有容易提纯的有点，但因ALDH收率低，在宿醉消除剂商业大量生产方面存在限制。为改善这些问题，能够大量生产源自米的酵母ALDH的方法问世。确保ALDH基因以制造重组酵母的方法记载于大韩民国公开专利第10-2005-0052664号(PCT/EP2003/01049)中。

关于源自酵母的醛脱氢酶基因(ALDH gene)的重组的技术记载于专利号第10-1664814中。根据氧化酒精的ADH酶的基因重组的生产方法记载于专利申请第10-2020-0045978号中。

另外，为预防酒精摄取导致的宿醉、宿醉的消除剂肝损伤，也尝试开发以各种健康食品材料激活人体内ALDH酶的激活剂(Activator)的各种努力。(US 10,406,126 B2(2019)、US Pub.NO US2020/0237716 A1(2020))。

在韩国，作为激活剂公开将川芎、甘草、葛根、陈皮、枳椇等中药单独或混合制造的中医提取物(韩国专利申请10-2020-0142768)。

另外，韩国专利注册第10-0696589号中记载含有黃苔、枳椇树、槲寄生提取物及葛藤成分的宿醉消除组合物，在韩国公开专利第10-2012-0123860号中提供一种包含郁金、赤杨树、枳椇树果柄、刺五加浓缩液、无胚芽大豆发酵提取物、水飞蓟及谷胱甘肽的宿醉消除组合物，公开还原剂谷胱甘肽的使用。

但是，目前为止专利技术的大部分较之宿醉预防，把重点放在宿醉消除，而且大部分情况下宿醉消除效果甚微。因此，本领域亟待开发出含有可直接快速解读作为宿醉现象的根源的乙醛的ALDH的宿醉消除组合物。

本发明人开发出可在体内迅速起效以快速分解酒精和醛，进而迅速分解诱发作为人体代谢过程中生成的活性氧(ROS)的各种ROS的醛生成物，其效果在体内持续，从而不仅可消除宿醉，而且还可保护人体生理功能的含有谷胱甘肽和ALDH宿醉消除用组合物。

在本发明的目的在于，提供一种ALDH酶和谷胱甘肽的含量充分，从而可快速去除体内醛类毒素，且可保证持续效能的新宿醉消除组合物。根据本发明的宿醉消除组合物，不仅维持消化器官内醛毒性去除活性，而且维持人体内各种内因性醛毒性去除活性。

另外，谷胱甘肽(Glutathione，γ-L-glutamyl-L-cysteinylglycine，GSH)为存在于细胞的生理活性物质，是由谷氨酸盐(glutamate)、半胱氨酸(cystein)、甘氨酸(glycine)三种氨基酸构成的三肽，在动物、植物及微生物的细胞内以0.1至10mM的浓度存在，占细胞的总非蛋白活性成分的90％以上。

在生物体内，谷胱甘肽(glutathione)引起通过生成白血球的免疫活性的增加，以起到重要的抗病毒剂的作用，作为GST(glutathione S-transferase)的基质，以共轭(Conjugation)形式结合对生物体有害的如异生物质(xenobiotics)等毒性物质，对解毒起到重要作用。

另外，谷胱甘肽起到阻止通过氧化作用使细胞膜、核酸和细胞结构坏死，缓和作为老化的原因的活性氧(Reactive oxygen species，ROS)的毒性的作用。此时，活性氧在各种生物体代谢作用中形成，包含超氧化物(superoxide)、过氧化物(peroxide)、羟基(hydroxyl radical)等，可分为作为物质的生物体代谢产物生成的内因性活性氧和烟、放射线等的外因性活性氧。

活性氧引起的氧化应激有可能损伤认知功能(Liu et al.2002)，破坏精子的DNA而成为男性不孕的原因(Wright et al.2014)，损伤细胞蛋白、脂质及核算而引发癌症，降低生理功能而成为各种疾病和老化的致因因子。因此，对我们身体而言，起到预防疾病、增进免疫、防止老化等作用的抗氧化剂非常重要，在细胞内起到抗氧化作用的谷胱甘肽的功能在酶学、药物学、治疗学、毒物学、内分泌学及微生物学在内的许多医学领域受到关注。

上述谷胱甘肽基本上在体内合成，随着疾病发生、免疫力弱化、老化等非正常状态的进行，人体内的绝对含量减少，恶化健康。因此，从外部供应的谷胱甘肽可通过去除细胞内活性氧，维持健康，缓解老化。因上述谷胱甘肽的人体内生理活性因素，现在谷胱甘肽用于食品、化妆品、饲料及医药品的用途，使用量呈逐渐增加的趋势。

另外，谷胱甘肽的生产目前利用可食用的微生物生产，但微生物能够生产的谷胱甘肽的固有含量非常低，因此，正在积极开展通过突变及重组技术增大微生物的谷胱甘肽含量，以利用该技术的发酵方法，利用高含量谷胱甘肽生产菌株实现大量生产的研究。

因此，谷胱甘肽高含量菌株开发属于开发提高经济价值的根源性材料，能够使谷胱甘肽具有可广泛用于健康食品、医药品、饲料等的市场竞争力。

但是，通过基因重组技术的菌株开发，因无法摆脱成为当前话题的对GOM的各种问题，其使用范围收到限制。但是，通过突变技术的性能改良菌株，相对而言限制较少，容易开发成各种用途。因此，利用突变技术的高含量的谷胱甘肽生产菌株育种技术，适合于用作食品或药品的有效成分的谷胱甘肽生产。

但是，如上所述，为去除积蓄在体内的各种有害物质中尤其是活性氧或各种醛类等化学物质，同时使用谷胱甘肽和醛脱氢酶效率较高，但到目前为止同时大量生产谷胱甘肽和醛脱氢酶的菌株还没有商业化。

[专利文献]

1、韩国专利申请第10-2020-0019858号的生产谷胱甘肽和醛脱氢酶的酿酒酵母KwonP-1、2、3

2、韩国专利申请公开第10-2005-0052664

3、韩国专利第10-1664814号

4、韩国专利公开第10-2020-0045978号

5、United States Patent 10,406,126B2 ALDH2 ACTIVATOR

6、United States Patent Application US2020/0237716A1

7、韩国专利公开第10-2020-0142768

8、韩国注册专利第10-0696589号

9、韩国专利申请公开第10-2012-0123860号

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发明内容

发明要解决的问题

为制造本发明的宿醉消除剂组合物，第一次使用化学突变方法制造可同时高效率生产醛脱氢酶和谷胱甘肽的突变株，第二次选择因子(Selection factor)适应(Adaptation)变异株进行开发。

可同时过量生产谷胱甘肽和醛脱氢酶2的突变菌株，选择使用用于食品、健康食品、饲料、化妆品及医药用途不存在问题的，报道为GRAS(Generally Recognized As Safe)的，虽然生产效率低，但已知为同时生产谷胱甘肽和醛脱氢酶的菌株的野生酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。

这样通过突变制造作为谷胱甘肽的生产能力增加，同时醛脱氢酶生产能力也增加的新改良菌株的酿酒酵母属(Saccharomyces cerevisiae sp.)，制造上述菌株干燥粉末、裂解物(lysate)或含ALDH提取物，以完成本发明的宿醉消除剂。

解决问题的方法

本发明的宿醉消除剂组合物的有效成分详细记载于韩国专利申请第10-2020-0019858号中，为存托于国际存托机构(KCTC)的Saccharomyces cerevisiae Kwon P-1(KCTC13925BP)、Saccharomyces cerevisiae Kwon P-2(KCTC14122BP)或Saccharomycescerevisiae Kwon P-3(KCTC14123BP)的干燥粉末、裂解物(lysate)或含ALDH提取物。

本发明人通过包括单独或混合使用通过突变的ALDH生产能力高，谷胱甘肽生产能力也高的酿酒酵母Kwon P-1(Saccharomyces cerevisiae Kwon P-1，存托号：KCTC13925BP)等三种菌株进行第一次液体发酵步骤之后，将液体发酵产物添加于米发酵粉末进行第二次固体发酵的步骤的两步工艺，发明出能够大幅提高ALDH的生产收率的新发酵工艺。

另外，在本发明的新发酵工艺中，使用酿酒酵母Kwon P-1(存托号：KCTC13925BP)等的三种菌株中的一种或其混合菌株，进行第一次液体发酵步骤和第二次固体发酵步骤，从而完成能够同时高手率生产作为强力还原剂的谷胱甘肽(Glutathione)和ALDH酶的发酵工艺。

将大量培养的酿酒酵母KwonP-1(存托号：KCTC13925BP)再次接种在米中进行固体发酵，以在两步工艺中更大规模培养过量生产谷胱甘肽和醛脱氢酶的酿酒酵母菌株之后，制造含有菌株的干燥粉末、裂解物或提取粉末的本发明的宿醉消除组合物。

附图说明

图1为表示根据本发明的组合物的使用的实验动物的血液中乙醛含量变化的图表；

图2为表示根据本发明的组合物的使用的实验动物的血液中乙醛含量变化的图表。

最佳实施方式

下面，通过如下实施例对本发明的构成及效果进行详细说明。但是，这些实施例旨在示例性得说明本发明，而本发明的范围不受下列实施例的限制。下面，通过实施例对本发明的构成及效果进行详细说明。但是，下列实施例旨在示例性得说明本发明，而本发明的范围不受下列实施例的限制。

具体实施方式

[实施例1]准备含有谷胱甘肽和ALDH的酵母裂解物

实施例1-1：含谷胱甘肽和ALDH的酿酒酵母发酵过程

将含有ALDH的酿酒酵母的菌种，在200mL flask中使用YPD培养基(含有酵母提取物、蛋白胨、葡萄糖的培养基)，在160rpm，30℃条件的培养箱中发酵培养24小时，而本培养通过5L发酵器(Marado-05D-PS，CNS，Korea)进行72小时。培养结束后，利用高速离心分离器(Supra R22，Hanil，Korea)离心分离酵母。

实施例1-2：含谷胱甘肽和ALDH的酵母裂解物准备过程

将离心分离的含ALDH酵母在超低温冷柜(CLN-52U，Nihon freezer，Japan)中冷冻2天之后，利用冷冻干燥器(FDU-7006，Operon，Korea)冷冻干燥2天。将冷冻干燥的酵母粉3g溶解于添加蛋白分解酵母抑制剂(A32955，Thermo fisher，USA)的50mL磷酸缓冲盐水(phosphate-buffered saline，PBS)之后，添加0.5mm细胞破碎用玻璃珠(11079105，Biospec)10g，利用玻璃珠混合磨(Mixer Mill MM400，Retsch，Germany)每次2分钟共分3次破碎酵母。利用高速离心分离器(Supra R22，Hanil，Korea)离心分离之后，只分离上层液并利用冷冻干燥机(FDU-7006，Operon，Korea)冷冻干燥2天。

[实施例2]通过两步发酵工艺的酿酒酵母菌株的大量生产

将酿酒酵母KwonP-1(Saccharomyces cerevisiae KwonP-1)菌株(KCTC13925BP)接种于包含2％蛋白胨、1％酵母提取物、2％葡萄糖的YPD培养基，在30℃下进行培养，直至OD_600nm值变成50为止，在发酵槽(Fermentor，KoBioTech)中以200rpm，1vvm条件进行发酵。使用membrane filter从培养液中回收菌体。

将回收的菌体以10％的比率混合于已灭菌的米发酵粉末，将水分含量调节为60％，以固体相在30℃下固体培养2天之后，在50℃下进行干燥以将最终水分含量调节为7％，以此制造酵母发酵米发酵粉末。

这样制造的本发明的发酵组合物最多含有ALDH 600unit/g。考虑到目前为止已知的利用野生型酿酒酵母菌株的米发酵粉末一般含有ALDH 2unit/g左右，本发明的发酵组合物的ALDH含量约增加300倍。

表1表示评价本发明的通过两步发酵工艺制造的组合物(1至4)在5分钟内表现出的醛分解能力的结果。

【表1】

向这样制造的本发明的发酵组合物干燥粉碎粉末，作为酶激活剂添加ALDH辅酶NAD之后，添加柠檬酸、硬脂酸镁、DL甲硫氨酸、维生素C和乳酸菌(Lactobacillus plantium10⁷/g)、氧化锌、二氧化硅制造本发明的宿醉消除剂。

通过本发明的宿醉消除剂的动物实验，测量摄取酒精后血液内乙醛浓度结果表明，较之现有的宿醉消除剂，本发明的宿醉消除剂明显快速减少血液内乙醛浓度。

另外，为对本发明的宿醉消除剂的人体临床试验，通过基因组检查将临床试验主动志愿者分为分解醛的ALDH2保有组和遗传方面醛分解能力欠缺的ALDH2*2变异基因保有组。

进行15小时的人体中宿醉消除能力实验的结果表明，ALDH2保有实验组合ALDH2*2基因变异实验组都能确认具有显著性的醛分解能力差异。本发明的宿醉消除剂在两个实验组中都能够有效去除乙醛。尤其是，在难以分解醛的ALDH 2*2基因变异实验组中也能有效去除醛，从而确认因ALDH及谷胱甘肽的含量增加所取得的本发明的宿醉消除剂的醛分解和宿醉消除效果。

[实施例3]本发明的组合物的宿醉消除效果测量

实施例3-1：血液中乙醛随时间变化的动物试验

使用乙醇之后，将血液中乙醛随时间变化的动物试验结构表示于表2。

【表2】

将血液中醛积累量动物实验结果(mg/L·hr)表示于表3。

【表3】

实施例3-2：人体临床试验志愿者的血液中乙醇和醛分析

人体临床试验志愿者选拔一次饮酒时能够平均引用酒精度20度标准的烧酒的健康的20岁到40岁之间的成人男性43名，经过四周，每周一次从星期五晚上17点到次日8点的供15小时内，在临床试验实施医院通过集体住宿进行临床试验，在临床过程中，因个人情况等原因，最终有23名完成了试验。

集体住宿第一天，引用烧酒10杯之后，测量不同时间段的血液中酒精代谢，即酒精浓度变化及乙醛浓度变化，集体住宿第二天，在服用本发明的组合物73mg/kg之后，30分钟之后引用烧酒10杯，之后测量血液中酒精代谢变化量，集体住宿第三天，在服用本发明的组合物220mg/kg之后，30分钟之后引用烧酒10杯，之后测量血液中酒精代谢变化量。

在含本发明的两步发酵干燥粉末500mg/day及发酵米粉末1500mg的组合物服用组中，较之酒精单独摄取组相比，作为宿醉致因物质及体内强力致癌物质的乙醛的血液中浓度，容量相关地显著减少。另外，血液中酒精残留量也本发明的组合物使用容量相关地显著减少。

将人体临床试验志愿者的血液中酒精浓度减少表示于表4。

【表4】

将人体临床试验志愿者的血液中乙醛残留量减少表示于表5。

【表5】

实施例3-3：根据ALDH基因变异与否的乙醇和乙醛变化确认试验

为募集人体临床试验志愿者，选拔一次饮酒时能够平均引用酒精度20度标准的烧酒的健康的20岁到40岁之间的成人男性43名。经过四周，每周一次从星期五晚上17点到次日8点的供15小时内，在临床试验实施医院通过集体住宿进行临床试验，在临床过程中，因个人情况等原因，最终有23名完成了试验。

其中，约22名参与酒精代谢相关基因检查，经过实验及信息活动同意，通过共22人的生物体内酒精代谢相关的ADH1B(Alcohol dehydrogenase 1B)、ALDH2(Aldehydedehydrogenase 2)、CPY2E1 P450三种基因组检查，确认较之酒精单独摄取组相比，作为宿醉致因物质及体内强力致癌物质的乙醛的血液中浓度，在ALDH2非变异租及ALDH2*2变异租中都容量相关地显著减少。

在ALDH2*2基因变异租的情况下，少量饮酒也出现非常高的血液中乙醛浓度，未曾报道过通过通常的宿醉消除饮料或现有方式的宿醉消除食品及医药品获得血液中醛减少效果。但是，在使用本发明的宿醉消除组合物的情况下，ALDH2*2基因变异租的血液中乙醛的减少效果是非常值得关注的。

将正常ALDH基因保有组和ALDH基因变异组的酒精量(g hr/L)测量值表示于表6。

【表6】

将正常ALDH基因保有组和ALDH基因变异组的血液中乙醛含量平均(g hr/L)表示于表7。

【表7】

[实施例4]本发明的解救组合物的毒性试验

实施例4-1实验动物的准备

实验动物取公母ICR小鼠(7周龄)驯化7天，在驯化期间观察一般症状，只将健康的动物用于试验。饲料和水自由摄取，在口服前一天，以体重约20g为准，以各组公母5只，共10只地进行分组。

实施例4-2：本发明的宿醉消除组合物的使用

试验物质以本发明的含GSH和ALDH的酵母裂解物的含量为准，溶解于生理盐水以使使用量各为0、750、3000、5000mg/Kg。使用容量的基准遵守食药厅的Korea nationalToxicology Program(KNTP)毒性试验手册，将KNTP手册推荐的使用最大容量5000mg/Kg作为本实验的最大浓度。将按照各组准备的试料，对实验动物口服使用各一次，正常组(G1)使用生理盐水。

实施例4-3观察及尸检

对所有试验组的动物，从接受之日起到尸检为止，实施每日一次以上的症状观察，口服之后7日之内观察症状。症状观察结束后进行尸检，尸检时通过肉眼观察各脏器的变化。

本发明在使用含谷胱甘肽和ALDH的酵母裂解物，对小鼠进行单词使用毒性试验的结果表明，在5000mg/kg为止的浓度下，7日之内没有观察到死亡例，没有观察到体重增加、饲料摄取量等的特殊情况。另外，在结束观察之后进行的尸检中未观察到特殊情况。

【保藏号】

保藏机构名称：韩国生命工学研究院

保藏号：KCTC13925BP

保藏日期：2019年8月22日

Claims

1.一种含有谷胱甘肽和醛脱氢酶的宿醉消除组合物。

2.根据权利要求1所述的宿醉消除组合物，其特征在于：谷胱甘肽和醛脱氢酶源自由选自酿酒酵母、酿酒酵母Kwon P-1 KCTC13925BP、酿酒酵母Kwon P-2 KCTC14122BP及酿酒酵母Kwon P-3 KCTC14123BP构成的的组选择的一种或其混合物。

3.一种酿酒酵母菌株大量培养方法，包括：在液体培养基上培养酿酒酵母菌株的第一步骤；在固体培养基上再次培养在上述第一步骤培养的酿酒酵母菌株的第二步骤。

4.根据权利要求3所述的酿酒酵母菌株大量培养方法，其特征在于：上述固体培养基为选自由米、大麦、小麦、玉米、大豆构成的组中选择的一种或其混合物。

5.根据权利要求3或4所述的酿酒酵母菌株大量培养方法，其特征在于：上述酿酒酵母菌株选自由酿酒酵母Kwon P-1（KCTC13925BP）、酿酒酵母Kwon P-2（KCTC14122BP）及酿酒酵母Kwon P-3（KCTC14123BP）构成的的组。