CN115074325A - Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法 - Google Patents
Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115074325A CN115074325A CN202210794030.9A CN202210794030A CN115074325A CN 115074325 A CN115074325 A CN 115074325A CN 202210794030 A CN202210794030 A CN 202210794030A CN 115074325 A CN115074325 A CN 115074325A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cells
- herceptin
- 1bbl
- vitro amplification
- pbs
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000002627 4-1BB Ligand Human genes 0.000 title claims abstract description 32
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 title claims abstract description 32
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 230000003321 amplification Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 10
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 12
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 10
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 9
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 7
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 claims description 6
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 4
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 claims description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 2
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 abstract description 9
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 abstract description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 abstract description 4
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 abstract description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 abstract description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 abstract description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 abstract description 3
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 2
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 2
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 108010056030 retronectin Proteins 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2315—Interleukin-15 (IL-15)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2321—Interleukin-21 (IL-21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
- C12N2501/599—Cell markers; Cell surface determinants with CD designations not provided for elsewhere
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及体外扩增NK细胞的方法领域，尤其涉及Herceptin联合4‑1BBL体外扩增NK方法。本发明将外周血单个核细胞接种到预包被的赫赛汀和4‑1BBL蛋白的细胞培养瓶中，并添加含IL‑2、IL‑15、IL‑21和自体血浆的培养基。其中赫赛汀可以在体外活化NK并促进NK增殖。4‑1BBL蛋白作为配体与NK细胞表面的受体4‑1BB结合并活化，具有促进NK细胞增殖和IFN‑γ的分泌，增强CTL的杀伤活性和ADCC作用。上述技术可以快速活化增殖为纯度高的NK细胞。不需要磁珠或滋养层细胞活化，避免复杂的分选操作，不存在滋养细胞安全性问题及多因子造成的成本过高问题。
Description
技术领域
本发明涉及体外扩增NK细胞的方法领域，尤其涉及Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法。
背景技术
现有的体外扩增NK细胞技术中，细胞培养方法采用赫赛汀、Herceptin和PHA、RetroNectin+美罗华抗体+鼠抗人CD161抗体包板、透明质酸+CD16+
RetroNectin等等，还有经典的采用滋养细胞的方法。上述方法在操作过程中容易引入安全性问题(例如多种外源因子或试剂的引入均可能增加细胞质量控制的难度，进而增加临床应用的风险)，且存在操作复杂，导致工艺不稳定及成本较高的问题。
发明内容
针对背景技术中存在的问题，提出Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法。本发明将外周血单个核细胞接种到预包被的赫赛汀和4-1BBL蛋白的细胞培养瓶中，并添加含IL-2、IL-15、IL-21和自体血浆的培养基。可以快速活化增殖为纯度高的NK细胞。不需要磁珠或滋养层细胞活化，避免复杂的分选操作，不存在滋养细胞安全性问题及多因子造成的成本过高问题。
本发明提出Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法，方法步骤包括：
S1、从外周血中分离出单个核细胞；
S2、将外周血单个核细胞接种到预包被的赫赛汀和4-1BBL蛋白的细胞培养瓶中，并添加含IL-2、IL-15、IL-21和自体血浆的培养基；
S3、连续培养14-17天，获得高纯度高活性NK细胞。
优选的，培养前需要先包被Herceptin和4-1BBL。
优选的，包被液的组成成分包括10mlPBS、35ug Her-2和17ug 4-1BBL蛋白，混合制备。
优选的，具体步骤包括：
A、包被：将包被液加入培养瓶，铺平放匀，在4℃条件下，避光过夜；
B、采血：采集外周血15ml,将其加入离心管一中备用；
C、淋巴细胞分离液分离：向离心管中加入等体积PBS至30ml，混匀后转移至提前添加15ml淋巴分离液的离心管二，在1800rpm/800g，室温条件下离心20min，升降速设为0；
D、洗涤PBMC：用吸管将离心后中间白色的PBMC层吸出，在离心管三中加入18-22ml的PBS清洗，在2000rpm条件下离心6min，弃上清；再次用20mlPBS清洗，在1800rpm条件下离心6min，弃上清；使用培养基重悬、混匀、取样，采用typan blue染色计数，1800rpm条件下离心6min，弃上清；
E、配制细胞悬液：用40ml培养基重悬细胞、沉淀、混匀；
F、接种细胞：取40ml上述的细胞悬液加入培养瓶，添加终浓度30ng/ml的IL-15、终浓度100ng/ml的IL-21、终浓度5％的自体血浆、终浓度6000U/ml的IL-2，将接种后的培养瓶置二氧化碳培养箱培养；
G、培养至4、6、8、11和14天时分瓶培养，期间检测，并在第17日回收细胞。
优选的，二氧化碳培养箱的培养条件：温度为37℃，CO2浓度为5％。
与现有技术相比，本发明具有如下有益的技术效果：
本发明将外周血单个核细胞接种到预包被的赫赛汀和4-1BBL蛋白的细胞培养瓶中，并添加含IL-2、IL-15、IL-21和自体血浆的培养基。其中赫赛汀可以在体外活化NK进NK增殖。4-1BBl蛋白作为配体与NK细胞表面的受体4-1BB结合并活化，具有促进NK细胞增殖和IFN-γ的分泌，增强CTL的杀伤活性和ADCC作用。上述技术可以快速活化增殖为纯度高的NK细胞。不需要磁珠或滋养层细胞活化，避免复杂的分选操作，不存在滋养细胞安全性问题及多因子造成的成本过高问题。
附图说明
图1为本发明一种实施例中方法流程示意图；
图2为14天内NK细胞扩增示意图；
图3为流式检测NK细胞的结果示意图。
具体实施方式
实施例一
本发明提出的Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法，方法步骤包括：
S1、从外周血中分离出单个核细胞；
S2、将外周血单个核细胞接种到预包被的赫赛汀和4-1BBL蛋白的细胞培养瓶中，并添加含IL-2、IL-15、IL-21和自体血浆的培养基；
S3、连续培养14-17天，获得高纯度高活性NK细胞。
实施例二
本发明提出的Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法，方法步骤包括：
S1、从外周血中分离出单个核细胞；
S2、将外周血单个核细胞接种到预包被的赫赛汀和4-1BBL蛋白的细胞培养瓶中，并添加含IL-2、IL-15、IL-21和自体血浆的培养基；
S3、连续培养14-17天，获得高纯度高活性NK细胞。
进一步的，培养前需要先包被Herceptin和4-1BBL。
进一步的，包被液的组成成分包括10mlPBS、35ug Her-2和17ug 4-1BBl蛋白，混合制备。
实施例三
如图1所示，本发明提出的Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法，方法步骤包括：
A、包被：将包被液加入T75培养瓶，铺平放匀，在4℃条件下，避光过夜；
B、采血：采集外周血15ml,将其加入50ml的离心管一中备用；
C、淋巴细胞分离液分离：向离心管中加入等体积PBS至30ml，混匀后转移至提前添加15ml淋巴分离液的离心管二，在1800rpm/800g，室温条件下离心20min，升降速设为0；
D、洗涤PBMC：用巴斯德吸管将离心后中间白色的PBMC层吸出，在离心管三中加入18-22ml的PBS清洗，在2000rpm条件下离心6min，弃上清；再次用20mlPBS清洗，在1800rpm条件下离心6min，弃上清；使用20ml培养基重悬、混匀、取样，采用typan blue染色计数，1800rpm条件下离心6min，弃上清；
E、配制细胞悬液：用40mlGT-T551H3培养基重悬细胞、沉淀、混匀；
F、接种细胞：取40ml上述的细胞悬液加入培养瓶，添加终浓度30ng/ml的IL-15、终浓度100ng/ml的IL-21、终浓度5％的自体血浆、终浓度6000U/ml的IL-2，将接种后的培养瓶置二氧化碳培养箱培养；二氧化碳培养箱的培养条件：温度为37℃，CO2浓度为5％；
G、培养至4、6、8、11和14天时分瓶培养，期间检测，并在第17日回收细胞；
H、采用流式检测手段，检测NK细胞表面markerCD3、CD56、CD16。
最终检测结果见图3，由图3可知胞培养14天，IL2+Ab-Her-2+4-1BBL组CD3-CD56+为93.5％，IL2+Ab-Her-2组CD3-CD56+为75.8％，IL2+4-1BBL组CD3-CD56+为47.8％，Control组CD3-CD56+为32.3％。细胞扩增结果见图2，由图2可知，细胞培养14天，IL2+Ab-Her-2+4-1BBL组增殖102倍，IL2+Ab-Her-2组增殖87倍，IL2+4-1BBL组增殖62倍，Control组增殖4倍。
本发明将外周血单个核细胞接种到预包被的赫赛汀和4-1BBL蛋白的细胞培养瓶中，并添加含IL-2、IL-15、IL-21和自体血浆的培养基。其中赫赛汀可以在体外活化NK进NK增殖。4-1BBl蛋白作为配体与NK细胞表面的受体4-1BB结合并活化，具有促进NK细胞增殖和IFN-γ的分泌，增强CTL的杀伤活性和ADCC作用。上述技术可以快速活化增殖为纯度高的NK细胞。不需要磁珠或滋养层细胞活化，避免复杂的分选操作，不存在滋养细胞安全性问题及多因子造成的成本过高问题。可高效扩增NK细胞，14天内细胞扩增140倍，NK细胞纯度高，具有很高的临床价值。
上面结合附图对本发明的实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于此，在所属技术领域的技术人员所具备的知识范围内，在不脱离本发明宗旨的前提下还可以作出各种变化。
Claims (5)
1.Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法，其特征在于，方法步骤包括：
S1、从外周血中分离出单个核细胞；
S2、将外周血单个核细胞接种到预包被的赫赛汀和4-1BBL蛋白的细胞培养瓶中，并添加含IL-2、IL-15、IL-21和自体血浆的培养基；
S3、连续培养14-17天，获得高纯度高活性NK细胞。
2.根据权利要求1所述的Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法，其特征在于，培养前需要先包被Herceptin和4-1BBL。
3.根据权利要求1所述的Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法，其特征在于，包被液的组成成分包括10mlPBS、35ug Her-2和17ug 4-1BBl蛋白，混合制备。
4.根据权利要求1所述的Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法，其特征在于，具体步骤包括：
A、包被：将包被液加入培养瓶，铺平放匀，在4℃条件下，避光过夜；
B、采血：采集外周血15ml,将其加入离心管一中备用；
C、淋巴细胞分离液分离：向离心管中加入等体积PBS至30ml，混匀后转移至提前添加15ml淋巴分离液的离心管二，在1800rpm/800g，室温条件下离心20min，升降速设为0；
D、洗涤PBMC：用吸管将离心后中间白色的PBMC层吸出，在离心管三中加入18-22ml的PBS清洗，在2000rpm条件下离心6min，弃上清；再次用20mlPBS清洗，在1800rpm条件下离心6min，弃上清；使用培养基重悬、混匀、取样，采用typan blue染色计数，1800rpm条件下离心6min，弃上清；
E、配制细胞悬液：用40ml培养基重悬细胞、沉淀、混匀；
F、接种细胞：取40ml上述的细胞悬液加入培养瓶，添加终浓度30ng/ml的IL-15、终浓度100ng/ml的IL-21、终浓度5％的自体血浆、终浓度6000U/ml的IL-2，将接种后的培养瓶置二氧化碳培养箱培养；
G、培养至4、6、8、11和14天时分瓶培养，期间检测，并在第17日回收细胞。
5.根据权利要求4所述的Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法，其特征在于，二氧化碳培养箱的培养条件：温度为37℃，CO2浓度为5％。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210794030.9A CN115074325A (zh) | 2022-07-07 | 2022-07-07 | Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210794030.9A CN115074325A (zh) | 2022-07-07 | 2022-07-07 | Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115074325A true CN115074325A (zh) | 2022-09-20 |
Family
ID=83257946
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210794030.9A Pending CN115074325A (zh) | 2022-07-07 | 2022-07-07 | Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115074325A (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107460167A (zh) * | 2017-09-21 | 2017-12-12 | 山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司 | 一种无滋养细胞的nk细胞的扩增方法 |
| US20180057795A1 (en) * | 2016-07-25 | 2018-03-01 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human | Methods of producing modified natural killer cells and methods of use |
-
2022
- 2022-07-07 CN CN202210794030.9A patent/CN115074325A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20180057795A1 (en) * | 2016-07-25 | 2018-03-01 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human | Methods of producing modified natural killer cells and methods of use |
| CN107460167A (zh) * | 2017-09-21 | 2017-12-12 | 山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司 | 一种无滋养细胞的nk细胞的扩增方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| XIAOMEI LI等: "Expansion of NK cells from PBMCs using immobilized 4-1BBL and interleukin-21", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY》, vol. 47, no. 1, pages 335 - 342, XP009186754, DOI: 10.3892/ijo.2015.3005 * |
| 王晓梦: "Herceptin对NK细胞体外扩增和杀伤活性的影响及机制研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》, no. 1, pages 072 - 110 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6661544B2 (ja) | 遺伝子改変したｔ細胞の自動生成法 | |
| US6541249B2 (en) | Immortalized human stromal cell lines | |
| CN110747166B (zh) | 一种外周血t细胞的体外扩增培养方法 | |
| CN112662627A (zh) | 多能干细胞分化为自然杀伤细胞的培养液及分化方法 | |
| CN113699106A (zh) | 一种细胞因子诱导的杀伤细胞的分离和扩增方法 | |
| CN117343902B (zh) | 一种高纯度nk细胞体外扩增培养方法 | |
| CN108251369B (zh) | 一种免疫细胞培养基、培养方法以及用途 | |
| CN112391344A (zh) | 一种无包被nk细胞体外扩增和培养方法 | |
| CN112680415A (zh) | 一种nk培养基及其扩增培养方法 | |
| CN113293132A (zh) | 一种nk细胞体外扩增体系及培养方法 | |
| CN114075546A (zh) | 一种nk细胞扩增组合物及体外扩增培养方法 | |
| CN112430573A (zh) | 一种nk细胞的培养体系及培养方法 | |
| CN111849893A (zh) | 一种体外培养自然杀伤细胞的试剂盒及其使用方法和应用 | |
| CN115044552A (zh) | 一种自然杀伤细胞的体外培养方法及试剂盒 | |
| CN115074326A (zh) | Cd16抗体联合细胞因子体外扩增nk细胞的培养方法 | |
| CN112662631B (zh) | 一种car-t细胞灌流培养方法 | |
| CN113502267A (zh) | 一种用于外周血中nk细胞扩增的培养基及方法 | |
| CN111548994B (zh) | 一种细胞培养基及其培养nk细胞的方法 | |
| CN110499291A (zh) | 无血清培养制备嵌合抗原受体t细胞的方法 | |
| CN115074325A (zh) | Herceptin联合4-1BBL体外扩增NK方法 | |
| CN111172110B (zh) | 一种脐带血cik细胞的培养方法 | |
| WO2018199186A1 (ja) | 造血前駆細胞マーカー | |
| CN112725273A (zh) | 一种nk细胞及其制备方法和应用 | |
| CN113564115A (zh) | 一种高扩增型dc-cik细胞及其制备和应用 | |
| CN113755436A (zh) | 一种体外nk细胞的扩增方法及其nk细胞 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220920 |