CN115074283A - 一种侧孢短芽孢杆菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种侧孢短芽孢杆菌及其应用。所述的侧孢短芽孢杆菌,名称为侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)HA‑2,于2021年12月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为:中国北京,保藏编号为:CGMCC No.24130。该菌株可以抑制牡丹轮纹斑点病、牡丹白绢病和牡丹褐斑病等多种牡丹病害病原真菌的生长和繁殖;且对其他植物病害也具有显著的抑制作用,例如番茄灰霉病、黄瓜蔓枯病、辣椒炭疽病、甘薯黑斑病和丝瓜枯萎病等,而且该菌株对生态环境无害,不会引起病原的抗药性,具有良好的开发应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种侧孢短芽孢杆菌及其应用。
背景技术
牡丹兼有观赏与药用双重价值,在我国栽培种植十分广泛。洛阳是十三朝古都,有“千年帝都,牡丹花城”的美誉。牡丹生长发育过程中,容易受到病虫害的侵害,严重影响了其观赏价值和经济价值。
牡丹轮纹斑点病、牡丹白绢病和牡丹褐斑病是洛阳牡丹目前较为严重的病害之一。其中,牡丹轮纹斑点病,又称牡丹轮纹病或牡丹轮斑病,主要危害牡丹叶片,病原真菌为黑座假尾孢(Pseudocercospora variicola),初发病时叶片上病斑网形或近圆形,直径4~10mm,数量多,颜色为灰白色,边缘褐色,后期呈现明显的同心轮纹,病斑中央生灰黑色霉状物;严重时病斑会蔓延至全株叶片,导致叶片枯焦凋落。牡丹白绢病主要危害牡丹根颈部,病原真菌为整齐小核菌(Sclerotium rolfsii),牡丹根颈部染病后呈水渍状,上覆白色绢状菌丝层,多呈辐射状蔓延,包括病部附近的土壤,受害牡丹株茎基部及根部皮层腐烂,植株的水分和养分的输送被阻断,叶片变黄枯萎,全株枯死。牡丹褐斑病主要危害牡丹叶片,病原真菌为牡丹枝孢霉(Cladosporium paeoniae),病害多在开花前后发生,一直延续到枯叶期;病原以菌丝体或分生孢子在枯叶或土壤里越冬,借助风雨传播夏初开始发生,秋季危害严重,高温、高湿、光照不足、通风不良、连作等均有利于病害发生。以上病害都会导致牡丹叶片光合作用及营养物质合成等生理功能受到影响,使牡丹根养分贮藏减少,对当年的花芽长势及来年的开花品质产生严重影响,已成为牡丹种植上的巨大障碍。
目前,牡丹真菌病害的防治目前主要依赖甲基托布津、多菌灵等化学药物的使用,但长期使用化学农药,不仅会污染农产品、空气、土壤和水域,危及人、畜健康与安全和生态环境,而且会增强某些病害的抗药性,降低防治效果。生物防治是利用生物或其代谢产物控制病虫害的防治方法,具有对人畜安全,对环境无污染,不易产生抗药性,高效广谱等特点。利用其生长速度快、培养简单、抗逆性强、便于贮存和运输、容易在施用环境中定殖与繁殖等特点,发挥生物防治效果,抑制多种农作物和蔬菜的土传真菌和细菌病害,并且对植物生长有一定的促生作用,日益受到人们的重视。然而利用生物防治手段、筛选微生物菌株进行牡丹轮纹斑点病、牡丹白绢病和牡丹褐斑病等多种牡丹病害防治的研究较少。
牡丹是洛阳重要的观赏植物,洛阳牡丹是中国国家地理标志产品,也是洛阳的城市名片。随着牡丹观赏价值的提升,种植面积的增加,导致牡丹病害的流行,危害严重,因此,如何采用生物防治手段做好牡丹病害的防治是目前的研究难点和热点。
发明内容
为了克服现有技术的不足和缺点,本发明的首要目的在于提供一种侧孢短芽孢杆菌,该菌株可以抑制牡丹轮纹斑点病、牡丹白绢病和牡丹褐斑病等多种牡丹病害病原真菌的生长和繁殖。
本发明的另一目的在于提供上述侧孢短芽孢杆菌的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现:
一种侧孢短芽孢杆菌,名称为侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)HA-2,于2021年12月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为:中国北京,保藏编号为:CGMCC No.24130;
所述的侧孢短芽孢杆菌从土壤中分离纯化得到;
所述的侧孢短芽孢杆菌具有如下形态特性:
(1)在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上菌落黄褐色,圆形或椭圆形,边缘光滑整齐,中央突起,半透明;
(2)菌体为粗短杆状,两端钝圆,0.5~0.9μm×2.0~3.0μm,芽孢侧生,椭圆形,中生或近端生,周生鞭毛,有荚膜,革兰氏染色反应不定(其中,对数期,革兰氏阳性;稳定期后期及衰亡期,革兰氏阴性);
所述的侧孢短芽孢杆菌在微生物制剂领域中的应用;
所述的微生物制剂优选为杀菌剂或植物生产促进剂;
所述的侧孢短芽孢杆菌在防治植物病害和促进植物生长中的应用;
所述的植物病害为牡丹轮纹斑点病、牡丹白绢病、牡丹褐斑病、番茄灰霉病、黄瓜蔓枯病、辣椒炭疽病、甘薯黑斑病或丝瓜枯萎病;
所述的牡丹轮纹斑点病的病原真菌为黑座假尾孢(P.variicola);
所述的牡丹白绢病的病原真菌为齐整小核菌(S.rolfsii);
所述的牡丹褐斑病的病原真菌为牡丹枝孢霉(C.paeoniae);
所述的番茄灰霉病的病原真菌为灰葡萄孢(Botrytis cinerea);
所述的黄瓜蔓枯病的病原真菌为西瓜壳二孢(Ascochyta citrullina);
所述的辣椒炭疽病的病原真菌为辣椒刺盘孢(Colletotrichum capsici);
所述的甘薯黑斑病的病原真菌为甘薯长喙壳(Ceratocystis fimbriata);
所述的丝瓜枯萎病的病原真菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum);
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果:
(1)本发明提供的侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2对牡丹轮纹斑点病的病原真菌黑座假尾孢(P.variicola)、牡丹白绢病的病原真菌齐整小核菌(S.rolfsii)和牡丹褐斑病的病原真菌牡丹枝孢霉(C.paeoniae)等多种牡丹病害病原菌具有显著的抑制作用,能够有效地防治牡丹轮纹斑点病、牡丹白绢病和牡丹褐斑病,对牡丹病害具有显著的特异性,具有良好的应用前景。
(2)本发明提供的侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2对其他植物的真菌病害也具有显著的抑制作用,例如番茄灰霉病、黄瓜蔓枯病、辣椒炭疽病、甘薯黑斑病和丝瓜枯萎病等,具有较好的广谱抗菌性。
(3)本发明提供的侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2可以增加烟草根系鲜重、侧根和不定根条数,可促进烟草等作物生长,可作为植物生长促进剂。
(4)本发明提供的侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2对生态环境无害,不会引起病原真菌的抗药性。
(5)本发明提供的侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2的培养条件简单,容易保存,易于工业化生产,具有良好的开发应用前景。
附图说明
图1是侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2的抑制黑座假尾孢抑菌圈试验结果图。
图2是侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2的菌落形态图。
图3是侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2的扫描电镜图。
图4是侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2的革兰氏染色结果图。
图5是侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2的鞭毛染色结果图。
图6是侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2的荚膜染色结果图。
图7是侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2的系统发育树结果图。
图8是实施例2中侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2对部分病原真菌的抑制作用展示图,A:辣椒炭疽病病原真菌,B:牡丹白绢病病原真菌,C:牡丹褐斑病病原真菌。
图9是实施例5中施加侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2对烟草根系影响结果图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限于此。
本发明筛选分离了侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2,该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为:CGMCC No.24130。
该菌株对牡丹轮纹斑点病的病原真菌黑座假尾孢(P.variicola)、牡丹白绢病的病原真菌齐整小核菌(S.rolfsii)和牡丹褐斑病的病原真菌牡丹枝孢霉(C.paeoniae)具有显著的抑制作用,同时对其他植物的真菌病害也具有显著的抑制作用,可用于防治牡丹或其他植物病害。
此外,该菌株还可以增强烟草根系活力,增加烟草根系鲜重、侧根和不定根条数,促进烟草根系的旺盛生长,可用于促进植物生长。
实施例1侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2的筛选、分离和纯化一、菌株的筛选分离方法
1、样品中微生物的分离
在河南科技大学农场采集地表下5~10cm处土样,装袋带回实验室风干、研磨,每个样品中称取1g分别加入到装有49mL无菌生理盐水和5颗玻璃珠的三角瓶(250mL)中,充分摇动30min,制得样品悬液。采用平板稀释分离法把梯度稀释后的菌悬液分别涂布到牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏一号琼脂培养基和察氏合成琼脂培养基平板上,30℃倒置培养1~2d。根据单菌落大小、表面结构、质地、光泽和颜色等特征,挑取菌落形态性状差异明显的单菌落,反复平板划线获得纯培养后,编号后保存备用。
2、抑制微生物的筛选
以牡丹轮纹斑点病的病原真菌黑座假尾孢(P.variicola)(牡丹病叶来自于洛阳国际牡丹园,病原真菌由河南科技大学特色生物资源开发与利用实验室分离保存。具体分离方法及鉴定方法见参考文献:鲁作云,戴应金,周启中.牡丹轮纹病病原的初步研究[J].湖北林业科技,2009,(01):35-37.)为靶标筛选抑制微生物,方法采用平板对峙法(具体方法同实施例2)。将黑座假尾孢(P.variicola)接种于PDA平板中央,30℃培养3d后,接入分离纯化保存的菌株,30℃恒温培养2~4d后观察抑菌情况,测量抑菌圈直径,每组试验重复3次。根据抑菌直径的大小选取抑菌效果好的菌株,转移至分离时对应的培养基保存备用。
3、细菌分类鉴定方法
(1)形态学鉴定
参照《常见细菌系统鉴定手册》中的实验方法进行,记录菌落形态、染色特征、光学显微镜及扫描电子显微镜形态特征。
(2)生理生化鉴定
参照《常见细菌系统鉴定手册》中的生理生化指标进行,对各菌株进行触酶、V-P反应、甲基红反应、硝酸盐还原试验等生理生化指标测定。
(3)16S rDNA序列分析
用细菌基因组提取试剂盒提取细菌基因组DNA,作为PCR反应的模板。引物用16SrDNA全长扩增通用引物。PCR扩增反应体系(30μL):PCR预混料15μL、模板DNA 1μL、引物各0.5μL、双蒸水13μL。PCR反应条件:95℃3min;95℃50s,52℃50s,72℃2min,30个循环;72℃延伸10min。用PCR胶回收试剂盒回收PCR产物,经质量分数为1.5%的凝胶电泳检测后,与克隆载体pGM-T在T4连接酶作用下于16℃过夜连接,并转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞。引物及阳性克隆菌测序由上海生工生物工程股份有限公司完成。利用Blast将菌株的16S rDNA的序列与GenBank数据库中已知的序列进行比较,分析其同源性。
二、筛选分离鉴定结果
1、抑制微生物的筛选分离
从土壤样品中分离获得24株细菌、3株放线菌和1株霉菌,经抑制微生物的筛选试验,共筛选到8株细菌具有抑制效果,其中,4株效果较明显,其编号依次为HA-1到HA-4,其中HA-2产生的抑菌圈最大,抑菌圈直径为6.70mm(图1),抑制率达到79.5%(具体计算方法见实施例2),将其进行后续系列鉴定工作。
2、菌株HA-2的形态学鉴定结果
对菌株HA-2进行菌落形态和个体形态的观察,结果见图2~6。所分离得到的菌株HA-2在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上菌落黄褐色,圆形或椭圆形,边缘光滑整齐,中央突起,半透明(图2);所分离得到的菌株HA-2的菌体为粗短杆状,两端钝圆,0.5~0.9μm×2.0~3.0μm,芽孢侧生,椭圆形,中生或近端生,周生鞭毛,有荚膜,革兰氏染色反应不定:对数期,革兰氏染色阳性,稳定期后期及衰亡期,革兰氏染色阴性(图3-图6)。
3、菌株HA-2的生理生化鉴定结果
菌株HA-2的部分生理生化特征见表1,结合形态学特征,依据《常见细菌系统鉴定手册》和《伯杰氏细菌系统鉴定手册》,可初步将菌株鉴定为短芽孢杆菌属(Brevibacillus)。
表1菌株HA-2生理生化试验结果
注:+表示阳性反应;-表示阴性反应。
4、菌株HA-2的16S rDNA鉴定结果
以细菌基因组为模板,经过PCR扩增后,所分离得到的菌株HA-2的PCR产物经质量分数为1.5%琼脂糖凝胶电泳检测出现大约1400bp荧光条带。通过阳性克隆菌质粒的目标区域测序,16S rDNA片段大小为1380bp,具体序列如下所示:
基于此序列,采用MEGA5.0软件,构建系统发育树,如图7所示。16S rDNA序列分析结果显示与已知菌株侧孢短芽孢杆菌Brevibacillus laterosporus DSM25T(CP017705)的亲缘关系最为接近,同源性达到99.93%。结合菌株菌落形态、个体形态、生理生化特征以及16S rDNA鉴定结果,菌株HA-2为侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)。该菌株于2021年12月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为:中国北京,保藏编号为:CGMCC No.24130。
实施例2侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2对多种病原真菌的抑制作用
采用对峙培养法,用直径为6mm的打孔器分别在培养好的番茄灰霉病、黄瓜蔓枯病、牡丹白绢病、牡丹褐斑病、辣椒炭疽病、甘薯黑斑病和丝瓜枯萎病病原真菌的菌落(番茄灰霉病的病原真菌灰葡萄孢(B.cinerea),菌株保藏号为ACCC 36027,黄瓜蔓枯病的病原真菌西瓜壳二孢(A.citrullina),菌株保藏号为ACCC 36024,牡丹白绢病的病原真菌齐整小核菌(S.rolfsii),菌株保藏号为ACCC 39139,牡丹褐斑病的病原真菌牡丹枝孢霉(C.paeoniae),菌株保藏号为ACCC 36187,辣椒炭疽病的病原真菌辣椒刺盘孢(C.capsici),菌株保藏号为CGMCC 3.7246,甘薯黑斑病的病原真菌甘薯长喙壳(C.fimbriata),菌株保藏号为ACCC 30008,丝瓜枯萎病的病原真菌尖孢镰刀菌(F.oxysporum),菌株保藏号为ACCC 37715;以上菌种购自于上海弭阳生物技术有限公司西安分公司)边缘取菌块,将菌块接种到PDA平板中央,然后把侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2接种到距离平板中央距离相等的位置,以只接病原真菌的平板为对照,做3次重复,之后置于温度为30℃的恒温箱中培养。至对照平板上病原真菌长满平皿,测量病原菌菌落直径,计算对病原真菌生长的抑制率。抑制率(%)=(对照菌落直径-处理菌落直径)/对照菌落直径×100%。
试验结果见表2和图8。从表2可以看出,菌株HA-2除了对牡丹轮纹斑点病的病原真菌黑座假尾孢(P.variicola)具有较好的抑制作用外,对牡丹白绢病的病原真菌齐整小核菌(S.rolfsii)和牡丹褐斑病的病原真菌牡丹枝孢霉(C.paeoniae)等多种牡丹病害病原菌也具有显著的抑制作用,与其他植物的真菌病害相比,该菌株对牡丹的真菌病害的抑制效果更高,说明其对牡丹真菌病害具有较好的特异性。
此外,菌株HA-2还对其他植物的真菌病害也具有显著的抑制作用,例如番茄灰霉病、黄瓜蔓枯病、辣椒炭疽病、甘薯黑斑病和丝瓜枯萎病等,说明其具有较好的广谱抗菌性。
表2侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2对多种病原真菌的抑制作用
实施例3侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2对牡丹轮纹斑点病的抑制作用
为了进一步研究侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2在大田试验中的抑菌效果,选取洛阳市伊滨区牡丹栽培园的60株8年生牡丹(品种‘凤丹’)作为试验对象,随机分为A、B两组,B组为对照组。对A、B两组中的牡丹接种等量的病原真菌黑座假尾孢(P.variicola),具体方法为:黑座假尾孢(P.variicola)接种于马铃薯蔗糖液体培养基,30℃培养3d后,菌丝体悬浮液按100mL/株均匀喷洒牡丹植株;5d后A组使用侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2菌体培养液(采用牛肉膏蛋白胨液体培养基培养,浓度为108CFU/mL)100mL/株均匀喷洒于牡丹植株,每隔10d喷洒一次,共喷洒三次;B组使用等量清水进行喷洒,每隔10d喷洒一次,共喷洒三次。调查并记录感染牡丹轮纹斑点病牡丹植株数,每5天调查1次。其中,发病率(%)=发病株数/试验总株数×100%,防效(%)=(对照发病率-处理发病率)/对照发病率×100%。
试验结果显示,A组有7株牡丹轮纹斑点病生成,发病率23.33%;对照组B组有25株牡丹轮纹斑点病生成,发病率83.33%。
结果表明,本发明中的侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2能够有效地抑制牡丹轮纹斑点病的生成,防效72%。
实施例4侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2抑菌活性物质分析
侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2由牛肉膏蛋白胨培养基斜面试管转接到装有牛肉膏蛋白胨液体培养基的三角瓶中,在恒温摇床上培养20h(180rpm,30℃),得到菌体培养液;取出部分菌体培养液(浓度为108CFU/mL)3000r/min离心30min,收集上清液备用;沉淀物即菌体,用生理盐水制备得到菌体悬浮液,调整菌体浓度为108CFU/mL;分别将清水(对照)、菌体悬浮液(浓度为108CFU/mL)、菌体培养液(浓度为108CFU/mL)和上清液分别以100mL/株均匀喷洒于黑座假尾孢(P.variicola)感染的各20株牡丹植株(黑座假尾孢(P.variicola)接种于马铃薯蔗糖液体培养基,30℃培养3d后,菌丝体悬浮液按100mL/株均匀喷洒牡丹植株,不做任何处理5d,同实施例3),每隔10d喷洒一次,共喷洒三次。调查并记录感染牡丹轮纹斑点病牡丹植株数,每5天调查1次。
表3侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2抑菌活性物质研究结果
试验结果如表3所示,菌体培养液和上清液处理效果明显,而菌体悬浮液处理抑菌效果不明显。该结果证明,侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2是通过胞外代谢产物对黑座假尾孢达到抑制作用的。
实施例5施加侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2对烟草根系的影响
选取洛阳市洛宁县东宋乡烟田中40棵烟草,随机分为A、B两组,B组为对照组。A组使用侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2菌体培养液(浓度为108CFU/mL)500mL/株对移栽后的团棵期烟草幼苗进行灌根处理;B组使用等量清水进行灌根。其它肥料用量与当地水平一致,每日观察烟苗生长状态、有无死苗等问题。施加60d后,每组随机选取5株根系,采用TTC法测定根系活力。同时将烟草根系用自来水、蒸馏水先后冲洗干净,最后用吸水纸将残留水分充分吸收干净,记录侧根和不定根条数,并称重,取平均值。
烟草的根系是合成生物碱的场所和提高烟草产量品质的器官,根系的贡献不仅取决于根系生长量,更取决于根系活力的强弱。根系鲜重和根系根条数量体现了根系生长量,发达的根系对移栽存活率、烟草抗性及品质形成均有重要的影响,根系活力直接影响烟草生长的状况,决定着烟草的产量和品质。试验结果显示(图9),相对于对照B组,A组施加侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2培养液后,烟草的根系活力明显增强(提高了47.41%),根系鲜重显著增加(增加了36.84%),侧根和不定根条数显著增多(侧根增加了43.75%,不定根增加了34.29%),说明侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)HA-2施入土壤后,能够优化烟草根际土壤的微环境,增强分解土壤有机物质的能力,促进烟草根系的旺盛生长,继而支持了地上部的生长与发育,为提高烟叶产量、改善烟叶的品质创造了优越的条件。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 河南科技大学
<120> 一种侧孢短芽孢杆菌及其应用
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1380
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 菌株HA-2 16S rDNA片段
<400> 1
tcgagcgagg gtcttcggac cctagcggcg gacgggtgag taacacgtag gcaacctgcc 60
tgtgagactg ggataacata gggaaactta tgctaatacc ggatagggtt ttgcttcgcc 120
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ccttgtacac accgcccgtc acaccacggg agtttgcaac acccgaagtc ggtgaggtaa 1380
Claims (10)
1.一种侧孢短芽孢杆菌,其特征在于名称为侧孢短芽孢杆菌(Brevibacilluslaterosporus)HA-2,于2021年12月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为:中国北京,保藏编号为:CGMCC No.24130。
2.根据权利要求1所述的侧孢短芽孢杆菌,其特征在于:
所述的侧孢短芽孢杆菌具有如下形态特性:
(1)在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上菌落黄褐色,圆形或椭圆形,边缘光滑整齐,中央突起,半透明;
(2)菌体为粗短杆状,两端钝圆,0.5~0.9μm×2.0~3.0μm,芽孢侧生,椭圆形,中生或近端生,周生鞭毛,有荚膜,革兰氏染色反应不定。
3.权利要求1或2所述的侧孢短芽孢杆菌在微生物制剂领域中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:
所述的微生物制剂为杀菌剂或植物生产促进剂。
5.权利要求1或2所述的侧孢短芽孢杆菌在防治植物病害和促进植物生长中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:
所述的植物病害为牡丹轮纹斑点病、牡丹白绢病、牡丹褐斑病、番茄灰霉病、黄瓜蔓枯病、辣椒炭疽病、甘薯黑斑病或丝瓜枯萎病。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于:
所述的牡丹轮纹斑点病的病原真菌为黑座假尾孢(Pseudocercospora variicola)。
8.根据权利要求6所述的应用,其特征在于:
所述的牡丹白绢病的病原真菌为齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)。
9.根据权利要求6所述的应用,其特征在于:
所述的牡丹褐斑病的病原真菌为牡丹枝孢霉(Cladosporium paeoniae)。
10.根据权利要求6所述的应用,其特征在于:
所述的番茄灰霉病的病原真菌为灰葡萄孢(Botrytis cinerea);
所述的黄瓜蔓枯病的病原真菌为西瓜壳二孢(Ascochyta citrullina);
所述的辣椒炭疽病的病原真菌为辣椒刺盘孢(Colletotrichum capsici);
所述的甘薯黑斑病的病原真菌为甘薯长喙壳(Ceratocystis fimbriata);
所述的丝瓜枯萎病的病原真菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。
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