CN115054572A - 一种含生物素的维生素c注射液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种含生物素的维生素C注射液，添加特定抗氧化剂，降低了杂质产生，提高了药物稳定性和安全性，能够用于克山症和心源性休克用药。本发明中在维生素C制备工艺中，采用本发明提供的壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂及明胶改性蒙脱土絮凝剂，絮凝沉降L‑山梨糖的发酵液和2‑酮基‑L‑古龙酸钠发酵液，有效提高了菌丝、蛋白等杂质的去除，简化后处理提纯工艺，提高了维生素C的品质，工艺简单易行，利于规模化生产应用。

Description

一种含生物素的维生素C注射液及其制备方法
技术领域
本发明属于维生素C工艺技术领域，具体涉及一种含生物 素的维生素C注射液及其制备方法。
背景技术
维生素C又被称为L-抗坏血酸，可以治愈坏血病，促进机 体丙种球蛋白的形成，增强抗感染能力。在体内参与生物氧化 还原过程，有利于红细胞生成及肾上腺皮质激素和神经递质等 的合成，参与解毒过程；保护体内其他抗氧化活性物质，对抗 自由基，可以促进重金属离子排出体外，且有致癌物质亚硝胺 生成的作用，改善心肌代谢，增强收缩力，可以促进胶原纤维 与组织黏合质的形成，促进伤口愈合。
维生素C的制备方法主要有莱氏法和二步发酵法。其中， 二步发酵法得到广泛的应用，其将D-山梨醇发酵生成L-山梨糖 后，再经细菌氧化生成2-酮基-L-古龙酸(钠)，在经过转化制 备得到维生素C。目前，对2-酮基-L-古龙酸(钠)分离提纯的 方法主要有加热沉淀法、化学絮凝法和超滤法。加热沉淀法能 耗较大；化学絮凝法通过絮凝剂除去菌丝体、蛋白质等杂质， 但目前使用的絮凝剂生物友好性无法满足使用要求，并且制备 过程中容易产生较多的废物环境污染较严重；超滤法是一种新 型的处理方法，操作简单，但由于菌丝蛋白等的存在，容易造 成滤膜堵塞，滤膜需要频繁更换等问题，成本较高。
因此，还需要进一步优化维生素C注射液的制备工艺，以 满足人们的需求。
发明内容
为解决上述问题，本发明以一种新型絮凝剂应用于维生素 C的制备过程，使2-酮基-L-古龙酸(钠)的收率得到有效提高， 大幅简化处理工艺，提高滤膜的过滤效果，延长其使用寿命， 进而制备得到了高品质维生素C，并且利用得到的维生素C制备 得到了一种含生物素的维生素C注射液。该注射液的工艺得到 缩短及简化，有效降低生产成本，从而完成本发明。
本发明第一方面提供了一种含生物素的维生素C注射液， 所述注射液中包括维生素C和生物素，优选地，还包括碳酸氢 钠、乙二胺四乙酸二钠、焦亚硫酸钠、甲醛合次硫酸氢钠、硫 代甘油。
优选地，所述维生素C利用2-酮基-L-古龙酸或2-酮基-L-古 龙酸钠酯化转化进行制备。
所述2-酮基-L-古龙酸钠采用包括以下步骤的方法进行制 备：
步骤1、制备壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂和明胶改性蒙脱土絮 凝剂；
步骤2、制备浓缩L-山梨糖发酵液；
步骤3、制备2-酮基-L-古龙酸钠发酵液；
步骤4、后处理2-酮基-L-古龙酸钠发酵液，得到2-酮基-L- 古龙酸钠。
本发明第二方面提供了所述含生物素的维生素C注射液的 制备方法，所述方法具体包括以下步骤：
(1)在配制罐中加入注射用水，控制水温为20℃～30℃， 搅拌条件下，充氮气饱和。
(2)加入碳酸氢钠、维生素C，搅拌溶解。
(3)再依次加入硫代甘油、焦亚硫酸钠及预先用注射用水 溶解的甲醛合次硫酸氢钠和预先用注射用水溶解的生物素，溶 解后，添加用氮气饱和的注射用水至全量。
(4)上述药液先用0.4-0.6μm滤器过滤，再用0.2-0.3μm 滤器过滤，pH值为5.5～6.5，再利用0.1-0.25μm除菌过滤器进 行精滤。
(5)灌装安瓿中，熔封，灭菌，检漏，灯检，得到注射液。
本发明提供的含生物素的维生素C注射液及其制备方法具 有以下有益效果：
(1)本发明提供的含生物素的维生素C注射液，分开溶解 药物和添加特定抗氧化剂，降低了杂质产生，提高了药物稳定 性和安全性，能够用于克山症和心源性休克用药。
(2)采用本发明提供的壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂及明胶改 性蒙脱土絮凝剂，絮凝沉降L-山梨糖的发酵液和2-酮基-L-古龙 酸钠发酵液，有效提高了菌丝、蛋白等杂质的去除，提高了过 滤后滤液纯度，降低杂质，简化后处理工艺。
(3)本发明中采用浓缩L-山梨糖进行发酵制备2-酮基-L- 古龙酸钠，提高了L-山梨糖的转化率及发酵液中2-酮基-L-古龙 酸钠的浓度，进一步简化后处理提纯工艺，从而提高了维生素 C的品质，简化其工艺，工艺简单易行，利于规模化生产应用。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明进行详细说明，本发明的 特点和优点将随着这些说明而变得更为清楚、明确。
本发明提供了一种含生物素的维生素C注射液，通过使用 氮气，分开溶解药物，添加特定抗氧化剂，降低了杂质产生， 提高了药物稳定性和安全性，同时增加了用于克山症，心源性 休克时抢救的临床的适应症新用途。本发明中采用絮凝和超滤 的综合处理工艺，大幅提高2-酮基-L-古龙酸(钠)的分离质量 计效率，从而提高维生素C的品质，缩短了制备周期，降低了 生产成本。
本发明提供了一种含生物素的维生素C注射液，所述注射 液中包括维生素C和生物素，优选地，还包括碳酸氢钠、乙二 胺四乙酸二钠、焦亚硫酸钠、甲醛合次硫酸氢钠、硫代甘油； 溶解于注射液用水中。
所述注射液中，维生素C与注射用水的质量体积比为 (150-650)g:(2000-5000)mL，优选为(200-600)g:(2000-5000)mL， 更优选为(260-550)g:(2000-5000)mL。
所述注射液中，生物素与注射用水的质量体积比为 (10-35)mg:2000mL，优选为(15-30)mg:2000mL，更优选为 (20-25)mg:2000mL。生物素是非常重要的维生素，有利于细胞 的健康和再生。生物素参与了很多生命物质的代谢和合成，对 于动脉硬化、中风以及脂类代谢失常的患者，还有高血压、冠 心病等患者，都有非常重要的辅助作用。
所述注射液中，维生素C与碳酸氢钠的质量比为 265:(90-160)，优选为265:(100-150)，更优选为265:(110-140)。
所述注射液中，维生素C与乙二胺四乙酸二钠的质量比为 265:(0.1-0.7)，优选为265:(0.2-0.6)，更优选为265:(0.3-0.5)。
所述注射液中，维生素C与焦亚硫酸钠的质量比为 265:(1.5-4.5)，优选为265:(2-4)，更优选为265:(2.5-3.5)。
所述注射液中，维生素C与甲醛合次硫酸氢钠的质量比为 265:(1.5-4.5)，优选为265:(2-4)，更优选为265:(2.5-3.5)。
所述注射液中，维生素C与硫代甘油的质量体积比为 265g:(1.0-5.0)mL，优选为265g:(1.5-4.5)mL，更优选为 265g:(2-4)mL。
优选地，所述维生素C利用2-酮基-L-古龙酸或2-酮基-L-古 龙酸钠酯化转化进行制备。
优选地，利用2-酮基-L-古龙酸或2-酮基-L-古龙酸钠，优选 为2-酮基-L-古龙酸钠，在酸性条件下与醇类进行酯化，然后加 入碳酸盐反应，酸化后，将反应溶液过滤、活性炭脱色、精制 得到维生素。所述醇类选自甲醇或丁醇，优选为甲醇。
所述2-酮基-L-古龙酸钠采用包括以下步骤的方法进行制 备：
步骤1、制备壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂和明胶改性蒙脱土 絮凝剂；
将壳聚糖溶液加入到蒙脱土水分散液中，加热反应，静置 分离沉淀物，干燥，研磨成粉，制备得到壳聚糖改性蒙脱土絮 凝剂。所述壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂的粒径为400-600目，优选 为450-550目。
所述壳聚糖溶液为壳聚糖溶解于醋酸水溶液制备得到，所 述壳聚糖溶液的质量浓度为1.0％-3.5％，优选为1.5％-3.0％，更 优选为2％-2.5％。所述醋酸水溶液中，醋酸的质量浓度为 1.5％-5％。
所述壳聚糖溶液与蒙脱土水分散液的体积比为1:(0.6-1.8)， 优选为1:(0.8-1.5)，更优选为1:(1-1.2)。
将明胶水溶液加入到蒙脱土水分散液中，加热反应，静置 分离沉淀物，干燥，研磨成粉，制备得到明胶改性蒙脱土絮凝 剂。所述壳明胶改性蒙脱土絮凝剂的粒径为400-600目，优选为 450-550目。
所述明胶水溶液的质量浓度为2.0％-5.0％，优选为 2.5％-4.5％，更优选为3％-4％
所述明胶溶液与蒙脱土水分散液的体积比为1:(0.6-1.8)，优 选为1:(0.8-1.5)，更优选为1:(1-1.2)。
所述蒙脱土水分散液的质量浓度为1.4％-2.8％，优选为 1.6％-2.6％，更优选为1.8％-2.4％。
本发明中，采用壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂和明胶改性蒙脱 土絮凝剂对后续2-酮基-L-古龙酸钠发酵液进行絮凝沉降，其 中，壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂为阳离子型絮凝剂，胶改性蒙脱 土絮凝剂为阴离子型絮凝剂，絮凝剂分子能够与菌丝及蛋白分 子进行有效结合，形成较大的絮状物从发酵液中沉降出来。
本发明中提供的壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂和明胶改性蒙脱 土絮凝剂制备方法、使用方法及后续分离方法简单易行，大幅 简化了2-酮基-L-古龙酸钠发酵液的分离工艺。
本发明中所应用的蒙脱土对生物体无毒害作用，并且具有 良好的离子交换容量及较大的吸水膨胀能力。壳聚糖和明胶具 有良好的可降解性及生物相容性，能够对蒙脱土进行改性，从 而得到性能良好的吸附剂絮凝作用。
步骤2、制备浓缩L-山梨糖发酵液；
本发明中，采用L-山梨醇在黑醋菌发酵作用下，经絮凝沉 降、过滤及浓缩后制备得到浓缩L-山梨糖发酵液。
所述黑醋菌发酵过程为：将L-山梨醇、玉米浆、酵母膏和 碳酸钙加入到水中得到L-山梨糖发酵培养基，接入黑醋菌，于 35-37℃发酵培养30-36小时，得到L-山梨糖原始发酵液，发酵 液中，L-山梨糖终浓度为280-330mg/mL。
L-山梨糖发酵培养基中，L-山梨醇的浓度为 250-300mg/mL、玉米浆的浓度为1.5-3.5mg/mL、酵母膏的浓度 为0.3-0.5mg/mL、碳酸钙浓度为0.6-1.0mg/mL。
向L-山梨糖原始发酵液中缓慢加入壳聚糖改性蒙脱土絮 凝剂，加入后，壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂浓度为0.01-0.05g/mL， 优选为0.02-0.04g/mL，搅拌混合。再缓慢加入明胶改性蒙脱土 絮凝剂的絮凝剂，加入后，明胶改性蒙脱土絮凝剂浓度为 0.01-0.05g/mL，优选为0.02-0.04g/mL，搅拌混合。加入3-6mol/L 的氢氧化钠溶液，调节pH值至6.5-7.5，优选为7.0-7.5，静置， 离心分离，得到上清液和沉淀物。
对上清液进行膜过滤，微滤膜孔径大小为0.02-0.08μm，优 选为0.04-0.06μm。滤液于50-85℃，真空条件下浓缩，进行2-3 次浓缩，得到浓缩L-山梨糖发酵液，其中L-山梨糖的浓度为 500-550mg/mL。
本发明中，采用壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂和明胶改性蒙脱 土絮凝剂对原始发酵液进行絮凝沉降，减轻后续过滤压力，提 高过滤效果，延长过滤膜的使用寿命，有利于规模化推广应用。 去除浓缩L-山梨糖发酵液中的菌丝、蛋白等杂质，可以有效避 免美拉德反应的发生，保持料液的色泽度，同时保证后续2-酮 基-L-古龙酸钠产品的纯度。
步骤3、制备2-酮基-L-古龙酸钠发酵液；
将巨大芽孢杆菌和氧化葡萄糖酸杆菌的混合种子液接种到 L-山梨糖发酵培养基中，当L-山梨糖残糖降至20-24mg/mL时， 开始加入浓缩L-山梨糖发酵液，加入L-山梨糖过程中控制糖含 量为20-22mg/mL；同时，发酵过程中缓慢加入0.1-0.5mol/L的 碳酸钠溶液，控制pH在6.7-6.8。发酵温度为28-32℃。
本发明中在制备2-酮基-L-古龙酸钠发酵液过程中，采用步 骤2中制备得到的浓缩L-山梨糖发酵液，避免使用较高浓度的山 梨醇导致黑醋菌生长的抑制，提高转化率L-山梨糖的转化率， 同时提高了发酵液中2-酮基-L-古龙酸钠的浓度，大幅简化后处 理工艺，减少处理量，降低三废的产生。
步骤4、后处理2-酮基-L-古龙酸钠发酵液，得到2-酮基-L- 古龙酸钠。
向2-酮基-L-古龙酸钠发酵液中缓慢加入壳聚糖改性蒙脱 土絮凝剂，加入后，壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂浓度为 0.01-0.08g/mL，优选为0.02-0.06g/mL，更优选为0.03-0.05g/mL， 搅拌混合。再缓慢加入明胶改性蒙脱土絮凝剂，加入后，明胶 改性蒙脱土絮凝剂浓度为0.01-0.08g/mL，优选为 0.02-0.06g/mL，更优选为0.03-0.05g/mL，搅拌混合。混合均匀 后，加入氢氧化钠溶液，调节pH值至7.0-7.5，静置，分离，得 到上清液和沉淀物。
然后，对上清液进行膜过滤，微滤膜孔径大小为 0.02-0.1μm，优选为0.04-0.08μm，得到过滤后上清液。
加入活性炭脱色，过滤除去活性炭。向滤液中加入无水甲 醇(滤液和甲醇的体积比为3:(1-2))，搅拌加热至55-60℃，冷 却结晶，得到2-酮基-L-古龙酸钠晶体。
本发明还提供了所述含生物素的维生素C注射液的制备方 法，所述方法具体包括以下步骤：
(1)在配制罐中加入注射用水，为注射用水总量的 1/3～2/3，控制水温为20℃～30℃，搅拌条件下，充氮气饱和。
(2)加入碳酸氢钠、维生素C，搅拌溶解。所述维生素C 为依上述进行制备的维生素C。
(3)再依次加入硫代甘油、焦亚硫酸钠及预先用注射用水 溶解的甲醛合次硫酸氢钠和预先用注射用水溶解的生物素，溶 解后，添加用氮气饱和的注射用水至全量；搅拌回流，配制的 药液通二氧化碳。
(4)上述药液先用0.4-0.6μm滤器过滤，再用0.2-0.3μm 滤器过滤，pH值为5.5～6.5(必要时用8-10％碳酸氢钠溶液调 节pH值)，再利用0.1-0.25μm除菌过滤器进行精滤。
(5)灌装安瓿中，灌装前后均充氮气，熔封，灭菌，检漏， 灯检，得到注射液。
本发明还提供了所述含生物素的维生素C注射液的用途， 能够用于制备克山症和心源性休克的药物制剂。
本发明提供的含生物素的维生素C注射液，分开溶解药物， 添加特定抗氧化剂，降低了杂质产生，提高了药物稳定性和安 全性，能够用于克山症和心源性休克用药。本发明中在维生素 C制备工艺中，采用本发明提供的壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂及 明胶改性蒙脱土絮凝剂，絮凝沉降L-山梨糖的发酵液和2-酮基 -L-古龙酸钠发酵液，有效提高了菌丝、蛋白等杂质的去除，提 高了过滤后滤液纯度，降低杂质，简化后处理工艺，并且本发 明中采用浓缩L-山梨糖进行发酵制备2-酮基-L-古龙酸钠，提高 了L-山梨糖的转化率及发酵液中2-酮基-L-古龙酸钠的浓度，进 一步简化后处理提纯工艺，从而提高了维生素C的品质，简化 其工艺，工艺简单易行，利于规模化生产应用。
实施例
实施例1
于150mL水中加入3g钠基蒙脱土(MMT)，在搅拌下加 热至80℃预处理3h，静置过夜使MMT充分浸润；在搅拌条件 下，将150mL质量分数为2％的壳聚糖(CS)溶液(溶剂为0.2mol/L醋酸水溶液)加入到上述MMT乳浊液中混合，升至 60℃，搅拌下反应4h，静置分离沉淀物，在65℃下，真空干燥 至恒重，研磨成粉，过500目标准筛，得到壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂。
实施例2
于150mL水中加入3g钠基蒙脱土(MMT)，在搅拌下加 热至80℃预处理2h，静置过夜使MMT充分浸润，搅拌均匀得 到约2.0wt％的MMT悬浮液。
取6.0g明胶溶于150mL去离子水，在70℃水浴搅拌条件 下，待充分溶解后，将明胶溶液滴入50mL 2.0wt％的MMT悬 浮液中，反应1小时，离心分离，减压过滤，65℃真空干燥至恒重，研磨成粉，过500目标准筛，得到明胶改性蒙脱土絮凝 剂。
实施例3
(1)向水中加入L-山梨醇、玉米浆、酵母膏和碳酸钙， 搅拌溶液得到L-山梨糖发酵培养基，其中，L-山梨醇的浓度为 280mg/mL、玉米浆的浓度为2.5mg/mL、酵母膏的浓度为0.4mg/mL、碳酸钙浓度为0.8mg/mL。
向L-山梨糖的发酵培养基中接入黑醋菌，于37℃发酵培养 34小时，发酵液中，L-山梨糖终浓度为300mg/mL。
(2)向发酵液中缓慢加入实施例1中制备的壳聚糖改性蒙 脱土絮凝剂，加入后，壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂浓度为 0.03g/mL，搅拌混合。再缓慢加入实施例2制备的明胶改性蒙 脱土絮凝剂，加入后，明胶改性蒙脱土絮凝剂浓度为0.02g/mL， 搅拌混合。加入5mol/L的氢氧化钠溶液，调节pH值至7.0-7.5， 静置1-2小时，离心分离，得到上清液和沉淀物。
然后，对上清液进行膜过滤，微滤膜孔径大小为0.04μm。 滤液于80℃，真空度0.05MPa条件下浓缩30分钟；然后于60℃， 真空度0.1MPa条件下继续浓缩20分钟，得到浓缩后的L-山梨 糖发酵醪液，其中L-山梨糖的浓度为545mg/mL。
(3)将25L发酵培养基加入到80L发酵罐中，按30v/v％ 的接种量接入巨大芽孢杆菌和氧化葡萄糖酸杆菌的混合种子 液，当残糖降至20mg/mL时，开始缓慢加入浓缩后的L-山梨 糖发酵醪液，加入L-山梨糖过程中控制糖含量为20-22mg/mL； 同时，发酵过程中缓慢加入0.1mol/L的碳酸钠溶液，控制pH 在6.7-6.8。发酵过程中，起始温度为29℃，30小时后，温度 升至30℃，36小时后，温度升至31℃。发酵周期为46小时， 发酵终体积为52L。经检测，发酵液中2-酮基-L-古龙酸钠含量 为148mg/mL，摩尔转化率为93％。
(4)向(3)中的发酵液中缓慢加入实施例1中制备的壳 聚糖改性蒙脱土絮凝剂，加入后，壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂浓 度为0.03g/mL，搅拌混合。再缓慢加入是实施例2制备的明胶 改性蒙脱土絮凝剂，加入后，明胶改性蒙脱土絮凝剂浓度为 0.02g/mL，搅拌混合。加入5mol/L的氢氧化钠溶液，调节pH 值至7.0-7.5，静置1-2小时，离心分离，得到上清液和沉淀物。
然后，对上清液进行膜过滤，微滤膜孔径大小为0.04μm， 得到过滤后上清液。
加入适量活性炭，进行脱色10分钟，过滤除去活性炭。向 滤液中加入无水甲醇(滤液和甲醇的体积比为3:1)，搅拌加热 至55-60℃，冷却结晶，得到2-酮基-L-古龙酸钠晶体，液相色 谱测量其纯度为99.9％。
实施例4
将50g 2-酮基-L-古龙酸钠晶体和50g 98wt％的浓硫酸加入 到2.5L甲醇中，搅拌均匀，加热反应，反应温度为65℃，反 应时间为5h。
反应结束后，将3.2g碳酸氢钠溶液加入到反应液中，在70℃下反应2h，然后在加入2.7g碳酸钠溶液继续反应2h。
反应结束后，加入稀硫酸调节反应液pH值为2.5，冷却结 晶。将酸化后的溶液过滤、加入活性炭脱色得到维生素C溶液， 精制后，得到维生素C。维生素C的收率为92％，含量≥99.9％， 外观纯白色。
实施例5
(1)在配制罐中加入总量2/5配制量的注射用水(总量为 2000mL)，控制水温为25℃，搅拌条件下，充氮气饱和10min。
(2)加入127.5g碳酸氢钠、265g依照实施例4中方法制 得的维生素C，搅拌溶解。
(3)再依次加入2ml硫代甘油、1.5g焦亚硫酸钠及预先 用注射用水溶解的2.5g甲醛合次硫酸氢钠和预先用注射用水 溶解的20mg生物素，溶解后，添加用氮气饱和的注射用水至 全量，搅拌回流10分钟，配制的药液通二氧化碳。
(4)上述药液先用0.45μm滤器过滤，再用0.22μm滤器 过滤，取样，检测溶液的pH值为5.8～6.2(必要时用10％碳酸 氢钠溶液调节pH值)合格后，0.22μm除菌过滤器进行精滤。
(5)灌装于安瓿中，灌装前后均充氮气，熔封，灭菌，检 漏，灯检，得到注射液。
实施例6
(1)在配制罐中加入总量2/5配制量的注射用水(总量为 5000mL)，控制水温为20℃～30℃，搅拌条件下，充氮气饱和 10min。
(2)加入255g碳酸氢钠、530g依照实施例4中方法制得 的维生素C，搅拌溶解。
(3)再依次加入4ml硫代甘油、3.0g焦亚硫酸钠及预先 用注射用水溶解的5g甲醛合次硫酸氢钠和预先用注射用水溶 解的20mg生物素，溶解后，添加用氮气饱和的注射用水至全 量，搅拌回流10分钟，配制的药液通二氧化碳。
(4)上述药液先用0.45μm滤器过滤，再用0.22μm滤器 过滤，取样，检测溶液的pH值为5.8～6.2(必要时用10％碳酸 氢钠溶液调节pH值)合格后，0.22μm除菌过滤器进行精滤。
(5)灌装于安瓿中，灌装前后均充氮气，熔封，灭菌，检 漏，灯检，得到注射液。
实施例7
(1)在配制罐中加入总量2/5配制量的注射用水(总量为 2000mL)，控制水温为20℃～30℃，搅拌条件下，充氮气饱和 10min。
(2)加入255g碳酸氢钠、530g依照实施例4中方法制得 的维生素C，搅拌溶解。
(3)再依次加入4ml硫代甘油、3.0g焦亚硫酸钠及预先 用注射用水溶解的5g甲醛合次硫酸氢钠和预先用注射用水溶 解的20mg生物素，溶解后，添加用氮气饱和的注射用水至全 量，搅拌回流10分钟，配制的药液通二氧化碳。
(4)上述药液先用0.45μm滤器过滤，再用0.22μm滤器 过滤，取样，检测溶液的pH值为5.8～6.2(必要时用10％碳酸 氢钠溶液调节pH值)合格后，0.22μm除菌过滤器进行精滤。
(5)灌装于安瓿中，灌装前后均充氮气，熔封，灭菌，检 漏，灯检，得到注射液。
加速试验结果如下：(考察条件：温度40±2℃)
Figure BDA0003652288290000141
长期稳定性实验结果如下：(考察条件：温度25±2℃)
Figure BDA0003652288290000142
对比例
(1)向水中加入L-山梨醇、玉米浆、酵母膏和碳酸钙， 搅拌溶液得到L-山梨糖发酵培养基，其中，L-山梨醇的浓度为 280mg/mL、玉米浆的浓度为2.5mg/mL、酵母膏的浓度为0.4mg/mL、碳酸钙浓度为0.8mg/mL。
向L-山梨糖的发酵培养基中接入黑醋菌，于37℃发酵培养 34小时，发酵液中，L-山梨糖终浓度为300mg/mL。
(2)对发酵液进行膜过滤，微滤膜孔径大小为0.04μm。 滤液于80℃，真空度0.05MPa条件下浓缩30分钟；然后于60℃， 真空度0.1MPa条件下继续浓缩20分钟，得到浓缩后的L-山梨 糖发酵醪液，其中L-山梨糖的浓度为545mg/mL。
(3)将25L发酵培养基加入到80L发酵罐中，按30v/v％ 的接种量接入巨大芽孢杆菌和氧化葡萄糖酸杆菌的混合种子 液，当残糖降至20mg/mL时，开始缓慢加入浓缩后的L-山梨 糖发酵醪液，加入L-山梨糖过程中控制糖含量为20-22mg/mL； 同时，发酵过程中缓慢加入0.1mol/L的碳酸钠溶液，控制pH 在6.7-6.8。发酵过程中，起始温度为29℃，30小时后，温度 升至30℃，36小时后，温度升至31℃。发酵周期为46小时， 发酵终体积为52L。经检测，发酵液中2-酮基-L-古龙酸含量为 121mg/mL，摩尔转化率为89％。
(4)对(3)中的发酵液进行膜过滤，微滤膜孔径大小为 0.04μm，得到过滤后上清液。
加入适量活性炭，进行脱色10分钟，过滤除去活性炭。向 滤液中加入无水甲醇(滤液和甲醇的体积比为3:1)，搅拌加热 至55-60℃，冷却结晶，得到2-酮基-L-古龙酸钠晶体。
利用得到的2-酮基-L-古龙酸钠晶体按照实施例4中的方 法制备得到维生素C。维生素C的收率为90％，含量为98％。
以上结合具体实施方式和/或范例性实例对本发明进行了 详细说明，不过这些说明并不能理解为对本发明的限制。本领 域技术人员理解，在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以 对本发明技术方案及其实施方式进行多种等价替换、修饰或改 进，这些均落入本发明的范围内。本发明的保护范围以所附权 利要求为准。

Claims (10)

1.一种含生物素的维生素C注射液，所述注射液中包括维生素C和生物素，优选地，还包括碳酸氢钠、乙二胺四乙酸二钠、焦亚硫酸钠、甲醛合次硫酸氢钠、硫代甘油；溶解于注射液用水中。
2.根据权利要求1所述的注射液，其特征在于，所述注射液中，维生素C与注射用水的质量体积比为(150-650)g:(2000-5000)mL，优选为(200-600)g:(2000-5000)mL；
所述注射液中，生物素与注射用水的质量体积比为(10-35)mg:2000mL，优选为(15-30)mg:2000mL。
3.根据权利要求1所述的注射液，其特征在于，所述维生素C利用2-酮基-L-古龙酸或2-酮基-L-古龙酸钠酯化转化进行制备。
4.根据权利要求1至3之一所述的注射液，其特征在于，所述2-酮基-L-古龙酸钠采用包括以下步骤的方法进行制备：
步骤1、制备壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂和明胶改性蒙脱土絮凝剂；
步骤2、制备浓缩L-山梨糖发酵液；
步骤3、制备2-酮基-L-古龙酸钠发酵液；
步骤4、后处理2-酮基-L-古龙酸钠发酵液，得到2-酮基-L-古龙酸钠。
5.根据权利要求4所述的注射液，其特征在于，步骤1中，
所述壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂通过将壳聚糖溶液加入到蒙脱土水分散液中，加热反应，静置，分离沉淀物，干燥，研磨成粉制备得到；
所述明胶改性蒙脱土絮凝剂通过将明胶水溶液加入到蒙脱土水分散液中，加热反应，静置，分离沉淀物，干燥，研磨成粉，制备得到。
6.根据权利要求4所述的注射液，其特征在于，步骤2中，采用L-山梨醇在黑醋菌发酵作用下，经絮凝、沉降、过滤及浓缩后制备得到浓缩L-山梨糖发酵液。
7.根据权利要求6所述的注射液，其特征在于，步骤2中，
所述絮凝为向原始发酵液中加入壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂，加入后，壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂浓度为0.01-0.05g/mL，搅拌混合；再加入明胶改性蒙脱土絮凝剂的絮凝剂，加入后，明胶改性蒙脱土絮凝剂浓度为0.01-0.05g/mL，搅拌混合；
所述浓缩为将滤液于50-85℃，真空条件下浓缩，进行2-3次，得到浓缩L-山梨糖发酵液，其中L-山梨糖的浓度为500-550mg/mL。
8.根据权利要求4所述的注射液，其特征在于，步骤3中，将巨大芽孢杆菌和氧化葡萄糖酸杆菌的混合种子液接种到L-山梨糖发酵培养基中，当L-山梨糖残糖降至20-24mg/mL时，开始加入浓缩L-山梨糖发酵醪液。
9.根据权利要求4所述的注射液，其特征在于，步骤4中，
向2-酮基-L-古龙酸钠发酵液中加入壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂，加入后，壳聚糖改性蒙脱土絮凝剂浓度为0.01-0.08g/mL，优选为0.02-0.06g/mL，搅拌混合；再加入明胶改性蒙脱土絮凝剂，加入后，明胶改性蒙脱土絮凝剂浓度为0.01-0.08g/mL，优选为0.02-0.06g/mL，搅拌混合；加入氢氧化钠溶液，调节pH值至7.0-7.5，静置，分离，得到上清液和沉淀物；
对上清液进行膜过滤，微滤膜孔径大小为0.02-0.1μm，优选为0.04-0.08μm。
10.一种含生物素的维生素C注射液的制备方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：
(1)在配制罐中加入注射用水，控制水温为20℃～30℃，搅拌条件下，充氮气饱和；
(2)加入碳酸氢钠、维生素C，搅拌溶解；
(3)再依次加入硫代甘油、焦亚硫酸钠及预先用注射用水溶解的甲醛合次硫酸氢钠和预先用注射用水溶解的生物素，溶解后，添加用氮气饱和的注射用水至全量；
(4)上述药液先用0.4-0.6μm滤器过滤，再用0.2-0.3μm滤器过滤，pH值为5.5～6.5，再利用0.1-0.25μm除菌过滤器进行精滤；
(5)灌装安瓿中，熔封，灭菌，检漏，灯检，得到含生物素的维生素C注射液。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20080007202A (ko) * 2007-12-12 2008-01-17 디지팜(주) 키토산 비드를 이용한 비타민의 고정화
CN101780100A (zh) * 2010-02-10 2010-07-21 北京国仁堂医药科技发展有限公司 一种注射用水溶性维生素组合物及其制备方法
CN103113334A (zh) * 2013-03-14 2013-05-22 乔敏 用环保型蒙脱石絮凝剂分离维生素c发酵液中菌丝体的方法
CN103110656A (zh) * 2013-02-20 2013-05-22 山西普德药业股份有限公司 一种注射用水溶性维生素冻干制剂及其制备方法
CN103880136A (zh) * 2014-04-02 2014-06-25 武汉理工大学 环保型镁离子改性蒙脱石自来水絮凝剂及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20080007202A (ko) * 2007-12-12 2008-01-17 디지팜(주) 키토산 비드를 이용한 비타민의 고정화
CN101780100A (zh) * 2010-02-10 2010-07-21 北京国仁堂医药科技发展有限公司 一种注射用水溶性维生素组合物及其制备方法
CN103110656A (zh) * 2013-02-20 2013-05-22 山西普德药业股份有限公司 一种注射用水溶性维生素冻干制剂及其制备方法
CN103113334A (zh) * 2013-03-14 2013-05-22 乔敏 用环保型蒙脱石絮凝剂分离维生素c发酵液中菌丝体的方法
CN103880136A (zh) * 2014-04-02 2014-06-25 武汉理工大学 环保型镁离子改性蒙脱石自来水絮凝剂及其应用

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