CN115032311B - 基于一测多评法的心脑欣药物成分含量测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种基于一测多评法的心脑欣药物成分含量测定方法，以红景天苷为内标物进行一测多评，建立红景天苷与没食子酸、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯和对香豆酸的相对校正因子，通过相对校正因子计算心脑欣药物中各成分含量，该药物75％甲醇提取液入高效液相色谱仪，色谱条件为：采用WondaSil C18‑WR色谱柱；柱温28℃～35℃；流动相A为甲醇；流动相B为0.1％磷酸溶液；采用梯度洗脱；体积流量1.0mL/min进样20μL；检测波长275nm～290nm；本发明对心脑欣药物进行定量分析，所得结果与外标法接近，简单可靠、重复性好，为心脑欣药物质量标准评价提供依据。
Description
技术领域
本发明属于中药成分检测的技术领域，具体涉及一种基于一测多评法的心脑欣药物成分含量测定方法。
背景技术
心脑欣片是由景忠山国药(唐山)有限公司研发的，主要由天然红景天、枸杞和沙棘鲜浆组成，用于治疗气阴不足，瘀血阻滞所引起的头晕，头痛，心悸，气喘，乏力以及缺氧引起的红细胞增多症。由红景天、枸杞和沙棘组成，其中传统藏药红景天为复方君药，具有益气活血，通脉平喘之功，主要包括红景天苷、酪醇、没食子酸等化学成分；枸杞子有滋肝补肾、益精明目之功效，相关研究表明，枸杞子中咖啡酸、对香豆酸等有机酸类成分与其功效密切相关；沙棘有健脾消食，止咳祛痰，活血化瘀之功效，据相关研究表明没食子酸、槲皮素等可作为沙棘功效相关的质量标志物。但现行质量标准及相关文献中仅检测了红景天苷和甜菜碱的含量。心脑欣片作为一种由3味中药组成的复方中药，所含化学成分复杂，现行的质量标准无法较全面的反映心脑欣片的质量。因此,多成分的综合测定成为中药质量控制研究的重点，建立质量标志物群的“一测多评法”方法，成为解决指标成分单一问题的关键。为了提升心脑欣药物的质量控制水平，同时提高提升对该类药品进行综合性的评价，有必要对现有方法进行改进和优化。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种测定心脑欣片中多种成分的的检测方法。
为实现上述目，本发明采用的具体技术方案是：
一种基于一测多评法的心脑欣药物成分含量测定方法，其特征在于：以红景天苷为内参物进行一测多评，建立红景天苷与没食子酸、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯和对香豆酸的相对校正因子，通过相对校正因子计算心脑欣药物中心脑欣的成分含量，具体包括以下步骤：
S1：供试品溶液制备：取心脑欣药物适量，研细，精确称取1g，置于锥形瓶中，加入75％甲醇20mL，超声处理40min，放冷，75％甲醇补足减失的质量，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
S2：对照品溶液制备：称取没食子酸、红景天苷、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯、对香豆酸对照品，用50％甲醇超声定容，制得质量浓度分别为红景天苷0.45mg/mL、没食子酸0.1425mg/mL、酪醇0.1025mg/mL、绿原酸0.01mg/mL、咖啡酸0.009mg/mL、没食子酸乙酯0.0085mg/mL、对香豆酸0.0115mg/mL的混合对照品溶液；
S3：阴性样品溶液制备：按处方比例制备缺红景天、缺枸杞、缺沙棘的阴性样品，按S1方法分别制备缺红景天溶液、缺枸杞溶液和缺沙棘溶液；
S4：高效液相色谱色谱条件为：采用WondaSil C18-WR色谱柱；流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液，梯度洗脱为：0～20min，95％～80％B；20min～70min，80％～40％B；体积流量1.0mL/min；柱温28-35℃；检测波长275-290nm；进样20μL；
S5：将对照品溶液入高效液相色谱仪，在S4所述高效液相色谱条件下进行检测；
S6：以红景天苷为内标物，分别计算没食子酸、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯和对香豆酸的相对校正因子；公式为fk/s＝fk/fs＝(CkAs)/(CsAk)，其中Ck为待测成分浓度，Cs为内标物浓度，As为内标物峰面积，Ak为待测成分峰面积；
S7：将供试品溶液和三种阴性样品溶液分别入高效液相色谱仪进行检测，色谱条件与步骤S3相同，测定心脑欣药物中红景天苷的含量，然后根据红景天苷与没食子酸、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯和对香豆酸的相对校正因子，计算分别得到心脑欣药物中没食子酸、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯和对香豆酸的含量。
本发明建立的一测多评法测定心脑欣药物中七种成分含量的方法，符合方法学验证的要求，并操作简单，灵敏度高，测定准确，适用性强，可以很好地对心脑欣药物的质量进行定量分析，为全面评价该药品的质量标准提供依据。
所述心脑欣药物为心脑欣片、心脑欣胶囊或心脑欣丸；均是由红景天、枸杞子、沙棘鲜浆三味中药组配而成。
步骤S6中，红景天苷与没食子酸、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯、对香豆酸的相对校正因子分别为0.7937、0.4041、0.9273、1.9063、2.4212、0.4416。
附图说明
图1：本发明11批样品HPLC指纹图谱；
图2：本发明11批样品树状图；
图3：本发明主成分分析得分图；
图4：本发明对照品HPLC色谱图；
图5：本发明供试品HPLC色谱图；
图6：本发明缺红景天阴性样品HPLC色谱图；
图7：本发明缺枸杞阴性样品HPLC色谱图；
图8：本发明缺沙棘阴性样品HPLC色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
本发明使用的试剂和仪器如下：
1、仪器LC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津公司)；WondaSil C18-WR色谱(4.6mm×250mm，5μm)；KQ-300DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；ME204E102型电子分析天平(瑞士Mettler-Toledo公司)。
2、试剂与药物红景天苷(批号AF21060954，纯度98％)、酪醇(批号AF21051753，纯度98％)、没食子酸(批号AF20050701，纯度98％)、没食子酸乙酯(批号AF21022852，纯度98％)、绿原酸(批号，纯度)、咖啡酸(批号AF21020856，纯度98％)和对香豆酸(批号AF20041951，纯度98％)心脑欣片共11批(编号S1～S11，批号分别为201201、201202、201203、210101、210102、210103、211203、211204、211205、211206、211207)，由景忠山国药(唐山)有限公司提供。甲醇、磷酸为色谱纯；乙醇为分析纯；水为超纯水。
供试品溶液的制备：取心脑欣片适量，研细，精确称取1g。置于锥形瓶中，加入75％甲醇20mL，超声处理40min，放冷，75％甲醇补足减失的质量，0.45μm微孔滤膜过滤，即得。
对照品溶液的制备：精准称取各对照品5mg，50％甲醇超声定容，制得质量浓度分别为红景天苷0.45mg/mL、酪醇0.1025mg/mL、没食子酸0.1425mg/mL、没食子酸乙酯0.0085mg/mL、对香豆酸0.0115mg/mL、咖啡酸0.009mg/mL、绿原酸0.01mg/mL的混合对照品溶液。
阴性样品溶液的制备：按处方比例制备缺红景天、缺枸杞、缺沙棘的阴性样品，分别加入75％甲醇20mL，超声处理40min，放冷，75％甲醇补足减失的质量，0.45μm微孔滤膜过滤，制得缺红景天溶液、缺枸杞溶液、缺沙棘溶液。
色谱条件：WondaSil C18-WR色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液，梯度洗脱：0～20min，95％～80％B；20min～70min，80％～40％B；体积流量1.0mL/min；柱温28℃～35℃；检测波长275nm～290nm；进样20μL。
HPLC指纹图谱建立
精密度试验：取心脑欣片样品溶液(批号211203)适量，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进样测定6次，以红景天苷为参照，测得各共有峰相对保留时间、相对峰面积RSD分别小于0.35％、0.67％，表明仪器精密度良好。
稳定性试验：取同批次心脑欣片样品，于0、4、8、12、16、24h依次进样，以红景天苷为参照，测得各共有峰相对保留时间、相对峰面积RSD分别小于0.46％、1.74％，表明溶液在24h内稳定性良好。
重复性试验：取同批次心脑欣片样品，依次进样6次，以红景天苷为参照，测得各共有峰相对保留时间、相对峰面积RSD分别小于0.41％、1.89％，表明该方法重复性良好。
图谱生成及相似度评价：取11批心脑欣片样品S1～S11溶液，依次进样测定，将所得色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.130723版本)》，设定样品S1为参照，时间窗宽度0.1min，采用多点校正全谱峰匹配，共确定24个共有峰，平均值法生成指纹图谱共有模式(R)，见图1、图4，图中3号峰为没食子酸；7号峰为红景天苷；8号峰为酪醇；10号峰为绿原酸；11号峰为咖啡酸；13号峰为没食子酸乙酯；16号峰为对香豆酸。各批样品图谱与对照图谱的相似度分别为0.967、0.992、0.987、0.990、0.992、0.990、0.988、0.974、0.973、0.991、0.980、1.000，均大于0.960，以7号峰(红景天苷)为参照，测得共有峰相对保留时间、相对峰面积的RSD分别为0.03％～0.25％、1.92％～16.07％，表明不同批次样品所含成分差别不大，但各成分含量有一定差异。
聚类分析：采用SPSS 26.0软件，以共有峰相对峰面积为变量，组间连接和平欧式距离法绘图，见图2。由此可知，11批样品聚为3类，第一类为S1、S3、S4、S5、S6、S7、S11，第二类为S2,第三类为S8、S9、S10。
主成分分析：采用SPSS26.0软件进行主成分分析，提取得到特征值大于1的4个主成分，其累积方差贡献率达95.046％，说明所提取成分可以代表11批样品HPLC指纹图谱中各成分的大部分信息，见表1。
表1主成分特征值及方差贡献率
Tab.1 Characteristic values and variance contribution rates ofprincipal components
载荷矩阵可直观反映各个变量对主成分的综合贡献，结合表1特征值和方差贡献率、因子载荷矩阵进行考察，结果见表2，
表2主成分因子载荷矩阵
Tab.2 Loading matrices for principal components
| 峰号 | 主成分1 | 主成分2 | 主成分3 | 主成分4 |
| 1 | 0.484 | -0.489 | 0.129 | 0.522 |
| 2 | 0.057 | -0.280 | 0.530 | 0.787 |
| 3 | -0.048 | 0.994 | 0.010 | 0.046 |
| 4 | 0.619 | 0.497 | 0.499 | 0.143 |
| 5 | 0.223 | 0.191 | 0.915 | 0.262 |
| 6 | 0.116 | 0.188 | 0.941 | 0.247 |
| 7 | 0.174 | -0.070 | 0.161 | 0.952 |
| 8 | -0.116 | 0.940 | -0.032 | -0.311 |
| 9 | 0.164 | 0.968 | -0.021 | 0.159 |
| 10 | 0.241 | -0.297 | 0.846 | 0.634 |
| 11 | 0.038 | 0.128 | 0.148 | 0.973 |
| 12 | -0.032 | 0.189 | -0.949 | -0.218 |
| 13 | 0.168 | 0.239 | 0.936 | 0.174 |
| 14 | 0.336 | 0.813 | 0.457 | 0-.024 |
| 15 | -0.114 | 0.207 | 0.495 | 0.663 |
| 16 | 0.969 | 0.482 | 0.327 | -0.065 |
| 17 | 0.553 | 0.650 | 0.416 | -0.128 |
| 18 | 0.918 | 0.255 | -0.258 | -0.059 |
| 19 | 0.835 | 0.529 | 0.075 | -0.033 |
| 20 | 0.960 | 0.087 | 0.197 | 0.115 |
| 21 | 0.948 | -0.099 | 0.071 | 0.158 |
| 22 | 0.956 | -0.012 | 0.239 | 0.130 |
| 23 | 0.971 | 0.011 | 0.129 | 0.131 |
| 24 | 0.449 | 0.883 | 0.095 | -0.007 |
可知色谱峰16(对香豆酸)、18、20、21、22、23号对主成分1贡献率较大，色谱峰3(没食子酸)、8(酪醇)、9、10(绿原酸)号对主成分2贡献率较大，色谱峰5、6、13(没食子酸乙酯)号对主成分3贡献率较大，色谱峰7(红景天苷)、11(咖啡酸)号对主成分4贡献率较大。再采用SIMCA软件绘制得到主成分分析得分图，结果见图3，可知11批样品主要分成3类，与聚类分析结果一致。
系统适应性考察：精密称取对照品、供试品、阴性样品溶液适量，分别入高效液相色谱仪进行测定，结果见图4至图8。由此可知，各成分色谱峰分离度均符合要求，理论塔板数均大于5000，阴性无干扰。各峰对应分成为：3.没食子酸7.红景天苷8.酪醇10.绿原酸11.咖啡酸13.没食子酸乙酯16.对香豆酸。
线性关系考察：精确吸取对照品溶液4、12、20、28、36μL，依次进样。以进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标进行回归，结果见表。
表3各成分线性关系
Tab·3 Linear relationships of various constituents
精密度试验：精确吸取对照品溶液，依次进样6次，得到没食子酸、红景天苷、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯、对香豆酸峰面积RSD分别为0.23％、0.21％、0.34％、0.54％、0.67％、0.25％、0.28％，表明仪器精密度良好。
稳定性试验：取同批次心脑欣片溶液适量，于0、4、8、12、16、24h依次进样，测得没食子酸、红景天苷、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯、对香豆酸峰面积RSD分别为1.69％、0.91％、1.37％、1.58％、1.68％、1.41％、0.84％，表明溶液在24h内稳定性良好。
重复性试验：取同批次心脑欣片样品6份，进样测定，测得没食子酸、红景天苷、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯、对香豆酸峰面积RSD分别为1.89％、0.13％、0.28％、1.06％、1.83％、0.21％、0.20％，表明该方法重复性良好。
加样回收率实验：精确称取同批次心脑欣片样品0.25g，共7份，置于10mL容量瓶中，精密加入对照品溶液5mL，甲醇定容进样，计算回收率。结果，测得没食子酸、红景天苷、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯、对香豆酸平均加样回收率为104.02％、97.09％、96.76％、100.08％、97.12％、102.98％、98.82％，RSD为0.06％、0.35％、0.89％、0.06％、0.05％、1.48％、1.26％。
相对校正因子(fk/s)计算：精密吸取对照品溶液2、6、10、14、18μL，在上述色谱条件下进样测定，以红景天苷为内标物，计算其他6种成分fk/s，公式为fk/s＝fk/fs＝(CkAs)/(CsAk)，其中Ck为待测成分浓度，Cs为内标物浓度，As为内标物峰面积，Ak为待测成分峰面积。结果见表4。
表4各成分相对校正因子
Tab.4 Kelative correction factors of various constituents
样品含量测定：取11批样品，分别采用外标法、一测多评法计算含量，结果见表6。
表6各成分含量测定结果(mg/g)
Tab.6 Results of content determination various constituents(mg/g)
由此可知，2种方法所得结果无明显差异，表明一测多评法合理可行。
耐用性试验通过考察：Thermo Acclaim 120、Agilent Eclipse Plus C、WondaSilCWR色谱柱(4.6mmx250mm，5um)，以及Waters e2695、Agilent 1260、Shimadzu LC-20A色谱仪对各成分fk/s的影响，结果见表5，可知均无明显影响(RSD＜5％)。
表5不同仪器、色谱柱对相对校正因子的影响
Tab.5 Effects of different instruments and columns on relativecorrection factors
指标成分、内标选择
根据心脑欣片3味组方药材的主要成分及其药理作用，结合一测多评指标选择原则和中药质量标志物确认原则[14]，选择组方中红景天苷、酪醇、没食子酸、没食子酸乙酯、对香豆酸、咖啡酸和绿原酸作为指标成分[3-5]，并选定峰型较好的红景天苷作为内标。
提取条件选择
实验考察了供试品溶液的提取方式(回流、超声)、提取溶剂(25％、50％、75％甲醇)、提取时间(20、30、40min)和提取料液比(0.5g∶20m L,1g∶20m L,2g∶20m L)对各成分提取效率的影响，综合考虑效益成本及单位质量各色谱峰峰面积，最终确定供试品溶液制备方法为以75％甲醇按料液比1g∶20m L超声提取40min。
色谱条件
通过前期检索文献发现，红景天苷、酪醇、没食子酸等在275nm波长处吸收最大，而绿原酸在324nm处有最大吸收。在心脑欣片的指纹图谱研究中，通过与对照品的保留时间及紫外吸收波长比对，比较不同波长条件下各峰的响应值、分离度、对称性及拖尾因子等参数，最终选择275nm作为检测波长，在该波长下各峰分离度、峰形对称性良好。
本发明建立的一测多评法测定心脑欣药物中七种成分含量的方法，符合方案学验证的要求，并操作简单，灵敏度高，测定准确，适用性强，可以很好地对心脑欣药物的质量进行定量分析，为全面评价该药品的质量标准提供依据。
Claims (3)
1.一种基于一测多评法的心脑欣药物成分含量测定方法，其特征在于：以红景天苷为内参物进行一测多评，建立红景天苷与没食子酸、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯和对香豆酸的相对校正因子，通过相对校正因子计算心脑欣药物中心脑欣的成分含量，具体包括以下步骤：
S1：供试品溶液制备：取心脑欣药物适量，研细，精确称取1g，置于锥形瓶中，加入75％甲醇20mL，超声处理40min，放冷，75％甲醇补足减失的质量，0.45μm微孔滤膜过滤，即得；
S2：对照品溶液制备：称取没食子酸、红景天苷、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯、对香豆酸对照品，用50％甲醇超声定容，制得质量浓度分别为红景天苷0.45mg/mL、没食子酸0.1425mg/mL、酪醇0.1025mg/mL、绿原酸0.01mg/mL、咖啡酸0.009mg/mL、没食子酸乙酯0.0085mg/mL、对香豆酸0.0115mg/mL的混合对照品溶液；
S3：阴性样品溶液制备：按处方比例制备缺红景天、缺枸杞、缺沙棘的阴性样品，按S1方法分别制备缺红景天溶液、缺枸杞溶液和缺沙棘溶液；
S4：高效液相色谱色谱条件为：采用WondaSil C18-WR色谱柱；流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液，梯度洗脱为：0～20min，95％～80％B；20min～70min，80％～40％B；体积流量1.0mL/min；柱温28-35℃；检测波长275-290nm；进样20μL；
S5：将对照品溶液入高效液相色谱仪，在S4所述高效液相色谱条件下进行检测；
S6：以红景天苷为内标物，分别计算没食子酸、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯和对香豆酸的相对校正因子；公式为fk/s＝fk/fs＝(CkAs)/(CsAk)，其中Ck为待测成分浓度，Cs为内标物浓度，As为内标物峰面积，Ak为待测成分峰面积；
S7：将供试品溶液和三种阴性样品溶液分别入高效液相色谱仪进行检测，色谱条件与步骤S3相同，测定心脑欣药物中红景天苷的含量，然后根据红景天苷与没食子酸、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯和对香豆酸的相对校正因子，计算分别得到心脑欣药物中没食子酸、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯和对香豆酸的含量。
2.根据权利要求1所述基于一测多评法的心脑欣药物成分含量测定方法，其特征在于：所述心脑欣药物为心脑欣片、心脑欣胶囊或心脑欣丸；均是由红景天、枸杞子、沙棘鲜浆三味中药组配而成。
3.根据权利要求1所述基于一测多评法的心脑欣药物成分含量测定方法，其特征在于，步骤S6中，红景天苷与没食子酸、酪醇、绿原酸、咖啡酸、没食子酸乙酯、对香豆酸、的相对校正因子分别为0.7937、0.4041、0.9273、1.9063、2.4212、0.4416。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101441201A (zh) * | 2007-11-23 | 2009-05-27 | 上海雷允上药业有限公司 | 炮天红养身酒中葛根素和红景天苷的含量检测方法 |
| WO2017148426A1 (zh) * | 2016-03-03 | 2017-09-08 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法 |
| CN109633043A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-04-16 | 通化玉圣药业有限公司 | 一种红景天注射液hplc指纹图谱的建立方法及其标准图谱 |
| CN110297061A (zh) * | 2019-07-25 | 2019-10-01 | 广西中医药大学 | 采用一测多评法测定山苦荬中绿原酸、咖啡酸和木犀草苷含量的方法 |
-
2022
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101441201A (zh) * | 2007-11-23 | 2009-05-27 | 上海雷允上药业有限公司 | 炮天红养身酒中葛根素和红景天苷的含量检测方法 |
| WO2017148426A1 (zh) * | 2016-03-03 | 2017-09-08 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法 |
| CN109633043A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-04-16 | 通化玉圣药业有限公司 | 一种红景天注射液hplc指纹图谱的建立方法及其标准图谱 |
| CN110297061A (zh) * | 2019-07-25 | 2019-10-01 | 广西中医药大学 | 采用一测多评法测定山苦荬中绿原酸、咖啡酸和木犀草苷含量的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 一测多评法同时测定野菊花中5种有机酸;吴明侠;侯珊珊;张东霞;李会;崔永霞;;中成药;20161120(第11期);全文 * |
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| PB01 | Publication | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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