CN115029266B

CN115029266B - 一株干酪乳杆菌m502及其与副干酪乳杆菌的复合制剂和在抗幽门螺杆菌药物中的应用

Info

Publication number: CN115029266B
Application number: CN202210694479.8A
Authority: CN
Inventors: 缪锦来; 曹峻菡; 曲长凤; 何英英
Original assignee: First Institute of Oceanography MNR
Current assignee: First Institute of Oceanography MNR
Priority date: 2022-06-20
Filing date: 2022-06-20
Publication date: 2023-06-20
Anticipated expiration: 2042-06-20
Also published as: CN115029266A

Abstract

本发明公开了一株干酪乳杆菌M502及其与副干酪乳杆菌的复合制剂和在抗幽门螺杆菌药物中的应用。所述干酪乳杆菌M502的分类命名为Lactobacillus casei，保藏编号为CGMCC No.24862，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述干酪乳杆菌M502与核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的、保藏编号为CGMCC No.24861的副干酪乳杆菌M501联合使用，增强了两株菌株的抑制幽门螺杆菌的效果，两株菌株均具有较强的疏水性、自凝聚能力和共聚能力，在开发具有根除幽门螺杆菌作用的药物制剂等方面具有良好的应用前景。

Description

一株干酪乳杆菌M502及其与副干酪乳杆菌的复合制剂和在抗幽门螺杆菌药物中的应用

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体涉及一株干酪乳杆菌M502及其与副干酪乳杆菌的复合制剂和在抗幽门螺杆菌药物中的应用。

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)被世界卫生组织和国际癌症研究机构定为第Ⅰ类生物致癌因子，是感染慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌的危险因素。Hp感染率高，据报道，所有的Hp感染者均会发展成胃体-胃窦为主的胃炎或全胃炎，15％-20％的Hp感染者会发展成消化性溃疡，且Hp感染者发生胃癌和粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤的风险较未感染人群增高了2-6倍，这也是由Hp引发的胃癌死亡率较高的主要原因之一。目前常用的Hp的治疗是四联疗法，包括两种抗生素(阿莫西林、甲硝唑、克拉霉素、喹诺酮类的药物、四环素以及呋喃唑酮)、质子泵抑制剂和铋剂，长期使用会使Hp的耐药性迅速增加，且疗程长，见效慢，患者常伴随着呕吐、腹胀、腹泻和肠道菌群失调等严重毒副作用。对抗生素的耐药性、致病靶点的多样性以及药物的副作用迫切需要我们开发安全有效的根除Hp的天然活性物质。

益生菌是一种活性强、耐酸的微生物，在胃中的存活时间较长，通过调节免疫系统、平衡胃肠道菌群和促进营养吸收影响宿主健康。近年来，由于益生菌可以减少抗生素带来的副作用，其被广泛用于治疗和预防胃肠道疾病。已有研究证明强生乳杆菌La1、干酪乳杆菌Shirota、罗伊氏乳杆菌DSM 17938、唾液乳杆菌UCC119和鼠李糖乳杆菌GG等菌株对Hp感染的拮抗作用，但不同益生菌菌株乃至不同的复配组分对于治疗Hp的效果不尽相同，因此，对于治疗Hp的益生菌菌株的选择及不同菌株组合物、不同组分治疗Hp的协同作用效果仍需要的大量研究来证实。

发明内容

本发明为了解决现有技术中的缺陷和不足，提供了一株干酪乳杆菌M502及其与副干酪乳杆菌的复合制剂和在抗幽门螺杆菌药物中的应用。所述干酪乳杆菌M502和副干酪乳杆菌M501具有较强的疏水性、自凝聚能力和共聚能力，均在体外对Hp具有明显的抑制作用，且能根除Hp在胃部环境的定植，预防和治疗Hp感染相关病症。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供了一株干酪乳杆菌M502，其分类命名为Lactobacillus casei，保藏编号为CGMCC No.24862。

进一步的，所述干酪乳杆菌M502的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

进一步的，所述干酪乳杆菌M502具有较强的疏水性、自凝聚能力和共聚能力，其发酵菌液和发酵上清液均能在体外培养实验中抑制幽门螺杆菌的生长。

本发明还提供了一种复合制剂，所述复合制剂中包含干酪乳杆菌M502和副干酪乳杆菌。

进一步的，所述复合制剂是由干酪乳杆菌M502和副干酪乳杆菌的发酵菌液、发酵上清液或菌体重悬液以1:1～3的体积比混合而成的。

进一步的，所述副干酪乳杆菌采用的是保藏编号为CGMCC No.24861的副干酪乳杆菌M501，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了所述的干酪乳杆菌M502或者所述的复合制剂在用于制备抑菌剂中的应用。

进一步的，所述抑菌剂抑制的是幽门螺杆菌。

进一步的，所述抑菌剂中的干酪乳杆菌M502的活菌含量为1.0×10⁴CFU/mL～1.0×10¹⁰CFU/mL。

优选的，所述抑菌剂中的干酪乳杆菌M502的活菌含量为1.0×10⁶CFU/mL～1.0×10CFU/mL。

本发明还提供了所述的干酪乳杆菌M502或者所述的复合制剂在用于制备防治由幽门螺杆菌引起的疾病的药物中的应用。

进一步的，所述药物中包含干酪乳杆菌M502和/或副干酪乳杆菌的发酵菌液、发酵上清液或菌体重悬液。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：

本发明从鲜牛奶中筛选得到了干酪乳杆菌M502和副干酪乳杆菌M501，来源天然。两株菌株均具有较强的疏水性、自凝聚能力和共聚能力，对幽门螺杆菌具有明显的抑制效果。本发明还将两者联合使用，增强其幽门螺杆菌抑制效果，两种菌株还具有很好的胃肠定植能力，有利于其更好的发挥抑菌效果，因此，这两株菌及其混合菌剂能够作为开发具有清除幽门螺杆菌的抑菌剂，或者用于在胃部定植作用的药物进行深层的开发。

附图说明

图1是副干酪乳杆菌(A)和干酪乳杆菌(B)形态图。

图2是副干酪乳杆菌(A和B)和干酪乳杆菌(C和D)镜检图。

图3是副干酪乳杆菌和干酪乳杆菌的16S r DNA PCR产物琼脂糖凝胶电泳图。

图4是副干酪乳杆菌(A)和干酪乳杆菌(B)抑制幽门螺杆菌效果图。

图5是副干酪乳杆菌和干酪乳杆菌联合抑制幽门螺杆菌效果图。

具体实施方式

结合以下具体实例对本发明的技术方案作进一步详细的说明，但本发明要求保护的范围并不局限于实例表述的范围。

实施例1、菌株的培养和鉴定

一、菌株的培养

采用涂布法将100μL样品(鲜牛奶)接种于MRS琼脂培养基(配方为：蛋白胨10.0g/L、牛肉浸粉8.0g/L、酵母浸粉4.0g/L、葡萄糖20.0g/L、磷酸氢二钾2.0g/L、柠檬酸氢二铵2.0g/L、乙酸钠5.0g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.04g/L、琼脂14.0g/L、吐温80 1.0g/L、pH值6.5±0.2)，37℃微氧培养24-48h。用无菌接种环刮一环菌，采用三区划线的方法接种于新的MRS琼脂培养基，37℃微氧培养24-48h。挑取菌株典型特征、菌落较大、活性较强的单菌落接种于培养基进行划线纯化培养，37℃微氧培养24-48h。此步骤重复2-3次，直到划线平皿中菌落特征一致。挑取已纯化的单菌落液体培养24h，取出部分用甘油保藏法保藏，置于-80℃冰箱中。

二、菌株的鉴定

1、形态学特征

经培养挑选得到两株菌株，分别命名为M501和M502。观察菌株在MRS琼脂平板上的菌落形态特征，并对纯化后的目标菌株进行革兰染色镜检，观察细菌特征。

结果如图1和2所示，M501和M502菌株在MRS固体培养基上形成菌落，单菌落较小，直径约为1-2mm，呈圆形凸起状，表面光滑，边缘整齐，呈乳白色；革兰氏染色阳性，油镜下观察呈杆状，长短不均一，无芽孢，成单、成对或者成串存在。

2、生理生化特征

对分离的M501和M502菌株进行硫化氢试验、糖发酵试验、明胶液化试验等实验，观察菌株的生化特征。具体试验操作参考生化鉴定管的说明书。

结果如表1所示，菌株M501和M502均能够利用葡萄糖、乳糖和甘露糖。

表1：M501和M502的生理生化结果

注：+代表实验结果阳性，-代表实验结果阴性

3、16S rDNA鉴定

分别提取筛选的M501和M502菌株的单个菌落DNA作为模板进行16S rDNA扩增，通用引物为：

27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’；

1492R：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’。

PCR反应扩增结束后，取PCR产物进行1.5％的琼脂糖凝胶电泳进行质控。琼脂糖凝胶电泳检测结果如图3所示，目的条带大小均约为1500bp。将质控合格的PCR产物送至上海生工生物工程股份有限公司进行序列测定。M501的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，M502的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。在NCBI数据库中将得到的菌株序列进行BLAST比对，比对结果如表2所示。

表2：BLAST比对结果

结果如表2所示，M501菌株与副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)的同源性超过99％，鉴定其为副干酪乳杆菌，命名为Lactobacillus paracasei M501；M502菌株与干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)的同源性超过91％，鉴定其为干酪乳杆菌，命名为Lactobacillus casei M502。

将筛选到的菌株M501进行菌种保藏，所述副干酪乳杆菌M501的保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2022年05月09日；副干酪乳杆菌Lactobacillusparacasei M501的保藏编号为CGMCC No.24861。

将筛选到的菌株M502进行菌种保藏，所述干酪乳杆菌M502的保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2022年05月09日；干酪乳杆菌Lactobacillus caseiM502的保藏编号为CGMCC No.24862。

实施例2、自凝聚能力检测

菌株的自凝聚力越高，越有助于在细胞表面定植和生物膜的形成，进而有阻碍致病菌黏附的能力，自凝聚力与黏附力呈正相关。所以，自凝聚力也是菌株黏附力的一个间接筛选指标。

取发酵12-18h的副干酪乳杆菌M501和干酪乳杆菌M502的新鲜发酵液离心(3000r/min，15min)收集菌体，无菌PBS洗两次，1×PBS(pH 7.4)调整菌体浓度为10⁸CFU/mL制成重悬液。充分混匀后，于37℃静置孵育。在0、2、4、6、20、24h后取上层液体测定OD₆₀₀值。实验重复3次。结果如表3所示。

其中，A0：0h的OD₆₀₀值；At：不同取样时间点的OD₆₀₀值。

表3：M501和M502在0-24h的OD₆₀₀值和自凝聚率

由表3可知，菌株M501和M502的自凝聚能力随着时间的延长逐渐增强，在24h时分别可达68.73％和66.80％左右，上清呈现明显的澄清状态。菌株的自凝聚能力与其粘附能力密切相关，高凝聚力的菌株一般具有较高的粘附能力，这说明副干酪乳杆菌M501和干酪乳杆菌M502具有较高的粘附能力，可抑制幽门螺杆菌对胃肠道的黏附作用。

实施例3、副干酪乳杆菌和干酪乳杆菌与幽门螺杆菌的共聚能力检测

1、幽门螺杆菌的培养

将冻存的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori SS1，Hp SS1)从-80℃超低温冰箱取出，在室温下溶解后，复苏于含有10％胎牛血清的布氏肉汤培养基中，在三气培养箱(5％O₂、10％ CO₂、85％ N₂)37℃培养48h。按照此步骤活化2-3次后用于后续实验。

2、共聚能力检测

取新鲜的副干酪乳杆菌M501、干酪乳杆菌M502和幽门螺杆菌发酵液，4℃下10000rpm离心5min，用无菌PBS洗两次，调整菌体浓度为10⁸CFU/mL，分别取等体积的副干酪乳杆菌M501和干酪乳杆菌M502与幽门螺杆菌混合。旋涡振荡5min，以使乳酸菌与幽门螺杆菌混合均匀，于37℃恒温培养箱中静置孵育，在0、2、4、6、20、24h时吸取混合菌液的上层溶液在波长为600nm的光束下测定吸光值。实验重复3次。其中，0h时测得Hp SS1 OD _600nm＝0.6030。结果如表4所示。

其中，Ax：副干酪乳杆菌菌悬液或干酪乳杆菌菌悬液在0h处OD _600nm值；

Ay：幽门螺杆菌菌悬液在0h处OD _600nm值；

Am：混合上层溶液静置后的各个取样点的OD _600nm值。

表4：副干酪乳杆菌和干酪乳杆菌在不同时间的OD _600nm值及共凝聚率％

由表4可知，随着时间的延长，副干酪乳杆菌以及干酪乳杆菌与幽门螺杆菌的共凝聚率逐渐增强，在24h时可达63％左右，说明这两种菌都能有效抑制幽门螺杆菌的黏附。

实施例4、副干酪乳杆菌和干酪乳杆菌疏水能力检测

疏水作用力的大小，决定着细胞表面的疏水性强弱。表面疏水性在不同菌株之间存在差异，可间接反映出乳酸菌的黏附能力。用pH 7.2-7.4PBS调节菌悬液至OD₆₀₀ _nm＝0.6，向3mL的M501和M502菌悬液加入1mL疏水溶剂二甲苯，静置5min，充分振荡120s，再静置10min，取水相测其OD_600nm值。实验重复3次。疏水率按式计算：

其中，H：疏水率％；A₀：OD₆₀₀ _nm菌悬液初始吸光值；A₁：静置后的水相吸光值。

结果如表5所示，M501和M502菌悬液与二甲苯经过5min静置，充分振荡120s，再静置10min后，测得其疏水率分别为64％、53％左右，说明副干酪乳杆菌和干酪乳杆菌对二甲苯有很强的亲和力。菌株的粘附力与其表面疏水性和自凝聚能力高度相关，具有较强疏水性以及自凝聚能力的菌株往往具有更高的粘附能力，这表明副干酪乳杆菌和干酪乳杆菌在肠道中也可呈现较高的粘附性。

表5：副干酪乳杆菌和干酪乳杆菌在A₀和A₁的OD₆₀₀ _nm吸光值以及疏水率

实施例5、副干酪乳杆菌和干酪乳杆菌体外抑制幽门螺杆菌能力检测

采用牛津杯法观察M501和M502的发酵菌液、发酵上清液和菌体重悬液体外抑制HpSS1的效果，以空白无菌水为对照。

利用比浊法调整Hp SS1菌悬液浓度为10⁸CFU/mL，取100μL的菌液接种到哥伦比亚血琼脂平板后，用涂布棒涂布均匀。

取发酵12-18h的副干酪乳杆菌M501、干酪乳杆菌M502的新鲜发酵液离心(3000r/min，15min)收集上清液和菌体。菌体用无菌水洗两次，并用无菌水调整菌体浓度为10⁸CFU/mL制成重悬液。将灭菌后牛津杯等距置于涂布有Hp SS1的平皿上，各孔依次加入200μL无菌水、阿莫西林(AMO，0.01mg/mL)、克拉霉素(CLR，0.01mg/mL)、副干酪乳杆菌(干酪乳杆菌)发酵菌液、发酵上清液和菌体重悬液。将培养皿放入三气培养箱中，37℃恒温培养48-72h后取出。抑菌圈实验重复3次。参照文献药物敏感度判定标准：抑菌圈直径≥15mm为高度敏感；10mm≤抑菌圈直径＜15mm为中度敏感；6mm≤抑菌圈直径＜10mm为低度敏感；抑菌圈直径＜5mm或无明显抑菌圈则为不敏感。

结果如表6和图4所示，在本实验剂量及限定时间范围内，空白对照组周围没有抑菌环存在；样品试验组有明显抑菌环存在，特别是副干酪乳杆菌发酵菌液抑菌效果更好，其抑菌圈直径为20.34±1.05mm，证明体外Hp SS1对副干酪乳杆菌发酵菌液呈高度敏感状态；同时，副干酪乳杆菌发酵上清液也有较大的抑菌圈存在，但较发酵菌液相比，其抑菌圈较小，说明发酵产物具有一定的抑菌作用。干酪乳杆菌液呈现出副干酪乳杆菌相同的趋势，但总体效果亚于副干酪乳杆菌。阳性药物对照组阿莫西林和克拉霉素牛津杯周围均出现显著抑菌圈，表明Hp SS1对其不耐药，其抑菌效果显著。

表6：副干酪乳杆菌对Hp SS1的体外抑菌效果

实施例6、副干酪乳杆菌和干酪乳杆菌体外联合抑制幽门螺杆菌能力检测

采用牛津杯法观察M501和M502的发酵菌液、发酵上清液和菌体重悬液体外联合抑制Hp SS1的效果，以空白无菌水为对照。

取发酵12-18h的副干酪乳杆菌M501、干酪乳杆菌M502的新鲜发酵液离心(3000r/min，15min)收集上清液和菌体。菌体用无菌水洗两次，并用无菌水调整菌体浓度为10⁸CFU/mL制成重悬液。将灭菌后牛津杯等距置于涂布有Hp SS1的平皿上，各孔依次加入200μL无菌水、阿莫西林(AMO，0.01mg/mL)、克拉霉素(CLR，0.01mg/mL)、100μL副干酪乳杆菌和100μL干酪乳杆菌发酵混合菌液、各100μL发酵上清液混合液和各100μL菌体重悬液混合液。将培养皿放入三气培养箱中，37℃恒温培养48-72h后取出。抑菌圈实验重复3次。参照文献药物敏感度判定标准：抑菌圈直径≥15mm为高度敏感；10mm≤抑菌圈直径＜15mm为中度敏感；6mm≤抑菌圈直径＜10mm为低度敏感；抑菌圈直径＜5mm或无明显抑菌圈则为不敏感。

结果如表6和图5所示，在本实验剂量及限定时间范围内，空白对照组周围无抑菌环存在；阿莫西林阳性药对照组抑菌圈最大，其抑菌效果极其显著；干酪乳杆菌和副干酪乳杆菌发酵菌液混合液出现较大的抑菌圈(22.57±0.38mm)，抑菌程度优于两种菌的单独作用，说明两株菌可协同抑制幽门螺杆菌的活性；此外，两种菌的发酵上清液混合液也有较大的抑菌圈存在(16.00±0.17mm)，且协同作用效果明显。

以上实施例仅说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

序列表

<110> 自然资源部第一海洋研究所

<120> 一株干酪乳杆菌M502及其与副干酪乳杆菌的复合制剂和在抗幽门螺杆菌药物中的应用

<141> 2022-06-20

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1470

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

ccactggcgg cgtgcctaat actgcaagtc gaacgagttc tcgttgatga tcggtgcttg 60

caccgagatt caacatggaa cgagtggcgg acgggtgagt aacacgtggg taacctgccc 120

ttaagtgggg gataacattt ggaaacagat gctaataccg catagatcca agaaccgcat 180

ggttcttggc tgaaagatgg cgtaagctat cgcttttgga tggacccgcg gcgtattagc 240

tagttggtga ggtaatggct caccaaggcg atgatacgta gccgaactga gaggttgatc 300

ggccacattg ggactgagac acggcccaaa ctcctacggg aggcagcagt agggaatctt 360

ccacaatgga cgcaagtctg atggagcaac gccgcgtgag tgaagaaggc tttcgggtcg 420

taaaactctg ttgttggaga agaatggtcg gcagagtaac tgttgtcggc gtgacggtat 480

ccaaccagaa agccacggct aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt aggtggcaag 540

cgttatccgg atttattggg cgtaaagcga gcgcaggcgg ttttttaagt ctgatgtgaa 600

agccctcggc ttaaccgagg aagcgcatcg gaaactggga aacttgagtg cagaagagga 660

cagtggaact ccatgtgtag cggtgaaatg cgtagatata tggaagaaca ccagtggcga 720

aggcggctgt ctggtctgta actgacgctg aggctcgaaa gcatgggtag cgaacaggat 780

tagataccct ggtagtccat gccgtaaacg atgaatgcta ggtgttggag ggtttccgcc 840

cttcagtgcc gcagctaacg cattaagcat tccgcctggg gagtacgacc gcaaggttga 900

aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgaagc 960

aacgcgaaga accttaccag gtcttgacat cttttgatca cctgagagat caggtttccc 1020

cttcgggggc aaaatgacag gtggtgcatg gttgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg 1080

ggttaagtcc cgcaacgagc gcaaccctta tgactagttg ccagcattta gttgggcact 1140

ctagtaagac tgccggtgac aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaaa tcatcatgcc 1200

ccttatgacc tgggctacac acgtgctaca atggatggta caacgagttg cgagaccgcg 1260

aggtcaagct aatctcttaa agccattctc agttcggact gtaggctgca actcgcctac 1320

acgaagtcgg aatcgctagt aatcgcggat cagcacgccg cggtgaatac gttcccgggc 1380

cttgtacaca ccgcccgtca caccatgaga gtttgtaaca cccgaagccg gtggcgtaac 1440

ccttttaggg agcgagccgt ctaaaggggg 1470

<210> 2

<211> 1471

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

cagggtacca gtagagattg atcctggctc gatttctcgt aacatggtcg ccgtttggtt 60

tgagattcag catggaacga gtggcggacg ggtgagtaac acgtgggtaa cctgccctta 120

agtgggggat aacatttgga aacagatgct aataccgcat agatccaaga accgcatggt 180

tcttggctga aagatggcgt aagctatcgc ttttggatgg acccgcggcg tattagctag 240

ttggtgaggt aatggctcac caaggcgatg atacgtagcc gaactgagag gttgatcggc 300

cacattggga ctgagacacg gcccaaactc ctacgggagg cagcagtagg gaatcttcca 360

caatggacgc aagtctgatg gagcaacgcc gcgtgagtga agaaggcttt cgggtcgtaa 420

aactctgttg ttggagaaga atggtcggca gagtaactgt tgtcggcgtg acggtatcca 480

accagaaagc cacggctaac tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg tggcaagcgt 540

tatccggatt tattgggcgt aaagcgagcg caggcggttt tttaagtctg atgtgaaagc 600

cctcggctta accgaggaag cgcatcggaa actgggaaac ttgagtgcag aagaggacag 660

tggaactcca tgtgtagcgg tgaaatgcgt agatatatgg aagaacacca gtggcgaagg 720

cggctgtctg gtctgtaact gacgctgagg ctcgaaagca tgggtagcga acaggattag 780

ataccctggt agtccatgcc gtaaacgatg aatgctaggt gttggagggt ttccgccctt 840

cagtgccgca gctaacgcat taagcattcc gcctggggag tacgaccgca aggttgaaac 900

tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat tcgaagcaac 960

gcgaagaacc ttaccaggtc ttgacatctt ttgatcacct gagagatcag gtttcccctt 1020

cgggggcaaa atgacaggtg gtgcatggtt gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt 1080

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tatgacctgg gctacacacg tgctacaatg gatggtacaa cgagttgcga gaccgcgagg 1260

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aagtcggaat cgctagtaat cgcggatcag cacgccgcgg tgaatacgtt cccgggctag 1380

atacacaccg cccgtcacta ccatgagaca aggtacccct agagttcgat cctggctcca 1440

gtaagtcgta acaacgtatc tcatagaggg t 1471

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ggttaccttg ttacgactt 19

Claims

1.一株干酪乳杆菌M502，其特征在于，所述干酪乳杆菌M502的分类命名为Lactobacillus casei，保藏编号为CGMCC No.24862。

2.一种复合制剂，其特征在于，所述复合制剂中为干酪乳杆菌M502和副干酪乳杆菌；

所述副干酪乳杆菌采用的是保藏编号为CGMCC No.24861的副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）M501。

3.根据权利要求2所述的复合制剂，其特征在于，所述复合制剂是由干酪乳杆菌M502和副干酪乳杆菌M501的发酵菌液或者发酵上清液以1:1~3的体积比混合而成的。

4.权利要求1所述的干酪乳杆菌M502或者权利要求2所述的复合制剂在用于制备抑菌剂中的应用，其特征在于，所述抑菌剂抑制的是幽门螺杆菌。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述抑菌剂中的干酪乳杆菌M502的活菌含量为1.0×10⁴ CFU/mL~1.0×10¹⁰CFU/mL。

6.权利要求1所述的干酪乳杆菌M502或者权利要求2所述的复合制剂在用于制备防治由幽门螺杆菌引起的疾病的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物中包含干酪乳杆菌M502，或干酪乳杆菌M502和副干酪乳杆菌M501的发酵菌液、发酵上清液。