CN115024378B - 一种植物蛋白人造肉及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种植物蛋白人造肉，由大豆蛋白、胶红酵母、植物乳杆菌和紫色红曲，混合发酵后制得。通过胶红酵母、紫色红曲和植物乳杆菌三种菌株对大豆蛋白进行发酵，发酵后的大豆蛋白可以模拟红肉的色泽、具有与肉类类似的风味物质、色泽对应的色素热稳定性较高，另外植物乳杆菌可以使紫色红曲减少产生桔霉素，提高植物蛋白人造肉的食用安全性。本发明还涉及一种植物蛋白人造肉的制备方法，同样具有可以模拟红肉的色泽、具有与肉类类似的风味物质等优点。

Description

一种植物蛋白人造肉及制备方法

技术领域

本发明涉及植物蛋白发酵技术领域，尤其涉及一种植物蛋白人造肉及制备方法。

背景技术

纯素食主义的普遍趋势、对动物福利的日益担忧、对人类健康和环境的考虑，增加了人们对肉类替代品的需求。肉类替代品，主要是通过植物蛋白人造肉进行替代。

色泽是肉类影响消费者情绪反应的第一感知参数。色素按其来源可分为合成色素和天然色素。天然色素多源于植物(如花青素、类胡萝卜素)，部分来自动物(如胭脂红)与微生物(如红曲红)。

现有植物蛋白人造肉在模拟肉类色泽方面，主要是模拟红肉的色泽，例如采用血红蛋白着色，通过添加甜菜提取物、焦糖色素、胡萝卜色素、番茄酱、石榴果粉等也被来对植物蛋白进行着色。

但通过其它方式来对植物蛋白进行着色、以模拟红肉色泽的研究较少。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是针对现有技术的现状，提供一种同样能够模拟红肉色泽的植物蛋白人造肉。

本发明所要解决的第二个技术问题是针对现有技术的现状，提供一种植物蛋白人造肉的制备方法。

本发明解决上述第一个技术问题所采用的技术方案为：一种植物蛋白人造肉，其特征在于：由大豆蛋白、胶红酵母、植物乳杆菌和紫色红曲，混合发酵后制得。

混合发酵的比例可以有多种，优选地，混合发酵的比例是，每大豆蛋白5g，添加蒸馏水20ml，添加胶红酵母6ml、植物乳杆菌2ml、紫色红曲6ml。

添加的菌株的浓度可以有多种选择，优选地，添加的所述胶红酵母在吸光度600nm下的OD值为2；

添加的所述植物乳杆菌在吸光度600nm下的OD值为2；

添加的所述紫色红曲在吸光度600nm下的OD值为1。

大豆蛋白的形态的可以有多种，优选地，为了使大豆蛋白与用于发酵的菌株混合充分，所述大豆蛋白采用大豆蛋白粉。

用于发酵的菌株的来源可以有多种，优选地，所述植物乳杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.24034。

本发明解决上述第二个技术问题所采用的技术方案为：一种植物蛋白人造肉的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括

步骤S1、在吸光度为600nm的条件下，通过添加生理盐水或无菌水，分别将胶红酵母(31429)的OD值调整为2，将植物乳杆菌的OD值调整为2，将紫色红曲的OD调整0.5；

步骤S2、按照每大豆蛋白5g，添加蒸馏水20ml，添加所述步骤S1调OD值后的胶红酵母6ml、植物乳杆菌2ml、紫色红曲3ml后，进行混合，再进行发酵，发酵温度为30℃，发酵时间为24h，发酵所得的产物即为所述植物蛋白人造肉。

为了添加的菌株尽量纯净，在所述步骤S1之前，还包括

步骤1)、将胶红酵母培养于麦芽浸膏汤，将植物乳杆菌培养于MRS肉汤培养基；

步骤2)、将胶红酵母与麦芽浸膏汤分离，将植物乳杆菌与MRS肉汤分离。

这样添加的菌株较为纯净，以减少培养基的干扰。

将菌株与培养基分离的方式有多种，优选地，所述步骤2)具体包括

步骤2-1)、将胶红酵母和植物乳杆菌均在在6000r/min条件下离心5min，去掉对应的培养基；

步骤2-2)、再用生理盐水或无菌水分别对胶红酵母和植物乳杆菌进行清洗，去掉胶红酵母和植物乳杆菌表面的培养基。

通过离心将培养基和菌株分离，再清洗菌株，这样得到的菌株较为纯净。

紫色红曲的培养方式可以有多种，优选地，在所述步骤S1之前，还包括步骤3)、将紫色红曲培养于麦芽浸膏汤培养基。

与现有技术相比，本发明的优点在于：(1)通过胶红酵母、紫色红曲和植物乳杆菌三种菌株对大豆蛋白进行发酵，发酵后的大豆蛋白呈现类似红肉的色泽，即同样可以模拟红肉的色泽；

(2)另外，发酵后的大豆蛋白具有与肉类类似的风味物质，并且具有与生猪肉类似的色泽；

(3)发酵后的大豆蛋白的色泽对应的色素热稳定性较高，这样发酵后的大豆蛋白在加热后仍然可以保持类似红肉的色泽；

(4)通过胶红酵母、紫色红曲和植物乳杆菌复合发酵，植物乳杆菌可以使紫色红曲减少产生桔霉素，提高植物蛋白人造肉的食用安全性；

(5)得到的植物蛋白人造肉的pH在7.4左右，接近于中性、接近于新鲜肉的pH。

如此，有利于提高人们对植物蛋白人造肉的接受度，满足纯素食主义对植物蛋白人造肉的需求，也对动物福利、人类健康和环境保护起到了一定的促进作用。

一种植物蛋白人造肉的制备方法，通过设置胶红酵母、植物乳杆菌、紫色红曲三种菌株之间的配比，设置合适的发酵温度、发酵时间，可以在较短的时间内得到能够模拟生猪肉色泽、同时具有生猪肉形态的植物蛋白人造肉。

附图说明

图1为本发明实施例1中四种菌株发酵液图；

图2为本发明实施例1中三种菌株经过离心、洗涤、真空冻干得到的冻干粉图；

图3为本发明实施例1中三种菌株色素的200～700nm的波长扫描图；

图4为本发明实施例1中三种色素在不同温度下的色素稳定性图；

图5为本发明实施例2中料液比对大豆蛋白发酵的影响；

图6为本发明实施例2中不同温度下大豆蛋白发酵的效果图；

图7为本发明实施例2中接菌量对发酵产物的影响；

图8为本发明实施例2中接菌量对发酵产物的影响；

图9为本发明实施例2中混菌发酵的大豆蛋白发酵产物与生猪肉；

图10为本发明实施例2中不同菌株的加菌量的发酵产物在24h范围内色泽的变化；

图11为本发明实施例3中大豆发酵产物的风味物质在不同接菌的组别下各类物质的占比图；

图12为本发明实施例3中大豆蛋白发酵后的风味物质百分比图；

图13为本发明实施例4中大豆发酵产物中桔霉素含量的检测结果

图14为本发明实施例5中大豆发酵产物的pH的检测结果。

具体实施方式

以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1：菌株的选择及其特性研究

1.1菌株的选择

于中国工业微生物菌种保藏管理中心购买胶红酵母(菌株标号CICC 31429)、胶红酵母(菌株标号CICC 31030)、紫色红曲(菌株标号CICC 40156)、紫色红曲(菌株标号CICC5013)，为了便于描述，分别记为胶红酵母(31429)、胶红酵母(31030)、紫色红曲(40156)、紫色红曲(5013)。这4株菌都培养于麦芽浸膏汤(青岛高科技工业园海博生物技术有限公司)，观察这4种菌株发酵液的颜色。

4种菌株发酵液的颜色如图1所示，可见4种菌株都可以产生与红肉色泽类似的颜色(本实施例中，以生猪肉的色泽作为对比)，其中胶红酵母菌株(31429)和胶红酵母(31030)发酵液的颜色较浅，紫色红曲(40156)和紫色红曲(5013)发酵液的红色较深，但紫色红曲(5013)发酵液的颜色过深、与生猪肉的色泽距离较远。

为了能较好地模拟红肉色泽，挑选胶红酵母菌株(31429)、胶红酵母(31030)、紫色红曲(40156)作为后续实验的菌株。

1.2菌株特征性能研究

胶红酵母的最适培养基为麦芽浸膏汤，其原因有二，一是，该培养基成分简单易于与胶红酵母分离；二是，该培养基颜色较浅易于观察胶红酵母的生长情况。按照标准比例配置，在121℃的条件下，对培养基灭菌15min，冷却至室温。从-40℃的冰箱中，将胶红酵母(31429、31030)接种到麦芽浸膏汤(青岛高科技工业园海博生物技术有限公司)培养基中，于30℃下，转速为140r/min的摇床中培养2～3天；紫色红曲(40156)接种到麦芽浸膏汤培养基中于30℃下，转速为140r/min的摇床中培养7～8天；植物乳杆菌接种到MRS肉汤培养基(青岛高科技工业园海博生物技术有限公司)中，于37℃下培养8～12小时，使其达到对数生长期，接着在6000r/min条件下离心5min，将菌体与麦芽浸膏汤和MRS肉汤培养基分离，再用灭菌的去离子水清洗2～3遍即可得到较为纯净的菌体。将纯净的菌体冻干，即可得到冻干粉。冻干粉如图2所示。

分别称量0.1g的胶红酵母(31429)、胶红酵母(31030)、紫色红曲(40156)冻干粉，定容至100ml，在不同温度下水浴3.5h，用荧光光度计在200～700nm范围内扫描，确认色素的最大吸光度。

如图3所示，胶红酵母(31429)和胶红酵母(31030)的色素最大吸收波长为230nm左右，紫色红曲(40156)色素的最大吸收波长在410nm左右。

分别称量0.1g的胶红酵母(31429)、胶红酵母(31030)、紫色红曲(40156)冻干粉，定容至100ml，在常温、30℃、50℃、70℃、90℃和100℃的温度条件下，水浴3.5h，取200μl放入986孔板中测定吸光度。

如图4所示，温度对这三种菌株色素的影响性较小，在可接受的范围内。

菌株发酵后的大豆蛋白是半成品(相当于生的人造肉)，该半成品需要经过高温加热才能加工制作成最后的成品(相当于加热后熟的人造肉)。因为温度对上述菌株色素的影响较小，所以发酵后的大豆蛋白进行加热后，仍然可以保持原有色泽，从而保证植物蛋白人造肉色泽的稳定性。

实施例2：菌株与大豆蛋白固态混合物发酵的条件探索

2.1料液比对发酵大豆蛋白的影响

为了探究料液比对发酵大豆蛋白的影响，以大豆蛋白为固态发酵基质，按料水比(M/V，即每5g大豆蛋白粉/添加一定体积的蒸馏水，蒸馏水的体积用ml衡量)为5:16、5:18、5:20、5:22的比例，分别记为A组、B组、C组和D组，探究料水比对发酵大豆蛋白基质的影响。通常菌株生长所需的水分主要与初始含水量有关，水分含量过高或过低都不利于微生物的生长，所以适宜的含水量是菌株发酵的一个重要指标。

如图5所示，图5(A)、(B)水分含量过低导致大豆蛋白无法完全溶于水，从而自由水分含量少不利于菌株的生长，图5(D)水分含量过高，导致大豆蛋白无法成型，不利于后续发酵生产和模拟生猪肉的外形；图5(C)可见大豆蛋白分布均匀，成型状态良好，有利于模拟生猪肉的外形。

所以，选择料液比为5:20(即每5g大豆蛋白粉，添加20ml蒸馏水)作为大豆蛋白发酵的比例。

2.2温度对发酵大豆蛋白的影响

以大豆蛋白为固态发酵基质，按照上述得到的料水比(M/V)为5:20，即每5g大豆蛋白粉，添加蒸馏水为20ml的比例，制备大豆蛋白发酵基。接种体积为总混合液10％的胶红酵母(31429)(总混合液是指蒸馏水与胶红酵母的混合液)，设置不同温度的培养梯度(20℃、25℃、30℃、35℃)，在恒湿的条件下发酵24h，探究温度对大豆蛋白发酵的影响。

如图6所示，在低温条件下大豆蛋白基的形态保持良好，色泽与红色色泽相差较远，可能是由于温度过低不利于微生物的生长；在30℃条件下，大豆蛋白基的形态和色泽均与生猪肉的形态和色泽较为接近，可能是因为此温度适宜微生物的生长；在35℃条件下，大豆蛋白基的色泽与生猪肉的色泽较为接近，但形态与生猪肉的形态相差较远，可能由于温度过高，导致发酵过度。

因此，认为大豆蛋白的最适发酵温度为30℃。

2.4发酵时间对大豆蛋白的影响

以大豆蛋白为固态发酵基质，按照料水比(M/V)为5:20，即按照大豆蛋白5g，添加蒸馏水为20ml的比例制备大豆蛋白发酵基。在30℃恒温的条件下，接种对应菌种后(对照组不接种菌株，实验组分别接种胶红酵母31429+紫色红曲40156，其中各组中紫色红曲40156添加体积为总体积的15％，胶红酵母的添加体积为总体积的30％，探究发酵时间对大豆蛋白的影响。每隔4h用色差仪测定大豆蛋白的色泽，读取L值、a值、b值。“L”代表物体的明亮度，0-100表示从黑色到白色。“a”代表物体的红绿色：正值表示红色，负值表示绿色。“b”代表物体的黄蓝色：正值表示黄色，负值表示蓝色。

如表1所示，各实验组大豆蛋白发酵产物的a值(即红色物质)随着时间的增长均总体呈现上升的趋势，各实验组均大致在16h后，红色物质的色泽逐渐趋于稳定，均大致到24h色泽达到最大值。各实验组的b值(即黄色物质)随着发酵时间的增长均总体呈现下降趋势。

所以，认为大豆蛋白的最适发酵时间为24h。

表1在30℃条件下大豆蛋白发酵24h的色差变化

注：相同列不同字母表示显著性差异(p<0.05)a，b，c字母不同表示基本特性指数差异具有统计学意义(p<0.05)；

2.3接种量对发酵大豆蛋白色泽的影响

2.3.1单菌胶红酵母(31429)的加菌量对发酵大豆蛋白的影响

首先，将胶红酵母(31429)菌株在6000r/min条件下离心5min，再用生理盐水或无菌水清洗三遍，直至培养基被清洗掉，将离心所得的菌体中加入一定量的生理盐水或无菌水，取200ul混匀液到96孔板中，利用酶标仪在吸光度为600nm的条件下，调整OD值为2。以大豆蛋白为固态发酵基质，按照上述得到的最适料水比(M/V)为5:20(每5g大豆蛋白粉，添加20ml蒸馏水)，在温度为30℃的条件下，按照接菌量占总混合液(总混合液，指胶红酵母和蒸馏水的混合液)体积的30％、50％、80％进行接种，发酵24h。

如图7所示，随着胶红酵母(31429)接菌量的增加，发酵产物的色泽更加贴近生猪肉的色泽，但是接菌量从50％增加到80％时，色泽变化不太明显。

所以，认为胶红酵母31429的最佳接菌量范围为30％到50％。

2.3.2单菌紫色红曲(40156)对发酵大豆蛋白的影响

首先，将紫色红曲(40156)培养到OD为0.5。以大豆蛋白为固态发酵基质，按照上述得到的最适料水比(M/V)为5:20，在恒湿、温度为30℃的条件下，按照接菌量占总混合液体积的15％、25％、40％、50％进行接种，发酵24h。

如图8所示，随着紫色红曲(40156)加菌量的增加，发酵产物的色泽逐渐变成深红色，红到发紫，颜色过深。

因此，认为紫色红曲的最佳添加量范围为15％左右。

2.3.3混菌发酵对发酵大豆蛋白的影响

首先，将胶红酵母(31429)菌株和植物乳杆菌在6000r/min条件下离心5min，再用生理盐水/无菌水清洗三遍，直至培养基被清洗掉，将离心所得的菌体中加入一定量的生理盐水/无菌水，取200ul混匀液到96孔板中，利用酶标仪在吸光度为600nm的条件下，调整OD值为2。紫色红曲(40156)培养到菌液的OD值为0.5后直接添加菌液。以大豆蛋白为固态发酵基质，按照料水比(M/V)为5:20(即每5g蛋白粉添加20ml蒸馏水)，接种对应的菌株，混合液(混合液，是指蒸馏水和添加的菌株的混合物)的总体积相同，且均在恒湿、温度为30℃的条件下进行发酵，测定发酵产物的色泽。本发明按照胶红酵母(31429)、植物乳杆菌，紫色红曲(40156)三株菌组合的形式，共分为六组。

A组：为生鲜猪肉；

B组：为大豆蛋白；

C组：只接种胶红酵母(31429)；

D组：胶红酵母(31429)：植物乳杆菌＝3:1(每20ml蒸馏水，添加6ml胶红酵母，添加2ml植物乳杆菌)；

E组：只接种紫色红曲(40156)；

F组：紫色红曲(40156)：植物乳杆菌＝3:2(每20ml蒸馏水，添加3ml紫色红曲，添加2ml植物乳杆菌。

G组：胶红酵母(31429)：紫色红曲(40156)＝4:1(每20ml蒸馏水，添加胶红酵母6ml，紫色红曲3ml)；

H组：胶红酵母(31429)：植物乳杆菌：紫色红曲(40156)＝12:4:3(每20ml蒸馏水，添加胶红酵母6ml，植物乳杆菌2ml，紫色红曲6ml)。

各组均在恒温培养箱中30℃下，发酵24h。

发酵后的大豆蛋白如图9所示，可见空白组图9(B)的大豆蛋白会保持原来大豆偏黄的颜色，图9(C、D)的发酵产物的色泽不能达到生猪肉的色泽要求，图9(E～H)随着紫色红曲的加入，发酵产物的色泽均较为接近肉的色泽。并且H组，发酵产物的色泽最接近生猪肉，即胶红酵母(31429)、紫色红曲(40156)和植物乳杆菌按12:4:3与大豆蛋白粉混合发酵的发酵产物的色泽最接近生猪肉。

如图10所示，各图的趋势基本是：随着发酵时间的增长，a*值有明显的增加，b*值明显下降，在20h后发酵产物的色泽逐渐达到稳定。

实施例3：发酵产物的风味物质分析

3.1顶空固相微萃取条件

上述实施例探索得到的发酵条件(料水比5:20，胶红酵母占总体积的30％，紫色红曲占总体积的15％，植物乳杆菌占总体积的10％)，将菌株与大豆蛋白粉混合发酵，设置空白组、胶红酵母31429、紫色红曲40156、紫色红曲40156+植物乳杆菌、胶红酵母31429+植物乳杆菌、胶红酵母31429+紫色红曲40156、胶红酵母31429+紫色红曲40156+植物乳杆菌，分别测定发酵产物的具体成分。

称量5g发酵产物，加入5ml生理盐水或无菌水，放置于25ml的螺口样品瓶中，将螺口样品密封，放在室温下平衡15min。将SPME萃取头插入瓶中，使之处于样品上方一定距离处，避免萃取头接触到样品。推出固相微萃取头在45℃下恒温顶空吸附45min。然后将固相微萃取头插入气相色谱质谱联用仪，在250℃条件下解析5min。

3.2色谱-质谱条件

色谱条件：色谱柱Agilent 19091S-433UI:0650452H(30m×250μm×0.25μm)，升温程序的起始柱温40℃，保持3min，以8℃/min上升至250℃，保留1min，以15℃/min上升至260℃，保持3min；载气为He气，载气流量1.2ml/min；恒压40kPa，不分流；进样口温度与接口温度均为250℃。

质谱条件：电子轰击为EI离子源；离子温度200℃；电子能量70eV；质量扫描范围(m/z)50-500u。通过解谱分析，从普库中检索出化合物进行整合。

如表3所示，共检测了72种物质，三种菌株复合发酵后得到的植物蛋白人造肉的物质种类丰富，如检测到了烷烃(辛烷)、醛类(壬醛、己醛、苯甲醛、乙醛)、酮类(3-乙基环戊酮)以及呋喃类(2-正戊基呋喃)等物质。据文献报道，醇类、醛类、酮类、酸类物质、呋喃类是肉类的特征风味物质。肉类(例如猪肉、牛肉、鸡肉等)的脂肪氧化形成六醛、七醛、辛醛、壬醛、辛烷、苯甲醛和1-辛烯-3-醇等物质，这些物质对熟肉的风味起到重要作用。而本发明实施例三种菌株混合发酵后得到的植物蛋白人造肉因为具有检测到的这些风味物质，从而可以模拟肉类的风味。

如图11所示，未加菌的空白组的发酵产物中醛类物质含量高，添加菌的各实验组发酵产物的风味物质中醇类物质含量最高。

在图12所示，相比其余组，三株菌混合发酵后的发酵产物中，醇类、醛类、酮类、酸类、呋喃类的占比最均匀。

综上，在不同发酵组别中，三种菌株混合发酵得到的发酵产物(即植物蛋白人造肉)具有肉类的特征风味物质，并且醇类、醛类、酮类、酸类、呋喃类占比最均匀，说明三株菌的混合发酵最有利于肉类风味物质的形成，也就是在风味上，三种菌株混合发酵后得到的植物蛋白人造肉最接近真实肉类。

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实施例4：发酵产物中桔霉素的含量测定

由于紫色红曲能够产生桔霉素，桔霉素是一种作用于肾脏的毒素，对人体健康造成危害，所以需要消除或者抑制桔霉素的产生。称量1g发酵24h的发酵产物(其为含有40156菌株的组别)溶于5ml的生理盐水或无菌水中捣碎，在3000r/min条件下离心10min取上清，然后按照ELISA试剂盒(上海桥社生物科技有限公司)的步骤对发酵产物中的桔霉素测定。

如图13所示，加入植物乳杆菌后可以有效抑制桔霉素的产生。该发酵产物桔霉素最高含量为1.98ppb，通过结果发现31429胶红酵母可以降低产物桔霉素的含量。

实施例5：发酵产物的pH测定

称量1g的发酵产物，溶于5ml的生理盐水或无菌水中捣碎，在常温下测定样品的pH值。如图14所示，发酵产物的pH值在中性范围，新鲜肉的pH也是处于中性范围。

Claims (8)

1.一种植物蛋白人造肉，其特征在于：由大豆蛋白、胶红酵母、植物乳杆菌和紫色红曲，混合发酵后制得；

所述植物乳杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMC-C No.24034；

所述植物蛋白人造肉采用以下制备方法制得：

所述制备方法包括

步骤S1、在吸光度为600 nm的条件下，通过添加生理盐水或无菌水，分别将菌株标号为CICC 31429的胶红酵母的OD值调整为2，将植物乳杆菌的OD值调整为2，将菌株标号为CICC40156的紫色红曲的OD调整0.5；

步骤S2、按照每大豆蛋白5g，添加蒸馏水20ml，添加所述步骤S1调OD值后的胶红酵母6ml、植物乳杆菌2 ml、紫色红曲6ml后，进行混合，再进行发酵，发酵温度为30℃，发酵时间为24h，发酵所得的产物即为所述植物蛋白人造肉。

2.根据权利要求1所述的植物蛋白人造肉，其特征在于：混合发酵的比例是，每大豆蛋白5g，添加蒸馏水20ml，添加胶红酵母6 ml、植物乳杆菌2 ml、紫色红曲6ml。

3.根据权利要求2所述的植物蛋白人造肉，其特征在于：添加的所述胶红酵母在吸光度600 nm下的OD值为2；

添加的所述植物乳杆菌在吸光度600 nm下的OD值为2；

添加的所述紫色红曲在吸光度600 nm下的OD值为0.5。

4.根据权利要求1~3中任一项所述的植物蛋白人造肉，其特征在于：所述大豆蛋白采用大豆蛋白粉。

5.一种植物蛋白人造肉的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括

步骤S1、在吸光度为600 nm的条件下，通过添加生理盐水或无菌水，分别将菌株标号为CICC 31429胶红酵母的OD值调整为2，将植物乳杆菌的OD值调整为2，将菌株标号为CICC40156的紫色红曲的OD调整0.5；

步骤S2、按照每大豆蛋白5g，添加蒸馏水20ml，添加所述步骤S1调OD值后的胶红酵母6ml、植物乳杆菌2 ml、紫色红曲6ml后，进行混合，再进行发酵，发酵温度为30℃，发酵时间为24h，发酵所得的产物即为所述植物蛋白人造肉。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：在所述步骤S1之前，还包括

步骤1)、将胶红酵母培养于麦芽浸膏汤，将植物乳杆菌培养于MRS肉汤培养基；

步骤2)、将胶红酵母与麦芽浸膏汤分离，将植物乳杆菌与MRS肉汤分离。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述步骤2）具体包括

步骤2-1)、将胶红酵母和植物乳杆菌均在在6000 r/min条件下离心5 min，去掉对应的培养基；

步骤2-2)、再用生理盐水或无菌水分别对胶红酵母和植物乳杆菌进行清洗，去掉胶红酵母和植物乳杆菌表面的培养基。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：在所述步骤S1之前，还包括步骤3)、将紫色红曲培养于麦芽浸膏汤培养基。