CN115024335B - 一种抗百合叶斑病制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及微生物生物技术领域，特别的涉及一种抗百合叶斑病的金色毛壳菌微生物制剂，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCC NO.40190。本发明通过平板对峙法验证金色毛壳菌对拟盘多毛孢菌的拮抗作用，并且将金色毛壳菌发酵产物适用于百合叶斑病植株上，在1×106cfu/mL的施用浓度下，抑制率与65%代森锌800倍或者1000倍稀释液效果接近，显示了金色毛壳菌对于百合叶斑病防治的巨大的潜力。为百合叶斑病的生物防治提供了思路和相关制剂。

Description

一种抗百合叶斑病制剂
技术领域
本发明涉及微生物生物技术领域，特别的涉及一种抗百合叶斑病的金色毛壳菌微生物制剂。
背景技术
百合原产于中国，主要分布在亚洲东部、欧洲、北美洲等北半球温带地区，已发现有至少120个品种。近年更有不少经过人工杂交而产生的新品种，如亚洲百合、香水百合、火百合等。鳞茎含丰富淀粉，可食，亦作药用。百合叶斑病是一种较为常见的危害百合的生长和美观的疾病，百合叶斑病主要危害百合茎、叶，但是花蕾及刚萌发的幼芽也可受害。叶片受害后出现圆形病斑，微下陷，严重时，形成大病斑，致使叶片上早期干枯、茎秆受害、病部易腐烂并从此处折断。叶斑病菌在病残体或随之到地表层越冬,翌年发病期随风、雨传播侵染寄主。经研究发现，拟盘多毛孢菌是百合叶斑病的元凶之一，该菌菌落圆形，边缘不整齐，菌丝紧密细致，灰白色至淡黄褐色，由内向外渐淡，具少许轮纹，分泌淡黄色色素。
金色毛壳菌（Chaetomium aureum）具有很强的拮抗效果和生防潜力。早在1975年，即有科学家就对金色毛壳菌的固氮作用开始了研究工作。也有文献报道，从核桃叶片上分离得到金色毛壳菌对辣椒疫霉的菌丝生长具有很强的抑制作用，能防治辣椒疫病的发生；金色毛壳菌对水稻稻瘟病也有较好的防治作用。金色毛壳菌、渐狭蜡蚧菌和少根根霉菌可用于烟蚜的生物防治。
然而，目前百合叶斑病菌多是采用化学试剂进行防治，例如使用波尔多液或65%代森锌，化学试剂的使用不可避免的会造成环境污染和残留，而且长期使用也会造成生物进化选择压力产生抗性，以至于后期需要施用的量越来愈大。而微生物生物防治高效、无毒无害、无污染等诸多特点，能有效的解决 3R（Resistance, Residue, Resurgence）问题，促进农业可持续发展。
发明内容
筛选一种能够对百合叶斑病进行生物防治的微生物成为了人们亟待解决的技术问题，为此，本发明人通过长期的筛选和试验发现，金色毛壳菌或其孢子具有拮抗拟盘多毛孢菌作用，进而发挥抗百合叶斑病的作用。为此，本发明提供如下技术方案：
本发明从玉竹块茎上分离得到金色毛壳菌类菌株，经鉴定属于金色毛壳菌，所述金色毛壳菌已经保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2022年05月07日，保藏编号为CGMCC NO.40190。
本发明的一个方面，本发明还提供了金色毛壳菌或其孢子在制备抗百合叶斑病制剂中的应用，所述制剂中包括金色毛壳菌或其孢子，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCCNO.40190。
本发明的一个方面，本发明提供了一种抗百合叶斑病制剂，所述制剂中包括金色毛壳菌或其孢子，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCC NO.40190。优选的，发明的制剂中的金色毛壳菌以发酵液的形式存在。更优选的，制剂中的金色毛壳菌以发酵液冻干粉的形式存在。制备成为冻干粉可以方便的包装和使用，而且能够更佳的保护微生物制剂的稳定性。当然，本发明的制剂还可以是颗粒剂、悬浮剂、可湿性粉剂等适用于使用的剂型。
本发明的一个方面，本发明提供了一种抗百合叶斑病制剂，所述制剂中包括金色毛壳菌或其孢子以及药学上可以接受的助剂，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCCNO.40190。所述助剂包括载体、表面活性剂、保护剂、营养助剂中的一种或多种。载体包括无机载体、有机载体中的一种多种，表面活性剂在微生物农药中起到乳化、湿润、增溶、消泡、起泡、稳定等作用。保护剂主要作用是保护微生物菌体在制剂和保存过程中不受到损伤或者减少损伤。营养助剂主要为微生物菌体提供营养物质，提高微生物的繁殖能力。
本发明的一个方面，本发明提供一种抗百合叶斑病制剂，所述制剂中还包括其他可以抗百合叶斑病的微生物。
本发明的一个方面，本发明提供一种抗百合叶斑病制剂，所述制剂中还包括其他可以抗百合叶斑病的化学制剂。
本发明的一个方面，本发明还提供了金色毛壳菌或其孢子抗百合叶斑病中的应用，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCC NO.40190。
有益效果
本发明通过试验证实和发现了金色毛壳菌能够拮抗拟盘多毛孢菌，进而发挥抗百合叶斑病的作用，在106cfu/mL的剂量下，防治有效率达到了68.4%，为百合叶斑菌的生物防治提供新的思路，能够为百合病菌的防治起到了良好的社会经济效应。
附图说明
图1为平板对峙法验证金色毛壳菌对拟盘多毛孢菌的拮抗作用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。本发明所述技术方案，如未特别说明均为本领域的常规方式，所述试剂或材料，如未特别说明，均为常规试剂，来源于商业渠道。
金色毛壳对比菌HTC：源自山东农业大学高克祥课题组。
实施例1 金色毛壳菌对拟盘多毛孢菌的拮抗作用
按照常规植物内生菌分离方法从玉竹块茎上分离得到金色毛壳菌类菌株，经鉴定属于金色毛壳菌，并进行菌种保藏。将金色毛壳菌培养基在PDB培养基（马铃薯蔗糖培养基）中培养，PDB 培养基配方组成马铃薯 200g，蔗糖 20g，蒸馏水1000 mL。从百合叶斑上进行病原菌分离，经形态鉴定为分离的拟盘多毛孢菌，病菌在 PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）上培养，备用。PDA培养基组成：马铃薯 200g，葡萄糖 20g，琼脂 20g，蒸馏水 1000mL。
平板对峙法验证金色毛壳菌对拟盘多毛孢菌的拮抗作用。即将各菌用直径为5mm的打孔器制成菌饼，拟盘多毛孢菌（病原菌）接种在PDA平板中间，四周放上金色毛壳菌（拮抗菌）。拮抗菌距离培养皿周围约为10mm,两种菌接种距离为30mm，每种处理重复3次。于26℃培养3天。同时，以只接种病原菌的平皿作为对照组，每个处理重复3 次。待对照组病原菌菌落长满培养皿时，用毫米测度尺测定菌落直径。根据实验组两菌落的生长速度、菌落之间有无抑制带、菌落边缘的菌丝是否发生稀疏和萎缩的现象来判断生防菌对病原菌是否有拮抗作用，基于实验组和对照组的测量数据计算金色毛壳菌对于拟盘多毛孢菌的生长抑制率。参见图1，金色毛壳菌对于拟盘多毛孢菌的生长起到了明显的抑制作用。经过测量计算，毛壳菌对于拟盘多毛孢菌的生长抑制率达到了70.1%，有较为明显的抑制作用。
实施例2 金色毛壳菌对抗百合叶斑病的作用
将金色毛壳菌接种到PDB 培养基中，28℃振荡培养10天，将发酵液用纱布过滤，保存在三角瓶中，密封，4℃冰箱保存，备用。
取植株大小、高度、粗细相近的百合160株，分为8组，每组20株，分别喷施金色毛壳菌发酵液2.5×107cfu/mL、金色毛壳菌发酵液2.5×106cfu/mL、金色毛壳菌发酵液2.5×105cfu/mL，65%代森锌可湿性粉剂800倍和1000倍稀释液、多利维生-寡雄腐霉（捷克生物制剂国际股份有限公司）、金色毛壳对比菌HTC 2.5×106cfu/mL、灭菌水；套透明塑料袋保湿，3天后，用接种针将拟盘多毛孢菌（1×107cfu/mL）接种在百合叶片上，套袋保湿，接种7天后，用十字交叉法，测量病斑大小，计算拮抗效果，计算公式如下：
组别 <![CDATA[金色毛壳菌发酵液（2.5×10<sup>7</sup>cfu/mL）]]> <![CDATA[金色毛壳菌发酵液（2.5×10<sup>6</sup>cfu/mL）]]> <![CDATA[金色毛壳菌发酵液（2.5×10<sup>5</sup>cfu/mL）]]> 65%代森锌800倍稀释液 65%代森锌1000倍稀释液 多利维生-寡雄腐霉 金色毛壳对比菌HTC 无菌水
抑制率 67.2% 66.4% 55.6% 74.3% 71.5% 72.3% 52.7% /
表1 金色毛壳菌发酵液对百合叶斑病的抑制效果
由表1可见，金色毛壳菌对于拟盘多毛孢菌引起的百合叶斑病具有比较良好的拮抗抑制作用，在2.5×106cfu/mL较高浓度下，金色毛壳菌的抑制效果与使用65%代森锌800倍或者1000倍稀释液效果接近，综合使用成本106cfu/mL是一个较为理想的使用的浓度，显示了金色毛壳菌对于拟盘多毛孢菌引起的百合叶斑病的防治具有巨大的潜力。
以上内容是结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明，不能认定本发明具体实施只局限于这些说明，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的构思的前提下，还可以做出若干简单的推演或替换，都应当视为属于本发明所提交的权利要求书确定的保护范围。

Claims (7)

1.一种抗百合叶斑病制剂，其特征在于，所述制剂中包括金色毛壳菌或其孢子，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCC NO.40190。
2.根据权利要求1所述制剂，其特征在于，所述制剂中的金色毛壳菌以发酵液的形式存在。
3.根据权利要求2所述制剂，其特征在于，所述制剂中的金色毛壳菌以发酵液冻干粉的形式存在。
4.根据权利要求1-3任一所述的制剂，其特征在于，所述制剂还包括药学上可以接受的助剂或其他的抗百合叶斑病的微生物。
5.根据权利要求4所述的制剂，所述助剂包括载体、表面活性剂、保护剂、营养助剂中的一种或多种。
6.金色毛壳菌或其孢子在制备抗百合叶斑病制剂中应用，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCC NO.40190。
7.金色毛壳菌或其孢子在抗百合叶斑病中的应用，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCCNO.40190。
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