CN115029253B - 金色毛壳菌或其孢子在抗黄精叶斑病中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物生物技术领域，特别的涉及金色毛壳菌或其孢子在抗黄精叶斑病中的应用，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCC NO.40190，以及抗黄精叶斑病的生物制剂。本发明通过病原菌分离发现炭疽菌是黄精叶斑病的重要病菌之一，采用平板对峙法验证了金色毛壳菌对炭疽菌的拮抗作用，106cfu/ml浓度的金色毛壳菌的使用即能够在炭疽菌引起的黄精叶斑病中的防治中发挥较好的效果，为提高黄精品质保障黄精产业的健康发展作出了贡献。
Description
技术领域
本发明涉及微生物生物技术领域，特别的涉及金色毛壳菌或其孢子在抗黄精叶斑病中的应用，以及抗黄精叶斑病的生物制剂。
背景技术
黄精在《中国药典》2015 年版记载黄精为滇黄精 m. kingianum Coll. etHemsl.、黄精 m. sibiricum Red. 或多花黄精m. cyrtonema Hua的干燥根茎。黄精是我国传统的中药材，广泛分布于除我国南方热带以外的广大地区，也是农民大量种植的一种中药品种。黄精药食同源，药性温和，味甘平，无毒，具有补脾润肺、补中益气、养阴生津、滋肾填精等功效，主要有效成分为黄精多糖。黄精与黄精形态形似，常被混淆使用。黄精叶斑病是一种严重影响广大中药材种植者的植物病害，导致种植黄精中多糖含量的降低，影响黄精的品质。黄精叶斑病初期在叶片表面出现圆形或不规则深褐色病斑，随着进程加深病斑不断扩大，病情严重时可导致全株叶片枯死。叶斑病的致病因素较多包括真菌、细菌、病毒等等，而炭疽菌也是叶斑病的一种重要的致病菌。
金色毛壳菌（Chaetomium aureum）具有很强的拮抗效果和生防潜力。早在1975年，即有科学家就对金色毛壳菌的固氮作用开始了研究工作。也有文献报道，从核桃叶片上分离得到金色毛壳菌对辣椒疫霉的菌丝生长具有很强的抑制作用，能防治辣椒疫病的发生；金色毛壳菌对水稻稻瘟病也有较好的防治作用。金色毛壳菌、渐狭蜡蚧菌和少根根霉菌可用于烟蚜的生物防治。
然而，目前黄精叶斑病的防治主要采用10%苯醚甲环唑水分散颗粒剂、波尔多液、多菌灵、50%甲基硫菌灵等化学药剂。化学农药的使用容易导致环境污染和生态系统的干扰，而且极易产生抗药性，大量的农药使用还导致黄精的农药残留超标。近年来，多种微生物农药兴起，在防治病、虫等方面展现了良好的效果。CN202111311497.5公开了通过筛选发现了一株芽孢杆菌，通过使用该芽孢杆菌浸泡黄精根茎或黄精种子的方式可以有效提高黄精茎点霉叶斑病的抵抗效果，对黄精的茎点霉叶斑病有较好的防治效果，对黄精茎点霉叶斑病病原菌的抑制率达到了61.5％。
发明内容
开发更多有效的能够防治黄精叶斑病的微生物，对于黄精产业的健康发展，提高种植黄精的品质，具有重要的意义。为此，本发明人通过长期的筛选和试验发现，炭疽菌感染是黄精叶斑病的发病病原菌之一，而金色毛壳菌或其孢子具有拮抗炭疽菌的能力，能够在黄精叶斑病中的防治中发挥较好的效果。为此，本发明提供如下技术方案：
本发明从玉竹块茎上分离得到金色毛壳菌类菌株，经鉴定属于金色毛壳菌，所述金色毛壳菌已经保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2022年05月07日，保藏编号为CGMCC NO.40190。
本发明的一个方案，本发明公开了金色毛壳菌或其孢子在制备抗黄精叶斑病生物制剂中的应用，所述生物制剂中含有金色毛壳菌或其孢子，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCC NO.40190。
本发明的一个方案，本发明公开了金色毛壳菌或其孢子在制备抗黄精叶斑病生物制剂中的应用，生物制剂为金色毛壳菌或其孢子的发酵液、冻干粉剂、颗粒剂、悬浮剂、可湿粉剂，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCC NO.40190。
发酵液是将金色毛壳菌在培养基中发酵后获得的含菌或孢子的产物；冻干粉剂，是将金色毛壳菌在培养基中培养或发酵后获得含菌或孢子的产物进一步的采用冷冻干燥的形式制备，冷冻干燥有助于保持生物制剂的稳定性，在另一个方面也有助于保存和运输。颗粒剂是具有一定粒径范围可自由流动含有效成分的粒状制剂。悬浮剂是指有效成分以固体微粒分散在水中成稳定的悬浮液体制剂，一般用水稀释使用。可湿性粉剂是指有效成分在水中分散成悬浮液的粉状制剂。
本发明的一个方案，本发明的生物制剂包括药学上可以接受的助剂。优选的，所述助剂包括载体、表面活性剂、保护剂、营养助剂中的一种或多种。至于具体的载体、表面活性剂、保护剂、营养助剂的种类，其是本领域技术人员在微生物农药的制备中所常规使用的，例如载体中使用吸附树脂、活性炭、硅藻土、海泡石，表面活性剂选择机硅类表面活性剂，保护剂选择紫外保护剂以避免微生物被紫外线所杀伤，营养助剂提供微生物生长所需的碳源、氮源。
本发明的一个方案，本发明的生物制剂还包括其他的抗黄精叶斑病的微生物或抗黄精叶斑病化学药剂。
本发明的一个方案，本发明提供了金色毛壳菌或其孢子在制备抗炭疽菌引起的黄精叶斑病制剂中应用，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCC NO.40190。
本发明的一个方案，本发明提供了金色毛壳菌或其孢子在抗炭疽菌引起的黄精叶斑病中的应用，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCC NO.40190。
有益效果
本发明通过试验发现和证实了炭疽菌感染是黄精叶斑病的发病病原菌之一，而金色毛壳菌或其孢子具有拮抗炭疽菌的能力，106cfu/ml浓度的金色毛壳菌的使用即能够在炭疽菌引起的黄精叶斑病中的防治中发挥较好的效果，为提高黄精品质保障黄精产业的健康发展作出了贡献。
附图说明
图1为平板对峙法验证金色毛壳菌对炭疽菌的拮抗作用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。本发明所述技术方案，如未特别说明均为本领域的常规方式，所述试剂或材料，如未特别说明，均为常规试剂，来源于商业渠道。
金色毛壳对比菌HTC：源自山东农业大学高克祥课题组。
实施例1 金色毛壳菌对黄精叶斑病病菌镰刀菌的拮抗作用
按照常规方法玉竹块茎上分离得到金色毛壳菌类菌株，经鉴定属于金色毛壳菌，并进行菌种保藏。所述金色毛壳菌已经保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2022年05月07日，保藏编号为CGMCC NO.40190。
将金色毛壳菌培养基在PDB培养基（马铃薯蔗糖培养基）中培养，PDB 培养基配方组成马铃薯 200g，蔗糖 20g，蒸馏水1000 mL，pH7.0。从患叶斑病的黄精上分离病原菌：将叶斑叶片从黄精植株上剪下，表面清洗，75％乙醇中浸泡３min，无菌水冲洗3次，1%升汞溶液浸泡30秒，无菌水冲洗5次，吸干多余水分，将处理过的样品病害处剪成小片薄片，接种于PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）中，PDA培养基组成：马铃薯 200g，葡萄糖 20g，琼脂20g，蒸馏水 1000 mL，pH7.0。使部分组织插入培养基中，充分与培养基接触，放入28℃恒温培养箱中培养５ｄ。待长出菌丝后，挑取前端菌丝置于新鲜的PDA培养基培养。对分离的真菌培养物进行致病性鉴定，确定分离的病原菌培养物能够产生典型的叶斑病症状。对病原菌进行形态学鉴定，经形态鉴定分离的到的病菌为炭疽菌。
平板对峙法验证金色毛壳菌对黄精叶斑病致病菌炭疽菌的拮抗作用。即将各菌用直径为5mm的打孔器制成菌饼，炭疽菌（病原菌）接种在PDA平板中间，四周放上金色毛壳菌（拮抗菌）。拮抗菌距离培养皿周围约为10mm，两种菌接种距离为30mm，每种处理重复3次。于28℃培养3天。同时，以只接种病原菌的平皿作为对照组，每个处理重复3 次。待对照组病原菌菌落长满培养皿时，用毫米测度尺测定菌落直径。根据实验组两菌落的生长速度、菌落之间有无抑制带、菌落边缘的菌丝是否发生稀疏和萎缩的现象来判断生防菌对病原菌是否有拮抗作用，基于实验组和对照组的测量数据计算金色毛壳菌对于镰刀菌的生长抑制率。参见图1，金色毛壳菌对于炭疽菌的生长起到了较强的抑制作用。经过测量计算，金色毛壳菌对于镰刀菌的生长抑制率达到了76.5%，有明显的抑制作用。
实施例2 金色毛壳菌对抗炭疽菌引起的黄精叶斑病的作用
将金色毛壳菌接种到PDB 培养基中，28℃振荡培养10天，将发酵液用纱布过滤，保存在三角瓶中，密封，4℃冰箱保存，备用。
分别配制1.25×105 CFU/mL、1.25×106 CFU/mL、1.25×107CFU/mL、1.25×108CFU/mL的炭疽菌发酵液。对已经长出3-4片嫩叶的黄精进行叶片消毒，然后用棉签在黄精叶片上涂抹不同浓度的炭疽菌发酵液，以针刺产生伤口，每个组别5株，以涂抹无菌水为对照。然后套袋保湿，置于人工气候箱中培养4天，观察炭疽菌的致病性。经观察，在1.25×106CFU/mL即可以达到致病浓度。
同样选择3~4片叶的健康黄精幼苗，在试验前两周置于温室培养。配制1.25×106CFU/mL炭疽菌悬液，用接种针接种到黄精苗叶片上，套袋保湿48h。然后，以约2×107cfu/mL、约2×106cfu/mL、约2×105cfu/mL金色毛壳菌发酵液、无菌水、50%多菌灵可湿粉剂800倍稀释液、多利维生-寡雄腐霉稀释液（捷克生物制剂国际股份有限公司）、金色毛壳对比菌HTC 约2×106cfu/mL，分别喷雾至黄精苗上，每组15株，套袋保湿，置于人工气候箱中培养10天，观察叶斑形成，并用十字交叉法，测量病斑大小，计算拮抗效果，计算公式如下
| 组别 | 金色毛壳菌2×107cfu/mL | 金色毛壳菌2×106cfu/mL | 金色毛壳菌2×105cfu/mL | 50%多菌灵可湿粉剂800倍稀释 | 多利维生-寡雄腐霉 | 金色毛壳对比菌HTC | 无菌水 |
| 抑制率 | 73.2% | 72.6% | 61.4% | 80.1% | 79.3% | 50.3% | / |
表1 金色毛壳菌发酵液对黄精叶斑病的抑制效果
由表1可见，金色毛壳菌对于炭疽菌引起的黄精叶斑病具有较强的拮抗抑制作用，在2×106cfu/mL的浓度下，金色毛壳菌的抑制效果即与使用50%多菌灵可湿粉剂800倍稀释液效果接近，进一步增加毛壳菌的浓度对于防治效果提升有限，在综合考虑成本的基础上，107cfu/mL的用药浓度即是一个较为理想的浓度，可以作为黄精叶斑病防治的生物制剂。
以上内容是结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明，不能认定本发明具体实施只局限于这些说明，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的构思的前提下，还可以做出若干简单的推演或替换，都应当视为属于本发明所提交的权利要求书确定的保护范围。
Claims (8)
1.金色毛壳菌或其孢子在制备抗黄精叶斑病的生物制剂中应用，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCC NO.40190。
2.根据权利要求1所述的应用，所述生物制剂为金色毛壳菌或其孢子的发酵液、冻干粉剂、颗粒剂、悬浮剂。
3.根据权利要求1-2任一所述的应用，其特征在于，所述生物制剂还包括药学上可以接受的助剂。
4.根据权利要求3所述的应用，所述助剂包括载体、表面活性剂、保护剂、营养助剂中的一种或多种。
5.根据权利要求1-2任一所述的应用，其特征在于，所述生物制剂还包括其他的抗黄精叶斑病的微生物或抗黄精叶斑病化学药剂。
6.金色毛壳菌或其孢子在制备抗炭疽菌引起的黄精叶斑病制剂中应用，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCC NO.40190。
7.金色毛壳菌或其孢子在抗炭疽菌引起的黄精叶斑病中的应用，所述金色毛壳菌保藏编号为CGMCC NO.40190。
8.根据权利要求7所述的应用，所述金色毛壳菌的剂量为107cfu/mL。
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010081837A (ja) * | 2008-09-30 | 2010-04-15 | Shikoku Electric Power Co Inc | バークホルデリア属細菌、それを用いた植物病害防除剤および防除方法 |
| KR20190023689A (ko) * | 2017-08-30 | 2019-03-08 | 영남대학교 산학협력단 | 택솔을 생산하는 카에토미움 아우레움 tx1 균주 및 이의 용도 |
| CN111357771A (zh) * | 2020-05-12 | 2020-07-03 | 海南大学 | 一种防治土传病害的生防菌制剂 |
Non-Patent Citations (2)
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| 拮抗真菌HTC的鉴定及其对辣椒疫病的生物防治潜力;刘永亮;尹成林;田叶韩;刘晓光;张修国;高克祥;;植物保护学报(第05期);全文 * |
| 毛壳菌产抗真菌活性物质菌株的筛选与鉴定;谭悠久;钟娟;周金燕;谭红;;西南农业学报(第04期);全文 * |
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