CN104480046B - 一株侧孢短芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

一株侧孢短芽孢杆菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN104480046B
CN104480046B CN201410796208.9A CN201410796208A CN104480046B CN 104480046 B CN104480046 B CN 104480046B CN 201410796208 A CN201410796208 A CN 201410796208A CN 104480046 B CN104480046 B CN 104480046B
Authority
CN
China
Prior art keywords
brevibacillus laterosporus
pests
biological
bacterium
ecological methods
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201410796208.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104480046A (zh
Inventor
乔俊卿
刘邮洲
梁雪杰
杜艳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangsu Academy of Agricultural Sciences
Original Assignee
Jiangsu Academy of Agricultural Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangsu Academy of Agricultural Sciences filed Critical Jiangsu Academy of Agricultural Sciences
Priority to CN201410796208.9A priority Critical patent/CN104480046B/zh
Publication of CN104480046A publication Critical patent/CN104480046A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104480046B publication Critical patent/CN104480046B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing liquids as carriers, diluents or solvents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明公开一株侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus）N106‑2，其保藏号为CGMCC No.8482，该菌株具有如下特征：对多种植物病原真菌（番茄枯萎病菌、辣椒根腐茄柄镰刀菌、番茄灰霉病菌、水稻纹枯病菌、甘蓝黑斑病菌、梨炭疽病菌和梨轮纹病菌）及植物病原细菌（番茄青枯病菌、梨火疫病菌和水稻细条斑病菌）均具有较强的室内平板抑制作用；可以分泌蛋白酶、纤维素酶和具有溶血活性的表面活性剂类抗菌相关物质；本发明所述侧孢短芽孢杆菌可制备成生防水剂，该生防水剂对番茄枯萎病，辣椒镰刀菌根腐病、梨果炭疽病和梨果轮纹病都具有一定的防治效果，本发明涉及的侧孢短芽孢杆菌N106‑2无毒无致病性，对人畜安全、对环境友好，是微生物农药研发的有用资源，具有潜在的应用前景。

Description

一株侧孢短芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及生物农药领域，特别是研发一株侧孢短芽孢杆菌(Brevibacilluslaterosporus)及其应用。
背景技术
近半个世纪以来，化学农药在农业病虫害防治中发挥了重要的作用，但农药的不合理使用以及长期、大剂量使用导致了农药残留问题，严重危害环境安全。利用拮抗微生物防治植物病害始于1921年，经过多年的发展，可产生活性物质的微生物制剂或含有活性成分的生物农药已经成为了近年来研究的热点和焦点，目前，在我国的农药使用中，生物农药仅占1％的比例，且品种较少，因此，基于农业可持续发展和食品安全的背景，研发无毒，环境友好、可持续的生物农药及其资源储备十分必要和迫切。
侧孢短芽孢杆菌是一类好氧细菌，在自然界分布极其广泛，在寒带、温带、热带均有分布，在某些昆虫的体内、鱼体内、土壤、淡水、海水及其它生境中也有存在。随着对侧孢短芽孢杆菌的深入研究，国内外已有文献表明：侧孢短芽孢杆菌具有抗菌(Foelde等，2000，《Journal of Applied Microbiology》，89:840-846)、杀虫(Singer等，1996，《Advance inApplied Microbiology》，(42):219-261；Smirnova等，1996，《Research inMicrobiology》，(147):343-350)、杀线虫(黄晓伟等，2005，《Research in Microbiology》，156(5-6):719-727)、溶磷、降解有机污染物(Crawford等，1976，《Bacteriology》，127(1):204-207)、生产赖氨酸和多种酶类物质的功能(Umeriea等，2000，《BioresourceTechnology》，3(75):249-252)。在美国、俄罗斯、日本等国家，该菌主要用于防治临床上已经产生抗药性的革兰氏阳性菌核念珠菌，目前，国内相关研究主要集中于以下几方面：1)侧孢短芽孢杆菌杀线虫、杀虫研究，如云南大学在专利2003135604.4公开的侧孢短芽孢杆菌G4菌株具有较好的杀线虫效果(柯崇榕等，2010，《微生物学》，(6):11-15)；2)专利201010522661.2，“一种鉴定微生物肥料中侧孢短芽孢杆菌的方法“则公开了侧孢短芽孢杆菌在微生物肥料中的应用；3)侧孢短芽孢杆菌抑菌物质相关研究，如侧孢短芽孢杆菌Lh-1分离物R-1对多种细菌(造成食品腐败的多种革兰氏阴性和阳性细菌)具有抑制作用(任召珍等，2007，《微生物学报》，47(6):997-1001)，邱德文等在专利CN201210004727.8中公开的由侧孢短芽孢杆菌A60中分离出的抗菌肽具有抑制植物病原真菌(辣椒疫霉、西瓜枯萎病菌、小麦赤霉菌、灰葡萄孢菌、草莓炭疽病菌)和细菌(枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、普通变形杆菌和番茄疮痂病菌)的效果。
发明内容
本发明的目的是提供一株具有广谱抑菌效果的侧孢短芽孢杆菌，其对多种植物病原真菌及细菌具有室内抑制作用，与已有专利公开的菌株的抑菌谱完全不同，且范围更广，在生物农药领域中具有广泛的应用前景，本发明是这样实现的：
一株侧孢短芽孢杆菌(Brevibacilluslaterosporus)N106-，2其保藏号为CGMCCNo.8482，所述侧孢短芽孢杆菌在LB培养基培养时菌落边缘圆滑，灰白色，表面无皱褶，不透明状，最佳生长温度为28-30℃；所述LB培养基配方为：酵母粉5g,胰蛋白胨10g,氯化钠10g,琼脂17g,蒸馏水1000ml,pH6.8-7.2。
一种本发明所述侧孢短芽孢杆菌的应用，将侧孢短芽孢杆菌制备成防治番茄枯萎病、辣椒镰刀菌根腐病、梨果炭疽病和梨果轮纹病的生防水剂。
本发明所述侧孢短芽孢杆菌的应用中，所述的生防水剂是这样获得的：将在30℃下，转速150rpm，培养16h的侧孢短芽孢杆菌种子液(菌含量为1×107cfu/mL)以体积比1％接入液体发酵培养基中，30℃，转速150rpm，培养48-72h，待发酵液中90％菌体形成芽孢时，将发酵液放入储罐中，加入质量比为0.1-0.3％的苯甲酸钠，调节pH为6.0，其活芽孢数为1×108‐1×109cfu/mL，即获得生防水剂；所述液体发酵培养基成分为：以质量比计，豆饼粉1.0％，酵母粉2.0％，鱼粉1.0％,NaCl 0.05％，余量为水，pH＝7.0。
申请人从植物(杂草)根际土壤中分离获得菌株N106-2，经鉴定为侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)，并于2013年11月19日在中国普通微生物菌种保藏管理中心登记入册，保藏编号为CGMCC No.8482，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所菌种保藏中心。侧孢短芽孢杆菌N106-2对多种植物病原真菌(番茄灰霉病菌、番茄枯萎病菌、辣椒根腐茄柄镰刀菌、水稻纹枯病菌、梨轮纹病菌、梨炭疽病菌和甘蓝黑斑病菌)及细菌(番茄青枯病菌、梨火疫病菌和水稻细条斑病菌)具有较强的室内抑制作用，与目前已有专利所公开的菌株的抑菌谱完全不同，且范围更广，这表明菌株N106-2分泌的抑菌物质与目前已报道的不同，具有新颖性。进一步的温室或室内防效评价显示，该菌株制备的生防水剂对番茄枯萎病，辣椒镰刀菌根腐病、梨果炭疽和轮纹病都具有较好的防治效果。综上所述，本发明所提供的侧孢短芽孢杆菌具有广谱的抑制植物病原菌的能力，且无毒无致病性，对人畜安全、对环境友好，是微生物农药研发的有用资源，具有潜在的应用前景。
附图说明
图1为侧孢短芽孢杆菌N106-2在LB平板上形成的菌落形态图；
图2为侧孢短芽孢杆菌N106-2产生的相关抗菌物质
其中，a，蛋白酶；b，纤维素酶；c，表面活性剂类物质；d,嗜铁素；e,几丁质酶。
具体实施例方式
实施例涉及培养基及配方：
LB固体培养基：酵母粉5g,胰蛋白胨10g,氯化钠10g,琼脂17g,蒸馏水1000ml,pH6.8-7.2；
LB培养液：酵母粉5g,胰蛋白胨10g,氯化钠10g,,蒸馏水1000ml,pH6.8-7.2；
PDA固体培养基：200g马铃薯、20g葡萄糖、20g琼胶和1000mL蒸馏水，pH 5.6～6.6；
NA固体培养基：牛肉浸膏3g，酵母膏1g，蛋白胨5g，葡萄糖10g，琼脂20g，蒸馏水1000mL；
NA培养液：牛肉浸膏3g，酵母膏1g，蛋白胨5g，葡萄糖10g，蒸馏水1000mL；
蛋白酶检测培养基：脱脂奶粉100g，琼脂20g，加蒸馏水定容至1000mL；
几丁质酶检测培养基：胶状几丁质15g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeS04·7H2O 0.01g，K2HPO40.7g，KH2PO40.3g、琼脂20g，加蒸馏水定容至1000mL，pH7.0～7.2；
纤维素酶检测培养基：蛋白胨10g，酵母粉10g，羧甲基纤维素钠10g，NaCl 5g，KH2PO41g，琼脂20g，加蒸馏水定容至1000mL，pH＝7.0；
嗜铁素检测培养基：CAS 60.5mg，10mL 1mmol·L-1FeCl3·6H2O，HDTMA 72.9g，琼脂20g，加蒸馏水定容至1000mL，pH7.0；
表面活性物质检测培养基：即羊血琼脂平板，购于南京便诊生物科技有限公司，其中含有羊血细胞成分。
N106-2发酵培养基成分为：以质量比计，豆饼粉1.0％，酵母粉2.0％，鱼粉1.0％,NaCl0.05％，余量为水，pH＝7.0；
实施例中涉及的植物病原真菌番茄枯萎病菌、辣椒根腐茄柄镰刀菌、番茄灰霉病菌、水稻纹枯病菌、甘蓝黑斑病菌、梨炭疽病菌和梨轮纹病菌，以及植物病原细菌番茄青枯病菌、梨火疫病菌和水稻细条斑病菌皆由江苏省农科院植保所提供；
实施例中所述菌株活化是指：将菌株由保存管中划线入固体培养基平板，并长出单菌落的过程。
实施例1侧孢短芽孢杆菌N106-2的分离、鉴定
取样时间：2013年8月
取样地点：山西省太原市
采用梯度稀释法，将获得的杂草根围土壤10g，加入90mL灭菌水三角瓶中，150rpm震荡培养30min，制成悬浮液，然后取悬浮液1mL，置于9mL无菌水三角瓶中，以无菌水制备其105、106倍稀释液，在其中各取330ul，涂布LB培养基平板，每个处理重复3次，将上述培养基置于28℃恒温培养2d，挑取单菌落转至LB培养基划线纯化，纯化菌株于-70℃甘油保存。
申请人将所分离菌株自命名为N106-2，其在LB培养基上培养形态如图1所示，菌落边缘圆滑，灰白色，表面无皱褶，质地为不透明状，最佳生长温度28-30℃。
用细菌通用引物扩增菌株N106-2的16S rDNA序列，正向引物BSF(27f)：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG；反向引物BSR(1492r)：TACGGYTACCTTGTTACGACTT，菌株N106-216SrDNA序列递交GenBank数据库，获取基因登录号为KP100051，经比对，N106-2的16S rDNA序列与侧孢短芽孢杆菌同源性达98％，最终确定菌株N106-2的分类地位为：侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)。
申请人于2013年11月19日将菌株N106-2保存于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCC No.8482。
实施例2侧孢短芽孢杆菌N106-2的广谱抑菌试验
将实施例1获得的侧孢短芽孢杆菌N106-2在LB培养基上活化，然后移入50mL LB培养液中，在28℃下150rpm振荡培养2d，备用，其含菌量为1×108cfu/mL。
(1)将植物病原真菌(分别是：番茄枯萎病菌、辣椒根腐茄柄镰刀菌、番茄灰霉病菌、水稻纹枯病菌、甘蓝黑斑病菌、梨炭疽病菌和梨轮纹病菌)的PDA培养菌饼(直径为7mm)分别置于PDA平板(直径为9cm)一侧，菌饼距平板边缘30mm，在平板另一侧，距平板边缘30mm，平行放置5mm灭菌滤纸片，灭菌滤纸片距平板中心15mm，向滤纸片加入10μL上述制备的侧孢短芽孢杆菌N106-2菌液，每种真菌处理重复3皿，同时设LB培养液对照，26℃恒温培养，待对照平板菌落长满时测量调查病原真菌菌落直径，并计算抑制率：
抑制率＝(对照病原真菌菌落直径-实验病原真菌菌落直径)/对照病原菌菌落直径×100％。
(2)将植物病原细菌(分别为番茄青枯病菌、梨火疫病菌和水稻细条斑病菌)的NA培养菌液的稀释液(菌含量为1×107cfu/mL)分别涂布NA平板，0.3mL菌液/平板，在培养皿中间放置1张灭菌滤纸片，滤纸片上加入上述制备的侧孢短芽孢杆菌N106-2菌液10μL，同时设LB培养液对照，每种细菌处理重复3皿。28℃恒温培养2d，测量抑菌圈直径。
试验结果如表1所示：侧孢短芽孢杆菌N106-2对多种植物病原真菌和细菌均具有较强的抑制作用。
表1侧孢短芽孢杆菌N106-2对植物病原菌的抑制效果
实施例3侧孢短芽孢杆菌N106-2抗菌相关物质检测
将实施例1获得的侧孢短芽孢杆菌N106-2在LB培养基上进行活化，然后移入50mLLB培养液中，在28℃下150rpm振荡培养2d，备用，其含菌量为1×108cfu/mL。
(a)蛋白酶检测：蛋白酶检测培养基平板中央放置5mm灭菌滤纸片，每张滤纸片上滴侧孢短芽孢杆菌N106-2菌液5μL，每处理重复4皿，30℃培养2d，观察有无透明圈产生。
(b)几丁质酶检测：几丁质酶检测培养基中央放置5mm灭菌滤纸片，每张滤纸片上滴侧孢短芽孢杆菌N106-2菌液5μL，每处理重复4皿，30℃培养3～7d，观察有无透明圈产生。
(c)纤维素酶检测：纤维素酶检测培养基平板中央放置5mm灭菌滤纸片，每张滤纸片上滴侧孢短芽孢杆菌N106-2菌液5μL，每处理重复4皿，30℃培养3～7d，观察有无透明圈产生。
(d)嗜铁素检测：嗜铁素检测培养基平板中央放置5mm灭菌滤纸片，每张滤纸片上滴侧孢短芽孢杆菌N106-2菌液5μL，每处理重复4皿，30℃培养3～7d观察颜色变化，若有桔黄色晕圈产生，则有嗜铁素产生。
(e)表面活性物质检测：将侧孢短芽孢杆菌N106-2菌活化后的单菌落直接划线于表面活性物质检测培养基上(即羊血琼脂平板)，37℃培养2d,观察有无透明圈产生，若有则说明其具有溶血活性，即可以产生表面活性物质。
试验结果如图2所示，其中图2a为蛋白酶检测结果，图2b为纤维素酶检测结果，图2c为表面活性物质检测结果，图2d为嗜铁素检测结果，图2e为几丁质酶检测结果，由图可见，侧孢短芽孢杆菌N106-2不能分泌嗜铁素和几丁质酶；能分泌蛋白酶、纤维素酶和表面活性剂类物质。
实施例4侧孢短芽孢杆菌N106-2生防水剂的制备
(1)发酵菌种的准备
将实施例1获得的侧孢短芽孢杆菌N106-2在LB培养基上进行活化，挑取单菌落接种于LB试管斜面，30℃培养2天，此斜面即为发酵所用菌种。
(2)种子液的制备：将步骤1获得的培养好的试管斜面，用接种环移一环菌苔入100mL LB培养液中，共移2瓶，在30℃下150rpm培养16h，菌含量为1×107cfu/mL，备用；
(3)生防水剂的制备：向1L发酵三角瓶中放300mL液体发酵培养基，并121℃灭菌30min，冷却至室温后按体积比1％接种上述种子液入1L发酵三角瓶中，温度30℃，转速150rpm，发酵48-72h，待发酵液中90％菌体形成芽孢时停止培养，将发酵液放入储罐中，按质量比0.1-0.3％加入防腐剂苯甲酸钠，搅拌均匀，调节pH为6.0左右，经检测，活芽孢数约为1×108‐1×109cfu/mL。
实施例5生防水剂防治番茄枯萎病的盆栽试验
试验时间、地点：2014年9月在江苏省农科院日光温室内进行；
试验品种：巨粉宝；
供试病原菌菌株：番茄枯萎病菌(由江苏省农科院植保所提供)；
枯萎病菌病土制备：将沙土与玉米粉以体积比2:1比例混匀装袋，湿热灭菌2次，制成沙土培养基；将番茄枯萎病菌接入PDA平板上活化7d后转接到沙土培养基中，28℃恒温培养箱培养20d(期间每隔7d颠倒摇匀一次)。
实验分为实验组与对照组，实验组分别采用实施例4获得的生防水剂、生防水剂10倍稀释液、生防水剂100倍稀释液进行灌根处理；对照组分为清水对照组(CK)和常用药剂对照组，清水对照组以清水进行灌根处理，常用药剂对照组以50％多菌灵可湿性粉剂进行灌根处理。
盆栽防效试验：将巨粉宝番茄播于灭菌土壤中，当番茄苗长出4片真叶时，将番茄苗移栽于枯萎病菌病土和营养土混合的盆钵(体积比为1:3)中定植，每钵1株苗，定植后1d，分别进行灌根处理，每株番茄灌根20mL；每处理15盆，重复3次，正常管理。生长温度控制为18-25℃，10d后调查病情，计算防效。
病情分级标准如下：
0级：长势良好未表现病症；1级：叶片轻度变黄；2级：叶片中度或严重变黄，萎蔫状；3级：植株萎蔫，叶片严重卷曲；4级：植株严重萎蔫，茎部维管束开始褐变；5级：整株枯萎，茎部维管束变为黄褐色，植株死亡。
防治效果(％)＝[(对照的病情指数－防治的病情指数)/对照的病情指数]×100％
实验结果如表2所示，清水(对照)处理的番茄枯萎病发病指数为41.54，而不同浓度的生防水剂灌根处理后，番茄枯萎病病情指数均有所降低，其中生防水剂病情指数为24.45，对枯萎病的防治效果最好，达41.14％，与常用化学农药多菌灵防效基本相当。此外，随着生防水剂浓度的降低，其对番茄枯萎病的防效逐步丧失，其100倍稀释液防效仅为11.87％。
表2生防水剂对番茄枯萎病的盆栽防效
处理 病情指数 防效(％)
生防水剂 24.45 41.14
生防水剂10倍稀释液 30.94 25.17
生防水剂100倍稀释液 36.61 11.87
常用药剂对照组 22.48 45.81
清水对照CK 41.54 -
实施例6生防水剂防治辣椒镰刀菌根腐病的盆栽试验
试验时间、地点：于2014年9-10月在江苏省农科院日光温室内进行。
试验品种：苏椒5号。
供试病原菌菌株：辣椒根腐茄柄镰刀菌(由江苏省农科院植保所提供)
根腐病土制备：将沙土与玉米粉以体积比2:1比例混匀装袋，湿热灭菌2次，制成沙土培养基；将辣椒根腐茄柄镰刀菌接入PDA平板上活化7d后转接到沙土培养基中，28℃恒温培养箱培养20d(期间每隔7d颠倒摇匀一次)。
实验分为实验组与对照组，实验组分别采用实施例4获得的生防水剂、生防水剂10倍稀释液、生防水剂100倍稀释液进行灌根处理；对照组分为清水对照组(CK)和常用药剂对照组，清水对照组以清水进行灌根处理，常用药剂对照组以50％多菌灵可湿性粉剂进行灌根处理。
盆栽防效试验：将辣椒播于灭菌土壤中，当6-8片真叶时(苗龄为50d)，将苗移栽于病土和营养土混合的盆钵(体积比1:3)中定植，每钵1株苗，定植后1d，进行灌根处理，每株辣椒灌根20mL，每处理15盆，重复3次，常规管理。生长温度控制为18-25℃，10d后调查病情，计算防效。
病情分级标准如下：
按辣椒叶片萎蔫划分病级：0级，植株不萎蔫；1级，少量叶片表现可恢复性萎蔫；3级，叶片10％～30％萎蔫，叶仍绿色；5级，叶片30.1％～50％明显萎蔫；7级，植株萎蔫，叶片50.1％～80％变黄萎蔫，根茎部变褐色；9级，全株枯死，根部腐烂。
防治效果(％)＝[(对照的病情指数－防治的病情指数)/对照的病情指数]×100％
实验结果如表3所示，由病情指数调查显示，清水(对照)处理的辣椒根腐病发病指数为21.5，常用药剂病情指数为8.22，生防水剂灌根处理后病情指数为9.02，生防水剂10倍稀释液处理后病情指数为12.99，生防水剂100倍稀释液处理后病情指数为20.36；经过计算得出：生防水剂对由茄柄镰刀菌引起的辣椒根腐病的盆栽防治效果为58.1％，与常用药剂效果相近，10倍稀释液效果次之，为39.6％，而100倍稀释液基本没有防治作用。
表3生防水剂对辣椒镰刀菌根腐病的盆栽防效
处理 病情指数 防效(％)
生防水剂 9.02 58.1
生防水剂10倍稀释液 12.99 39.6
生防水剂100倍稀释液 20.36 5.35
常用药剂对照组 8.22 61.8
清水(对照)CK 21.51 -
实施例7生防水剂防治梨果炭疽和轮纹病的试验
试验时间、地点：2014年10月在江苏省农科院人工气候箱内进行。
试验品种：丰水梨、砀山梨、皇冠梨。
供试病原菌菌株：梨炭疽病菌和梨轮纹病菌(均由江苏省农科院植保所提供)。
梨炭疽病菌和梨轮纹病菌皆采用PDA培养基培养。
防效试验分为两种：
(1)将梨果洗净，酒精擦洗消毒，首先将PDA平板中的梨炭疽病菌和轮纹病菌分别制成直径0.5cm的菌饼，接种于梨果内，每果接种3个点，放于26℃无菌培养箱培养，24h后，喷雾实施例4获得的生防水剂(1ml/果)；每处理6个接种点，重复3次，静置于人工气候箱中，温度为26℃，同时设立清水对照组；7d后观察果实接种点炭疽病和轮纹病斑直径，统计数据，计算防效。
(2)将梨果洗净，酒精擦洗消毒，首先喷雾实施例4获得的生防水剂(1ml/果)，24h后，将PDA平板中的梨炭疽病菌和轮纹病菌分别制成直径0.5cm的菌饼，接种于梨果内，每果接种3个点，放于26℃无菌培养箱培养；每处理6个接种点，重复3次，静置于人工气候箱中，同时设立清水对照组；7d后观察果实接种点炭疽病和轮纹病斑直径，统计数据，计算防效。
防治效果(％)＝[(对照的病斑直径－防治的病斑直径)/对照的病斑直径]×100％
表4生防水剂对梨果炭疽病室内防效
生防水剂对梨果炭疽病室内防治效果如表4所示，无论是先在梨果接种炭疽病菌，还是先在梨果上喷雾生防水剂，其对不同品种的梨果感染炭疽病的防效不同，其防效呈现：砀山梨>皇冠梨>丰水梨的趋势，同时，表4还表明，先喷雾生防水剂的防效比先接种病原菌的防效要高，在砀山梨品种上，先喷雾生防水剂的防效为47.1％，而先接种病原菌的防效仅为29.1％，两者差异非常明显。以上结果表明，生防水剂对梨果炭疽病的防治效果与梨果品种密切相关，且其表现的预防性防效比治疗性防效更好。
表5生防水剂对梨果轮纹病室内防效
生防水剂对梨果轮纹病室内防治效果如表5所示。先接种轮纹病菌处理中，生防水剂对不同品种梨果感染轮纹病的防效呈现：皇冠梨>丰水梨>砀山梨的趋势，而在先喷雾生防水剂的处理中，防效呈现：皇冠梨>砀山梨>丰水梨的趋势，这与生防水剂对梨炭疽病的防效截然不同。此外，我们发现在丰水梨和皇冠梨两个品种上，先接种梨果轮纹病菌处理较先喷雾生防水剂处理的防效高，就丰水梨品种而言，先接种轮纹病的处理，生防水剂对其防效为31.0％，而先喷雾生防水剂的处理，其防效仅为5.08％，这表明，对于丰水梨和皇冠梨而言，生防水剂对梨轮纹病的治疗效果优于预防效果。

Claims (3)

1.一株侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus），其保藏号为CGMCC No.8482，所述侧孢短芽孢杆菌菌落边缘圆滑，灰白色，表面无皱褶，不透明状，最佳生长温度为28-30℃。
2.一种如权利要求1所述侧孢短芽孢杆菌的应用，其特征在于：将侧孢短芽孢杆菌制备成生防水剂，用于防治番茄枯萎病、辣椒镰刀菌根腐病、梨果炭疽病和梨果轮纹病。
3.如权利要求2所述侧孢短芽孢杆菌的应用，其特征在于，所述的生防水剂是这样获得的：
将在30℃下，转速150 rpm，培养16h的侧孢短芽孢杆菌种子液以体积比1%接入液体发酵培养基中，30℃，转速150 rpm培养48-72h，待发酵液中90%菌体形成芽孢时，将发酵液放入储罐中，加入质量比为0.1-0.3%的苯甲酸钠，调节pH为6.0，其活芽孢数为1×108‐1×109cfu/mL，即获得生防水剂；
所述侧孢短芽孢杆菌种子液的菌含量为1×107cfu/mL；
所述液体发酵培养基成分为：以质量比计，豆饼粉1.0%，酵母粉2.0%，鱼粉1.0%, NaCl0.05%，余量为水，pH=7.0。
CN201410796208.9A 2014-12-18 2014-12-18 一株侧孢短芽孢杆菌及其应用 Active CN104480046B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410796208.9A CN104480046B (zh) 2014-12-18 2014-12-18 一株侧孢短芽孢杆菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410796208.9A CN104480046B (zh) 2014-12-18 2014-12-18 一株侧孢短芽孢杆菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104480046A CN104480046A (zh) 2015-04-01
CN104480046B true CN104480046B (zh) 2017-04-05

Family

ID=52754655

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410796208.9A Active CN104480046B (zh) 2014-12-18 2014-12-18 一株侧孢短芽孢杆菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104480046B (zh)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107151641B (zh) * 2017-07-04 2020-11-27 沈阳农业大学 一株抑制水稻纹枯病菌的侧孢短芽孢杆菌及其应用
CN111394361B (zh) * 2018-12-27 2022-04-26 中粮生物科技（北京）有限公司 一株侧孢短芽孢杆菌、其组合物及其用途
RU2733140C1 (ru) * 2019-10-11 2020-09-29 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) Полифункциональный биопрепарат с широким спектром антагонистической активности и его применение
CN110964671A (zh) * 2019-12-27 2020-04-07 天津开发区坤禾生物技术有限公司 侧孢短芽孢杆菌mes818、菌剂、制备方法及应用
CN111748496B (zh) * 2020-07-03 2022-05-13 天津坤禾生物科技集团股份有限公司 侧孢短芽孢杆菌mes818在番茄培育方面的应用
CN113186138A (zh) * 2021-06-08 2021-07-30 南京本源生态农业科技有限公司 一种生防菌株及其在防治青枯病和作物促生中的应用
CN114181871B (zh) * 2021-12-31 2023-08-15 河南麻博士喜万家生物科技有限公司 一株侧孢短芽孢杆菌菌株及其应用
WO2023220508A1 (en) * 2022-05-13 2023-11-16 Nutrition & Biosciences USA 4, Inc. Compositions comprising brevibacilla multifunctional fermentates and methods of use
CN115074283B (zh) * 2022-06-29 2023-07-25 河南科技大学 一种侧孢短芽孢杆菌及其应用
CN115364123B (zh) * 2022-07-05 2023-08-25 江苏三仪生物工程有限公司 一种侧孢短芽孢杆菌及其在反刍寄生虫防治中的应用
CN116355817B (zh) * 2023-05-25 2023-08-08 山东爱普生农业发展有限公司 一株侧孢短芽孢杆菌及其在防治蔬菜根肿病上的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013050867A2 (en) * 2011-10-08 2013-04-11 Gangavaramu Lakshmi Prasanna A chitinase from brevibacillus laterosporus, its production and use thereof
CN103756930A (zh) * 2013-12-03 2014-04-30 青岛润地丰科技有限公司 一株花生根际生防菌及其制备方法和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013050867A2 (en) * 2011-10-08 2013-04-11 Gangavaramu Lakshmi Prasanna A chitinase from brevibacillus laterosporus, its production and use thereof
CN103756930A (zh) * 2013-12-03 2014-04-30 青岛润地丰科技有限公司 一株花生根际生防菌及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Isolation and characterization of a potential biocontrol Brevibacillus laterosporus;Zhen Song等;《African Journal of Microbiology Research》;20110916;第5卷(第18期);第2675-2681页 *
侧孢短芽孢杆菌AMCC100017的分离鉴定、生防潜力及其发酵条件的系统优化;陈潺;《山东农业大学硕士学位论文》;20141028;第1-84页，尤其是正文第26页第2.1.2节"基础发酵培养基"部分，第33页第2.3.6.1节"氮源"部分、第32-33页第2.3.6节"种子液的制备"、"摇瓶培养部分"部分，第41-42页3.3"抗菌谱测定"、第43页第3.4.1节"蛋白酶活力" *
侧孢短芽孢杆菌的抑真菌蛋白酶;张楹;《中国生物防治》;20060531;第22卷(第2期);第146-149页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN104480046A (zh) 2015-04-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104480046B (zh) 一株侧孢短芽孢杆菌及其应用
CN106434493B (zh) 一株生防链霉菌及其应用
CN102433282B (zh) 枯草芽孢杆菌nb12及其培养方法和应用
CN100334201C (zh) 一株枯草芽孢杆菌及其应用
CN105219681B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens D2WM及制备方法和应用
CN103789234B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN102533593B (zh) 洋葱伯克霍尔德氏菌sd7及其培养方法和应用
CN105018366B (zh) 甲基营养型芽孢杆菌及其应用
CN102433281B (zh) 卡特拉链霉菌nb20及其培养方法和应用
CN105886428A (zh) 一株微白黄链霉菌及其在微生物肥料中的应用
CN107151641A (zh) 一株抑制水稻纹枯病菌的侧孢短芽孢杆菌及其应用
CN108148794A (zh) 一种广谱抑菌活性的枯草芽孢杆菌DYr3.3及制备方法和应用
CN102533617A (zh) 一株枯草芽孢杆菌及其应用
CN105018386A (zh) 一种甲基营养型芽孢杆菌及其应用
CN103627659A (zh) 一种枯草芽孢杆菌及其在水稻稻曲病防治中的应用
CN103436457A (zh) 一种双向伯克霍尔德氏菌及其培养方法和应用
CN106676049A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN106942301B (zh) 一种防控水稻稻瘟病的植物源农药制剂及其制备方法
CN105746503A (zh) 一种甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法和应用
CN106701623A (zh) 一株拮抗枸杞根腐病的萎缩芽孢杆菌及其应用
CN107699526A (zh) 一株防治灰霉病的放线菌菌株及其应用
CN106754529A (zh) 一株拮抗枸杞根腐病的解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN102649944B (zh) 一株对香蕉枯萎病菌有拮抗作用的嗜铁内生菌及其应用
CN104982459B (zh) 一株短小芽孢杆菌n103‑1及其应用
CN106701624A (zh) 一株拮抗枸杞根腐病的特基拉芽孢杆菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant