CN115011657B - 一种高效酶解法水解虾壳蛋白的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及水产副产品加工技术领域，具体涉及一种高效酶解法水解虾壳蛋白的方法，包括以下步骤：S1.包埋蛋白酶；S2.将下壳经过脱钙处理，加入水中，调节溶液的pH为7.5～8.5；加入步骤S1得到的包埋蛋白酶，在50～60℃温度下，酶解4～6h，即得。本发明采用氯化胆碱葡萄糖低共溶剂包埋蛋白酶Novozym 37071，包埋后的蛋白酶活性持续时间久，而且对虾壳等虾下脚料蛋白水解的更加充分。
Description
技术领域
本发明涉及水产副产品加工技术领域，具体涉及一种高效酶解法水解虾壳蛋白的方法。
技术背景
在虾类加工过程中，会产生大量的虾头、虾壳等下脚料，虾下脚料约占虾体重量30-40％。新鲜虾头、虾壳中含有大约5％左右的甲壳素，10％以上的蛋白质等。虾壳蛋白含有人体必需的8种氨基酸，是营养价值较高的蛋白质。酶法生产水解蛋白是一种常用的方法。但现有技术的酶解方法，酶活力持续时间短，蛋白酶解不彻底。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的问题，提供一种高效酶解法水解虾壳蛋白的方法。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现：
一种高效酶解法水解虾壳蛋白的方法，包括以下步骤：
S1.包埋蛋白酶；
S2.将下壳经过脱钙处理，加入水中，调节溶液的pH为7.5～8.5；加入步骤S1得到的包埋蛋白酶，在50～60℃温度下，酶解4～6h，即得。
优选地，所述步骤S1中，包埋蛋白酶的步骤包括：将质量分数为1％蛋白酶Novozym37071冻干，然后加入氯化胆碱葡萄糖低共溶剂，在室温下放置1～3h。
优选地，所述蛋白酶Novozym 37071与氯化胆碱葡萄糖低共熔溶剂的质量比为1:10。
优选地，所述步骤S2中，溶液的pH为8.0。
优选地，所述步骤S2中，反应温度为55℃。
优选地，所述步骤S2中，酶解温度为5h。
与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：
本发明公开的一种高效酶解法水解虾壳蛋白的方法，采用氯化胆碱葡萄糖低共熔溶剂包埋蛋白酶Novozym 37071，包埋后的蛋白酶活性持续时间久，而且对虾壳等虾下脚料蛋白水解的更加彻底。
附图说明
图1为包埋和未包埋蛋白酶对虾壳的水解效果图；
图2为包埋和未包埋蛋白酶活性时间测试图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例和对比例将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
除特殊说明，本实施例中所用的设备均为常规实验设备，所用的材料、试剂若无特殊说明均为市售得到，无特殊说明的实验方法也为常规实验方法。
实施例1
低共溶剂包埋蛋白酶：按底物1％取0.6ml质量分数为1％蛋白酶Novozym37071冻干，加入0.6ml氯化胆碱葡萄糖低共熔溶剂，室温放置2小时。
酶法水解蛋白：60g虾下脚料有机酸溶液脱钙处理，洗涤虾下脚料，加水180ml，调pH8.0，加入上述低共溶剂包埋蛋白酶Novozym 37071，55℃恒温水浴酶解5h，得到虾壳蛋白水解物。
实验例
1、蛋白测定方法：
称取4克酶解后的虾壳，用5％氢氧化钠90℃水浴6h，分离含蛋白质的碱液，用天根BCA试剂盒测定其中蛋白质含量。
作为对比，利用未包埋的蛋白酶Novozym 37071，参照实施例1的方法酶解虾壳。结果如图1所示。可以看出，经过包埋后的蛋白酶Novozym 37071对虾壳蛋白水解的更加彻底。
2、取一支10ml离心管，加入1ml酶解液，置于40℃水浴中预热3-5min，再加入预热至40℃的1％酪蛋白溶液1.0ml(最适缓冲液配制，如20mM(0.02M)磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液,PH＝8.0)，准确及时40℃保温10min。立即加入2.0ml0.4mol/L三氯乙酸溶液(现配现用)终止反应。将混合液继续40℃水浴继续保温20分钟，使残余蛋白质沉淀完全，10000r离心5min分离，去除沉淀。吸取1.0ml清液加入缓冲溶液或含DES的缓冲溶液2ml，使之稀释3倍。
另取一支2ml离心管为空白管。在空白管中先加入1.0ml酶液，40℃水浴3-5min，再加入1ml 0.4mol/L三氯乙酸溶液，再加入1.0ml 1％酪蛋白溶液，将混合液继续40℃水浴继续保温30分钟，使残余蛋白质沉淀完全，10000r离心5min分离，去除沉淀。吸取1ml清液，加入缓冲溶液或含DES的缓冲溶液2ml，使之稀释3倍。以空白为对照，在275nm波长下测吸光度，样品重复三次。酶活性测试结果如果2所示。结果表明包埋后的蛋白酶Novozym 37071活性持续时间更久。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (1)
1.一种高效酶解法水解虾壳蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.包埋蛋白酶；
S2.将虾壳经过脱钙处理，加入水中，调节溶液的pH为8.0；加入步骤S1得到的包埋蛋白酶，在55℃温度下，酶解5h，即得；
所述步骤S1中，包埋蛋白酶的步骤包括：将质量分数为1％的蛋白酶Novozym37071冻干，然后加入氯化胆碱葡萄糖低共熔溶剂，在室温下放置1～3h；所述蛋白酶Novozym 37071与氯化胆碱葡萄糖低共熔溶剂的质量比为1:10。
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