CN115006317A - 一种利用天然低共熔溶剂富集福鼎白茶黄酮的方法及应用 - Google Patents

一种利用天然低共熔溶剂富集福鼎白茶黄酮的方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种天然低共熔溶剂在富集白茶黄酮中的应用，所述天然低共熔溶剂为由甜菜碱、乙二醇和水制备得到的天然低共熔溶剂。本发明以白茶为研究对象，以甜菜碱、乙二醇和水制备得到的天然低共熔溶剂对白茶中的黄酮进行富集，对实验人员的身体健康以及环境都很友好，并且提取率明显提升。另外，本发明提供的白茶黄酮的制备工艺简单又快捷，易于放大生产，本发明采取的加热提取技术和大孔树脂吸附纯化技术所需要的仪器设备较为普遍、工艺操作流程较为简单，以及工艺所需时间周期短，有利于工厂的实际放大和节能降耗；并且，制备的白茶黄酮提取物具有较为显著的细胞修护效果，为白茶黄酮提取物应用于化妆品领域提供了新思路及理论依据。

Description

一种利用天然低共熔溶剂富集福鼎白茶黄酮的方法及应用
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种利用天然低共熔溶剂富集福鼎白茶黄酮的方法及应用。
背景技术
白茶，属微发酵茶，是中国茶类中的特殊珍品。因成品茶多为芽头，满披白毫，如银似雪而得名，属于中国六大茶类之一。白茶不经杀青或揉捻，只经过晒或文火干燥后加工的茶，具有外形芽毫完整，满身披毫，毫香清鲜，汤色黄绿清澈，滋味清淡回甘的品质特点。基本工艺包括萎凋、烘焙(或阴干)、拣剔、复火等工序。云南白茶工艺主要晒青，晒青茶的优势在于口感保持茶叶原有的清香味。白茶具有较好的体外抗氧化、肝损伤保护、抗糖尿病、抗癌和抗突变、抑菌及促进生殖健康等多种生物学功效。
白茶中含有丰富的黄酮，含量居六大茶类榜首，且可以长期存放，里面内含的黄酮物质也会随着存放的时间增长而增加。黄酮类物质里含有丰富的槲皮素成分，而槲皮素是维生素p的重要合成元素，有着显著的降低血管通透性的好处，所以喝上了一些年份的白茶可以起到“降三高”的作用。黄酮类物质不仅能够有效“降三高”，而且经过减少血管通透性促进血液循环后，有利于减少胆固醇。黄酮类物质能够更好清理人体内的自由基及毒素，预防和降低疾病的发生率；还有很好的抗氧化功效，有潜在的可以延迟衰老的功效。
目前有关白茶黄酮物质提取的相关研究较少，主要研究对象都以白茶提取物(混合物，无具体活性物质的含量测定)为核心，在食品、保健品中应用较多，在化妆品中的应用较少。
现有技术有较多来源天然成份的黄酮提取工艺报道，但未见白茶黄酮提取物的相关报道。并且，目前技术有关黄酮的提取溶剂多集中在甲醇、乙醇等传统溶剂，不符合绿色环保的理念，并且提取率较低。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种利用天然低共熔溶剂富集白茶黄酮的方法及应用，本发明采用天然低共熔溶剂对白茶中的黄酮进行富集提取，绿色环保，并且提取率高。
本发明提供了一种天然低共熔溶剂在富集白茶黄酮中的应用，所述天然低共熔溶剂为由甜菜碱、乙二醇和水制备得到的天然低共熔溶剂。
优选的，所述甜菜碱与乙二醇的摩尔比为1：(2～5)。
优选的，所述甜菜碱与乙二醇的总质量占所述天然低共熔溶剂的质量分数为30wt％～70wt％。
优选的，所述白茶选自福鼎白茶。
本发明还提供了一种利用天然低共熔溶剂富集福鼎白茶黄酮的方法，包括以下步骤：
将白茶与天然低共熔溶剂混合进行加热提取，得到提取液，所述天然低共熔溶剂选自上述天然低共熔溶剂；
将所述提取液采用大孔吸附树脂进行纯化，得到白茶黄酮提取物。
优选的，所述白茶与天然低共熔溶剂的质量体积比为1g：(10～30)mL。
优选的，所述加热提取的温度为40～60℃，时间为30～50min。
优选的，所述大孔吸附树脂选自D-101、AB-8或NAK-9。
优选的，将所述提取液采用大孔吸附树脂进行纯化的方法包括以下步骤：
将提取液与大孔吸附树脂混合，使大孔吸附树脂吸附提取液中的白茶黄酮，然后进行过滤，得到吸附了白茶黄酮的大孔吸附树脂；优选的，所述提取液与大孔吸附树脂的体积重量比为4～6mL：1g；
将吸附了白茶黄酮的大孔吸附树脂与乙醇混合，得到乙醇解吸附液；
将所述乙醇解吸附液进行浓缩和干燥，得到白茶黄酮提取物。
本发明还提供了一种上述方法富集得到的白茶黄酮提取物在制备具有修复功效的化妆品中的应用。
与现有技术相比，本发明提供了一种天然低共熔溶剂在富集白茶黄酮中的应用，所述天然低共熔溶剂为由甜菜碱、乙二醇和水制备得到的天然低共熔溶剂。本发明以白茶为研究对象，以甜菜碱、乙二醇和水制备得到的天然低共熔溶剂对白茶中的黄酮进行富集，对实验人员的身体健康以及环境都很友好，符合当前消费者对于“纯净美妆”的追求，并且提取率明显提升。
另外，本发明提供的白茶黄酮的制备工艺简单又快捷，易于放大生产，本发明采取的加热提取技术和大孔树脂吸附纯化技术所需要的仪器设备较为普遍、工艺操作流程较为简单，以及工艺所需时间周期短，有利于工厂的实际放大和节能降耗；并且，制备的白茶黄酮提取物具有较为显著的细胞修护效果，为白茶黄酮提取物应用于化妆品领域提供了新思路及理论依据。
附图说明
图1为标准曲线图；
图2为DESs种类对白茶黄酮含量的影响；
图3为DESs摩尔比对白茶黄酮含量的影响；
图4为不同类型的大孔吸附树脂的吸附效果；
图5为划痕修复实验结果，图5(A)划痕修复实验细胞显微图，图5(B) 划痕愈合百分比(％)。
具体实施方式
本发明提供了一种天然低共熔溶剂在富集白茶黄酮中的应用，所述天然低共熔溶剂为由甜菜碱、乙二醇和水制备得到的天然低共熔溶剂。
在本发明的天然低共熔溶剂中，所述甜菜碱与乙二醇的摩尔比为1： (2～5)，优选为1:2、1:3、1:4、1:5，或1：(2～5)之间的任意值，在本发明的一些优选实施方式中，所述甜菜碱与乙二醇的摩尔比为1：2，在该摩尔比条件下，白茶黄酮的提取率显著提高。
在本发明的天然低共熔溶剂中，所述甜菜碱与乙二醇的总质量占所述天然低共熔溶剂的质量分数为30wt％～70wt％，优选为30wt％、40wt％、50wt％、 60wt％、70wt％，或30wt％～70wt％之间的任意值，在本发明的一些优选实施方式中，所述甜菜碱与乙二醇的总质量占所述天然低共熔溶剂的质量分数为 70wt％。当随着所述甜菜碱与乙二醇的总质量占所述天然低共熔溶剂的质量分数高于70wt％后，尤其是增加至90wt％时，白茶黄酮的提取率会大幅度下降。在本发明提供的质量分数范围内，DESs质量分数的提高，会加强HBA、HBD 与目标化合物之间的氢键作用，提高提取效率。但是，超过本发明限定的质量分数范围后，过高DESs质量分数会增加提取体系的粘度，不利于目标化合物的提取。
在本发明中，所述白茶优选为福鼎白茶。
本发明还提供了一种利用天然低共熔溶剂富集福鼎白茶黄酮的方法，包括以下步骤：
将白茶与天然低共熔溶剂混合进行加热提取，得到提取液，所述天然低共熔溶剂选自上述天然低共熔溶剂；
将所述提取液采用大孔吸附树脂进行纯化，得到白茶黄酮提取物。
具体的，本发明首先将白茶与天然低共熔溶剂混合，其中，所述白茶与天然低共熔溶剂的质量体积比为1g：(10～30)mL，优选为1g：10mL、1g： 20mL、1g：30mL，或1g：(10～30)mL之间的任意值，在本发明的一些优选实施方式中，所述白茶与天然低共熔溶剂的质量体积比为1g：20mL，在该比例的料液比条件下，白茶提取率显著提高。
然后进行加热提取，得到提取液。本发明对所述加热方式并没有特殊限制，本领域技术人员公知的加热方式即可。在本发明中，优选采用油浴加热。其中，所述加热提取的温度为40～60℃，优选为40、50、60，或40～60℃之间的任意值。其中，在40～60℃范围之间，黄酮含量随着温度的增加而增加，然而当温度高于60℃时，黄酮的含量呈现下降趋势。适当的温度可以加强分子扩散，促进黄酮从白茶植物细胞中溶出。但是过高的温度可能会影响黄酮的生物活性，进而导致含量下降。
在本发明中，所述加热提取的时间为30～50min，优选为30、40、50，或 30～50min之间的任意值。在本发明中，提取温度为20～40min时，黄酮含量呈逐渐增加的趋势；40min时黄酮含量最高，时间继续增加，黄酮含量几乎不变。这可能是由于在一定范围内时间越久，黄酮溶出的量会越多，但提取时间过长可能会破坏黄酮的结构，进而降低提取效率。
加热提取完成后，得到提取液。然后，将所述提取液采用大孔吸附树脂进行纯化，得到白茶黄酮提取物。
在本发明中，所述大孔吸附树脂选自D-101、AB-8或NAK-9，优选为 NAK-9大孔吸附树脂。综合吸附率和解吸附率，NAK-9大孔吸附树脂纯化效果显著优于D-101和AB-8，从而达到最大回收效果。
具体的，将所述提取液采用大孔吸附树脂进行纯化的方法包括以下步骤：
将提取液与大孔吸附树脂混合，使大孔吸附树脂吸附提取液中的白茶黄酮，然后进行过滤，得到吸附了白茶黄酮的大孔吸附树脂。优选的，所述提取液与大孔吸附树脂的体积重量比为4～6mL：1g，优选为4mL：1g、5mL： 1g、6mL：1g，或4～6mL：1g之间的任意值；在本发明中，为了保证大孔吸附树脂的吸附效果，将混匀后的提取液与大孔吸附树脂放置于30℃下于恒温生化振荡培养箱上摇动12h(转速为80～100r·min-1)。大孔树脂完全吸附并饱和后，然后进行过滤处理，得到吸附了白茶黄酮的大孔吸附树脂。
接着，将吸附了白茶黄酮的大孔吸附树脂与乙醇混合，得到乙醇解吸附液；其中，所述吸附了白茶黄酮的大孔吸附树脂与乙醇的质量体积比为1g： 5～8mL，优选为1g：5mL、1g：6mL、1g：7mL、1g：8mL，或1g：5～8mL 之间的任意值。同样的为了保证乙醇的解析效果，将乙醇与吸附了白茶黄酮的大孔吸附树脂混匀后，在120～140r·min-1的转速条件下，振摇6～10h，优选为6、7、8、9、10，或6～10h之间的任意值。然后过滤掉大孔吸附树脂，得到乙醇解吸附液；
将所述乙醇解吸附液进行浓缩和干燥，得到白茶黄酮提取物。本发明对所述浓缩的方式并没有特殊限制，本领域技术人员公知的浓缩方法即可。在本发明中，优选采用旋转蒸发仪在40～45℃的条件下进行浓缩。
采用上述方法制备得到的白茶中黄酮物质具有高浓度、高活性特点，能作为化妆品修护功效成分广泛应用于化妆品制备中。
本发明还提供了一种上述方法富集得到的白茶黄酮提取物在制备具有修复功效的化妆品中的应用。
本发明以白茶为研究对象，以甜菜碱、乙二醇和水制备得到的天然低共熔溶剂对白茶中的黄酮进行富集，对实验人员的身体健康以及环境都很友好，符合当前消费者对于“纯净美妆”的追求，并且提取率明显提升。
另外，本发明提供的白茶黄酮的制备工艺简单又快捷，易于放大生产，本发明采取的加热提取技术和大孔树脂吸附纯化技术所需要的仪器设备较为普遍、工艺操作流程较为简单，以及工艺所需时间周期短，有利于工厂的实际放大和节能降耗；并且，制备的白茶黄酮提取物具有较为显著的细胞修护效果，为白茶黄酮提取物应用于化妆品领域提供了新思路及理论依据。
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的利用天然低共熔溶剂富集福鼎白茶黄酮的方法及应用进行说明，本发明的保护范围不受以下实施例的限制。
以下实施例和对比例在进行黄酮含量测定时，按照如下方法进行：
芦丁标准曲线绘制
(1)芦丁标准品准备
精密称量经过干燥的芦丁标准品10mg置于烧杯中，加入50％乙醇溶液溶解完全。冷却后移入50mL容量瓶中，继续加入50％乙醇溶液定容至刻度线，得到浓度为0.2mg/mL的芦丁标准溶液。
(2)亚硝酸钠-硝酸铝比色溶液配制
分别准确称量1.5g的亚硝酸钠、3g的硝酸铝和1.2g的氢氧化钠置于烧杯中，加入30mL的超纯水配制成浓度为5％的亚硝酸钠溶液、10％的硝酸铝溶液和4％的氢氧化钠溶液。
(3)标准曲线测定
用移液枪分别吸取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.2mL的芦丁标准溶液，置于10mL具塞试管中，用超纯水补齐至2.0mL。加入0.4 mL的5％亚硝酸钠溶液，充分混合并静置6min；再添加0.4mL的10％硝酸铝溶液，摇晃并静置 6min；再添加4.0mL的4％氢氧化钠溶液并摇匀静置；最后加入纯水至10mL，然后放置10min显色，酶标仪510nm。以吸光度值为纵坐标Y，芦丁标准溶液浓度为横坐标X，绘制芦丁标准曲线。参见图1，图1为标准曲线图。其中，线性回归方程为Y＝1.131X-0.0008，R2＝0.9986
将实施例和对比例中溶液的吸光度值带入至标准曲线中，即可得到黄酮的含量。
以下实施例中所用的白茶粉末为福鼎白茶粉末。
实施例1
1、化妆品友好型DESs的制备
按照氢键受体与氢键供体的摩尔比，称量各低共熔溶剂原料组分(具体配比参见表1)，混合均匀，然后置于事先已加入搅拌子的100mL的圆底烧瓶中，密封严实。混合物在80-90℃的磁力搅拌装置中持续搅拌2-4h，获得均一、透明的液体。合成的DESs冷却至室温后，在60℃真空干燥条件中干燥24h。干燥后若无沉淀、浑浊等现象出现，即可判定该DESs合成成功。
表1.白茶提取黄酮所需DESs
Figure BDA0003767628980000061
Figure BDA0003767628980000071
表2.不同DESs显著性分析
Figure BDA0003767628980000072
由表1和表2的数据可知，甜菜碱-乙二醇组合相比其他种类的DESs白茶黄酮的含量显著提高。
2、DESs种类的影响
1)称取干燥至恒重的白茶粉末0.3g置于圆底烧瓶中，按照1:20g/mL的固液比例加入预先已合成的不同种类的50％wt浓度的DESs；
同时，黄酮的传统提取方式为有机溶剂提取法，故用70％乙醇水溶液替代DESs建立对照组。
2)然后放置于温度为30℃的油浴锅中搅拌20min。提取结束后，放置于超速离心机(转速为8000r/min)中离心8min，得上清液稀释20倍。精密吸取稀释后的提取液2mL置于10mL具塞试管中，按照1.1中的步骤测定吸光值，将测得的吸光度值代入标准曲线可得提取液中白茶黄酮的含量，公式如 (1-1)所示。
Figure BDA0003767628980000073
结果参见表1和图2，图2为DESs种类对白茶黄酮含量的影响。如图2 所示，DES-3和DES-4的提取率高于对照组，因此，DESs可作为高效、环保的绿色提取溶剂。在所选取的5种DESs中，由甜菜碱-乙二醇合成的DES-4 具有最佳的提取能力。DESs的粘度、溶解性、酸碱性等都会直接影响目标化合物的提取效果。通过实验发现，黄酮类化合物含有多个酚羟基，乙二醇结构中含有两个羟基，因此黄酮与乙二醇之间的氢键相互作用更强，且粘度较低约为10.47mPa·s，故有较优的黄酮提取效率。
实施例2
称取干燥至恒重的白茶粉末0.3g置于10mL圆底烧瓶中，按照1:20g/mL 的固液比例加入预先已合成的不同种类的50％wt浓度的DESs(具体摩尔比参见表2)。提取结束后，放置于超速离心机(转速为8000r/min)中离心8min，得上清液稀释20倍。精密吸取稀释后的提取液2mL置于10mL具塞试管中，按照芦丁标准曲线绘制方法中的步骤测定吸光值，将测得的吸光度值代入标准曲线可得提取液中白茶黄酮的含量。
表2.配制不同摩尔比的DESs(甜菜碱-乙二醇)
Figure BDA0003767628980000081
由表2可以看出，甜菜碱-乙二醇摩尔比为1:1的比例制备DESs是失败的，没有达到均一稳定的状态；同时参见图3，图3为DESs摩尔比对白茶黄酮含量的影响。由图3可以看出，当摩尔比系数越大，即乙二醇占比越大时，白茶黄酮提取效果呈现逐渐递减的趋势，当甜菜碱：乙二醇的摩尔比为1:2时，白茶黄酮的提取率显著提高。
实施例3
称量0.5g干燥的白茶粉末，按照料液比1:10g/mL的比例加入5.0mL质量分数30wt％的DESs，然后放置在40℃油浴锅中搅拌30min。提取结束后，离心8min，得上清液，稀释40倍后，吸取提取液2mL置于10mL具塞试管中，按照芦丁标准曲线绘制方法中的步骤测定吸光值，代入标准曲线，再利用公式(1-1)计算白茶中黄酮含量，结果见表3。
实施例4
称量0.5g干燥的白茶粉末，按照料液比1:20g/mL的比例加入10.0mL质量分数30wt％的DESs，然后放置在50℃油浴锅中搅拌40min。提取结束后，离心8min，得上清液，稀释40倍后，吸取提取液2mL置于10mL具塞试管中，按照芦丁标准曲线绘制方法中的步骤测定吸光值，代入标准曲线，再利用公式(1-1)计算白茶中黄酮含量，结果见表3。
实施例5
称量0.5g干燥的白茶粉末，按照料液比1:30g/mL的比例加入15.0mL质量分数30wt％的DESs，然后放置在60℃油浴锅中搅拌50min。提取结束后，离心8min，得上清液，稀释40倍后，吸取提取液2mL置于10mL具塞试管中，按照芦丁标准曲线绘制方法中的步骤测定吸光值，代入标准曲线，再利用公式(1-1)计算白茶中黄酮含量，结果见表3。
实施例6
称量0.5g干燥的白茶粉末，按照料液比1:10g/mL的比例加入5.0mL质量分数50wt％的DESs，然后放置在50℃油浴锅中搅拌50min。提取结束后，离心8min，得上清液，稀释40倍后，吸取提取液2mL置于10mL具塞试管中，按照芦丁标准曲线绘制方法中的步骤测定吸光值，代入标准曲线，再利用公式(1-1)计算白茶中黄酮含量，结果见表3。
实施例7
称量0.5g干燥的白茶粉末，按照料液比1:20g/mL的比例加入10.0mL质量分数50wt％的DESs，然后放置在60℃油浴锅中搅拌30min。提取结束后，离心8min，得上清液，稀释40倍后，吸取提取液2mL置于10mL具塞试管中，按照芦丁标准曲线绘制方法中的步骤测定吸光值，代入标准曲线，再利用公式(1-1)计算白茶中黄酮含量，结果见表3。
实施例8
称量0.5g干燥的白茶粉末，按照料液比1:30g/mL的比例加入15.0mL质量分数50wt％的DESs，然后放置在40℃油浴锅中搅拌40min。提取结束后，离心8min，得上清液，稀释40倍后，吸取提取液2mL置于10mL具塞试管中，按照芦丁标准曲线绘制方法中的步骤测定吸光值，代入标准曲线，再利用公式(1-1)计算白茶中黄酮含量，结果见表3。
实施例9
称量0.5g干燥的白茶粉末，按照料液比1:10g/mL的比例加入5.0mL质量分数70wt％的DESs，然后放置在60℃油浴锅中搅拌40min。提取结束后，离心8min，得上清液，稀释40倍后，吸取提取液2mL置于10mL具塞试管中，按照芦丁标准曲线绘制方法中的步骤测定吸光值，代入标准曲线，再利用公式(1-1)计算白茶中黄酮含量，结果见表3。
实施例10
称量0.5g干燥的白茶粉末，按照料液比1:20g/mL的比例加入10.0mL质量分数70wt％的DESs，然后放置在40℃油浴锅中搅拌50min。提取结束后，离心8min，得上清液，稀释40倍后，吸取提取液2mL置于10mL具塞试管中，按照芦丁标准曲线绘制方法中的步骤测定吸光值，代入标准曲线，再利用公式(1-1)计算白茶中黄酮含量，结果见表3。
实施例11
称量0.5g干燥的白茶粉末，按照料液比1:30g/mL的比例加入15.0mL质量分数70wt％的DESs，然后放置在50℃油浴锅中搅拌30min。提取结束后，离心8min，得上清液，稀释40倍后，吸取提取液2mL置于10mL具塞试管中，按照芦丁标准曲线绘制方法中的步骤测定吸光值，代入标准曲线，再利用公式(1-1)计算白茶中黄酮含量，结果见表3。
实施例12
称量0.5g干燥的白茶粉末，按照料液比1:20g/mL的比例加入10.0mL质量分数70wt％的DESs，然后放置在50℃油浴锅中搅拌30min。提取结束后，离心8min，得上清液，稀释40倍后，吸取提取液2mL置于10mL具塞试管中，按照芦丁标准曲线绘制方法中的步骤测定吸光值，代入标准曲线，再利用公式(1-1)计算白茶中黄酮含量，结果见表3。
对比例1
称量0.5g干燥的白茶粉末，按照料液比1:20g/mL的比例加入10.0mL质量分数70wt％的乙醇水溶液，然后放置在50℃油浴锅中搅拌30min。提取结束后，离心8min，得上清液，稀释40倍后，吸取提取液2mL置于10mL具塞试管中，按照芦丁标准曲线绘制方法中的步骤测定吸光值，代入标准曲线，再利用公式(1-1)计算白茶中黄酮含量，结果见表3。
表3
Figure BDA0003767628980000101
Figure BDA0003767628980000111
实施例13
(1)选取三种不同极性的大孔树脂(NAK-9、D101、AB-8)分别进行实验。最佳提取工艺条件下的白茶黄酮DESs提取液，添加不同的大孔树脂(料液(mL)：树脂(g)＝6:1)，并将其混匀放置于30℃下于恒温生化振荡培养箱上摇动12h(转速为80～100r·min-1)。大孔树脂完全吸附并饱和后，然后进行过滤处理，计算不同极性大孔树脂吸附白茶黄酮的效果。
(2)加入乙醇，振摇6h(120～140r·min-1)，滤过大孔树脂，得乙醇解吸附溶液，计算不同极性大孔树脂解吸附能力。结果见图4，图4为不同类型的大孔吸附树脂的吸附效果。由图4可以看出，AB-8大孔吸附树脂的黄酮吸附率是最高的，而按照解吸附能力来看，NAK-9效果最优。因此综合吸附率和解吸附率来看，应选择NAK-9大孔树脂进行DESs中白茶黄酮的吸附回收，这样可以达到最大的回收效果。
(3)将经过NAK-9大孔树脂吸附和解析操作后得到的乙醇解吸附液，然后将其置于在旋转蒸发仪(旋蒸温度：40～45℃)上旋干乙醇溶剂，再进行冻干制粉，得到白茶黄酮粉。
对比例2
将对比例1制备得到的提取液按照实施例13中的方法，选用NAK-9大孔树脂吸附和解析操作后得到的乙醇解吸附液，然后将其置于在旋转蒸发仪 (旋蒸温度：40～45℃)上旋干乙醇溶剂，再进行冻干制粉，得到白茶黄酮粉。
实施例14
利用DESs制备的白茶提取物与传统乙醇制备的白茶提取物对Hacat细胞划痕损伤修复实验
角质形成细胞复苏，用含10％FBS的DMEM作为培养液培养细胞；取对数期细胞，用0.25％胰酶消化细胞，含10％FBS的DMEM作为培养液,用消毒过的镊子，将culture-insert2well底面放在6孔板。注意只有插件底面具有粘性，同时应该保证附着的界面，光滑，干燥。必要时可以用手指推动或者颠倒观察是否粘贴牢固。细胞悬液配置和以往相同，5x 10^5/mL，在两侧孔中各加入70uL细胞悬液，在孔外加入培养基，不能低于1mL，于37℃，5％CO2培养箱中培养24h后，将孔板取出拍照。将插件拔出，以含0.5％血清的完全培养基为稀释液，按照样品试验浓度表配制不同浓度的样品工作液以及阴性对照组，2mL/孔，加入孔内。置于37℃，5％CO2培养箱内培养6h后在显微镜下观察细胞形态并拍照。根据划痕前后面积，计算划痕相对修复率。
结果参见图5，图5为划痕修复实验结果。(a)划痕修复实验细胞显微图(b)划痕愈合百分比(％)。由图5可知，DESs和乙醇制备的白茶提取物均对Hacat细胞划痕修复有显著的修复作用。其中，DESs制备的白茶提取物效果最为显著，划痕愈合百分比可达到13％，相较于乙醇制备的白茶提取物的8％具有一定的优势。因此，DESs制备的白茶提取物与传统工艺相比具有差异化，且效果显著优于乙醇制备的白茶提取物，划痕愈合百分比提高了62.5％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种天然低共熔溶剂在富集白茶黄酮中的应用，其特征在于，所述天然低共熔溶剂为由甜菜碱、乙二醇和水制备得到的天然低共熔溶剂。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述甜菜碱与乙二醇的摩尔比为1：(2～5)。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述甜菜碱与乙二醇的总质量占所述天然低共熔溶剂的质量分数为30wt％～70wt％。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述白茶选自福鼎白茶。
5.一种利用天然低共熔溶剂富集福鼎白茶黄酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将白茶与天然低共熔溶剂混合进行加热提取，得到提取液，所述天然低共熔溶剂选自权利要求1～4任意一项所述的应用中的天然低共熔溶剂；
将所述提取液采用大孔吸附树脂进行纯化，得到白茶黄酮提取物。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述白茶与天然低共熔溶剂的质量体积比为1g：(10～30)mL。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述加热提取的温度为40～60℃，时间为30～50min。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂选自D-101、AB-8或NAK-9。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，将所述提取液采用大孔吸附树脂进行纯化的方法包括以下步骤：
将提取液与大孔吸附树脂混合，使大孔吸附树脂吸附提取液中的白茶黄酮，然后进行过滤，得到吸附了白茶黄酮的大孔吸附树脂；优选的，所述提取液与大孔吸附树脂的体积重量比为4～6mL：1g；
将吸附了白茶黄酮的大孔吸附树脂与乙醇混合，得到乙醇解吸附液；
将所述乙醇解吸附液进行浓缩和干燥，得到白茶黄酮提取物。
10.一种如权利要求5～9任意一项所述的方法富集得到的白茶黄酮提取物在制备具有修复功效的化妆品中的应用。
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