CN114982630B - 一种高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法 - Google Patents
一种高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于农林技术领域,具体涉及一种高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,包括:从多个玉米品种中选择出具有抗南方锈病的分子标记的玉米作为亲本;选择综合性状优良的玉米,作为亲本;两个亲本进行杂交,收获一代籽粒;一代籽粒自交后,收获二代籽粒,二代籽粒经过多堆柄锈菌菌液浸泡,进行抗病筛选,选择未感病的健康种子进行育种;所述多堆柄锈菌菌液中含有病菌抑制剂。本发明的方法将分子标记与杂交育种相结合,在杂交二代中即可筛选出抗病品种,减少后续杂交育种步骤,也减少了非抗病品种的干扰,缩短了育种进程,提高了育种效率。
Description
技术领域
本发明属于农林技术领域,具体涉及一种高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法。
背景技术
玉米是我国主要粮食作物之一,玉米粒中含有丰富的维生素,能有效促进新陈代谢,预防心脑血管疾病,研究显示,玉米苞叶对于血脂具有较佳的调控作用(姜秀娟,王旭辉,李奕,等.玉米苞叶对高血脂大鼠VSMC凋亡及Fas、caspase-3的调控[J].时珍国医国药,2012,23(5):1147-1148)。玉米还可以用于制作玉米油。因此,我国对于玉米的需求量是较大的。
南方锈病是由多堆柄锈菌引起的一种玉米病害,该菌影响玉米生长,导致玉米感病减产,为了减少南方锈病的发生,可以通过施用杀菌剂的方法来预防,但是杀菌剂滥用将导致危害土壤质量,危害生态,发掘和选育高抗南方锈病的玉米品种,可以从玉米自身提高对多堆柄锈菌的抵抗力,进而减少病害的发生,减少玉米减产的情况。
目前,高抗南方锈病玉米的选育方法主要包括以下几种:1)杂交育种方法,选择具有南方锈病抗性的玉米品种与其他性状优良的玉米品种进行杂交,杂交,回交等,经过多代之后,选育出高抗南方锈病的玉米株系,该方法耗时长;2)分子标记辅助育种,该方法是分析和识别玉米基因组中的抗南方锈病的分子标记,预测玉米植株的抗病性状,分子标记手段与杂交育种手段相结合,缩短了传统杂交育种方法的时间,具有很好的应用前景,但是,现有技术的研究聚焦于如何开发分子标记(比如CN201811266736.8),仅阐述了该分子标记具有良好前景的概括性描述,仅处于理论阶段,并未进行实实在在的分子标记辅助育种操作,导致现有技术的育种仍然采用的是传统杂交育种方法,育种效率仍然不高。
综上所述,需要开发一种基于分子标记辅助育种技术的育种方法,来提高高抗南方锈病玉米品种的选育效率。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明提供了一种高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法及应用。
本发明的目的是提供一种高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,包括:
从多个玉米品种中选择出具有抗南方锈病的分子标记的玉米作为亲本;
选择综合性状优良的玉米,作为亲本;
两个具有抗南方锈病的分子标记的玉米亲本与综合性状优良的玉米亲本进行杂交,收获一代籽粒;
一代籽粒自交后,收获二代籽粒;
二代籽粒经过多堆柄锈菌菌液浸泡,进行抗病筛选,选择未感病的健康种子进行育种;所述多堆柄锈菌菌液中含有病菌抑制剂。
优选的,上述高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,所述分子标记由引物Phi118和P2两个引物检测得到,或者所述分子标记为A009919、P2.913或P2.649。
优选的,上述高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,所述抗南方锈病的玉米亲本为抗病自交系CML496玉米或者S313,所述综合性状优良的玉米亲本为郑单958。
优选的,上述高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,所述多堆柄锈菌菌液为孢子悬浮液。
优选的,上述高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,所述病菌抑制剂为亚硒酸钠或者水溶性镧系化合物,优选的,所述水溶性镧系化合物为硝酸镧或者氯化镧。
优选的,上述高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,所述病菌抑制剂与孢子悬浮液的质量比例为0.1-1:100。
优选的,上述高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,浸泡时间为10-18h。
优选的,上述高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,抗病筛选的步骤如下:捞出浸泡后的种子,清洗干净,无菌室室温摊放2天,摊放厚度2-5cm,筛选出无病斑的种子,作为健康种子。
优选的,上述高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,健康种子种植后,与选择综合性状优良的玉米亲本杂交,收获三代籽粒;
三代籽粒经过多代自交后,获得性状稳定的高抗南方锈病优良株系。
优选的,上述高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,三代籽粒经过多堆柄锈菌菌液浸泡,进行抗病筛选,选择未感病的健康种子进行多代自交,获得性状稳定的高抗南方锈病优良株系。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
1、本发明选择抗南方锈病的玉米亲本时,可以是从抗病性未知品种或者抗病性已知品种/株系,扩大了亲本筛选范围,给筛选出高抗南方锈病品种提供了可能性;本发明还选择综合性状优良的玉米品种,将优良性状与抗南方锈病性状相结合,筛选出高抗南方锈病且其它性状也优良的综合性高抗病品种,提高新品种的推广应用价值。本发明的方法将分子标记与杂交育种相结合,在杂交二代中即可筛选出抗病品种,减少后续杂交育种步骤,也减少了非抗病品种的干扰,缩短了育种进程,提高了育种效率。
2、由于严重的多堆柄锈菌病害可以侵害玉米果穗,所以本发明在二代籽粒阶段对抗病品种进行识别和分离;所述多堆柄锈菌菌液中含有病菌抑制剂(亚硒酸钠、硝酸镧或者氯化镧),用于抑制病菌活性,减缓病毒侵染毒,达到区分抗病和感病品种的效果。
3、本发明提供的所述分子标记由引物Phi118和P2两个引物检测得到(李少博,宋伟,王凤格,等.分子标记辅助玉米自交系京24抗南方锈病的改良[J].分子植物育种,2012,10(4):6.),或者所述分子标记为A009919(CN201910954789.7用于检测抗玉米南方锈病基因RPPS313的分子标记及应用),或者所述分子标记为P2.913、P2.649(CN201610179256.2与玉米南方锈病基因紧密连锁的分子标记组合及其应用),这些分子标记与玉米南方锈病基因紧密相关,可以准确鉴定出抗病品种,且不同基因所处染色体位置不同,有各自的优势,这些分子标记可以组合用于本发明的方法中。
具体实施方式
为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案能予以实施,下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
在本发明的描述中,如未特殊说明,所用试剂均为市售,所用方法均为本领域常规技术。下述实施例中,所用水均为去离子水。
在本发明的发明构思下,多堆柄锈菌菌液为采用现有技术制备的孢子悬浮液,下述实施例及实验中,孢子悬浮液的培养方法参照“江凯,段灿星,武小菲,等.多堆柄锈菌侵染玉米的细胞学及超微结构特征[J].植物保护学报,2015,42(6):7”的1.2.1的记载,制备成孢子悬浮液。
实施例1浸泡液配方与浸泡时间的选择
每个配方的浸泡液选择100粒抗病CML496玉米(CN201610179256.2)种子和100粒感病ZHENG58玉米种子(CN201610179256.2),进行不同配方浸泡液的浸泡,捞出浸泡后的种子,无菌水冲洗干净,无菌室室温摊放2天,摊放厚度3cm,摊放过程中,浸泡时进入籽粒的多堆柄锈菌繁殖,抗病能力弱的种子可能产生病斑,抗病能力越弱,则病斑越多。观察种子染病率,以获得最佳配方的浸泡液。注意,每个时间的浸泡液的浸泡实验中,仅浸泡液的配方不同,其余条件相同。
表1-2的结果中,将无病斑的种子作为健康种子。
表1不同配方浸泡液的浸泡实验健康种子个数(个)(CML496)
表1结果显示,对于抗病品种,短时间的浸泡对抗病种子的健康程度并无影响,随着浸泡时间的延长,含有多堆柄锈菌的不同配方浸泡液体现出对种子的不同程度的感染。
表2不同配方浸泡液的浸泡实验健康种子个数(个)(ZHENG58)
表2结果显示,对于感病品种,短时间的浸泡对抗病种子的健康程度影响也较大,随着浸泡时间的延长,含有多堆柄锈菌的不同配方浸泡液体现出对种子的更深程度的感染,健康种子数量显著下降。
综合考虑表1-2中时间成本和抗病种子筛选准确度及筛选量的因素,选择10-18h较优,选择含有无水氯化镧、无水硝酸兰或无水亚硒酸钠的多堆柄锈菌孢子悬浮液。
实施例2病菌抑制剂浓度的选择
每个配方的浸泡液选择100粒抗病CML496玉米(CN201610179256.2)种子和100粒感病ZHENG58玉米种子(CN201610179256.2),进行浸泡液(无水氯化镧与多堆柄锈菌孢子悬浮液的混合液)的浸泡,捞出浸泡后的种子,无菌水冲洗干净,无菌室室温摊放2天,摊放厚度3cm,摊放过程中,浸泡时进入籽粒的多堆柄锈菌繁殖,抗病能力越弱,则病斑越多。观察种子染病率,以获得最佳配方的浸泡液。注意,每个时间的浸泡液的浸泡实验中,仅浸泡液的配方不同,其余条件相同。
表3不同配方浸泡液的浸泡实验健康种子个数(个)(CML496)
表4不同配方浸泡液的浸泡实验健康种子个数(个)(ZHENG58)
综合考虑3-4中原料成本和抗病种子筛选准确度及筛选量的因素,无水氯化镧与多堆柄锈菌孢子悬浮液选择质量比例0.1-1:100较优。
实施例3
一种高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,包括以下步骤:
所述抗南方锈病的玉米父本为抗病自交系CML496玉米(CN201610179256.2),所述综合性状优良的玉米母本为郑单958。
步骤1,分别种植父本和母本,然后将二者人工杂交,人工杂交后常规田间管理,直至收获(杂交)一代籽粒;
步骤2,一代籽粒自交一代后,收获二代籽粒(二代籽粒出现了性状分离),二代籽粒经过多堆柄锈菌菌液浸泡10h,进行抗病筛选,选择未感病(无病斑的)的健康种子进行育种;
抗病筛选步骤如下:捞出浸泡后的种子,无菌室室温(15-30℃)摊放2天,摊放厚度3cm,筛选出无病斑的种子作为健康种子,播种用的健康种子先进行清洗,然后再用次氯酸钠进行消毒杀菌;
所述多堆柄锈菌菌液中含有病菌抑制剂,所述多堆柄锈菌菌液为孢子悬浮液,所述病菌抑制剂为无水氯化镧,所述病菌抑制剂与孢子悬浮液的质量比例为0.5:100。
抽取100粒播种用的健康种子进行基因鉴定,96粒健康种子均可鉴定出抗病分子标记。
步骤3,健康种子经过多代自交后,获得性状稳定的高抗南方锈病优良株系。
实施例4
一种高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,包括以下步骤:
所述抗南方锈病的玉米父本为抗病自交系CML496玉米(CN201610179256.2),所述综合性状优良的玉米母本为郑单958。
步骤1,分别种植父本和母本,然后将二者人工杂交,人工杂交后常规田间管理,直至收获(杂交)一代籽粒;
步骤2,一代籽粒自交一代后,收获二代籽粒(二代籽粒出现了性状分离),二代籽粒经过多堆柄锈菌菌液浸泡18h,进行抗病筛选,选择未感病(无病斑的)的健康种子进行育种;
抗病筛选步骤如下:捞出浸泡后的种子,无菌室室温(15-30℃)摊放2天,摊放厚度5cm,筛选出无病斑的种子作为健康种子,播种用的健康种子先进行清洗,然后再用次氯酸钠进行消毒杀菌;
所述多堆柄锈菌菌液中含有病菌抑制剂,所述多堆柄锈菌菌液为孢子悬浮液,所述病菌抑制剂为无水亚硒酸钠,所述病菌抑制剂与孢子悬浮液的质量比例为0.5:100。
抽取100粒播种用的健康种子进行基因鉴定,97粒健康种子均可鉴定出抗病分子标记。
步骤3,健康种子种植后,与选择综合性状优良的玉米亲本杂交,收获三代籽粒;
三代籽粒经过多代自交后,获得性状稳定的高抗南方锈病优良株系。
实施例3
一种高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,包括以下步骤:
所述抗南方锈病的玉米父本为抗病自交系CML496玉米(CN201610179256.2),所述综合性状优良的玉米母本为郑单958。
步骤1,分别种植父本和母本,然后将二者人工杂交,人工杂交后常规田间管理,直至收获(杂交)一代籽粒;
步骤2,一代籽粒自交一代后,收获二代籽粒(二代籽粒出现了性状分离),二代籽粒经过多堆柄锈菌菌液浸泡18h,进行抗病筛选,选择未感病(无病斑的)的健康种子进行育种;
抗病筛选步骤如下:捞出浸泡后的种子,无菌室室温(15-30℃)摊放2天,摊放厚度5cm,筛选出无病斑的种子作为健康种子,播种用的健康种子先进行清洗,然后再用次氯酸钠进行消毒杀菌;
所述多堆柄锈菌菌液中含有病菌抑制剂,所述多堆柄锈菌菌液为孢子悬浮液,所述病菌抑制剂为无水亚硒酸钠,所述病菌抑制剂与孢子悬浮液的质量比例为0.5:100。
抽取100粒播种用的健康种子进行基因鉴定,97粒健康种子均可鉴定出抗病分子标记。
步骤3,健康种子种植后,与选择综合性状优良的玉米亲本杂交,收获三代籽粒;
三代籽粒经过多堆柄锈菌菌液浸泡,进行抗病筛选,选择未感病的健康种子进行多代自交,获得性状稳定的高抗南方锈病优良株系。
需要说明的是,本发明中涉及数值范围时,应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用,由于采用的步骤方法与实施例相同,为了防止赘述,本发明描述了优选的实施例。尽管已描述了本发明的优选实施例,但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念,则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以,所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然,本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样,倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内,则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (6)
1.一种高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,其特征在于,包括:
从多个玉米品种中选择出具有抗南方锈病的分子标记的玉米作为亲本;
选择综合性状优良的玉米,作为亲本;
两个亲本进行杂交,收获一代籽粒;
一代籽粒自交后,收获二代籽粒;
二代籽粒经过多堆柄锈菌菌液浸泡10-18h,进行抗病筛选,选择未感病的健康种子进行育种;所述多堆柄锈菌菌液中含有病菌抑制剂;
所述多堆柄锈菌菌液为孢子悬浮液;
所述病菌抑制剂为亚硒酸钠或者水溶性镧系化合物;
所述病菌抑制剂与孢子悬浮液的质量比例为0.1-1:100。
2.根据权利要求1所述的一种高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,其特征在于,所述分子标记由引物Phi118和P2两个引物检测得到;
或者,所述分子标记为A009919、P2.913或P2.649。
3.根据权利要求1所述的一种高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,其特征在于,所述抗南方锈病的玉米亲本为抗病自交系CML496玉米或者S313,所述综合性状优良的玉米亲本为郑单958。
4.根据权利要求1所述的一种高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,其特征在于,抗病筛选的步骤如下:捞出浸泡后的种子,清洗干净,无菌室室温摊放2天,摊放厚度2-5cm,筛选出无病斑的种子,作为健康种子。
5.根据权利要求1所述的一种高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,其特征在于,健康种子种植后,与选择综合性状优良的玉米亲本杂交,收获三代籽粒;
三代籽粒经过多代自交后,获得性状稳定的高抗南方锈病优良株系。
6.根据权利要求5所述的一种高抗南方锈病玉米的分子标记辅助育种方法,其特征在于,三代籽粒经过多堆柄锈菌菌液浸泡,进行抗病筛选,选择未感病的健康种子进行多代自交,获得性状稳定的高抗南方锈病优良株系。
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Legal Events
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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