CN114965746A - 门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法 - Google Patents

门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法 Download PDF

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Abstract

本申请提供一种门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法。上述的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法包括如下步骤：获取门冬氨酸鸟氨酸注射液；取样：采用稀释剂对门冬氨酸鸟氨酸注射液进行稀释处理，得到待测液；建立色谱条件：色谱参数包括氨基柱4.6mm*250mm，5μm，柱温：20℃～30℃，紫外检测波长：204nm～206nm，流速：1.0ml/min，流动相：乙腈‑磷酸盐缓冲液，进样量：20μl；色谱实验：按上述色谱条件对待测液进行高效液相色谱检测分析；其中，稀释剂包括流动相、抗氧化剂和低级酰卤。上述的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法对门冬氨酸鸟氨酸注射液的杂质分析准确性较好。

Description

门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法
技术领域
本发明涉及化学分析技术领域，特别是涉及一种门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法。
背景技术
门冬氨酸鸟氨酸注射液为一种由门冬氨酸和鸟氨酸反应形成的二肽化合物，具有护肝、解酶、能量三效合一的作用，其注射剂特别适用于因肝脏疾患引起的中枢神经系统症状的解除及肝昏迷的抢救，且作用直接，起效显著。
由于注射剂对安全性的要求较高，但是门冬氨酸鸟氨酸注射液中不可避免地会存在一些杂质，杂质含量多少直接影响了门冬氨酸鸟氨酸注射液的质量，如鸟氨酰胺并无治疗作用，且容易引起人体的不良反应和增强药物刺激性，因此，为了确保门冬氨酸鸟氨酸注射液的质量，需要对制备得到的门冬氨酸鸟氨酸注射液进行杂质分析检测，而在杂质分析检测的过程中，由于门冬氨酸鸟氨酸注射液会进行稀释和发生暴露，使得门冬氨酸鸟氨酸注射液中的各物质的含量发生变化，进而使得门冬氨酸鸟氨酸注射液的杂质含量发生变化，进而影响门冬氨酸鸟氨酸注射液的杂质分析准确性，尤其是在针对门冬氨酸鸟氨酸注射液的质检中，若门冬氨酸鸟氨酸注射液的杂质含量发生变化，而造成门冬氨酸鸟氨酸注射液的品质要求不达标，则造成了门冬氨酸鸟氨酸注射液的浪费。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足之处，提供一种杂质分析准确性较好的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法，包括如下步骤：
获取门冬氨酸鸟氨酸注射液；
取样：采用稀释剂对所述门冬氨酸鸟氨酸注射液进行稀释处理，得到待测液；
建立色谱条件：色谱参数包括氨基柱4.6mm*250mm，5μm，柱温：20℃～30℃，紫外检测波长：204nm～206nm，流速：1.0ml/min，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液，进样量：20μl；
色谱实验：按上述色谱条件对所述待测液进行高效液相色谱检测分析；
其中，所述稀释剂包括流动相、抗氧化剂和低级酰卤。
在其中一个实施例中，所述低级酰卤为低级酰氯、低级酰溴和低级酰碘中的至少一种。
在其中一个实施例中，所述低级酰卤为含有1～4个碳原子的烷基酰氯、含有1～4个碳原子的烷基酰溴、含有1～5个碳原子的烷基酰碘、二氯乙酰氯、草酰氯、亚硫酰氯、亚硫酰(二)氯、亚硫酰溴、溴乙酰溴、溴代异丙酰溴、草酰溴、丙烯酰碘和草酰碘中的至少一种。
在其中一个实施例中，所述待测液的PH为4.2～6.8。
在其中一个实施例中，所述柱温为30℃。
在其中一个实施例中，所述流动相中的乙腈-磷酸盐缓冲液的体积比为0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液：乙腈＝38/62～42/58。
在其中一个实施例中，所述待测液中的门冬氨酸鸟氨酸的浓度均为4mg/ml～6mg/ml。
在其中一个实施例中，所述抗氧化剂为亚硫酸氢钠、半胱氨酸、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、二丁基苯酚、没食子酸丙酯和焦亚硫酸钠中的至少一种。
在其中一个实施例中，所述稀释剂中的所述抗氧化剂的含量为：0.3mg/ml～0.8mg/ml。
在其中一个实施例中，所述稀释剂中的所述低级酰卤的含量为：0.05mg/ml～0.2mg/ml。
与现有技术相比，本发明至少具有以下优点：
本发明的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法，在对门冬氨酸鸟氨酸注射液进行稀释的过程中，采用的稀释液包括流动相、抗氧化剂和低级酰卤，其中流动相起到稀释的作用，抗氧化剂和低级酰氯相互配合有效减轻了门冬氨酸鸟氨酸注射液在稀释过程中各杂质组分的含量会发生变化的问题，即有效提高了门冬氨酸鸟氨酸注射液中个杂志组分的含量稳定性，进而提高了门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测准确性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明一实施方式的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法的流程图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施方式。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明的公开内容理解的更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本申请提供一种门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法。上述的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法包括如下步骤：获取门冬氨酸鸟氨酸注射液；取样：采用稀释剂对门冬氨酸鸟氨酸注射液进行稀释处理，得到待测液；建立色谱条件：色谱参数包括氨基柱4.6mm*250mm，5μm，柱温：20℃～30℃，紫外检测波长：204nm～206nm，流速：1.0ml/min，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液，进样量：20μl；色谱实验：按上述色谱条件对待测液进行高效液相色谱检测分析；其中，稀释剂包括流动相、抗氧化剂和低级酰卤。
上述的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法，在对门冬氨酸鸟氨酸注射液进行稀释的过程中，采用的稀释液包括流动相、抗氧化剂和低级酰卤，其中流动相起到稀释的作用，抗氧化剂和低级酰氯相互配合有效减轻了门冬氨酸鸟氨酸注射液在稀释过程中各杂质组分的含量会发生变化的问题，即有效提高了门冬氨酸鸟氨酸注射液中个杂志组分的含量稳定性，进而提高了门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测准确性。
为了更好地理解本申请的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法，以下对本申请的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法作进一步的解释说明：
请参阅图1，一实施方式的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法包括如下步骤：
S100、获取门冬氨酸鸟氨酸注射液。
S200、取样：采用稀释剂对门冬氨酸鸟氨酸注射液进行稀释处理，得到待测液，其中，稀释剂包括流动相、第二抗氧化剂和低级酰卤。可以理解，在门冬氨酸鸟氨酸注射液制备过程中会引进或生成需要说明的是，实施例1～5和对比例1～2中提及的门冬氨酸鸟氨酸注射液为现配现用的每毫升含有3mg门冬氨酸鸟氨酸、10ng鸟氨酸内酰胺、10ng丁二酸、10ng精氨酸、10ng富马酸和10ng苹果酸的混合溶液。、丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸，而门冬氨酸鸟氨酸注射液中添加的用以提高门冬氨酸鸟氨酸中各物质的稳定性的物质在对门冬氨酸鸟氨酸注射液进行稀释时，含量也会下降，进而造成门冬氨酸鸟氨酸注射液中的杂质发生变化，因此，本申请中，在流动相中加入抗氧化剂，抗氧化剂能有效减轻门冬氨酸鸟氨酸注射液稀释后丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸的含量的变化，但抗氧化剂加入后会造成鸟氨酸内酰胺的含量增加，因此，向流动相中加入低级酰卤和抗氧化剂，使得低级酰卤和抗氧化剂配合，采用加入了低级酰卤和抗氧化剂的流动相对门冬氨酸鸟氨酸注射液进行稀释后，较好地减轻了门冬氨酸鸟氨酸注射液稀释后丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸的含量的变化，进而提高了门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测准确性。
S300、建立色谱条件：色谱参数包括氨基柱4.6mm*250mm，5μm，柱温：20℃～30℃，紫外检测波长：204nm～206nm，流速：1.0ml/min，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液，进样量：20μl。可以理解，在色谱参数包括氨基柱4.6mm*250mm，5μm，柱温：20℃～30℃，紫外检测波长：204nm～206nm，流速：1.0ml/min，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液，进样量：20μl的条件下，对门冬氨酸鸟氨酸注射液中的各杂质进行检测分析，专属性强，各杂质峰分离效果较好，进一步确保了门冬氨酸鸟氨酸注射液中的各杂质的分析检测准确性，且重复性好。
S400、色谱实验：按上述色谱条件对待测液进行高效液相色谱检测分析，操作简单。
需要说明的是，低级酰卤能较好地溶于流动相中，进而确保了低级酰卤在对门冬氨酸鸟氨酸注射液进行稀释的过程中，能与门冬氨酸鸟氨酸注射液快速混合均匀，进而与抗氧化剂配合实现待测液中鸟氨酸内酰胺、丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸的含量稳定性，具体地，低级酰卤的反应原理可能为：在溶于流动相后，由于低级酰卤中的羰基具有较高的活性，进而在存在能生成鸟氨酸内酰胺的中间产物时，低级酰卤中的羰基会先于中间产物中的氨基一步而形成其他产物，进而减轻了鸟氨酸内酰胺的含量的变化。
在其中一个实施例中，低级酰卤为低级酰氯、低级酰溴和低级酰碘中的至少一种。可以理解，低级酰氯、低级酰溴和低级酰碘均具有较好的水溶性，进而能实现与门冬氨酸鸟氨酸注射液的充分混合，且能较好地与抗氧化剂配合，进而实现待测液中鸟氨酸内酰胺、丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸的含量稳定性，需要说明的是，当低级酰氯、低级酰溴和低级酰碘同时使用时，更好地实现了待测液中鸟氨酸内酰胺、丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸的含量稳定性，从而确保了门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测准确性。
在其中一个实施例中，草酰碘、草酰溴和亚硫酰氯的质量比为(1～5)：(2～3)：(3～8)，较好地减轻了待测液中鸟氨酸内酰胺、丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸含量变化的问题，并且对待测液中鸟氨酸内酰胺、丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸的含量检测的准确性的影响较小，进而更好地确保了门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测准确性。
在其中一个实施例中，低级酰卤为含有1～4个碳原子的烷基酰氯、含有1～4个碳原子的烷基酰溴、含有1～5个碳原子的烷基酰碘、二氯乙酰氯、草酰氯、亚硫酰氯、亚硫酰(二)氯、亚硫酰溴、溴乙酰溴、溴代异丙酰溴、草酰溴、丙烯酰碘和草酰碘中的至少一种。可以理解，当低级酰卤为含有1～4个碳原子的烷基酰氯、含有1～4个碳原子的烷基酰溴、含有1～5个碳原子的烷基酰碘、二氯乙酰氯、草酰氯、亚硫酰氯、亚硫酰(二)氯、亚硫酰溴、溴乙酰溴、溴代异丙酰溴、草酰溴、丙烯酰碘和草酰碘中的至少一种时，更好地与抗氧化剂配合实现了待测液中鸟氨酸内酰胺、丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸的含量稳定性，从而更好地确保了门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测准确性。
在其中一个实施例中，低级酰卤包括草酰碘和亚硫酰氯。可以理解，当低级酰卤包括草酰碘和亚硫酰氯时，抗氧化剂、草酰碘和亚硫酰氯配合，能更好地减轻了待测液中鸟氨酸内酰胺、丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸含量变化的问题，并且对待测液中鸟氨酸内酰胺、丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸的含量检测的准确性的影响更小，更好地确保了门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测准确性。
在其中一个实施例中，草酰碘和亚硫酰氯的质量比为(3～8)：(6～10)，进一步减轻了待测液中鸟氨酸内酰胺、丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸含量变化的问题，并且对待测液中鸟氨酸内酰胺、丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸的含量检测的准确性的影响更小，进一步更好地确保了门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测准确性。
在其中一个实施例中，待测液的PH为4.2～6.8。可以理解，当待测液的PH为4.2～6.8时，待测液中的，也就是门冬氨酸鸟氨酸注射液中的鸟氨酸内酰胺、丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸的含量变化相对较小，因此，使得待测液的PH为4.2～6.8，有效地提高了门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测准确性。
在其中一个实施例中，柱温为30℃。
在其中一个实施例中，流动相中的乙腈-磷酸盐缓冲液的体积比为0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液：乙腈＝38/62～42/58，对门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质具有较好的分离作用，较好地实现了门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质的有效检出。
在其中一个实施例中，流动相中的乙腈-磷酸盐缓冲液的体积比为0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液：乙腈＝40:60，更好地实现了门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质的有效检出。
在其中一个实施例中，待测液中的门冬氨酸鸟氨酸的浓度均为2mg/ml～5mg/ml。可以理解，在待测液中的门冬氨酸鸟氨酸的浓度均为2mg/ml～5mg/ml时，尤其为3mg/ml时，较好地确保了门冬氨酸鸟氨酸中各杂质的有效检出。
在其中一个实施例中，抗氧化剂为亚硫酸氢钠、半胱氨酸、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、二丁基苯酚、没食子酸丙酯和焦亚硫酸钠中的至少一种。可以理解，亚硫酸氢钠、半胱氨酸、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、二丁基苯酚、没食子酸丙酯和焦亚硫酸钠均能较好地与低级酰卤配合而提高门冬氨酸鸟氨酸注射液中的各物质的稳定性，即减少了门冬氨酸鸟氨酸注射液中各物质的含量变化，进而提高了门冬氨酸鸟氨酸注射液的杂质检测分析准确性。
在其中一个实施例中，稀释剂中的抗氧化剂的含量为：0.3mg/ml～0.8mg/ml。可以理解，当抗氧化剂的含量为0.3mg/ml～0.8mg/ml时，尤其为0.5mg/ml时，较好地确保了与低级酰卤配合时对门冬氨酸鸟氨酸注射液中的各物质的稳定性起到的作用。
在其中一个实施例中，稀释剂中的低级酰卤的含量为：0.05mg/ml～0.52mg/ml。可以理解，当稀释剂中的低级酰卤的含量为：0.05mg/ml～0.52mg/ml时，尤其为0.2mg/ml时，有效地与低级酰卤配合而提高了门冬氨酸鸟氨酸注射液中的各物质的稳定性。
在其中一个实施例中，氨基柱以氨基键合硅胶为填充剂。可以理解，有效地确保了门冬氨酸鸟氨酸注射液中的各物质的有效分离。
在其中一个实施例中，0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液的制备，具体为取磷酸二氢钾6.8g，加水300ml溶解后加入20％～25％的氨水3ml，加水稀释至500ml，混匀后用磷酸调PH至4.2～6.8。
以下列举一些具体实施例，若提到％，均表示按重量百分比计。需注意的是，下列实施例并没有穷举所有可能的情况，并且下述实施例中所用的材料如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
制备稀释液：
取磷酸二氢钾6.8g，加水300ml溶解后加入20％±0.2的氨水3ml，加水稀释至500ml，混匀后用磷酸调PH至4.2，得到0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液；
取0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液4L和乙腈6L进行混合，接着加入0.3mg/ml亚硫酸氢钠和0.05mg/ml丙烯酰碘搅拌混合，得到稀释液；
待测液的配置：
将门冬氨酸鸟氨酸注射液置于1000ml容量瓶中，并加入500ml稀释剂摇匀，接着加入稀释剂进行定容，得到待测液；
建立色谱条件：色谱参数包括氨基柱4.6mm*250mm，5μm，柱温：20℃，紫外检测波长：206nm，流速：1.0ml/min，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液，进样量：20μl；
色谱实验：按上述色谱条件对待测液进行高效液相色谱检测分析。
实施例2
制备稀释液：
取磷酸二氢钾6.8g，加水300ml溶解后加入22％±0.2的氨水3ml，加水稀释至500ml，混匀后用磷酸调PH至4.5，得到0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液；
取0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液4L和乙腈6L进行混合，接着加入0.mg/ml半胱氨酸和0.52mg/ml草酰碘和亚硫酰氯的混合物搅拌混合，得到稀释液，其中，草酰碘和亚硫酰氯的质量比为4：5；
待测液的配置：
将门冬氨酸鸟氨酸注射液置于1000ml容量瓶中，并加入500ml稀释剂摇匀，接着加入稀释剂进行定容，得到待测液；
建立色谱条件：色谱参数包括氨基柱4.6mm*250mm，5μm，柱温：20℃，紫外检测波长：206nm，流速：1.0ml/min，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液，进样量：20μl；
色谱实验：按上述色谱条件对待测液进行高效液相色谱检测分析。
实施例3
制备稀释液：
取磷酸二氢钾6.8g，加水300ml溶解后加入20％±0.2的氨水3ml，加水稀释至500ml，混匀后用磷酸调PH至5.0，得到0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液；
取0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液4L和乙腈6L进行混合，接着加入0.5mg/ml抗坏血酸和半胱氨酸的混合物，以及0.2mg/ml草酰碘和亚硫酰氯的混合物搅拌混合，得到稀释液，其中，草酰碘和亚硫酰氯的质量比为1：2；
待测液的配置：
将门冬氨酸鸟氨酸注射液、置于1000ml容量瓶中，并加入500ml稀释剂摇匀，接着加入稀释剂进行定容，得到待测液；
建立色谱条件：色谱参数包括氨基柱4.6mm*250mm，5μm，柱温：30℃，紫外检测波长：204nm，流速：1.0ml/min，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液，进样量：20μl；
色谱实验：按上述色谱条件对待测液进行高效液相色谱检测分析。
实施例4
制备稀释液：
取磷酸二氢钾6.8g，加水300ml溶解后加入20％±0.2的氨水3ml，加水稀释至500ml，混匀后用磷酸调PH至5.0，得到0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液；
取0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液4L和乙腈6L进行混合，接着加入0.5mg/ml没食子酸丙酯和0.2mg/ml草酰碘、草酰溴和亚硫酰氯的混合物搅拌均匀，得到稀释液，其中，草酰碘、草酰溴和亚硫酰氯的质量比为5：3：8；
待测液的配置：
将门冬氨酸鸟氨酸注射液、置于1000ml容量瓶中，并加入500ml稀释剂摇匀，接着加入稀释剂进行定容，得到待测液；
建立色谱条件：色谱参数包括氨基柱4.6mm*250mm，5μm，柱温：30℃，紫外检测波长：204nm，流速：1.0ml/min，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液，进样量：20μl；
色谱实验：按上述色谱条件对待测液进行高效液相色谱检测分析。
实施例5
制备稀释液：
取磷酸二氢钾6.8g，加水300ml溶解后加入25％±0.2的氨水3ml，加水稀释至500ml，混匀后用磷酸调PH至5.0，得到0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液；
取0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液4L和乙腈6L进行混合，接着加入0.5mg/ml二丁基苯酚和抗坏血酸的混合物，以及0.2mg/ml草酰碘、草酰溴和亚硫酰氯的混合物搅拌混合，得到稀释液，其中，草酰碘、草酰溴和亚硫酰氯的质量比为1：2：3；
待测液的配置：
将门冬氨酸鸟氨酸注射液置于1000ml容量瓶中，并加入500ml稀释剂摇匀，接着加入稀释剂进行定容，得到待测液；
建立色谱条件：色谱参数包括氨基柱4.6mm*250mm，5μm，柱温：30℃，紫外检测波长：204nm，流速：1.0ml/min，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液，进样量：20μl；
色谱实验：按上述色谱条件对待测液进行高效液相色谱检测分析。
实施例6
制备稀释液：
取磷酸二氢钾6.8g，加水300ml溶解后加入25％±0.2的氨水3ml，加水稀释至500ml，混匀后用磷酸调PH至6.8，得到0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液；
取0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液4L和乙腈6L进行混合，接着加入0.5mg/ml没食子酸丙酯和0.2mg/ml溴代异丙酰溴搅拌混合，得到稀释液；
待测液的配置：
将门冬氨酸鸟氨酸注射液置于1000ml容量瓶中，并加入500ml稀释剂摇匀，接着加入稀释剂进行定容，得到待测液；
建立色谱条件：色谱参数包括氨基柱4.6mm*250mm，5μm，柱温：30℃，紫外检测波长：204nm，流速：1.0ml/min，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液，进样量：20μl；
色谱实验：按上述色谱条件对待测液进行高效液相色谱检测分析。
对比例1
制备稀释液：
取磷酸二氢钾6.8g，加水300ml溶解后加入20％的氨水3ml，加水稀释至500ml，混匀后用磷酸调PH至4.2，得到0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液；
取0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液4L和乙腈6L进行混合，得到稀释液；
待测液的配置：
将门冬氨酸鸟氨酸注射液置于1000ml容量瓶中，并加入500ml稀释剂摇匀，接着加入稀释剂进行定容，得到待测液；
建立色谱条件：色谱参数包括氨基柱4.6mm*250mm，5μm，柱温：30℃，紫外检测波长：204nm，流速：1.0ml/min，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液，进样量：20μl；
色谱实验：按上述色谱条件对待测液进行高效液相色谱检测分析。
对比例2
制备稀释液：
取磷酸二氢钾6.8g，加水300ml溶解后加入25％的氨水3ml，加水稀释至500ml，混匀后用磷酸调PH至6.8，得到0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液；
取0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液4L和乙腈6L进行混合，接着加入0.5mg/ml亚硫酸氢钠和抗坏血酸的混合物搅拌混合，得到稀释液；
待测液的配置：
将门冬氨酸鸟氨酸注射液置于容量瓶中，并加入500ml稀释剂摇匀，接着加入稀释剂进行定容，得到待测液；
建立色谱条件：色谱参数包括氨基柱4.6mm*250mm，5μm，柱温：30℃，紫外检测波长：204nm，流速：1.0ml/min，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液，进样量：20μl；
色谱实验：按上述色谱条件对待测液进行高效液相色谱检测分析。
需要说明的是，实施例1～5和对比例1～2中提及的待测液为现配现用的每毫升含有3mg门冬氨酸鸟氨酸、10ng鸟氨酸内酰胺、10ng丁二酸、10ng精氨酸、10ng富马酸和10ng苹果酸的混合溶液。
对实施例1～5和对比例1～2中的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法得到的检测数据进行分析，测定结果如下：
表1：门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质检测结果
Figure BDA0003620346470000121
现将配制好的待测液在常温下放置0.5h后进行杂质检测。
表2：门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质检测结果
Figure BDA0003620346470000122
Figure BDA0003620346470000131
需要说明的是，以上均为10针测得的平均值，且10针的RSD小于2.0％，再现性较好。
从表1和表2中可以看出实施例1～6的中门冬氨酸鸟氨酸和鸟氨酸内酰胺的含量变化相对于对比例1～2的明显较小，尤其是实施例2～5，并且尤其是表2可更加明显地体现，而丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸几乎无变化，说明本申请门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法能较好地确保了待测液中鸟氨酸内酰胺、丁二酸、精氨酸、富马酸和苹果酸的含量稳定性，进而更好地确保了门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测准确性。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
获取门冬氨酸鸟氨酸注射液；
取样：采用稀释剂对所述门冬氨酸鸟氨酸注射液进行稀释处理，得到待测液；
建立色谱条件：色谱参数包括氨基柱4.6mm*250mm，5μm，柱温：20℃～30℃，紫外检测波长：204nm～206nm，流速：1.0ml/min，流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液，进样量：20μl；
色谱实验：按上述色谱条件对所述待测液进行高效液相色谱检测分析；
其中，所述稀释剂包括流动相、抗氧化剂和低级酰卤。
2.根据权利要求1所述的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法，其特征在于，所述低级酰卤为低级酰氯、低级酰溴和低级酰碘中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法，其特征在于，所述低级酰卤为含有1～4个碳原子的烷基酰氯、含有1～4个碳原子的烷基酰溴、含有1～5个碳原子的烷基酰碘、二氯乙酰氯、草酰氯、亚硫酰氯、亚硫酰(二)氯、亚硫酰溴、溴乙酰溴、溴代异丙酰溴、草酰溴、丙烯酰碘和草酰碘中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法，其特征在于，所述待测液的PH为4.2～6.8。
5.根据权利要求1所述的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法，其特征在于，所述柱温为30℃。
6.根据权利要求1所述的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法，其特征在于，所述流动相中的乙腈-磷酸盐缓冲液的体积比为0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液：乙腈＝38/62～42/58。
7.根据权利要求1所述的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法，其特征在于，所述待测液中的门冬氨酸鸟氨酸的浓度均为4mg/ml～6mg/ml。
8.根据权利要求1所述的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法，其特征在于，所述抗氧化剂为亚硫酸氢钠、半胱氨酸、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、二丁基苯酚、没食子酸丙酯和焦亚硫酸钠中的至少一种。
9.根据权利要求1所述的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法，其特征在于，所述稀释剂中的所述抗氧化剂的含量为：0.3mg/ml～0.8mg/ml。
10.根据权利要求1所述的门冬氨酸鸟氨酸注射液杂质分析检测方法，其特征在于，所述稀释剂中的所述低级酰卤的含量为：0.05mg/ml～0.52mg/ml。
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