CN114959123A - 一种基于配体交换和位阻效应的混合模式色谱技术分离麦芽三糖料液中单糖和二糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于配体交换和位阻效应的混合模式色谱技术分离麦芽三糖料液中单糖和二糖的方法，将含有葡萄糖和麦芽糖的麦芽三糖料液上样到含有超高交联强阳离子交换树脂的色谱柱中进行分离，收集流出液，即得除去葡萄糖和麦芽糖的麦芽三糖溶液。由于麦芽三糖、葡萄糖、麦芽糖均有一个端基异构碳上的羟基去质子化后与超高交联的强阳离子交换树脂表面上阳离子的正电荷发生相互作用，并且麦芽三糖、葡萄糖、麦芽糖的位阻效应不同，使三种物质得到分离。本发明通过固定床实现去除单糖和二糖的目的，并且收集液中的麦芽三糖产品的纯度达到98％。
Description
技术领域
本发明属于生物分离技术领域，具体涉及一种基于配体交换和位阻效应的混合模式色谱技术分离麦芽三糖料液中单糖和二糖的方法。
背景技术
麦芽三糖是由3个葡萄糖单元以α-l,4糖苷键连接的直链麦芽低聚糖，具有很多优良的特性：甜味柔和适中，且甜度仅为蔗糖的32％，可代替蔗糖，降低食品甜度[1]；保湿性强，防止食品中淀粉的回生，也可用于添加到化妆品及药物中，安全性高；渗透压较低，容易被人体消化吸收；具有能量缓释性，与葡萄糖相比必须在肠道经由小肠糖苷酶水解后才能够吸收利用，是功能饮料的理想甜味剂之一；耐热、耐酸性能比蔗糖、葡萄糖好，不易发生美拉德反应，在面包烘焙行业能很好地保护颜色。虽然麦芽三糖具有诸多益处，但由于其生产成本较高，麦芽三糖的利用受到限制。
目前来说，麦芽三糖的发展多以酶催化和细胞催化为主，但是在得到的麦芽三糖发酵液中，葡萄糖(单糖)和麦芽糖(二糖)这两种物质总是存在的，也是麦芽三糖产品纯度不高的主要原因[1]。一般来说，催化反应的底物是麦芽糊精和淀粉，所以说在我们得到的麦芽三糖产品中总是有一些单糖和二糖的存在[2]。众所周知，纯度往往是和价格呈正相关的，尤其是高纯度产品的进一步提纯，但是解决的难度也是可想而知的。因此，急需寻找一种高效节能的分离提取方法。目前，麦芽三糖纯化方法主要有：有机溶剂分级分离法，膜分离法，色谱分离法。有机溶剂分级分离法是利用混合物体系中各组分分子量的差异以及各组分在不同浓度有机溶剂中溶解度的不同来实现对目标麦芽三糖的分离纯化。但是这种方法只能对产物进行粗略的分离，不可能将各个聚合度的糖组分或杂质成分很精确的分离开来。膜分离法是借助天然或人工合成的高分子薄膜，以外界能量或化学位差为动力，对双组分或多组分进行分离的方法。但是膜易损坏，造成成本增加。基于树脂的色谱分离法具有操作简单、设备要求低、能耗小、环境污染少等优点。并且在色谱分离中，混合作用色谱模式越来越被重视。通过结合两种或两种以上的色谱机理实现较难物质的分离。因此，本发明提供了一种基于配体交换和位阻效应的混合模式色谱技术分离麦芽三糖料液中单糖和二糖的方法。
参考文献
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发明内容
发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种基于配体交换和位阻效应的混合模式色谱技术分离麦芽三糖料液中单糖和二糖的方法，以解决麦芽三糖产业中下游分离难题，极大降低了分离过程中的能量消耗，实现了麦芽三糖的高纯度回收。
发明思路：基于配体交换作用的强阳离子交换树脂的主要原理如下：糖分子上每一个羟基都带有一个非常弱的负电荷，而端基异构碳上所带的羟基可被去质子化，从而带上一个很强的负电荷。糖分子上的这些负电荷与树脂表面上的金属离子的正电荷之间的相互作用使糖被保留，从而达到分离。由于葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖均含有一个端基异构碳羟基，故三种糖可以与阳离子交换树脂的阳离子增加配体交换作用力。同时由于不同物质的位阻效应大小不同，结合这两种色谱机理，可对含有端基异构碳羟基的邻“族”糖分子混合物进行提纯，且用超高交联强阳离子交换树脂来分离纯化麦芽三糖迄今为止鲜有报道。
为了解决上述技术问题，本发明公开了一种基于配体交换和位阻效应的混合模式色谱技术分离麦芽三糖料液中单糖和二糖的方法，将含有葡萄糖和麦芽糖的麦芽三糖的料液上样到含有超高交联强阳离子交换树脂的色谱柱中进行分离，由于麦芽三糖、葡萄糖、麦芽糖均有一个端基异构碳上的羟基去质子化后与超高交联强阳离子交换树脂表面上的阳离子产生相互作用，并且位阻效应顺序为麦芽三糖、麦芽糖、葡萄糖，所以葡萄糖和麦芽糖在树脂上保留时间长，麦芽三糖几乎不保留，故洗脱后可在流出口收集到除去葡萄糖(单糖)和麦芽糖(二糖)的麦芽三糖产品液。
其中，所述含有麦芽糖、葡萄糖和麦芽三糖料液为麦芽三糖料液是全细胞催化所得，需先进行上柱前的预处理，即离心处理，取上清液，所得上清液即为本发明中的含有麦芽糖、葡萄糖和麦芽三糖料液为麦芽三糖料液；所述含有麦芽三糖、麦芽糖和葡萄糖的麦芽三糖料液中，葡萄糖的含量为10～35g/L，麦芽糖的含量为15～50g/L，麦芽三糖的含量为80～100g/L。
其中，所述超高交联强阳离子交换树脂是以苯乙烯为单体通过交联剂二乙烯基苯交联的树脂；所述超高交联强阳离子交换树脂的交联度为3％～10％。
其中，所述超高交联强阳离子交换树脂包括但不限于H型、Na型、K型、Ca型等。
其中，所述超高交联强阳离子交换树脂的粒径为0.12～1.26mm，含水量为35％～75％，湿真密度为1.05～1.12g/cm3，比表面积为200～2000m2/g，孔容为0.51～1.33cm3/g，孔径为1～200nm。
其中，所述上样的速率为0.3～1.5BV/h；上样量为使树快要脂饱和即可，继续增加上样量可能导致树脂吸附到饱和，使流出液中残留葡萄糖和麦芽糖，如，上样液的体积可为1.5～3BV；其中，可通过对固定床穿透实验中穿透曲线的饱和点(C/C0＝1)来判断树脂是否吸附饱和。
优选地，在上样结束后，即收集第一流出液(即为纯麦芽三糖溶液)后；用纯水对超高交联阳离子交换树脂进行洗脱，收集第二流出液，即为树脂颗粒间隙少量的麦芽三糖溶液。
其中，洗脱剂为水，洗脱剂的用量为0.8～1BV，洗脱剂的流速为0.3～1.5BV/h。
优选地，在洗脱过程结束后，即收集第二流出液后；用纯水对树脂柱进行解吸，收集麦芽糖和葡萄糖的混合液，同时树脂再生。
其中，解吸剂的用量为3～5BV，解吸剂的流速为0.3～1.5BV/h。
上述工艺流程中，所涉及的吸附(含有麦芽三糖的麦芽三糖料液)、洗脱(树脂颗粒间隙少量的麦芽三糖溶液)、解吸(麦芽糖和葡萄糖混合液)均是在常温下进行的。
上述工艺流程中，本发明所使用的固定床柱分离装置，由1根装填有吸附剂的树脂柱、蠕动泵和自动部份收集器组成，通过切换流动相将整个系统分为吸附、洗脱、解吸三个步骤，按顺序切换，先进量含葡萄糖和麦芽糖的麦芽三糖料液待树脂柱吸附葡萄糖和麦芽糖饱和后，吸附段出口处收集产品液(麦芽三糖)，再切换纯水进行洗脱，得到树脂颗粒间隙的少量麦芽三糖溶液，后续用纯水进行解吸，收集吸附的葡萄糖和麦芽糖混合液，解吸完成也就意味着树脂的再生，吸附剂可重复使用。
通过上述工艺路线处理后，本发明通过固定床实现去除单糖和二糖的目的，并且收集液中的麦芽三糖产品的纯度达到98％。
本发明利用一种利用配体交换和位阻效应的混合色谱模式原理，通过装填有超高交联强阳离子交换树脂的固定床柱实验实现去除葡萄糖和麦芽糖的目的，产品液中的葡萄糖和麦芽糖的含量已低于液相检测限，麦芽三糖产品的纯度达到了98％。
因此本发明公布了一种基于配体交换和位阻效应的混合模式色谱技术来分离麦芽三糖料液中单糖和二糖的方法。将该阳离子交换树脂进行固定床柱分离实验。所述分离装置，由1根装填有吸附剂的树脂柱、蠕动泵和自动部份收集器组成，通过切换流动相将整个系统分为吸附、洗脱、解吸三个步骤，按顺序切换，先进量麦芽三糖料液待树脂柱吸附葡萄糖和麦芽糖饱和后，吸附段出口处收集产品液(麦芽三糖)，再切换纯水进行洗脱，得到树脂颗粒间隙的少量麦芽三糖溶液，后续用纯水进行解吸，收集吸附的葡萄糖和麦芽糖混合液，解吸完成也就意味着树脂的再生，吸附剂可重复使用。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优势：
(1)色谱分离操作均在室温下进行，大大降低了能耗。
(2)树脂易于再生，可重复使用，运行成本低，可直接进行工艺放大。
(3)通过树脂柱，将葡萄糖和麦芽糖等杂质一步和产品麦芽三糖分离，保证了麦芽三糖产品的纯度和品质，纯度可达到98％。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明，本发明的上述和/或其他方面的优点将会变得更加清楚。
图1为本发明的工艺流程图。
图2为本发明的超高交联强阳离子交换树脂的色谱峰图。
具体实施方式
下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
以下实施例中使用外标法对料液中的麦芽三糖、葡萄糖、麦芽糖浓度进行检测，色谱条件为：
1)检测器：Agilent 1260型高效液相色谱仪-示差检测器；
2)色谱柱：AMINEX HPX-87H Organic Acid液相色谱柱；
3)流动相：5mmol/L的硫酸；
4)流速：0.6mL/min；
5)柱温：28℃；
6)进样体积：20μL。
检测方法及步骤：
1)色谱柱的平衡：配置好的流动相5mmol/L的硫酸用孔径0.22μm的混合微孔滤膜过滤，再进行超声处理30min。用处理好的流动相以0.5mL/min的流速冲洗色谱柱，同时开启柱温箱，开始采集基线，待基线趋于直线时，平衡结束。
2)样品的检测：按照色谱条件编写进样序列及方法，将过膜处理后的标准品及样品按照进样序列置于自动进样器的相应位置上，开始进样并收集图谱信息。
使用以下方法计算产品液中麦芽三糖的纯度：
C1：产品液中麦芽三糖的浓度；
C2：产品液中麦芽糖的浓度；
C3：产品液中葡萄糖的浓度。
使用以下方法计算树脂的分离度大小：
W1、W2：此相邻两峰的峰宽。
一般说当R<1时，两峰有部分重叠；当R＝1.0时，分离度可达98％；当R＝1.5时，分离度可达99.7％。通常用R＝1.5作为相邻两组分已完全分离的标志。
以下实施例中，所使用的超高交联强阳离子交换树脂(Gal-SEX)为：以苯乙烯为单体，通过二乙烯苯交联的超高交联强阳离子交换树脂。并且树脂的粒径为0.12～1.26mm，含水量为35％～75％，湿真密度为1.05～1.12g/cm3，比表面积为200～2000m2/g，孔容为0.51～1.33cm3/g，孔径为1～200nm。树脂厂家可以根据上述条件自行合成。
以下实施例中，所述麦芽三糖料液P1是按照如下方法获得：以15mL 30％麦芽糊精水溶液作为底物，加入的全细胞催化剂的量为70U/g干底物，55℃恒温催化摇床中200r/min反应15h，反应结束后沸水浴10min灭酶，离心取上清液，过0.22μm水系滤膜除杂，通过HPLC-ELSD检测产生的葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖浓度；所述全细胞催化剂为黑曲霉α-葡萄糖苷酶，酶活为262U/g，酶活定义为：55℃、pH5.8条件下，30min从30％麦芽糊精中分解出1mg麦芽三糖的酶量定义为1个酶活单位，以U/g表示。按照上述方法重复四次实验，分别得到四批清液；第一批清液中，所得清液中麦芽三糖料液P1的葡萄糖含量为14g/L，麦芽糖含量为18g/L，麦芽三糖含量为85g/L；第二批清液中，所得清液中麦芽三糖料液P1的葡萄糖含量为15g/L，麦芽糖含量为20g/L，麦芽三糖含量为89.2g/L；第三批清液中，所得清液中麦芽三糖料液P1的葡萄糖含量为16g/L，麦芽糖含量为19g/L，麦芽三糖含量为87g/L；第四批清液中，所得清液中麦芽三糖料液P1的葡萄糖含量为13.5g/L，麦芽糖含量为21g/L，麦芽三糖含量为88.3g/L。
以下实施例中所述麦芽三糖、葡萄糖、麦芽糖标准曲线是按照如下方法获得：分别配制浓度为1g/L、3g/L、5g/L、8g/L、10g/L、12g/L、15g/L的葡萄糖、麦芽糖和麦芽三糖标准溶液，按照上述所说的色谱条件进行检测，所得数据进行过原点拟合，即得三种物质各自的标准曲线(表1)。
表1
| 物质 | 葡萄糖 | 麦芽糖 | 麦芽三糖 |
| 标准曲线拟合公式 | y＝329324.94x | y＝344849.60x | y＝297518.72x |
| R<sup>2</sup> | 0.9994 | 0.9992 | 0.997 |
从R2可以得出，得到的三种物质的标准曲线可以作为后续实验浓度的计算。
实施例1：中所用的超高交联强阳离子交换树脂的分离度由下列色谱峰实验获得：
采用由1根装填有吸附剂的树脂柱、蠕动泵和自动部份收集器组成的分离系统。树脂柱装填0.08L树脂(Gal-SEX)，该树脂柱直径3cm，高度15cm。将预处理后的第一批麦芽三糖料液P上柱，上样流速为1BV/h，待全部上样0.25BV完后，用1BV纯水进行洗脱，洗脱速率为1BV/h，整个过程中一直收集出口处的流出液。收集的产品流出液用HPLC检测各糖组分的浓度，直至糖浓度低于液相检测限(0.01ppm)。根据如色谱峰图2，可计算分离度R为：
从分离度均大于1可以看出，麦芽三糖和葡萄糖、麦芽糖的分离效果较好。
以下实施例2～5中，整个分离装置系统分为吸附、洗脱、解吸三个步骤，吸附段进料均为1.5BV，洗脱阶段的纯水用量为0.8BV，解吸段均用3BV的纯水进行解吸，解吸完成，也就意味着树脂的再生，所有段流速均为0.3BV/h。
以下实施例2～5中，所述固定床穿透实验的分离装置，其是由1根装填有吸附剂(超高交联强阳离子交换树脂)的树脂柱、蠕动泵和自动部份收集器组成，由通过切换流动相将整个系统分为吸附、洗脱、解吸三个步骤，如图1所示，按顺序切换，先进量麦芽三糖料液待树脂柱吸附葡萄糖和麦芽糖饱和后，吸附段出口处收集产品液(麦芽三糖)，再切换纯水进行洗脱，得到树脂颗粒间隙的少量麦芽三糖溶液，后续用纯水进行解吸，收集吸附的葡萄糖和麦芽糖混合液，解吸完成也就意味着树脂的再生，吸附剂可重复使用。
实施例2：色谱分离麦芽三糖料液P1
采用由1根装填有吸附剂的树脂柱、蠕动泵和自动部份收集器组成的分离系统。树脂柱装填0.6L树脂(Gal-SEX)，该树脂柱直径5cm，高度70cm。将预处理后的第一批麦芽三糖料液P1上柱，上柱浓度：麦芽三糖料液(葡萄糖14g/L，麦芽糖18g/L，麦芽三糖85g/L)，且上样体积为1.5BV，通过切换流动相将整个系统分为吸附、洗脱、解吸三个步骤，按顺序切换，先进量麦芽三糖料液待树脂柱吸附葡萄糖和麦芽糖饱和后，吸附段出口处收集产品液(麦芽三糖)，再切换0.8BV的纯水进行洗脱，得到树脂颗粒间隙的少量麦芽三糖溶液，后续用3BV的纯水进行解吸，收集吸附的葡萄糖和麦芽糖混合液，解吸完成也就意味着树脂的再生，流速均为0.3BV/h。收集的产品流出液用HPLC检测葡萄糖和麦芽糖浓度，葡萄糖和麦芽糖浓度低于液相检测限，产品的纯度达到97.3％，收率为98.527％。其中，第一流出液体积为1.5BV，麦芽三糖浓度为82.705g/L；第二流出液体积为0.8BV，麦芽三糖浓度为1.955g/L。
实施例3：色谱分离麦芽三糖料液P1
采用由1根装填有吸附剂的树脂柱、蠕动泵和自动部份收集器组成的分离系统。树脂柱装填0.6L树脂(Gal-SEX)，该树脂柱直径5cm，高度70cm。将预处理后的第二批麦芽三糖料液P1上柱，上柱浓度：麦芽三糖料液(葡萄糖15g/L，麦芽糖20g/L，麦芽三糖89.2g/L)，且上样体积为1.5BV，通过切换流动相将整个系统分为吸附、洗脱、解吸三个步骤，按顺序切换，先进量麦芽三糖料液待树脂柱吸附葡萄糖和麦芽糖饱和后，吸附段出口处收集产品液(麦芽三糖)，再切换0.8BV的纯水进行洗脱，得到树脂颗粒间隙的少量麦芽三糖溶液，后续用3BV的纯水进行解吸，收集吸附的葡萄糖和麦芽糖混合液，解吸完成也就意味着树脂的再生，流速均为0.3BV/h。收集的产品流出液用HPLC检测葡萄糖和麦芽糖浓度，葡萄糖和麦芽糖浓度低于液相检测限，产品的纯度达到98％，收率为99.06％。其中，第一流出液体积为1.5BV，麦芽三糖浓度为87.416g/L；第二流出液体积为0.8BV，麦芽三糖浓度为1.784g/L。
实施例4：色谱分离麦芽三糖料液P1
采用由1根装填有吸附剂的树脂柱、蠕动泵和自动部份收集器组成的分离系统。树脂柱装填0.6L树脂(Gal-SEX)，该树脂柱直径5cm，高度70cm。将预处理后的第三批麦芽三糖料液P1上柱，上柱浓度：麦芽三糖料液(葡萄糖16g/L，麦芽糖19g/L，麦芽三糖87g/L)，且上样体积为1.5BV，通过切换流动相将整个系统分为吸附、洗脱、解吸三个步骤，按顺序切换，先进量麦芽三糖料液待树脂柱吸附葡萄糖和麦芽糖饱和后，吸附段出口处收集产品液(麦芽三糖)，再切换0.8BV的纯水进行洗脱，得到树脂颗粒间隙的少量麦芽三糖溶液，后续用3BV的纯水进行解吸，收集吸附的葡萄糖和麦芽糖混合液，解吸完成也就意味着树脂的再生，流速均为0.3BV/h。收集的产品流出液用HPLC检测葡萄糖和麦芽糖浓度，葡萄糖和麦芽糖浓度低于液相检测限，产品的纯度达到97.8％，收率为98.7％。其中，第一流出液体积为1.5BV，麦芽三糖浓度为85.086g/L；第二流出液体积为0.8BV，麦芽三糖浓度为1.502g/L。
实施例5：色谱分离麦芽三糖料液P1
采用由1根装填有吸附剂的树脂柱、蠕动泵和自动部份收集器组成的分离系统。树脂柱装填0.6L树脂(Gal-SEX)，该树脂柱直径5cm，高度70cm。将预处理后的第四批麦芽三糖料液P1上柱，上柱浓度：麦芽三糖料液(葡萄糖13.5g/L，麦芽糖21g/L，麦芽三糖88.3g/L)，且上样体积为1.5BV，通过切换流动相将整个系统分为吸附、洗脱、解吸三个步骤，按顺序切换，先进量麦芽三糖料液待树脂柱吸附葡萄糖和麦芽糖饱和后，吸附段出口处收集产品液(麦芽三糖)，再切换0.8BV的纯水进行洗脱，得到树脂颗粒间隙的少量麦芽三糖溶液，后续用3BV的纯水进行解吸，收集吸附的葡萄糖和麦芽糖混合液，解吸完成也就意味着树脂的再生，流速均为0.3BV/h。收集的产品流出液用HPLC检测葡萄糖和麦芽糖浓度，葡萄糖和麦芽糖浓度低于液相检测限，产品的纯度达到96.9％，收率为97.75％。其中，第一流出液体积为1.5BV，麦芽三糖浓度为85.563g/L；第二流出液体积为0.8BV，麦芽三糖浓度为1.413/L。
对比例1
同实施例2～5，使用同一批次的料液，相同的进样量、流速等条件，将超高交联的Gal-SEX强阳离子交换树脂分别更换为强碱性阴离子交换树脂WA30和酸性阳离子交换树脂NH-1，在吸附段出口处收集产品液中均检测出葡萄糖和麦芽糖的存在，并且WA30树脂的收集液中麦芽三糖产品液纯度为35％，NH-1树脂的收集液中麦芽三糖产品液纯度为71％，说明这两种树脂都不能很好的提纯麦芽三糖料液中的麦芽三糖产品。
本发明提供了一种基于配体交换和位阻效应的混合模式色谱技术分离麦芽三糖料液中单糖和二糖的方法，由于麦芽三糖、葡萄糖、麦芽糖均有一个端基异构碳上的羟基去质子化后与超高交联的强阳离子交换树脂表面上的交换阳离子产生相互作用，并且麦芽三糖、葡萄糖、麦芽糖的位阻效应不同，使三种物质得到分离。将该阳离子交换树脂上样到色谱柱中进行穿透实验，收集流出液，即得除去葡萄糖(单糖)和麦芽糖(二糖)的麦芽三糖溶液。本发明通过固定床实现去除单糖和二糖的目的，并且收集液中的麦芽三糖产品的纯度达到98％。具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。
Claims (10)
1.一种基于配体交换和位阻效应的混合模式色谱技术分离麦芽三糖料液中单糖和二糖的方法，其特征在于，将含有葡萄糖和麦芽糖的麦芽三糖料液上样到含有超高交联强阳离子交换树脂的色谱柱中进行分离，收集流出液，即得除去葡萄糖和麦芽糖的麦芽三糖溶液。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述含有葡萄糖和麦芽糖的麦芽三糖料液中，葡萄糖的含量为10～35g/L，麦芽糖的含量为15～50g/L，麦芽三糖的含量为80～100g/L。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述超高交联强阳离子交换树脂是以苯乙烯为单体通过二乙烯基苯交联的树脂。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述超高交联强阳离子交换树脂的交联度为3％～10％。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述超高交联强阳离子交换树脂的粒径为0.12～1.26mm，含水量为35％～75％，湿真密度为1.05～1.12g/cm3，比表面积为200～2000m2/g，孔容为0.51～1.33cm3/g，孔径为1～200nm。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，将含有葡萄糖和麦芽糖的麦芽三糖料液上样到含有超高交联强阳离子交换树脂的色谱柱中进行分离，收集第一流出液；洗脱，收集第二流出液；解吸，对强阳离子交换树脂进行再生。
7.根据权利要求1或6所述方法，其特征在于，所述上样的速率为0.3～1.5BV/h。
8.根据权利要求6所述方法，其特征在于，洗脱剂为水，洗脱剂的用量为0.8～1BV，洗脱剂的流速为0.3～1.5BV/h。
9.根据权利要求6所述方法，其特征在于，解吸剂为水，解吸剂的用量为3～5BV，解吸剂的流速为0.3～1.5BV/h。
10.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述纯化后的麦芽三糖溶液中，麦芽三糖的纯度为98％以上。
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