CN114942329A - 一种检测试剂板和制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种检测试剂板和制备方法,所述检测试剂板,包括上盖和下板,以及装配在上盖下板之间的检测试纸,所述检测试纸包括所述检测试纸包括依次相互叠加的样本垫、标记物结合垫、测试垫、吸水垫,所述样本垫、标记物结合垫、测试垫和吸水垫均粘附在底卡上,所述标记物结合垫预先用含有结合垫处理液进行处理,所述结合垫处理液包括糖类、多聚物和表面活性剂。本发明所述快速免疫检测试纸能有效促进检测试纸上标记物释放,完成检测后的检测试纸背景干净,易于操作者对测试垫上检测结果的判读。非专业人员也可操作本发明的快速免疫检测试纸和检测试剂板,有利于人群快速筛查疾病,特别是对传染性疾病的筛查,例如新型冠状病毒的检测等。
Description
技术领域
本发明属于生物检测技术领域,特别涉及快速免疫检测领域的检测试纸、检测试剂板及其制作方法。
背景技术
侧向横流检测试纸(Lateral Flow Test Strip)是目前常用的快速检测产品,其利用免疫层析原理实现样本在试纸上的传递并获得检测结果。侧向横流检测试纸一般包括底卡,在底卡上从上游到下游依次相互叠加的粘附有样本垫、标记物结合垫(又可简称标记垫,通常采用玻纤作为载体)、测试垫(通常采用NC膜作为载体)和吸水垫(通常采用滤纸等吸水性材料)。标记垫上包括能与被分析物结合的标记物,例如标记了抗原或抗体的乳胶、胶体金、荧光微球等。测试垫上一般设有检测线和质控线。根据反应原理的不同,随着样本在试纸上的流动,标记物会在检测线上被捕获并聚集或不被捕获。根据标记物的信号,例如颜色信号或荧光信号,判断被分析物是否存在或其浓度。质控线可用于判断试纸是否有效或用于仪器读取检测结果时的定位等作用。
以新型冠状病毒(SARS-CoV-2)抗原检测为例,检测试纸采用侧向横流技术,检测试纸包括样本垫、标记物结合垫、测试垫和吸水垫,并依此相互叠加的粘贴在塑料底卡上。标记物结合垫上包括有抗新型冠状病毒(抗SARS-CoV-2) 抗体-乳胶标记物、测试垫的检测线(T线)包被有抗SARS-CoV-2抗体,测试垫的质控线(C线)包被有羊抗鼠IgG。制备好的检测试纸还可以装配在检测试剂板中使用。这类新型冠状病毒(SARS-CoV-2)抗原检测试纸可用于人群快速筛查和分流管理,以缩短传播链,优点是快速、简单、易行,作为新冠肺炎检测的补充手段。
检测样本时,将处理好的样本溶液滴加在检测试纸的样本垫上,样本垫上的样本依次流过标记物结合垫、测试垫,多余的样本溶液最后被吸水垫吸收。如果样本溶液经过标记物结合垫而标记物结合垫上的乳胶标记物释放缓慢,常会发生以下情况:乳胶标记物与样本溶液分离,样本水溶液率先经NC膜层析至吸水垫,乳胶标记物缓慢层析。这种情况会造成标记结合物(例如乳胶标记物)未在规定的时间内完成层析(跑板)并到达吸水垫,这些释放缓慢的乳胶标记物在NC膜上有大量残留,导致NC膜上的背景颜色变深,影响CT线显色,从而影响样本阴阳性判读结果。
因此,如何让标记物快速充分释放,并能和样本溶液同步完成层析是目前快速免疫检测领域,特别是采用侧向横流技术的快速免疫检测领域急需解决的问题。
发明内容
为了解决现有技术的上述问题,本发明提供了一种检测试纸,包括依次相互叠加的样本垫、标记物结合垫、测试垫、吸水垫和起支撑作用的底卡,所述样本垫、标记物结合垫、测试垫和吸水垫粘附在底卡上,在标记物结合垫上包含有结合垫处理液,所述结合垫处理液包括糖类、多聚物和表面活性剂。
进一步的,所述糖类的浓度为5%-30%(m/V)。更进一步的,糖类的浓度为 5%-15%(m/V)。优选的,所述糖类选自蔗糖或果糖。
进一步的,所述多聚物的浓度为0.1%-20%(m/V)。更进一步的,所述多聚物的浓度为0.1%-10%(m/V)。优选的,所述多聚物选自聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯醇。
进一步的,所述表面活性剂的浓度为0.1%-15%(m/V)。更进一步的,所述表面活性剂的浓度为0.1%-10%(m/V)。优选的,所述表面活性剂选自吐温20 或Silwet L7600。
进一步的,结合垫处理液还包括缓冲试剂。所述缓冲试剂选自磷酸盐缓冲溶液。
本发明还提供了一种检测试剂板,包括上盖和下板,以及装配在上盖下板之间的检测试纸,所述检测试纸包括依次相互叠加的样本垫、标记物结合垫、测试垫、吸水垫和底卡,所述样本垫、标记物结合垫、测试垫和吸水垫粘附在底卡上,在标记物结合垫上包含有结合垫处理液,所述结合垫处理液包括糖类、多聚物和表面活性剂。
本发明还提供了一种检测试纸的制备方法,包括以下步骤:
步骤一 将测试垫粘贴在底卡上,并将T线原料和C线原料包被在所述测试垫的T线位置和C线位置;
步骤二 配制结合垫处理液,并用结合垫处理液处理结合垫,烘干;
步骤三 将免疫标记物处理在步骤二中已经处理的标记物结合垫上,烘干;
步骤四 将步骤三制备好的标记物结合垫,以及吸水垫分别粘贴在测试垫的两端;
步骤五 将样本垫粘贴在标记物结合垫的另一端,制得检测试纸;
所述的结合垫处理液包括糖类、多聚物和表面活性剂。
进一步的制备方法中,所述糖类的浓度为5%-30%(m/V)。更进一步的,糖类的浓度为5%-15%(m/V)。优选的,所述糖类选自蔗糖或果糖。
进一步的制备方法中,所述多聚物的浓度为0.1%-20%(m/V)。更进一步的,所述多聚物的浓度为0.1%-10%(m/V)。优选的,所述多聚物选自聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯醇。
进一步的制备方法中,所述表面活性剂的浓度为0.1%-15%(m/V)。更进一步的,所述表面活性剂的浓度为0.1%-10%(m/V)。优选的,所述表面活性剂选自吐温20或SilwetL7600。
进一步的制备方法中,结合垫处理液还包括缓冲试剂。所述缓冲试剂选自磷酸盐缓冲溶液。
本发明还提供了一种检测试剂板的制备方法,在本发明所述检测试纸的制备基础上,增加步骤六将步骤五制得的检测试纸安装在上盖和下板之间,得检测试剂板。
本发明所述检测试纸的标记物结合垫预先经结合垫处理液处理,其可以有效促进检测试纸上标记物的释放,完成检测后的检测试纸背景干净,不会影响测试垫上结果的显色,不会影响检测结果的判读,易于操作者对测试垫上检测结果的判读。本发明所述检测试纸和检测试剂板操作简单,出结果快速,因此非专业人员也可操作本发明的快速免疫检测试纸和检测试剂板,用于人群快速筛查疾病,特别是对传染性疾病的筛查,例如新型冠状病毒的检测等。
附图说明
图1检测试纸的结构示意图。
图2检测试纸放入检测试剂板的结构示意图。
图3检测试剂板的分解图。
具体实施方式
如图1所示,本发明提供了一种快速免疫检测试纸1,所述检测试纸1包括依次相互叠加的样本垫2、标记物结合垫3、测试垫4、吸水垫5和起支撑作用的底卡6,样本垫、标记物结合垫、测试垫和吸水垫均粘附在底卡上。测试垫4 上设有检测线7(T线)和质控线8(C线)。根据检测项目的不同标记物结合垫、检测线、质控线上包括与检测项目相适应的检测试剂。
如图2和3所示,将图1所述检测试纸安装在检测试剂板100内,所述检测试剂板包括上盖101和下板102,上盖和下板可相互扣合并将检测试纸1固定在检测试剂板内。检测试剂板的上盖还包括加样孔103和观察窗104。检测试纸的样本垫2位于加样孔103之下。检测试纸的测试垫4位于观察窗104之下,便于观察检测结果。
本发明所述检测试纸的标记物结合垫除了含有免疫标记物外,还包括促进免疫标记物从标记物结合垫上释放的结合垫处理液。所述结合垫处理液包括糖类、多聚物和表面活性剂。
所述结合垫处理液中的糖类选自但不限于蔗糖、果糖,多聚物选自但不限于聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA),所述表面活性剂选自但不限于吐温 20(Tween-20)、Silwet L7600(S16)。
结合点处理液中的缓冲溶液选自但不限于磷酸盐缓冲溶液。
本发明所述标记物结合垫的处理方法,包括以下步骤:
步骤1.将糖类、多聚物、表面活性剂按比例混合于缓冲溶液中配制成结合垫处理液。
步骤2.将空白的未经处理的结合垫浸入配制好的结合垫处理液中,取出烘干,制成已处理的标记物结合垫。所述结合垫的材料选自但不限于聚酯膜或玻纤。
步骤3.将免疫标记物处理在步骤2中制备好的结合垫上,烘干,备用。
制备本发明所述快速免疫检测试纸的方法,包括以下步骤:
步骤一 将测试垫4粘贴在底卡6上,并将T线原料和C线原料包被在所述测试垫的T线位置和C线位置。
步骤二 将经本发明所述标记物结合垫的处理方法处理好的标记物结合垫,以及吸水垫分别粘贴在测试垫的两端。
步骤三 将样本垫粘贴在标记物结合垫的另一端,制得检测试纸。
步骤三中制备好的检测试纸可以安装在检测试剂板100中,也可以直接用于检测,还可以在样本垫和吸水垫上分别贴上不干胶后使用。
实施例1新型冠状病毒抗原检测试纸
实验材料:
1.结合垫处理液配方:
结合垫处理液配方包括糖类、多聚物和表面活性剂。其中,
糖类选自蔗糖或果糖。
多聚物选自聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或聚乙烯醇(PVA)。
表面活性剂选自吐温20(Tween-20)或Silwet L7600(S16)。
另外还包括缓冲液,本实例中的缓冲液选自磷酸盐缓冲溶液(PBS, 0.01mol·L-1,pH 7.4)。
结合垫的材质为:采用玻纤。
2.免疫标记物:抗SARS-CoV-2抗体-乳胶标记物。
3.底卡材质:塑料底卡,例如选自但不限于PVC材料。
4.测试垫材质:NC膜。
5.C线溶液:羊抗鼠IgG。
6.T线溶液:抗SARS-CoV-2抗体。
7.吸水垫材质:滤纸。
8.样本垫上的试剂配方:磷酸盐缓冲液、Tween-20、酪蛋白。样本垫材质为:玻纤。
9.样本提取液:PBS,0.01mol·L-1,pH 7.4。用鼻拭子采样后,放入样本提取液中,获得检测用样本。
实验方法:
1.将蔗糖、果糖、PVP、PVA、Tween-20、Silwet L7600(S16)按不同比例以 PBS配制成相应的结合垫处理液。将空白结合垫浸入溶液中,充分浸泡,取出于55℃烘箱烘干,制成已处理结合垫。结合垫处理液配方如下表1所示:
表1结合垫处理液配方
*(m/V)表示每100ml溶剂中溶解的溶质的克数
2.使用喷金机将抗SARS-CoV-2抗体-乳胶标记物均匀喷点于已处理结合垫,并放置37℃烘箱烘干。
3.将烘干后、结合有抗SARS-CoV-2抗体-乳胶标记物的结合垫,包被有羊抗鼠IgG、抗SARS-CoV-2抗体的NC膜(粘附在底卡),样本垫,以及吸水垫,按常规检测试纸的方式组装,即依次相互叠加的样本垫、标记物结合垫、测试垫、吸水垫,并将它们粘贴在底卡上,制成检测试纸,并将检测试纸装入检测试剂板中,制备成检测试剂板。
4.样本经提取液处理,进行加样测试,观察乳胶在检测试纸上的跑板情况。其中将抗SARS-CoV-2抗体-乳胶标记物充分释放,跑板背景干净(即NC膜背景干净),乳胶标记物与水溶液不分离的视为跑板正常;而乳胶标记物释放缓慢,与水溶液分离,水溶液率先层析至吸水垫,乳胶标记物缓慢层析,未在规定时间完成跑板,乳胶标记物在NC膜上残留,跑板背景颜色深,视为跑板异常。每种配方重复测试100次,并统计实验数据。实验结果见表2。
表2实验结果:
分析:
经分析,在本实施例的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)抗原检测试纸的标记物结合垫预处理试剂配方中,蔗糖、果糖、PVP、PVA、Tween-20、Silwet L7600 (S16)按表3使用浓度范围内处理标记物结合垫,并制得检测试纸,在测试时,检测试纸跑板正常(跑板正常率≥95%),跑板正常即乳胶标记物充分释放,测试垫背景干净,乳胶标记物与水溶液不分离。
表3
化学品 | 使用浓度 |
糖类:蔗糖或果糖 | 5%-30%(m/V) |
多聚物:聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或聚乙烯醇(PVA) | 0.1%-20%(m/V) |
表面活性剂:吐温20(Tween-20)或Silwet L7600(S16) | 0.1%-15%(m/V) |
经分析,在本实施例的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)抗原检测试纸的标记物结合垫预处理试剂配方中,蔗糖、果糖、PVP、PVA、Tween-20、Silwet L7600 (S16)按表4使用浓度范围内处理标记物结合垫,并制得检测试纸,在测试时,检测试纸即跑板正常(跑板正常率可达100%)。
表4
Claims (10)
1.一种检测试剂板,包括上盖和下板,以及装配在上盖下板之间的检测试纸,所述检测试纸包括依次相互叠加的样本垫、标记物结合垫、测试垫、吸水垫和底卡,所述样本垫、标记物结合垫、测试垫和吸水垫粘附在底卡上,其特征在于,在标记物结合垫上包含有结合垫处理液,所述结合垫处理液包括糖类、多聚物和表面活性剂。
2.根据权利要求1所述的检测试剂板,其特征在于,所述糖类的浓度为5%-30%(m/V)。
3.根据权利要求2所述的检测试剂板,其特征在于,所述糖类的浓度为5%-15%(m/V)。
4.根据权利要求1所述的检测试剂板,其特征在于,所述多聚物的浓度为0.1%-20%(m/V)。
5.根据权利要求4所述的检测试剂板,其特征在于,所述多聚物的浓度为0.1%-10%(m/V)。
6.根据权利要求1所述的检测试剂板,其特征在于,所述表面活性剂的浓度为0.1%-15%(m/V)。
7.根据权利要求6所述的检测试剂板,其特征在于,所述表面活性剂的浓度为0.1%-10%(m/V)。
8.根据权利要求1至7之一所述的检测试剂板,其特征在于,所述糖类选自蔗糖或果糖;和/或所述多聚物选自聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯醇;和/或所述表面活性剂选自吐温20或Silwet L7600。
9.一种检测试剂板的制备方法,包括以下步骤:
步骤一 将测试垫粘贴在底卡上,并将T线原料和C线原料包被在所述测试垫的T线位置和C线位置;
步骤二 配制结合垫处理液,并用结合垫处理液处理标记物结合垫,烘干;
步骤三 将免疫标记物处理在步骤二中已经处理的标记物结合垫上,烘干;
步骤四 将步骤三制备好的标记物结合垫,以及吸水垫分别粘贴在测试垫的两端;
步骤五 将样本垫粘贴在标记物结合垫的另一端,制得检测试纸;
步骤六 将步骤五制得的检测试纸安装在上盖和下板之间,得检测试剂板。
所述的结合垫处理液包括糖类、多聚物和表面活性剂。
10.根据权利要求9所述的制备方法,其特征在于,所述糖类的浓度为5%-30%(m/V),所述多聚物的浓度为0.1%-10%(m/V),所述表面活性剂的浓度为0.1%-15%(m/V)。
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