CN114931097B - 用于千年健的组织培养产品、千年健的组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于千年健的组织培养产品，包括诱导培养基、增殖培养基以及生根培养基中的一种或多种；所述诱导培养基以1/2MS为基础培养基，且每1L所述诱导培养基包含、1mg～2mg 6‑BA、25g～30g白糖或蔗糖、以及5.8g～6.0g卡拉胶；所述增殖培养基以MS为基础培养基，且每1L所述增殖培养基包含、10mg～20mg 6‑BA、25g～30g白糖或蔗糖、以及5.8g～6.0g卡拉胶；所述生根培养基以MS为基础培养基，且每1L所述生根培养基包含、0.5mg～5mg6‑BA、25g～30g白糖或蔗糖、以及5.8g～6.0g卡拉胶。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，特别是涉及一种用于千年健的组织培养产品、千年健的组织培养方法。
背景技术
千年健(Homalomena occulta(Lour.)Schott)为天南星科千年健属多年生草本植物，主要产于广东海南、广西西南部至东部、云南南部至东南部，海拔80米-1100米，生长于沟谷密林下，竹林和山坡灌丛中。千年健的根茎可入药，可用于治疗跌打损伤、外伤出血、四肢麻木、风湿疼痛、胃痛、肠胃炎、痧症等病症，具有良好的药用价值。自然环境下千年健生长缓慢，野生资源被过度采挖导致资源匮乏，人工培育效率不高，种苗量远远不能满足市场需要，因此迫切需要一种能够使千年健种苗实现快速规模化生产的植物组织培养技术，有效解决种苗供应不足的问题。
发明内容
基于此，本发明提供了一种用于千年健的组织培养产品，利用该组织培养产品对千年健进行组织培养，可获得植株生长状态良好、增殖率高、适合规模化快速生产的千年健种苗。
进一步地，本发明还提供一种千年健组织培养方法。
本发明提供一种用于千年健的组织培养产品，包括诱导培养基、增殖培养基以及生根培养基中的一种或多种；
所述诱导培养基以1/2MS为基础培养基，且每1L所述诱导培养基包含、1mg～2mg6-BA、25g～30g白糖或蔗糖、以及5.8g～6.0g卡拉胶；
所述增殖培养基以MS为基础培养基，且每1L所述增殖培养基包含、10mg～20mg 6-BA、25g～30g白糖或蔗糖、以及5.8g～6.0g卡拉胶；
所述生根培养基以MS为基础培养基，且每1L所述生根培养基包含、0.5mg～5mg 6-BA、25g～30g白糖或蔗糖、以及5.8g～6.0g卡拉胶。
在其中一个实施例中，所述组织培养产品为套装产品，所述套装产品包括所述诱导培养基、且包括所述增殖培养基和所述生根培养基中的至少一种。
本发明还提供一种千年健的组织培养方法，使用如上述任一实施例中所述的用于千年健的组织培养产品对千年健进行组织培养。
在其中一个实施例中，所述组织培养包括诱导培养、增殖培养以及生根培养中的一种或多种；
所述诱导培养、所述增殖培养和所述生根培养所使用的培养基分别为所述诱导培养基、所述增殖培养基和所述生根培养基；
所述诱导培养是对消毒后的外植体进行初代诱导培养至长出幼芽；
所述增殖培养是直接对所述幼芽或者对所述生根培养基将所述幼芽生根培养后的培养产物进行培养；
所述生根培养基是直接对所述幼芽或者对所述增殖培养基将所述幼芽增殖培养后的培养产物进行培养。
在其中一个实施例中，所述外植体为带隐芽的千年健茎段和/或截取千年健顶芽后基部促萌生出的新芽。
在其中一个实施例中，所述外植体为带隐芽的千年健茎段，对所述外植体消毒的步骤包括：
采用体积分数为75％的酒精消毒5s～15s，再用质量分数为0.1％的升汞浸泡5min～15min；
和/或
所述外植体为截取千年健顶芽后基部促萌生出的新芽，对所述外植体消毒的步骤包括：
采用体积分数为75％的酒精消毒30s～60s，再用质量分数为0.1％的升汞浸泡5min～15min。
在其中一个实施例中，所述诱导培养的培养条件为：温度22℃～26℃，光照强度2000lx～3000lx，光照时间12h/d～16h/d，培养天数25d～35d。
在其中一个实施例中，所述增殖培养的培养条件为：温度22℃～26℃，光照强度2000lx～3000lx，光照时间12h/d～16h/d，培养天数25d～35d。
在其中一个实施例中，所述生根培养的培养条件为：温度22℃～26℃，光照强度2000lx～3000lx，光照时间12h/d～16h/d，培养天数25d～35d。
在其中一个实施例中，还包括对组织培养后形成的培养产物进行移栽管理的步骤，移栽管理采用的基质的配方包括：
按质量比计，椰糠：泥炭土：蛭石＝(2.5～3.5):(2.5～3.5):(0.8～1.2)。
上述的用于千年健的组织培养产品包括诱导培养基、增殖培养基以及生根培养基中的一种或多种，利用该组织培养产品进行千年健组织培养，可获得植株生长状态良好、增殖率高、适合规模化快速生产的千年健种苗。
附图说明
图1中的a为一实施方式中千年健的母体材料形貌图；
图1中的b为一实施方式中选用的外植体形貌图；
图1中的c为一实施方式中诱导培养后形成的幼芽形貌图；
图1中的d为一实施方式中增殖和生根培养后的正面形貌图；
图1中的e为一实施方式中增殖和生根培养后的底面形貌图；
图1中的f为一实施方式中移栽管理成苗出圃的形貌图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
本发明一实施例提供了一种用于千年健的组织培养产品，包括诱导培养基、增殖培养基以及生根培养基中的一种或多种。利用本发明提供的组织培养产品进行千年健组织培养，可获得植株生长状态良好、增殖率高、适合规模化快速生产的千年健种苗。
其中，诱导培养基以1/2MS为基础培养基，且每1L诱导培养基包含、1mg～2mg 6-BA、25g～30g白糖或蔗糖、以及5.8g～6.0g卡拉胶。
增殖培养基以MS为基础培养基，且每1L增殖培养基包含、10mg～20mg6-BA、25g～30g白糖或蔗糖、以及5.8g～6.0g卡拉胶。
生根培养基以MS为基础培养基，且每1L生根培养基包含、0.5mg～5mg6-BA、25g～30g白糖或蔗糖、以及5.8g～6.0g卡拉胶。
在一个具体的示例中，组织培养产品为套装产品，套装产品包括诱导培养基、且包括增殖培养基和生根培养基中的至少一种。
本发明一实施方式还提供一种千年健的组织培养方法，使用如上述任一示例中的用于千年健的组织培养产品对千年健进行组织培养。
可以理解地，在组织培养之前，通常需要先对外植体进行体外消毒。
如图1中的a和b所示，在一个具体的示例中，先从千年健的母体材料中选取外植体材料，外植体为带隐芽的千年健茎段和/或截取千年健顶芽后基部促萌生出的新芽。可以理解地，选取带隐芽的千年健茎段作为外植体，易于消毒、且诱导快、成活率高。可以理解地，选取截取千年健顶芽后基部促萌生出的新芽作为外植体，除了上述优点外，去除顶端优势后基部促萌长出的新芽数量多，可为外植体的选取提供更多选择。
可以理解地，为保证不同的外植体具有较高的诱导存活率，通常需要采用不同的条件进行消毒。
当选择带隐芽的千年健茎段为外植体时，消毒的步骤包括：
采用体积分数为75％的酒精消毒5s～15s，再用质量分数为0.1％的升汞浸泡5min～15min。
当选择截取千年健顶芽后基部促萌生出的新芽为外植体时，消毒的步骤包括：
采用体积分数为75％的酒精消毒30s～60s，再用质量分数为0.1％的升汞浸泡5min～15min。
可以理解地，当外植体同时包括带隐芽的千年健茎段和截取千年健顶芽后基部促萌生出的新芽时，针对不同来源的外植体分别采用不同的方法进行消毒。
可以理解地，若初次灭菌后外植体消毒不彻底，可以采用多次反复灭菌方法进行拯救。
可以理解地，组织培养包括诱导培养、增殖培养以及生根培养中的一种或多种。
诱导培养、增殖培养和生根培养所使用的培养基分别为诱导培养基、增殖培养基和生根培养基。
诱导培养是对消毒后的外植体进行初代诱导培养至长出幼芽。进一步地，诱导培养的培养条件为：温度22℃～26℃，光照强度2000lx～3000lx，光照时间12h/d～16h/d，培养天数25d～35d。通过本发明一实施方式提供的方法进行诱导培养，诱导率高，萌芽时间短，幼芽生长状态良好，诱导效果好。
图1中的c示出了本发明一实施方式中经诱导培养后形成的幼芽形貌图，可以理解地，以上仅为示例，诱导培养后形成的幼芽形貌图不限于此。
可以理解地，针对诱导培养后形成的幼芽，可以根据需求后续步骤是要进行增殖还是生根。例如，可以在诱导培养后只进行增殖培养，例如，可以在诱导培养后只进行生根培养，例如，可以在诱导培养后先对幼芽进行增殖培养再进行生根培养，例如，还可以在诱导培养后先对幼芽进行生根培养在进行增殖培养等等。
增殖培养是直接对幼芽或者对生根培养基将幼芽生根培养后的培养产物进行培养。进一步地，增殖培养的培养条件为：温度22℃～26℃，光照强度2000lx～3000lx，光照时间12h/d～16h/d，培养天数25d～35d。
生根培养基是直接对幼芽或者对增殖培养基将幼芽增殖培养后的培养产物进行培养。进一步地，生根培养的培养条件为：温度22℃～26℃，光照强度2000lx～3000lx，光照时间12h/d～16h/d，培养天数25d～35d。
进一步地，在本发明的一实施方式中采用的增殖培养基和生根培养基均同时具有一定的增殖和生根效果。只是，其中增殖培养基是以增殖为主要目的，生根率可能较低；生根培养基是以生根为主要目的，增值率可能较低。实际使用中，可根据对植株生长的要求采用合适的培养基。
图1中的d和e示出了本发明一实施方式中经增殖和生根培养后形成的幼芽形貌图，可以理解地，以上仅为示例，增殖和生根培养后形成的幼芽形貌图不限于此。
可以理解地，对组织培养后形成的培养产物通常还需要进行移栽管理，将培养产物移栽至育苗基质中进行培养。移栽管理采用的育苗基质的配方包括：
按质量比计，椰糠：泥炭土：蛭石＝(2.5～3.5):(2.5～3.5):(0.8～1.2)。
可以理解地，移栽前需要先将基质淋透水，且经消毒后才能移栽培养产物至育苗基质中。进一步地，例如可以采用500倍多菌灵溶液对基质进行消毒。
可以理解地，将培养产物移栽至基质中培养后，覆盖透明农膜和75％阴网，定期浇水保持基质湿润。
进一步地，移栽1周后可长出新根，移栽2周后可抽出新叶，移栽成活率为95％以上。
进一步地，移栽4周后可去除农膜和阴网，再用0.2％的复合肥喷施叶面，每周一次。移栽6-8周后植株生长至苗高为5cm～10cm即可出圃。
图1中的f示出了本发明一实施方式中经移栽管理后出圃的种苗形貌图，可以理解地，以上仅为示例，移栽管理后出圃的种苗形貌图不限于此。
以下为具体实施例。
第一部分对外植体进行消毒
实施例1
外植体选取：带隐芽的千年健茎段。
预处理：用细毛刷去除外植体表面的泥土，蘸取洗洁精清洁，流水冲洗30min，用滤纸吸干水分放置于超净工作台备用。
消毒：采用体积分数为75％的酒精消毒10s，再用质量分数为0.1％的升汞浸泡10min。
实施例2
外植体选取：带隐芽的千年健茎段。
预处理：用细毛刷去除外植体表面的泥土，蘸取洗洁精清洁，流水冲洗30min，用滤纸吸干水分放置于超净工作台备用。
消毒：采用体积分数为75％的酒精消毒10s，再用质量分数为0.1％的升汞浸泡5min。
实施例3
外植体选取：带隐芽的千年健茎段。
预处理：用细毛刷去除外植体表面的泥土，蘸取洗洁精清洁，流水冲洗30min，用滤纸吸干水分放置于超净工作台备用。
消毒：采用体积分数为75％的酒精消毒10s，再用质量分数为0.1％的升汞浸泡15min。
实施例4
外植体选取：截取千年健顶芽后基部促萌生出的新芽。
预处理：用细毛刷去除外植体表面的泥土，蘸取洗洁精清洁，流水冲洗30min，用滤纸吸干水分放置于超净工作台备用。
消毒：采用体积分数为75％的酒精消毒45s，再用质量分数为0.1％的升汞浸泡10min。
实施例5
外植体选取：截取千年健顶芽后基部促萌生出的新芽。
预处理：用细毛刷去除外植体表面的泥土，蘸取洗洁精清洁，流水冲洗30min，用滤纸吸干水分放置于超净工作台备用。
消毒：采用体积分数为75％的酒精消毒30s，再用质量分数为0.1％的升汞浸泡10min。
实施例6
外植体选取：截取千年健顶芽后基部促萌生出的新芽。
预处理：用细毛刷去除外植体表面的泥土，蘸取洗洁精清洁，流水冲洗30min，用滤纸吸干水分放置于超净工作台备用。
消毒：采用体积分数为75％的酒精消毒60s，再用质量分数为0.1％的升汞浸泡10min。
对比例1
外植体选取：千年健根部。
预处理：用细毛刷去除外植体表面的泥土，蘸取洗洁精清洁，流水冲洗30min，用滤纸吸干水分放置于超净工作台备用。
消毒：采用体积分数为75％的酒精消毒10s，再用质量分数为0.1％的升汞浸泡5min。
对比例2
外植体选取：千年健根部。
预处理：用细毛刷去除外植体表面的泥土，蘸取洗洁精清洁，流水冲洗30min，用滤纸吸干水分放置于超净工作台备用。
消毒：采用体积分数为75％的酒精消毒10s，再用质量分数为0.1％的升汞浸泡10min。
对比例3
外植体选取：千年健根部。
预处理：用细毛刷去除外植体表面的泥土，蘸取洗洁精清洁，流水冲洗30min，用滤纸吸干水分放置于超净工作台备用。
消毒：采用体积分数为75％的酒精消毒10s，再用质量分数为0.1％的升汞浸泡15min。
对采用实施例1～实施例6以及对比例1～对比例3的方法进行消毒后的外植体进行诱导培养并计算存活率，诱导培养基为：以1/2MS为基础培养基，且每1L诱导培养基包含1.0mg 6-BA、30g白糖、以及6.0g卡拉胶，培养条件为：温度25℃，光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养天数30d，不同方法消毒后外植体诱导存活率如下表1。
表1不同消毒方式对存活率的影响
由表1可见，采用带隐芽的千年健茎段和截取千年健顶芽后基部促萌生出的新芽作为外植体，经消毒后进行诱导均具有一定的存活率。其中，带隐芽的千年健茎段的诱导存活率最高达55.6％，截取千年健顶芽后基部促萌生出的新芽的诱导存活率最高达72.7％，千年健根部难以消毒彻底，诱导成活率为0％。
第二部分诱导培养
选取带隐芽的千年健茎段和截取千年健顶芽后基部促萌生出的新芽作为外植体，并分别按照实施例1和实施例4进行消毒后，将消毒后的外植体至于诱导培养基中进行诱导培养，具体培养方法如下：
实施例7
培养基组成：诱导培养基以1/2MS为基础培养基，且每1L诱导培养基包含、1.0mg6-BA、30g白糖、以及6.0g卡拉胶。
培养条件：温度25℃，光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养天数30d。
实施例8
培养基组成：诱导培养基以1/2MS为基础培养基，且每1L诱导培养基包含2.0mg 6-BA、30g白糖、以及6.0g卡拉胶。
培养条件：温度25℃，光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养天数30d。
对比例4
培养基组成：诱导培养基以1/2MS为基础培养基，且每1L诱导培养基包含0.3mg 6-BA、30g白糖、以及6.0g卡拉胶。
培养条件：温度25℃，光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养天数30d。
对比例5
培养基组成：诱导培养基以1/2MS为基础培养基，且每1L诱导培养基包含0.5mg 6-BA、30g白糖、以及6.0g卡拉胶。
培养条件：温度25℃，光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养天数30d。
对采用实施例7～实施例8以及对比例4～对比例5进行诱导培养后的诱导效果进行统计，统计效果如下表2。
表2不同培养基下的诱导效果
可见，采用实施例7～实施例8的方法进行诱导培养与对比例4～对比例5相比，诱导率更高，外植体芽点开始萌动时间更短，且幼芽生长状态更加良好。
第三部分增殖与生根培养
选取采用实施例7的方法进行诱导培养后的、高度为0.5cm～1.0cm的幼芽进行增殖和生根培养，具体培养方法如下：
实施例9
培养基组成：培养基以MS为基础培养基，且每1L培养基包含0.5mg 6-BA、30g白糖、以及6.0g卡拉胶。
培养条件：温度25℃，光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养天数30d。
实施例10
培养基组成：培养基以MS为基础培养基，且每1L培养基包含1mg 6-BA、30g白糖、以及6.0g卡拉胶。
培养条件：温度25℃，光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养天数30d。
实施例11
培养基组成：培养基以MS为基础培养基，且每1L培养基包含2mg 6-BA、30g白糖、以及6.0g卡拉胶。
培养条件：温度25℃，光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养天数30d。
实施例12
培养基组成：培养基以MS为基础培养基，且每1L培养基包含5mg 6-BA、30g白糖、以及6.0g卡拉胶。
培养条件：温度25℃，光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养天数30d。
实施例13
培养基组成：培养基以MS为基础培养基，且每1L培养基包含10mg 6-BA、30g白糖、以及6.0g卡拉胶。
培养条件：温度25℃，光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养天数30d。
实施例14
培养基组成：培养基以MS为基础培养基，且每1L培养基包含15mg 6-BA、30g白糖、以及6.0g卡拉胶。
培养条件：温度25℃，光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养天数30d。
实施例15
培养基组成：培养基以MS为基础培养基，且每1L培养基包含20mg 6-BA、30g白糖、以及6.0g卡拉胶。
培养条件：温度25℃，光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养天数30d。
对比例6
培养基组成：培养基以MS为基础培养基，且每1L培养基包含30mg 6-BA、30g白糖、以及6.0g卡拉胶。
培养条件：温度25℃，光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养天数30d。
对采用实施例9～实施例15以及对比例6进行增殖和生根培养后的生长状态进行统计，统计效果如下表3。
表3不同增殖和生根培养基下千年健的生长状态
由表3可见，采用实施例9～实施例12的培养基进行培养后，千年健的生根率达100％，丛芽较少，但植株生长良好，叶片宽大，根系粗壮，适宜为生根培养基。采用实施例13～实施例15的培养基进行培养后，千年健的增殖率较高，且植株生长良好，叶片小，丛芽多，适宜为增殖培养基。采用对比例6的培养基进行培养后，虽然千年健增殖率高，丛芽多，但部分幼芽畸形，且生根率为0％，因此不宜作为增殖培养基或生根培养基。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (5)
1.一种千年健的组织培养方法，其特征在于，所述组织培养由诱导培养、增殖培养以及生根培养组成；
所述诱导培养、所述增殖培养和所述生根培养所使用的培养基分别为诱导培养基、增殖培养基和生根培养基；
所述诱导培养基以1/2MS为基础培养基，且每1L所述诱导培养基由1mg~2mg 6-BA、25g~30g白糖或蔗糖、以及5.8g~6.0g卡拉胶组成；
所述增殖培养基以MS为基础培养基，且每1L所述增殖培养基由10mg~20mg 6-BA、25g~30g白糖或蔗糖、以及5.8g~6.0g卡拉胶组成；
所述生根培养基以MS为基础培养基，且每1L所述生根培养基由0.5mg~5mg 6-BA、25g~30g白糖或蔗糖、以及5.8g~6.0g卡拉胶组成；
所述诱导培养是对消毒后的外植体进行初代诱导培养至长出幼芽；
所述增殖培养是直接对所述幼芽或者对所述生根培养基将所述幼芽生根培养后的培养产物进行培养；
所述生根培养基是直接对所述幼芽或者对所述增殖培养基将所述幼芽增殖培养后的培养产物进行培养；
所述外植体为带隐芽的千年健茎段或截取千年健顶芽后基部促萌生出的新芽；
所述带隐芽的千年健茎段的消毒的步骤为：
采用体积分数为75%的酒精消毒5s~15s，再用质量分数为0.1%的升汞浸泡5min~15min；
所述截取千年健顶芽后基部促萌生出的新芽的消毒步骤为：
采用体积分数为75%的酒精消毒30s~60s，再用质量分数为0.1%的升汞浸泡5min~15min。
2.根据权利要求1所述的千年健的组织培养方法，其特征在于，所述诱导培养的培养条件为：温度22℃~26℃，光照强度2000lx~3000lx，光照时间12h/d~16h/d，培养天数25d~35d。
3.根据权利要求1所述的千年健的组织培养方法，其特征在于，所述增殖培养的培养条件为：温度22℃~26℃，光照强度2000lx~3000lx，光照时间12h/d~16h/d，培养天数25d~35d。
4.根据权利要求1所述的千年健的组织培养方法，其特征在于，所述生根培养的培养条件为：温度22℃~26℃，光照强度2000lx~3000lx，光照时间12h/d~16h/d，培养天数25d~35d。
5.根据权利要求1~4任一项所述的千年健的组织培养方法，其特征在于，还包括对组织培养后形成的培养产物进行移栽管理的步骤，移栽管理采用的基质的配方包括：
按质量比计，椰糠：泥炭土：蛭石=(2.5~3.5): (2.5~3.5): (0.8~1.2)。
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