CN114869943A

CN114869943A - 一种治疗肠炎的中药组合物及其制备方法

Info

Publication number: CN114869943A
Application number: CN202210440241.2A
Authority: CN
Inventors: 郭姣
Original assignee: Guangdong Pharmaceutical University
Current assignee: Guangdong Pharmaceutical University
Priority date: 2022-04-25
Filing date: 2022-04-25
Publication date: 2022-08-09
Anticipated expiration: 2042-04-25
Also published as: CN114869943B

Abstract

本发明提供了一种组合物，所述组合物由以下原料组成：党参、白术、甘草、陈皮和槐花。所述组合物的制备方法具体如下：(1)将党参、白术、甘草、陈皮、槐花按所需配比混合均匀；(2)向步骤(1)中所得的混合物中加入水，提取；(3)将步骤(2)中得到的滤液合并后进行加热浓缩。所述组合物还包括以下组分：白芷、肉豆蔻、石榴皮和五倍子。所制备的组合物应用在治疗溃疡性结肠炎和EpCAM单基因突变所致的肠道炎症药物中，副作用小且治疗效果好。

Description

一种治疗肠炎的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于中药制剂领域，涉及一种治疗肠炎的中药组合物及其制备方法。

背景技术

炎症性肠炎(IBD)为出现在回肠、直肠、结肠等部位的一种特发性肠道炎症性疾病。临床表现为腹泻、腹痛，严重的甚至有血便，主要包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)两种类型。CD起病比较隐匿，患病的几率相对不大。UC在疾病表型和对治疗的反应方面具有高度的异质性，是导致发病率和死亡率增加的原因。UC的病因是多因素的，与遗传和环境因素有关，包括共生微生物群的组成以及结肠粘膜和上皮屏障的完整性，但是UC的确切病因尚不清楚。

尽管已研究出治疗UC的相关药物，但约三分之二的中度至重度UC患者在治疗后未能实现粘膜愈合。此外，根据活检组织学结果的评估，三分之一的内窥镜粘膜愈合患者在组织学评估中具有持续性疾病。在临床试验中，相对于临床缓解和反应率的组织学缓解的定量评估发现，虽然内镜和组织学结果相关，但组织学缓解率较低，因此更难以实现。

硫酸葡聚糖钠(DSS)导致肠上皮化学损伤，使固有层暴露于管腔抗原和肠道细菌，从而引发免疫反应和炎症。亚急性炎症、结肠腺损伤/丢失、糜烂、上皮增生和粘膜下水肿的组织学病变通常很明显，该模型通常被认为是UC经典模型。DSS的诱导可以通过DSS剂量进行调节，这在控制疾病程度方面提供了优势，而且DSS周期数可以显著影响结肠炎的组织学特征，重复DSS周期数可以持续诱导炎症，而活动性中性粒细胞炎症减少。胶原在粘膜、粘膜下层和肌肉层中的沉积随着循环次数而增加。慢性DSS模型的这一特点使它更接近于临床现实。

先天性簇绒肠病(CTE)是顽固性疾病，主要治疗方式是通过长期的肠外营养改善，该治疗方式会导致患者体内电解质失衡和长期完全依赖全肠外营养(PN)。上皮细胞粘附分子(EpCAM)突变是CTE的主要原因，EpCAM基因位于染色体2P21，包括9个外显子及8个内含子，编码蛋白约32～42kDa，包括较长的细胞外结构域、跨膜结构域及短的细胞内结构域三部分。由于EpCAM突变的罕见性，目前相关资料较少，尽管出现类似于EpCAM纯合突变的EpCAM单基因突变的患者，但是二者发病率和严重程度均不同，不能将EpCAM纯合突变等同于单基因突变。EpCAM纯合突变导致的CTE目前除手术移植无特效药，但是EpCAM单基因突变的患者不一定出现CTE，而且有的患者程度较轻，在饮食和环境的刺激下才可能会出现比未发生突变者更严重的溃疡性结肠炎，所以EpCAM单基因突变的患者比EpCAM纯合突变患者有着更大的痊愈可能。因此，迫切需要针对EpCAM单基因突变患者的药物，这也将有助于研发出使EpCAM纯合突变患者痊愈的药物。

中国专利申请CN 106138421 A公开了一种治疗肠道炎症的中药组合物及其制备方法及应用，涉及中药技术领域。本发明治疗肠道炎症的中药组合物由以下原料制成：当归、红花、金银花、玄参、黄芪、赤芍、皂角刺、白术、牡丹皮、蒲公英、甘草、苦地丁，本发明制得的治疗肠道炎症的中药组合物用于治疗肠道炎症安全、无副作用，疗程短，治愈率高，不易复发，特别针对阑尾炎的治疗，止痛快，治疗彻底，避免了手术创伤。

中国专利申请CN 107638448 A公开了一种治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎的药物组合物及其制备方法、制剂与应用。所述的治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎的药物组合物包括黄龙尾、大黑药、补骨脂、肉豆蔻、杏叶防风根和草血竭，经前处理、提取和后处理步骤制备得到。制剂为所述的药物组合物中加入药学上接受的辅料制备成颗粒剂、片剂、胶囊剂、软胶囊、合剂、混悬剂及滴丸剂等；应用为所述的药物组合物在制备预防治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎。本发明所述的药物组合物具有疗效独特，副作用小，无毒副反应，能预防、缓解、治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎具有较好疗效。

但是上述公开的组合物成分较为复杂，且提取成本高，因此有必要探索一种成分简单、价格低廉且效果好的用于治疗溃疡性结肠炎的组合物及其制备方法。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种治疗溃疡性结肠炎的组合物及其制备方法和应用，该组合物成分简单、制备成本低、副作用小且治疗效果好。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种组合物，所述组合物由以下原料组成：党参、白术、甘草、陈皮和槐花。

进一步地，所述组合物由以下重量份的组分组成：党参12-18份，白术9-14份，甘草7-12份，陈皮7-12份，槐花7-12份。

进一步地，上述组分为缓和药性作用，会使用相应的炮制品或者进行前处理，比如党参会蒸熟(熟党参)，白术采用土炒或麸炒，甘草会蜜炙，陈皮会湿润蒸闷处理等。

一种中药提取物，由上述所述组合物提取获得。

进一步地，一种所述中药提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将党参、白术、甘草、陈皮和槐花按所需配比混合均匀；

(2)向步骤(1)中所得的混合物中加入水，提取，所述提取为1-4次；

(3)将步骤(2)中得到的滤液合并后进行加热浓缩；

步骤(2)中所述混合物与水的质量比为1:5-15；所述提取方式为加热回流，提取时间为1-3h。

一种组合物，所述组合物包括党参、白术、甘草、陈皮和槐花，还包括以下组分：白芷、肉豆蔻、石榴皮和五倍子。

进一步地，一种中药提取物，由上述所述组合物提取获得，所述组合物包括党参、白术、甘草、陈皮、槐花、白芷、肉豆蔻、石榴皮和五倍子。

(1)将党参、白术、甘草、陈皮、槐花、白芷、肉豆蔻、石榴皮和五倍子按所需配比混合均匀；

(3)将步骤(2)中得到的滤液合并后进行加热浓缩。

一种包括上述所述组合物或上述所述中药提取物或上述所述制备方法得到的中药提取物的药物，所述药物还包括药学上可接受的辅料，所述辅料包括淀粉、糊精、乳糖、甘油、蔗糖、微晶纤维素、羧甲纤维素钠、甘露醇、硬脂酸镁、滑石粉的一种或几种。

进一步地，所述药物的剂型包括颗粒剂、片剂、胶囊剂、软胶囊剂、溶液剂、糖浆剂、混悬剂和滴丸剂的任意一种。

上述所述组合物或上述所述中药提取物或上述所述制备方法得到的中药提取物或上述所述药物在制备治疗溃疡性结肠炎以及EpCAM单基因突变所致的肠道炎症的药物中的应用。

药理分析：

本发明组方中：党参为君药，其味甘、性平，归脾、肺经，健脾益肺、养血生津，具有健脾益肺、养血生津之功效，用于脾肺气虚、食少倦怠、咳嗽虚喘、气血不足、面色萎黄、心悸气短、津伤口渴、内热消渴等。白术为臣药，味苦、甘，性温，归脾、胃经；具有健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎之功效，主要用于脾虚食少，腹胀泄泻，痰饮眩悸，水肿，自汗及胎动不安。甘草为佐药，其性平味甘，归脾、胃、心、肺经，具有补中益气、润肺止咳、清热解毒、缓急止痛，可调和诸药，解百毒。陈皮味辛、苦，性温，归脾、胃、肺经，具有理气和中，燥湿化痰，利水通便之功效，主治脾胃不和，脘腹胀痛，不思饮食，呕吐哕逆，痰湿阻肺，小便不利，大便秘结等。槐花味苦，微寒，有凉血止血，清肝泻火之功效，主治血热吐衄，便血痔血，肝热目赤，头痛。白芷味辛，微苦，性温，归胃、大肠、肺经，有生肌止痛，活血排脓，祛风湿之功效，主治肠风痔漏、痈疽疮疡、头痛、牙痛。肉豆蔻味辛，苦，性温，归脾、胃、大肠经，有温中涩肠，行气消食之功效，用于虚泻冷痢，脘腹胀痛，食少呕吐，宿食不消。石榴皮味酸、微涩、性温，归大肠经，有涩肠止血，止泻，驱虫之功效，主治久泻久痢。五倍子味酸，性寒，有涩肠止泻，敛汗，固精止遗，止血，收湿敛疮之功效，主治久泻久痢，亦可治便血。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

(1)本发明的组合物对溃疡性结肠炎具有良好的治疗效果；

(2)本发明的组合物成分简单且副作用小；

(3)本发明的制备方法简单，成本低，可实现工业化大规模生产。

附图说明

图1为实施例1.3显微镜下各组小鼠结肠HE染色图；

图2为实施例2.3显微镜下各组小鼠结肠HE染色图。

具体实施方式

值得说明的是，本发明中使用的原料均为普通市售产品，对其来源不做具体限定。

以下试剂及仪器来源，为示例性说明：小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA KIT(CSB-E04741m，武汉华美生物工程有限公司)，小鼠白介素10(IL-10)ELISA KIT(CSB-E04594m，武汉华美生物工程有限公司)，小鼠脂多糖/内毒素(LPS)ELISA KIT(CSB-E13066m，武汉华美生物工程有限公司)，小鼠白介素1β(IL-1β)ELISA KIT(CSB-E08054m，武汉华美生物工程有限公司)，反转录试剂盒(RR420A，宝日医生物技术有限公司)，TB

Premix Ex Taq^TM(RR047A，宝日医生物技术有限公司)；LightCycler 480II实时荧光定量PCR(罗氏公司)，384孔板(乐泰生物科技有限公司，型号P02-3801)，热循环PCR仪(德国Biometra公司，型号37079)，多功能酶标仪(美国宝特公司，型号130124D)。

溃疡性结肠炎模型的构建

用DSS法建立溃疡性结肠炎模型，造模前先适应性喂养一周，造模组和给药组自由饮用含3％DSS的纯净水。给予DSS 7天后，休息5-7天，按此周期循环给予DSS。空白组自由饮用纯净水。

给药方案：给药组分别按1g/kg灌胃中药组合物，造模组和空白组按1g/kg灌胃纯净水，从开始造模后12天开始给药，连续给药40天。给药剂量通过实验动物与人的用药量进行换算，相当于临床上治疗溃疡性结肠炎的用药剂量。

实验试剂：小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA KIT，小鼠白介素10(IL-10)ELISAKIT，小鼠脂多糖/内毒素(LPS)ELISA KIT，小鼠白介素1β(IL-1β)ELISA KIT，反转录试剂盒，TB

Premix Ex Taq^TM。

实验仪器：LightCycler 480II实时荧光定量PCR，384孔板，热循环PCR仪，多功能酶标仪。

统计学处理：应用SPSS 21.0统计软件，计量资料的多组间比较用方差分析，不符合方差齐性以及正态分布的采用秩和检验，P≤0.05为存在差异且有统计学意义。

实施例1

中药提取物的制备

用于治疗溃疡性结肠炎的中药组合物组成，党参17份，白术13份，甘草11份，陈皮10份，槐花11份，白芷6份，肉豆蔻6份，石榴皮4份，五倍子4份，加入15倍量超纯水，加热回流2h，提取3次，滤液合并后进行加热浓缩至生药量为1g/mL，得到实施例1所用的中药提取物。

实验动物：健康的10周龄左右SPF级(无特定病原体)C57雌性小鼠。

实施例1.1

给药组给药期间，每天记录小鼠体重、进食量，并观察生存状态。给药40天后，小鼠状态得到明显改善，血便、脓便减少。

实施例1.2

给予中药提取物40天后，使用乙醚麻醉小鼠，眼眶取血，血液在室温下静置1小时后，于冷冻离心机中，在4℃条件下，以3500rpm/min的转速离心15min，吸取上层清液于1.5mL无酶离心管中，储存于-80℃中备用。使用ELISA KIT对血液中的促炎性细胞因子和抑炎因子进行检测，促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β和LPS)，抑炎性细胞因子(IL-10)的检测结果如表1：

表1

组别	n	TNF-α(pg/mL)	IL-1β(pg/mL)	LPS(pg/mL)	IL-10(pg/mL)
						空白组	6	70.28±7.25	241.79±6.55	7.24±1.84	70.76±4.44
造模组	6	84.50±4.76	268.61±10.74	15.08±6.35	77.24±3.75
						给药组	6	88.08±13.35	243.09±6.08<sup>＊＊＊</sup>	9.86±0.92<sup>＊</sup>	80.18±5.06

注：与造模组相比较，*P≤0.05，***P≤0.001

表1中结果表明，本中药提取物可以显著降低血液中的促炎性细胞因子IL-1β和LPS的水平，同时提高抑炎性细胞因子IL-10的水平，对促炎性细胞因子TNF-α的降低也有一定作用。

实施例1.3

人道地处死小鼠后，剪取肝脏和结肠等组织，测量并记录肝脏重量和结肠长度(见表2)。结肠使用PBS冲洗后，一部分使用液氮速冻，储存于-80℃冰箱；一部分于4℃条件下4％多聚甲醛中固定1天，于自动脱水机中进行脱水包埋后得到相应的石蜡包埋块，切片制得石蜡切片，对石蜡切片进行HE染色。在10倍显微镜下观察结肠HE染色切片(图1)，造模组小鼠黏膜和黏膜下层可见大量炎性细胞浸润，并出现淋巴结肿大，给予中药提取物后，黏膜和黏膜下层无炎性细胞浸润，淋巴结未见肿大。

表2

组别	n	肝脏重量(g)	结肠长度(cm)
				空白组	6	0.77±0.06	6.02±0.96
造模组	6	0.90±0.10	5.35±0.49
				给药组	6	0.88±0.09	5.73±0.41

上述表2结果表明，本中药提取物可改善因溃疡性结肠炎引起的肝脏变重，同时显著改善溃疡性结肠炎造成的结肠长度变短、结肠上皮细胞损伤和炎症细胞浸润。

实验例1.4

取出贮存于-80℃冰箱中的结肠组织，用酒精消毒后的剪刀剪取一小段置于1.5mL无酶Ep管中，加入磁珠和Trizol裂解液匀浆，使用氯仿/异丙醇抽提RNA，获得RNA后在-80℃下贮存。使用反转录试剂盒先去除DNA，再进行逆转录反应将RNA逆转为cDNA，以GAPDH为内参，按照TB Green 5uL，cDNA 2uL，上游引物0.6uL，下游引物0.6uL，DEPC水1.8uL的体系，程序设定为95℃，30sec；95℃，5sec；60℃，20sec；65℃，15sec；循环40次，进行实时荧光定量PCR实验，结果如表3：

表3

注：与造模组相比较，*P≤0.05，**P≤0.01，***P≤0.001

上述表3结果表明，本中药提取物可显著降低溃疡性结肠炎小鼠结肠中的促炎性细胞因子的水平。

实施例2

中药提取物的制备

用于治疗溃疡性结肠炎的中药组合物组成，党参13份，白术10份，甘草8份，陈皮7份，槐花8份，白芷6份，肉豆蔻4份，石榴皮3份，五倍子4份，加入10倍量超纯水，加热回流1.5h，提取3次，滤液合并后进行加热浓缩至生药量为1g/mL，得到实施例2所用的中药提取物。

实验动物：健康的10周龄左右SPF级(无特定病原体)和EpCAM单基因突变C57雌性小鼠。

实施例2.1

基因型鉴定：使用75％乙醇消毒剪刀和镊子，取小鼠尾巴约0.5cm放入1.5mLEP管中，每管中加入500uL消化液和10uL蛋白酶K，于55℃水浴消化过夜。使用酚仿醇法(Tris饱和酚：氯仿：异戊醇体积比为25：24：1)提取DNA。按照DNA模板：2uL；Primer EpCAM F(SEQ IDNO.1)：1uL；Primer EpCAM R(SEQ ID NO.2)：1uL；2x Master Mix：10uL；ddH₂O：6uL的扩增体系，将样品依次加入200uL EP管中，对EpCAM上4号外显子区域进行扩增。扩增程序为94℃，3min；94℃，20sec；57℃，30sec；72℃，20sec，循环35次；72℃，2min；4℃，∞。最后进行Sanger测序，将测序结果与原始序列进行对比，与原始序列一致的为野生型，其余则为突变型，选取突变型小鼠进行如下实验。

给药组给药期间，每天记录小鼠体重、进食量，并观察生存状态。给药30天后，小鼠状态得到明显改善，血便、脓便减少。

实施例2.2

给予中药提取物后40天后，使用乙醚麻醉小鼠，眼眶取血，血液在室温下静置1小时后，于冷冻离心机中，在4℃条件下，以3500rpm/min的转速离心15分钟，吸取上层清液于1.5mL无酶离心管中，储存于-80℃中备用。使用ELISA KIT对血液中的促炎性细胞因子和抑炎因子进行检测，促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β和LPS)，抑炎性细胞因子(IL-10)的检测结果如表4：

表4

注：与造模组相比较，*P≤0.05，***P≤0.001

上述表4结果表明，本中药提取物可以显著降低血液中的促炎性细胞因子IL-1β和LPS的水平，同时提高抑炎性细胞因子IL-10的水平，对促炎性细胞因子TNF-α的降低也有一定作用。

实施例2.3

人道地处死小鼠后，剪取肝脏和结肠等组织，测量并记录肝脏重量和结肠长度(见表5)。结肠使用PBS冲洗后，一部分使用液氮速冻，储存于-80℃冰箱；一部分于4℃条件下4％多聚甲醛中固定1天，于自动脱水机中进行脱水包埋后得到相应的石蜡包埋块，切片制得石蜡切片，对石蜡切片进行HE染色。在10倍显微镜下观察结肠HE染色切片(图2)，造模组小鼠粘膜层结构异常，杯状细胞几乎消失，炎症细胞大量聚集在发生萎缩的隐窝旁边，给予中药提取物后，粘膜层结构正常，杯状细胞数量恢复，未出现明显的炎症细胞聚集。

表5

组别	n	肝脏重量(g)	结肠长度(cm)
				空白组	6	0.79±0.09	5.83±0.34
造模组	6	1.01±0.13	5.07±0.61
				给药组	6	0.89±0.16	5.76±0.33

上述表5中的结果表明，本中药提取物可改善因溃疡性结肠炎引起的肝脏变重，同时显著改善溃疡性结肠炎造成的结肠长度变短、结肠上皮细胞损伤和炎症细胞浸润。

实验例2.4

取出贮存于-80℃冰箱中的结肠组织，用酒精消毒后的剪刀剪取一小段置于1.5mL无酶Ep管中，加入磁珠和Trizol裂解液匀浆，使用氯仿/异丙醇抽提RNA，获得RNA后-80℃温度下贮存。使用反转录试剂盒先去除DNA，再进行逆转录反应将RNA逆转为cDNA，以GAPDH为内参，按照TB Green 5uL，cDNA 2uL，上游引物0.6uL，下游引物0.6uL，DEPC水1.8uL的体系，程序设定为95℃，30sec；95℃，5sec；60℃，20sec；65℃，15sec；循环40次，进行实时荧光定量PCR实验，结果如表6：

表6

注：与造模组相比较，*P≤0.05

上述表6结果表明，本中药提取物可显著降低溃疡性结肠炎小鼠结肠中的促炎性细胞因子的水平。

最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 广东药科大学

<120> 一种治疗肠炎的中药组合物及其制备方法

<130> 20220216

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

cttggcctgg atggcagcag aataa 25

<210> 2

<211> 25

<212> DNA

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ggaggaggcc tgggatgatc tttggtccag ggttgtgaca tttccagagc tggcttatga 180

atttcctgtg tagataggct gggtcttagg ttttacacaa acagtagcag accagacatt 240

gttcccttta ttttcactga acctctggtc cccatttgga agttggagtt agtgtaaagt 300

gagtatgaat gacttgaact 320

Claims

1.一种组合物，其特征在于，所述组合物由以下原料组成：党参、白术、甘草、陈皮和槐花。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物由以下重量份的组分组成：党参12-18份，白术9-14份，甘草7-12份，陈皮7-12份，槐花7-12份。

3.一种中药提取物，其特征在于，由权利要求1-2任一项所述的组合物提取获得。

4.权利要求3所述中药提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将党参、白术、甘草、陈皮和槐花按所需配比混合均匀；

(2)向步骤(1)中所得的混合物中加入水，提取；

(3)将步骤(2)中得到的滤液合并后进行加热浓缩；

5.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求1所述的组合物，还包括以下组分：白芷、肉豆蔻、石榴皮和五倍子。

6.一种中药提取物，其特征在于，由权利要求5所述的组合物提取获得。

7.权利要求6所述中药提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(2)向步骤(1)中所得的混合物中加入水，提取；

(3)将步骤(2)中得到的滤液合并后进行加热浓缩；

8.包括权利要求1-2、5任一项所述组合物或权利要求3、6任一项所述中药提取物或权利要求4、7任一项所述制备方法得到的中药提取物的药物，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的辅料，所述辅料包括淀粉、糊精、乳糖、甘油、蔗糖、微晶纤维素、羧甲纤维素钠、甘露醇、硬脂酸镁、滑石粉的一种或几种。

9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型包括颗粒剂、片剂、胶囊剂、软胶囊剂、溶液剂、糖浆剂、混悬剂和滴丸剂的任意一种。

10.权利要求1-2、5任一项所述组合物或权利要求3、6任一项所述中药提取物或权利要求4、7任一项所述制备方法得到的中药提取物或权利要求8-9任一项所述药物在制备治疗溃疡性结肠炎以及EpCAM单基因突变所致的肠道炎症的药物中的应用。