CN108324880B - 一种治疗大肠癌的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

发明名称:一种治疗大肠癌的中药组合物及其制备方法，摘要:本发明涉及中医药技术领域，具体涉及一种对大肠癌患者可增强免疫力、提高生活质量及延长生存时间的中药配方组合物。本发明中药组合物配方组成为：蜈蚣、全蝎、半边莲、黄柏、三棱、胆南星、海藻、黄芪、山药、大黄。全方具有攻毒祛邪、祛瘀消肿、化痰散结、通络止痛、益气健脾之功效，攻毒祛邪为主，兼以扶正培本，攻补兼施，切合于大肠癌患者“毒、瘀、痰、虚”病困病机特点，临床疗效较好，且安全性高。主要用于大肠癌患者，特别是中晚期结直肠癌患者及其术后患者服用。

Description

一种治疗大肠癌的中药组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及中医药技术领域，具体涉及一种对大肠癌患者可增强免疫力、提高生活质量及延长生存时间的中药组合物，特别是中晚期结直肠癌患者及其术后患者使用的中药溶液、颗粒剂及制备方法。
背景技术
大肠癌（colorectal cancer）是一种常见的消化道肿瘤。在我国大肠癌发病率和死记率分别约为28.08/10万和13.41/10万，大肠癌在恶性肿瘤发病和死亡构成中分别占10.56％和7.80％，居第3位和第5位，且大肠癌发病率呈现上升趋势，故大肠癌在我国是一个高发病率和高死亡率的肿瘤性疾病。手术、化疗、分子靶向治疗、生物免疫治疗等是大肠癌西医学治疗的主要方法，它们虽然使大肠癌患者获得了较好的无进展生存（progression-free survival，PFS）和总生存率（overall survival，OS），但是仍有一部分患者会复发和转移，对于这些复发、转移和初诊时就处于肿瘤晚期的患者，他们难以通过上述治疗获益。
近年来，大量的临床研究与实验研究均表明，中医药在大肠癌根治术后预防复发和转移﹑减毒增效﹑减轻疼痛以及提高生存质量，延长生存期等方面发挥着非常重要的作用。
中医对大肠癌病机的认识，可概括为“毒、瘀、痰、虚”四个方面。目前，中医药对大肠癌的临床研究多是针对某一证型的方药研究，存在适用范围小、临床应用窄的问题。因此，研究生产出适合针对大肠癌病因病机的中药制剂显得极其必要。
发明内容
本发明旨在针对目前临床治疗大肠癌的中药制剂多是针对某一证型的方药，适用范围小、临床应用窄的现状，提供一种可使大肠癌患者增强免疫、减少复发转移、提高生活质量及延长生存时间的中药复合物，不但疗效显著，且毒副作用轻微，用药安全。
为了达到上述目的，所述可使大肠癌患者可调节免疫、减少复发转移、提高生活质量及延长生存时间的中药复合物，其特征在于其药用有效成分由以下各个组分及其质量份比的原料药制成：
一种可使大肠癌患者可调节免疫、减少复发转移、提高生活质量及延长生存时间的中药复合物，其特征在于其药用有效成分由以下各个组分及其质量份比的原料药制成：
蜈蚣1~10g，全蝎1.5~12g，半边莲4.5~15g，黄柏3~12g，三棱2.5~20g，胆南星1.5-12g，海藻3~24g，黄芪4.5~60g，山药7.5-60g，大黄1.5-30g。
具体而言，所述中药组合物包括以下八种方案：
方案一：蜈蚣2g，全蝎2g，半边莲9g，黄柏3g，三棱5g，胆南星3g，海藻6g，黄芪9g，山药15g，大黄3g。
方案二：蜈蚣2g，全蝎3g，半边莲15g，黄柏6g，三棱10g，胆南星6g，海藻10g，黄芪20g，山药10g，大黄6g。
方案三：蜈蚣2g，全蝎2g，半边莲10g，黄柏10g，三棱10g，胆南星6g，海藻10g，黄芪20g，山药30g，大黄9g。
方案四：蜈蚣3g，全蝎3g，半边莲10g，黄柏10g，三棱9g，胆南星6g，海藻10g，黄芪30g，山药30g，大黄10g。
方案五：蜈蚣5g，全蝎5g，半边莲10g，黄柏10g，三棱10g，胆南星6g，海藻12g，黄芪30g，山药20g，大黄3g。
方案六：蜈蚣3g，全蝎3g，半边莲15g，黄柏6g，三棱10g，胆南星6g，海藻10g，黄芪30g，山药30g，大黄6g。
方案七：蜈蚣3g，全蝎3g，半边莲15g，黄柏10g，三棱10g，胆南星6g，海藻10g，黄芪30g，山药30g，大黄9g。
方案八：蜈蚣5g，全蝎6g，半边莲15g，黄柏12g，三棱10g，胆南星6g，海藻12g，黄芪30g，山药30g，大黄10g。
本发明中药组合物中所用原料中药均为遵照传统中药炮制方法炮制的地道中药，各原料中药在中国药典、中国辞典以及中华本草中均有详细的记载。
方中所有中药，第一煎加水量不少于2000ml，武火煮沸后再改用文火慢煎，不少于3小时，煎取药液量约75-100ml；第二煎加水量不少于2500ml，武火煮沸后再改用文火慢煎，不少于4小时，煎取药液量约75-100ml。二次煎取药液量约150-200ml。
服用方法：每日1剂，分二次于早晚餐后温服。每服3个月，休息1个月。
本发明中药复合物配方的中医理论依据：中医认为大肠癌，或因忧思郁怒惊恐所致气血运行紊乱，脏腑功能失调，气滞血瘀，瘀积目久，毒从内生而恶变致癌；或因饮食不节、不洁，食毒内聚，久伤脾胃，中气亏损，痰湿内蕴，痰毒内生，郁结成瘤；或因外界毒邪，如环境浊气、射线毒物侵袭人体，毒邪内结。邪毒结聚不去，耗伤气血，损伤正气，正气虚而毒邪盛，导致癌肿的扩散、转移。故大肠癌的病因病机可归纳为“毒、瘀、痰、虚”，也就是脏毒蕴积于大肠，痰湿瘀血互积助长其形症，日久耗伤气血，使脏腑之气虚弱，毒不除则不足以治其根本。其治疗应以攻毒祛邪为主，兼以扶正培本，即攻毒祛邪、祛瘀消肿、化痰散结、益气养阴。
本中药组合物是经多年临床验证的效方，由《疡医大全·卷二十一》中的化痞膏、《世医得效方》中的黄芪益损汤和《医学启蒙》中的内消瘰疬丸三方化载而成。天马颗粒剂应用于临床多年，对大肠癌术后抗复发具有较好的临床疗效。将120例大肠癌术后患者随机分成治疗组（天马颗粒剂）和对照组（化疗组），每组各60例，结果显示：天马颗粒剂治疗中晚期大肠癌，术后5年生存率为52.71％，优于联合化疗的36.48％(P<0.05)。天马颗粒剂对术后复发转移有抑制作用，其复发转移率为49.2％，优于联合化疗组的67.3％。另一项临床研究入组52例行根治术的大肠癌患者，随机分成治疗组（天马颗粒剂）和对照组（FMC方案化疗组），结果显示：治疗组中位生存期为42.5月，对照组中位生存期为28.0月,差异有统计学意义(P<0.05)。原方由19味中药组成，经过近20年的临床应用、研究和总经，精减至17味中药，本发明中药复合物是以17味中药配方为基础，借助现代科研方法，研究所得。
本发明中药复合物所选用中药的药理学依据如下：
蜈蚣：味辛，温。有毒。归肝经。功能：息风止痉，攻毒散结，通络止痛。主要成分为组织胺、溶血蛋白质、甲酸、脂肪油、蚁酸等。现代研究具有抗惊厥、抗肿瘤、调节免疫功能、镇痛抗炎、延缓衰老等作用。有实验结果表明，少棘蜈蚣总碱性蛋白对人结肠癌细胞有明显的抑制作用，且活性稳定。
全蝎：味辛，性平。有毒。归肝经。功能：息风镇痉，通络止痛,攻毒散结。主要成分为蝎毒、三甲胺、蝎酸、油酸以及多种氨基酸等。现代研究具有抗惊厥、镇痛、抗肿瘤等作用，蝎毒能抑制直肠肿瘤DNA合成。
半边莲：味辛，性平。归心、肺、小肠经。功能：清热解毒，利水消肿。主要成分为生物碱、黄酮苷、皂苷等。现代研究具有抗肿瘤、利尿、抗蛇毒作用。
黄柏：味苦，性寒。归肾、膀脱、大肠经。功能：清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮。主要成分为小檗碱、黄柏碱等，现代研究具有抗菌、抗溃疡、抗肿瘤等作用。其成分小檗碱对结肠癌细胞有抑制作用。
三棱：味辛，苦，性平。归肝、脾经。功能：破血行气，消积止痛。主要成分为苯乙醇、对苯二酚、十六烷酸、去氢木香内酯、三棱醇等。现代研究具有抗凝、抗肿瘤、镇痛护作用，同时还有抑制原癌基因c-myc、c-fos、v-sis表达的作用。
胆南星：味苦、微辛，性凉，有毒。归肝、肺、脾经。功能：清热化痰，息风定惊。主要成分为凝聚素、胡萝卜素、β-谷甾醇、多种氨基酸等。现代研究具有抗惊厥、镇静、镇痛、抗肿瘤等作用。
海藻：味苦、咸，性寒。归肝、胃、肾经，功能：消痰软坚散结，利水退肿。主要成分为海藻胶、粗蛋白、甘露醇、马尾藻聚糖等。现代研究具有降血脂、抗溃疡、抗肿瘤等作用。
黄芪：味甘，性微温。归肺、脾经。功能：补气升阳，固表止汗，利水消肿，生津养血，气滞通痹，托毒排脓，敛疮生肌。主要成分为黄茂普、大豆皂普、多糖、氨基酸、多种维生素等。现代研究具有抗肿瘤、提高机体免疫力等作用。
山药：味甘，性平。归脾、肺、肾经。功能：补脾养胃，生津益肺，寂肾涩精。主要成分为薯预皂苷元、山药碱、山药多糖等。现代研究具有抗肿瘤、增加免疫功能、促进溃疡愈合、抗氧化等作用。
大黄：:味苦，性寒。归脾、胃、大肠、肝、心包经。功能：泻下攻积，清热泻火，逐瘀通经，利湿退黄。主要成分为大黄酸、大黄素、大黄酚等。现代研究具有泻下、抗炎、止血、抗肿瘤等作用。
蜈蚣、全蝎以毒攻毒，散结消肿，共为君药。半边莲、黄柏清热解毒消肿；三棱活活血祛瘀消肿，破血之结；胆南星化胶结之痰，海藻软坚散结；黄芪、山药益气养活阴，扶正培本，托毒外出，同时以防其它药耗气伤阴，共为佐药。大黄排便通腑，以通降为补，引邪外出，兼活血化瘀之效，为使药。全方共奏拔癌毒、消结肿、通经络、止疼痛、益气阴之效。本配方以攻毒祛邪为主，兼以益气养阴，攻补兼施，从而达到“祛邪不伤正，扶正不留邪”的目的，切合于大肠癌患者“毒、瘀、痰、虚”病因病机特点，因此能取得较好的临床疗效，且安全性高。
具体实施方式
以下将结合实施例说明本发明，本发明的实仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的实质。
一、制备实例：
本发明由下列各个组分及其质量份比的原料药制备而成：蜈蚣2g，全蝎3g，半边莲15g，黄柏6g，三棱10g，大黄6g，胆南星6 g，海藻10g，黄芪20g，山药10g。
本发明中药组合物中所用原料中药均为遵照传统中药炮制方法炮制的地道中药，各原料中药在中国药典、中国辞典以及中华本草中均有详细的记载。
方中所有中药，第一煎加水量不少于2000ml，武火煮沸后再改用文火慢煎不少于3小时，煎取药液量约75-100ml；第二煎加水量不少于2500ml，武火煮沸后再改用文火慢煎不少于4小时，煎取药液量约75-100ml。
二次煎取药液量约150-200ml。
服用方法：每日1剂，分二次于早晚餐后温服。每服3个月，休息1个月。
二、拆方研究
（一）正交设计：
用于实验研究的17味中药配方各组分的质量组成：蜈蚣2g，全蝎3g，重楼9g，半边莲15g、黄柏6g、三棱10g，莪术10g，大黄6g，胆南星3g，海藻10g，、夏枯草10g，当归10g，黄芪20g，党参10g，山药20g，车前子10g，火麻仁10g。用A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O、P、Q分别蜈蚣、全蝎、蚤休、半边莲、黄柏、醋制三棱、醋制莪术、酒制大黄、制南星、海藻、夏枯草、当归、黄芪、党参、山药、车前子、火麻仁17味中药。数字1、2分别代表“原始剂量”和“不用”，即17因素2水平。正交设计见表1。
表1 L20（217）正交设计及实验结果表
Figure DEST_PATH_RE-DEST_PATH_IMAGE002
(三) 含药血清制备：
（1）试验药物 17味中药复合物选用由广东一方制药生产的颗粒剂制备，购于湖南省中医院中药房。
（2）药物准备天马颗粒剂方药：蜈蚣2g，全蝎3g，重楼9g，半边莲15g、黄柏6g、三棱10g，莪术10g，大黄6g，胆南星3g，海藻10g，、夏枯草10g，当归10g，黄芪20g，党参10g，山药10g，车前子10g，火麻仁10g。按正交设计将各实验组药物用纯净水溶解后，冰箱贮存备用。
（3）制备血清将120只大鼠随机分为20组，每组6只，雌雄各半。标准食料适应性喂养1周后，予20组药物溶解后灌胃给药，给药剂量相当于成人日用量的5倍，分早晚2次给药，连续7d，末次给药2 h后麻醉，腹主动脉采血，室温静置2h，1500 r/min，离心15 min分离血清，同组血清混匀，56℃，30min灭活补体，0.22um过滤器除菌后分装，-80℃冰箱保存备用。
(四) 细胞培养
以HCT8、HCT116、HT29、CoLo320、SW480、SW620细胞株为研究对象。将大肠癌细胞培养于含10％的胎牛血清、100ug/ml的青霉素和链霉素的RPM1-1640培养基中，37℃、5％C02、相对湿度为95％的恒温培养箱内培养，每2～3d使用0.25％的胰蛋白酶消化传代一次。取对数期细胞用于实验。
（四）制作标准曲线
每孔以含细胞数分别为2000、4000、8000的细胞悬液100 ul接种于96孔板，每组设置6个复孔。恒温培养箱中培养24h，在避光条件下每孔加入CCK-8溶液10ul，轻敲培养板四周使CCK-8混匀，恒温培养箱中分别孵育0.5，1，2，4h后，酶标仪上450 nm测定吸光度（OD），使用Origin6.0制作标准曲线。选取OD值1.0时的细胞密度（4000个细胞/孔）和加入CCK-8后的孵育时间(2h)用于后续实验。
(五)细胞增殖检测
收集对数期的细胞，使用96孔板，根据每种细胞的标准曲线在每孔中加入相应细胞数的细胞悬液100ul接种于96孔板中，共20组，并设不加细胞组(只加入等体积的培养基)和空白对照组(加入等体积细胞悬液，不加含药血清干预)，每组设置6个复孔。待细胞贴壁，将原培养基更换为含有10%、15%和20%三个不同浓度含药血清的培养基100ul，不加细胞组和空白对照组均更换为等体积的完全培养基，每个浓度分别继续培养24小时、48小时和72小时。加入CCK-8溶液10ul，轻敲培养板四周使CCK-8混匀，放入恒温培养箱中继续孵育，每种细胞孵育时间根据标准曲线确定。酶标仪上450nm测定OD值(A)。试验重复2次。计算细胞增殖抑制率（IR）：IR%=[1-(A干预组均值-A不加细胞组均值) ]/(A空白对照组均值-A不加细胞组均值）×100。
（六）数据分析
所有数据使用SPSS17.0软件包进行统计分析，数据中的所有计量资料均采用(
Figure DEST_PATH_RE-DEST_PATH_IMAGE004
）表示。多组间比较采用方差分析。以P＜0.05为差别有统计学意义，所有的统计检验均采用双侧检验。
（七）结果
（1）人大肠癌HCT8细胞OD值 20组浓度分别为10%、15%、20%含药血清，对人大肠癌HCT8细胞的干预24h、48h、72h，酶标仪检测吸光度，其OD值见表2。
表2 人大肠癌HCT8细胞的OD值(
Figure DEST_PATH_DEST_PATH_IMAGE004A
）
Figure DEST_PATH_RE-DEST_PATH_IMAGE006
（2）人大肠癌HCT116细胞的OD值 20组浓度分别为10%、15%、20%含药血清，对人大肠癌HCT116细胞的干预24h、48h、72h，酶标仪检测吸光度，其OD值见表3。
表3 大肠癌HCT116细胞的OD值(
Figure DEST_PATH_DEST_PATH_IMAGE004AA
）
Figure DEST_PATH_RE-DEST_PATH_IMAGE008
（3）人大肠癌HT29细胞的OD值 20组浓度分别为10%、15%、20%含药血清，对人大肠癌HT29的细胞干预24h、48h、72h，酶标仪检测吸光度，其OD值见表4。
表4 人大肠癌HT29细胞的OD值(
Figure DEST_PATH_DEST_PATH_IMAGE004AAA
）
Figure DEST_PATH_RE-DEST_PATH_IMAGE010
(4) 人大肠癌Colo320细胞的OD值 20组浓度分别为10%、15%、20%含药血清，对人大肠癌Colo320细胞的干预24h、48h、72h，酶标仪检测吸光度，其OD值见表5。
表5 人大肠癌Colo320细胞的OD值(
Figure DEST_PATH_DEST_PATH_IMAGE004AAAA
）
Figure DEST_PATH_DEST_PATH_IMAGE012
（5）人大肠癌SW480细胞的OD值 20组浓度分别为10%、15%、20%含药血清，对人大肠癌SW480细胞的干预24h、48h、72h，酶标仪检测吸光度，其OD值见表6。
表6 人大肠癌SW480细胞的OD值(
Figure DEST_PATH_DEST_PATH_IMAGE004AAAAA
）
Figure DEST_PATH_DEST_PATH_IMAGE014
（6）人大肠癌SW620细胞的OD值 20组浓度分别为10%、15%、20%含药血清，对人大肠癌SW620细胞的干预24h、48h、72h，酶标仪检测吸光度，其OD值见表7。
表7 人大肠癌SW620细胞的OD值(
Figure DEST_PATH_DEST_PATH_IMAGE004AAAAAA
）
Figure DEST_PATH_DEST_PATH_IMAGE016
（7）细胞增殖抑制率计算细胞增殖抑制率（IR）：IR%=[1-(A干预组均值-A不加细胞组均值) ]/(A空白对照组均值-A不加细胞组均值）×100。20个拆方组含药血清对6种大肠癌细胞的最高抵制率，见表8
表8 20组含药血清对6种人大肠癌细胞的最高细胞抑制率(%)
Figure DEST_PATH_DEST_PATH_IMAGE018
（8）方差分析 经方差分析，原方中蜈蚣、全蝎、半边莲、黄柏、三棱、大黄、胆南星、海藻、黄芪、山药对大肠癌细胞的增殖，均有抑制作用（均P＜0.05），且蜈蚣为方中主药（P＝0.001）；而重楼、莪术、夏枯草、当归、党参、车前子、火麻仁则对大肠癌细胞的增殖抑制作用则不明显（均P＞0.05）。见表9。
表9 正交实验方差分析表
Figure DEST_PATH_DEST_PATH_IMAGE020
注：P＜0.05，★ P＞0.05）。
综上所述，本发明中药组合物配方组成为：蜈蚣、全蝎、半边莲、黄柏、三棱、大黄、胆南星、海藻、黄芪、山药。全方共奏拔癌毒、消结肿、通经络、止疼痛、益气阴之效。本配方以攻毒祛邪为主，兼以益气养阴，攻补兼施，从而达到“祛邪不伤正，扶正不留邪”的目的，切合于大肠癌患者“毒、瘀、痰、虚”病因病机特点，因此能取得较好的临床疗效，且安全性高。

Claims (9)

1.一种可使大肠癌患者调节免疫、减少复发转移、提高生活质量及延长生存时间的中药复合物，其特征在于,所述中药复合物由以下原料制成：蜈蚣2 g，全蝎2 g，半边莲9 g，黄柏3 g，三棱5 g，大黄3 g，胆南星3 g，海藻6g，黄芪9 g，山药15 g。
2.一种可使大肠癌患者调节免疫、减少复发转移、提高生活质量及延长生存时间的中药复合物，其特征在于,所述中药复合物由以下原料制成：蜈蚣2g，全蝎3g，半边莲15g，黄柏6g，三棱10g，大黄6 g，胆南星6 g，海藻10g，黄芪20g，山药10g。
3.一种可使大肠癌患者调节免疫、减少复发转移、提高生活质量及延长生存时间的中药复合物，其特征在于,所述中药复合物由以下原料制成：蜈蚣2g，全蝎2g，半边莲10g，黄柏10g，三棱10g，大黄9 g，胆南星6 g，海藻10g，黄芪20g，山药30g。
4.一种可使大肠癌患者调节免疫、减少复发转移、提高生活质量及延长生存时间的中药复合物，其特征在于,所述中药复合物由以下原料制成：蜈蚣3g，全蝎3g，半边莲10g，黄柏10g，三棱9g，大黄10 g，胆南星6 g，海藻10g，黄芪30g，山药30g。
5.一种可使大肠癌患者调节免疫、减少复发转移、提高生活质量及延长生存时间的中药复合物，其特征在于,所述中药复合物由以下原料制成：蜈蚣5g，全蝎5g，半边莲10g，黄柏10g，三棱10g，大黄3 g，胆南星6 g，海藻12g，黄芪30g，山药20g。
6.一种可使大肠癌患者调节免疫、减少复发转移、提高生活质量及延长生存时间的中药复合物，其特征在于,所述中药复合物由以下原料制成：蜈蚣3g，全蝎3g，半边莲15g，黄柏6g，三棱10g，大黄6 g，胆南星6 g，海藻10g，黄芪30g，山药30g。
7.一种可使大肠癌患者调节免疫、减少复发转移、提高生活质量及延长生存时间的中药复合物，其特征在于,所述中药复合物由以下原料制成：蜈蚣3g，全蝎3g，半边莲15g，黄柏10g，三棱10g，大黄9 g，胆南星6 g，海藻10g，黄芪30g，山药30g。
8.一种可使大肠癌患者调节免疫、减少复发转移、提高生活质量及延长生存时间的中药复合物，其特征在于,所述中药复合物由以下原料制成：蜈蚣5g，全蝎6g，半边莲15g，黄柏12g，三棱10g，大黄10 g，胆南星6 g，海藻12g，黄芪30g，山药30g。
9.如权利要求1-8任一项所述中药复合物的制备方法,包括:所有中药，第一煎加水量不少于2000ml，武火煮沸后再改用文火慢煎，不少于3小时，煎取药液量约75-100ml；第二煎加水量不少于2500ml，武火煮沸后再改用文火慢煎，不少于4小时，煎取药液量约75-100ml;二次煎取药液量约150-200ml。
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"天马颗粒剂的拆方研究";彭天书;《中国博士学位论文全文数据库（医药卫生科技辑）》;20150715;E057-37 *

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