CN114835769B - 20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物及其制备方法 - Google Patents

20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种酰胺键链接的20‑酰胺‑(异羟肟酸)‑孕烯醇酮类缀合物，其化学结构如下式所示：

Description

20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及抗肿瘤药物技术领域，更具体地说，本发明涉及一种20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物及其制备方法及应用。
背景技术
人口的增长和人口老龄化，全球癌症发病率和死亡率快速增长，2018年，FreddieBray博士于A Cancer Journal for Clinicians(CA)中报道，将有1810万新癌症病例和960万癌症死亡(Bray F.,Ferlay J.,Soerjomataram I.,et al.Global cancer statistics2018:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36cancers in185countries.CA:A Cancer Journal for Clinicians，68(6):394-424.)。文中提到男性中肺癌发病率和死亡率最高，女性中乳腺癌发病率和死亡率最高。
甾体化合物在生命过程中扮演重要的调节作用，是一类能够普遍从动植物体内分离的化学分子，具有显著活性。由于甾体化合物具有良好的膜渗透性，在临床上用于治疗癌症的甾体化合物已有应用。对甾体化合物的改造，并研究其生理活性，是药物化学方面的热点领域
基于此，非常有必要研发一种至少对人乳腺癌有显著效果的甾体化合物类抗癌药物。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述缺陷，并提供至少后面将说明的优点。
本发明的另一个目的是提供一种对人乳腺癌细胞(T47d)和人卵巢癌细胞(SKOV3)具有显著的抑制作用的20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物。
本发明的另一个目的是提供一种步骤简洁，产率高的20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物的制备方法。
本发明的另一个目的是提供一种20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物作为制备抗癌药物的应用。
为了实现本发明的这些目的和其它优点，本发明提供一种20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物，其化学结构如下式所示：
Figure GDA0004065488660000021
酯基链接的20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物的制备方法，包括：以己二酸单甲酯或辛二酸单甲酯为原料，在氯甲酸异丁酯和N-甲基吗啉的活化下，与氧代三苯甲基羟胺进行反应，得到第一化合物或第二化合物。再对第一化合物或第二化合物在四氢呋喃作为溶剂，氢氧化锂水溶液作为碱的情况下进行碱性水解反应，分别得到第三化合物或第四化合物。
再以孕烯醇酮为原料，溶于无水乙醇中，与乙酸钠和盐酸羟胺发生20-位羰基肟化反应得到第五化合物，将第五化合物溶于甲醇中，与一水合硫酸氢钠、氰基硼氢化钠和氯化钼发生肟基胺化反应得到第六化合物。
将第六化合物溶于二氯甲烷，与第三化合物或第四化合物进行分子杂交反应，得到第七化合物或第八化合物为中间产物。再对第七化合物或第八化合物，用三氟乙酸进行脱三苯甲基保护得到第九化合物或第十化合物为目的产物。
优选的是，以己二酸单甲酯或辛二酸单甲酯为原料，在氯甲酸异丁酯和N-甲基吗啉的活化下，与氧代三苯甲基羟胺进行反应，具体包括：取己二酸单甲酯或辛二酸单甲酯溶于无水四氢呋喃中，加入N-甲基吗啉，再加入氯甲酸异丁酯，冷却至0℃，5分钟后加入氧代三苯甲基羟胺，常温搅拌过夜，薄层色谱监测反应终点，待反应完成后，减压旋蒸，旋干溶剂后，乙酸乙酯萃取3次，水洗3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸，柱层析分析纯化，分别得到白色固体为第一化合物或第二化合物。
第一化合物为6-氧基-((三苯氧基)
氨基)己酸甲酯，结构如下：
Figure GDA0004065488660000031
第二化合物为8-氧基-((三氧基)氨基)辛酸甲酯，结构如下：
Figure GDA0004065488660000032
优选的是，以第一化合物或第二化合物做为原料，进行碱性水解的反应。具体如下：取第一化合物或第二化合物，分别加入无水四氢呋喃作为溶剂，再加入氢氧化锂水溶液，反应过夜(6-12小时)，薄层色谱监测反应终点，待反应完成后，减压旋蒸，旋干溶剂后，乙酸乙酯萃取3次，水洗3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸，柱层析分析纯化，分别得到白色固体为第三化合物或第四化合物。
第三化合物为6-氧基-((三苯氧基)氨基)己酸，结构如下：
Figure GDA0004065488660000033
第四化合物为8-氧基-((三氧基)氨基)辛酸，结构如下：
Figure GDA0004065488660000034
优选的是，以孕烯醇酮为原料，与乙酸钠和盐酸羟胺发生20-位羰基肟化反应具体包括：取雌酚酮溶于无水乙醇中，加热至65-70℃搅拌溶解，再加入乙酸钠和盐酸羟胺g，65-70℃搅拌反应3h，薄层色谱监测反应终点，待反应完成后，减压旋蒸，旋干溶剂后，乙酸乙酯萃取3次，水洗3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸，柱层析分析纯化，得到白色固体为第五化合物；
将第五化合物与一水合硫酸氢钠、氰基硼氢化钠和氯化钼发生肟基胺化反应。具体包括：加入第五化合物溶于甲醇冰浴搅拌，依次加入一水合硫酸氢钠，氰基硼氢化钠，氯化钼，常温反应3-4h，TLC跟踪反应，反应完全后，将溶液倒入短硅胶柱中，用二氯甲烷和甲醇混合液冲洗，旋干，柱层析分离，得到白色固体为第六化合物。
第五化合物为20-孕烯醇酮肟，结构式如下：
Figure GDA0004065488660000041
第六化合物为20-孕烯醇酮胺，结构式如下：
Figure GDA0004065488660000042
优选的是，以第六化合物作为原料，与第三化合物或第四化合物发生分子间脱水缩合反应。具体包括：取第六化合物20-孕烯醇酮胺，溶于二氯甲烷中，加入第三化合物或第四化合物，再加入三乙胺。TLC跟踪反应，常温反应3-4h，减压旋干，乙酸乙酯萃取3次，水洗2次，饱和食盐水洗涤1次，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析分离，分别得到白色固体为第七化合物或第八化合物。
第七化合物为N’-20孕烯醇酮胺基-N-(氧代三苯甲基)-己二酰胺，结构式如下：
Figure GDA0004065488660000043
第八化合物为N’-20孕烯醇酮胺基-N-(氧代三苯甲基)-辛二酰胺，结构式如下：
Figure GDA0004065488660000051
优选的是，以第七化合物或第八化合物作为原料，用三氟乙酸分别对其进行脱保护的反应。具体包括：取第七化合物或第八化合物，溶于L二氯甲烷中，加入三氟乙酸，20-25℃常温搅拌2h。TLC跟踪反应，常温反应3-4h，减压旋干，乙酸乙酯萃取3次，水洗2次，饱和食盐水洗涤1次，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析分离，得到淡红色粘稠状物为第九化合物或第十化合物。
第九化合物为N’-20孕烯醇酮胺基-N-(羟基)-己二酰胺，结构如下：
Figure GDA0004065488660000052
第十化合物为N’-20孕烯醇酮胺基-N-(羟基)-辛二酰胺，结构如下：
Figure GDA0004065488660000053
上述20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物作为制备抗肿瘤药物的应用。
特别的，上述20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物作为制备抗乳腺癌或卵巢癌药物的应用。
制备上述20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物的反应路线如下：
Figure GDA0004065488660000061
本发明至少能达到以下有益效果：
本发明的缀合物通过缩合反应将甾醇胺片段与具有活性的异羟肟酸基团片段杂交成为缀合物，化合物中疏水长链连接基团通过填充通道，能有效地将右侧的酰羟胺基团呈现到活性位点，而连接体另一端的则与通道边缘的氨基酸残基接触，利用甾体良好的膜渗透性和酰羟胺的活性位点，从而达到抑制肿瘤细胞增殖的效果。
本发明的20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物的制备方法，步骤简洁，易操作，方便投产，且产率高。
通过体外抗肿瘤增殖活性试验表明，本发明对人乳腺癌细胞和人卵巢癌细胞和具有显著的抑制作用。因此，本发明20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物可用于制备治疗肿瘤的药物，该药物可以制成注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、悬浮剂或乳剂的形式使用，其给药途径可为口服，或经皮下、静脉或肌肉注射。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1
步骤1:制备第一化合物6-氧基-((三苯氧基)氨基)己酸甲酯
将己二酸单乙酯(416mg，2.40mmol)溶于15mL四氢呋喃中，溶解完全之后加入N-甲基吗啉(289μL，2.63mol)，混合搅拌后将反应容器置于冰水中冷却5分钟，冷却过后加入氯甲酸异丁酯(341μL，2.63mmol)后产生白色沉淀，搅拌5分钟，最后加入氧代三苯甲基羟胺(658mg，2.39mmol)，常温下反应12小时，反应结束后过滤，用乙酸乙酯冲洗滤渣，将有机相减压蒸馏，硅胶柱层析(VPE:VEA＝4:1)得到白色固体产物898mg,m.p.:130-131℃；产率：93.2％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ:7.73(s,1H),7.27-7.60(m,15H),4.10(q,J＝7.1Hz,2H,7-CH2),2.08-2.27(m,2H,6-CH2),1.61(s,2H),1.28-1.48(m,4H),1.24(t,J＝7.2Hz,3H,8-CH3).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ:176.76,173.47,141.05,129.06,128.19,98.84,60.26,34.00,30.85,24.40,22.95,14.26.
制备第二化合物8-氧基-((三氧基)氨基)辛酸甲酯
将辛二酸单甲酯(500mg，2.39mmol)20mL四氢呋喃中，溶解完全之后加入N-甲基吗啉(289μL，2.63mmol)，混合搅拌后将反应容器置于冰水中冷却5分钟，冷却过后加入氯甲酸异丁酯(341μL，2.63mmol)后产生白色沉淀，使之搅拌5分钟，最后加入氧代三苯甲基羟胺(658mg，2.39mmol)，反应搅拌过夜，反应结束后滤去沉淀，用乙酸乙酯冲洗滤渣，将有机相减压蒸馏，硅胶柱层析(VPE:VEA＝4:1)得到淡黄色片状固体产物922mg,m.p.:132-135℃；产率：92.5％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:7.18-7.59(m,15H),5.79(s,1H,-NH),3.61(s,3H,-COCH3),2.26(d,J＝5.3Hz,2H),1.80-1.84(m,2H),1.45(d,J＝5.6Hz,2H),1.18-1.37(m,4H),0.97-1.02(m,2H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ:173.80(-C＝O),170.77(-C＝O-NH-),142.96,129.44,127.97,127.86,92.17(O-C-3Ph),51.64(-OCH3),33.67,32.41,28.57,28.43,25.05,24.70.
步骤2:制备第三化合物6-氧基-((三苯氧基)氨基)己酸和第四化合物8-氧基-((三氧基)氨基)辛酸
制备第三化合物6-氧基-((三苯氧基)氨基)己酸：
将第一化合物(890mg，2.21mmol)溶于9mL四氢呋喃，超声震荡溶解至全部溶解，再加入0.5M氢氧化锂溶液(16mL)，混合搅拌过夜。
薄层色谱法(TLC)跟踪反应，确认反应结束后，将烧瓶中的四氢呋喃减压蒸馏除去。粗产物(乙酸乙酯)萃取，分液，水层用稀盐酸酸化，大量白色沉淀析出，再次萃取，直至水层滴加盐酸溶液不再析出白色沉淀，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，硅胶柱层析(VDCM:VMeOH＝49:1)得到白色固体产物706mg,m.p.:135-136℃；产率：84％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ:7.27-7.52(m,15H),2.16(m,2H),1.60(t,J＝6.5Hz,2H),1.21-1.37(m,4H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ:178.62,177.35,141.02,129.09,128.19,127.95,93.54,33.57,30.72,24.09,22.79.
制备第四化合物8-氧基-((三氧基)氨基)辛酸：
合成步骤与实验后处理方式与第三化合物的合成相似，区别在于：将第一化合物替换为第二化合物。硅胶柱层析(VDCM:VMeOH＝45:1)，得到白色固体产物803mg，m.p.:134-135.7℃；产率：90.2％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ:10.23(s,1H,-COOH),7.26-7.53(m,15H),2.28(t,J＝7.4Hz,2H),1.82(t,J＝7.1Hz,2H),1.44-1.48(m,2H),1.13-1.24(m,4H),0.97-1.02(m,2H).13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ:173.83(-C＝O),170.80(-CO-NH),142.94,129.42,127.98,127.87,92.18(O-C-3Ph),51.64,33.67,32.40,28.56,28.42,25.05,24.69.
步骤3.制备第五化合物20-孕烯醇酮肟和第六化合物20-孕烯醇酮胺
制备第五化合物20-孕烯醇酮肟：
在250mL的茄形烧瓶中加入孕烯醇酮(1.4g，4.56mmol)溶于无水乙醇中，完全溶解后，加入2g三水乙酸钠，在升温的过程中乙酸钠逐渐溶解，溶解完全后，加入1g盐酸羟胺，溶液迅速变得混浊，反应混合溶液回流搅拌过夜。
薄层色谱法(TLC)跟踪反应，确认反应结束后(孕烯醇酮反应完全)。减压蒸馏除掉大部分乙醇，乙酸乙酯萃取三次，每次20mL，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏得到白色固体产物1.378g，产率：91.2％，m.p.:214～216℃。
1HNMR(600MHz,CDCl3)δ:8.67(1H,br s,N-OH),5.37(1H,d,J＝4.8Hz,6-CH),4.57-4.62(1H,m,3-CH),2.03(3H,s,3-CH3CO),1.89(3H,s,21-CH3),1.01(3H,s,19-CH3),0.64(3H,s,18-CH3).13CNMR(150MHz,CDCl3)δ:170.78(3-C＝O),158.95(20-C＝N-OH),139.82(6-C),122.57(5-C),74.07(3-C),56.88,56.21,50.19,43.94,38.75,38.23,37.14,36.76,32.15,31.88,27.88,24.34,23.25,21.13,19.48,15.33,13.27.
制备第六化合物20-孕烯醇酮胺：
在茄形烧瓶中，把第五化合物化合物(957mg，2.89mmol)溶解无水乙醇里，溶解完全后依次加入1.398g NaHSO4·H2O，0.849g NaBH3CN，0.923g MoCl5，反应混合溶液在常温下搅拌过夜。
薄层色谱法(TLC)跟踪反应，确认反应结束后(第五化合物化合物反应完全)。减压蒸馏除去大部分溶剂。硅胶柱层析(流动相(VDCM:VMeOH＝10:1))，得到白色固体产物817mg，产率为89.1％，m.p.:189～192℃。
1HNMR(600MHz,CDCl3)δ:5.35(1H,d,J＝4.8Hz,6-CH),4.58-4.68(1H,m,3-CH),3.50-3.58(1H,m,20-CH),2.03(3H,s,3-CH3CO),1.02(3H,s,19-CH3),0.70(3H,s,18-CH3).13CNMR(150MHz,CDCl3)δ:170.53(3-C＝O),139.68(6-C),122.44(5-C),73.92(3-C),57.91,57.68,56.30,49.87,42.08,39.64,38.08,36.98,36.58,31.72,27.74,26.62,24.21,21.42,22.63,20.91,19.30,12.30.
实施例2
第七化合物：N’-20孕烯醇酮胺基-N-(氧代三苯甲基)-己二酰胺的合成
在Ar保护下，把第六化合物(317mg,1mmol)溶于超干二氯甲烷中，然后加入第三化合物(454.8mg,1.2mmol)，溶解完全后，依次投入PyBop(624mg,1.2mmol)与DMAP(24mg,0.2mmol)，然后加入250μL TEA，反应混合溶液在35℃下搅拌。
薄层色谱法(TLC)跟踪反应，确认反应结束后。减压蒸馏除去二氯甲烷，加入饱和15mLNaHCO3溶液，乙酸乙酯萃取三次，每次20mL。合并有机层，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。硅胶柱层析(VPE:VEA＝8:1)得到白色固体产物337mg，产率为48％，m.p.:189-190℃。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ:7.87(s,1H),7.21-7.40(m,15H),5.25(d,J＝5.4Hz,1H),4.04(q,J＝7.1Hz,1H),3.86(d,J＝14.0Hz,1H),3.39-3.45(m,1H,3-CH),1.95(s,3H),0.91(s,3H),0.61(s,3H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ:171.13,171.08,147.02,140.93,129.08,128.08,127.96,127.84,127.79,127.15,121.34,114.04,93.48,71.65,60.34,56.30,56.25,50.19,46.91,42.28,42.26,39.44,37.32,36.52,31.85,31.84,31.63,29.65,26.80,24.04,21.41,21.03,20.96,19.37,14.17,12.29.HREIMS calcd for C46H58N2O4Na[M+H]+725.4289,found 725.4293.
经NMR和HREIMS分析确定产物结构为N’-20孕烯醇酮胺基-N-(氧代三苯甲基)-己二酰胺。
实施例3
第八化合物：N’-20孕烯醇酮胺基-N-(氧代三苯甲基)-辛二酰胺的合成
合成步骤与实验后处理方式与实施例2的第七化合物的合成相同，不同的只是将第三化合物替换为第四化合物。硅胶柱层析(VDCM:VMeOH＝15:1)，纯化后得到白色固体产物328mg，产率为62.5％，m.p.:192～195℃。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:7.87(s,1H,-C＝O-NH),7.39(m,15H),5.33(d,J＝2.8Hz,1H,6-CH),3.92-3.96(m,1H,20-CH),3.41-3.55(m,1H,3-CH),1.25(d,J＝1.9Hz,3H,21-CH3),0.99(s,3H,19-CH3),0.70(s,3H,18-CH3).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ:171.46(-C＝O),171.18(-C＝O),141.08,140.93(5-C),129.04,128.11,121.33(6-C),71.60(3-C),93.38(O-C-3Ph),60.40,56.29,50.12,46.90,42.24,39.47,37.29,36.50,31.84,31.78,31.58,26.83,24.05,21.55,21.04,21.00,19.40,14.19,12.30.HREIMS calcd for C48H62N2O4Na[M+Na]+753.4602,found 753.4615.
经NMR和HREIMS分析确定产物结构为N’-20孕烯醇酮胺基-N-(氧代三苯甲基)-辛二酰胺。
实施例4
第九化合物：N’-20孕烯醇酮胺基-N-(羟基)-己二酰胺的合成
在Ar保护下，双口茄形烧瓶中加入原料第七化合物(200mg，0.285mmol)溶于干燥的二氯甲烷中，冰浴冷却。交替滴加三氟乙酸和三乙基硅烷，溶液变黄，继续滴加直到黄色消失。将混合溶液旋转蒸发得到针状晶体为粗产物。硅胶柱层析，得到淡红色油状粘稠物97mg，产率：73.2％。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ:5.34(s,1H),3.90(s,1H),3.36(t,J＝18.2Hz,2H),1.02(d,J＝6.2Hz,6H),0.69(s,3H).13C NMR(100MHz,MeOD)δ:171.05(-C＝O),169.99(-C＝O),139.27(5-C),119.39,69.48,55.12,54.54,54.21,53.59,48.71,48.63,45.97,44.92,40.39,40.03,37.45,37.37,35.58,34.70,33.97,30.34,30.22,30.14,30.04,29.30,27.81,24.94,23.56,23.35,23.28,22.19,19.09,18.61,17.02,9.97.HREIMS calcd forC27H45N2O4[M+H]+461.3374,found461.3375.
经NMR和HREIMS分析确定产物结构为N’-20孕烯醇酮胺基-N-(羟基)-己二酰胺。
实施例5
第十化合物：N’-20孕烯醇酮胺基-N-(羟基)-辛二酰胺的合成
合成步骤与实验后处理方式与实施例4的第九化合物的合成相似，区别在于将第七化合物替换为第八化合物，硅胶柱层析，得到白色固体55mg，产率86.6％，m.p.:212～215℃。
1HNMR(400MHz,MeOD)δ:5.34(d,J＝3.2Hz,1H,6-CH),3.84-3.92(m,1H,20-CH),3.34-3.43(m,1H,3-CH),1.28(s,3H,21-CH3),1.03(s,3H,19-CH3),0.76(s,3H,18-CH3).13CNMR(100MHz,MeOD)δ:172.96,171.64,140.90,120.96,71.04,56.79,56.20,55.89,55.22,42.00,41.63,37.17,36.30,35.91,32.27,31.82,30.91,29.37,29.08,28.66,26.54,25.61,25.33,24.87,23.75,22.35,20.37,18.50,13.07,11.42,11.11.HREIMScalcd for C29H48N2O4Na[M+Na]+511.5306,found 511.3513.
经NMR和HREIMS分析确定产物结构为N’-20孕烯醇酮胺基-N-(羟基)-辛二酰胺。
对比试验
<对比例1>N’-20孕烯醇酮胺基-N-(氧代三苯甲基)-己二酰胺(实施例2中的第七化合物)
<对比例2>3N’-20孕烯醇酮胺基-N-(氧代三苯甲基)-辛二酰胺(实施例3中的第八化合物)
<对比例3>市售药物伏立诺他
采用MTT方法，测试体外抗肿瘤活性，测定IC50(半数抑制浓度)值。将细胞以约(3～4)×104/ml的密度置于96孔板中，每孔200μL，放在5％CO2培养箱中培养24h，按照浓度梯度加入需测的样品(分别加入本发明实施例4和5的酯基链接的3-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类化合物作为试验组，加入实施例2第七化合物作为对比例1对照组，加入实施例3中的第八化合物作为对比例2对照组，加入市售药物伏立诺他作为对比例3对照组)。将接种后的96孔板移至37℃二氧化碳培养箱中培养72h，然后每孔依次加入20μL的MTT(5mg/mL)，继续孵育3小时。吸取上清液，加入200μL的DMSO，将其置于摇床上约10min充分混匀，最后用酶标仪在波长为490nm处测定出OD值。计算各组细胞的抑制率：抑制率＝[(对照组OD-空白组OD)-(给药OD-空白组OD)]/(对照OD-空白OD)×100％(使用Graphpad Prism 8软件计算其半数存活浓度IC50值并分析统计)。IC50值见表1所示。
表1：20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物的体外抗肿瘤增殖活性(IC50,μmol/L)
样品 T47d SKOV3 HeLa 293T
实验例4 12.53±1.10 36.36±1.56 23.06±1.36 47.74±1.679
实验例5 4.147±1.25 5.938±0.774 5.76±1.47 ＞70
对比例1 18.67±1.271 21.75±1.34 10.88±1.04 70.11±1.85
对比例2 51.29±1.71 28.89±1.46 64.22±0.85 ＞70
对比例3 60.27±1.78 4.531±0.59 3.75±0.57 ＞70
数据分析
通过体外抗肿瘤增殖活性试验表明，本发明的20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物对人乳腺癌细胞(T47d)和人卵巢癌细胞(SKOV3)具有显著的抑制作用。
实施例5对T47d、SKOV3、HeLa几种肿瘤细胞的抑制效果均优于实施例4，说明随着酰胺键中链接的烷基支链增长，其抑制T47d、SKOV3、HeLa肿瘤细胞的活性明显增强。并且链端基团的链长增长，其对正常细胞的毒性减弱。实施例4、5对T47d肿瘤细胞的抑制活性均优于对比例3。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用。它完全可以被适用于各种适合本发明的领域。对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改。

Claims (7)

1.酰胺键链接的20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物，其特征在于，其化学结构式如下：
式一：
Figure FDA0004065488650000011
或
式二：
Figure FDA0004065488650000012
或
式三：
Figure FDA0004065488650000013
或
式四：
Figure FDA0004065488650000014
2.酰胺键链接的20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物的制备方法，其特征在于，包括：
步骤一、以己二酸单甲酯或辛二酸单甲酯为原料，在氯甲酸异丁酯和N-甲基吗啉的活化下，与氧代三苯甲基羟胺进行反应，得到第一化合物或第二化合物；
步骤二、第一化合物或第二化合物在以四氢呋喃作为溶剂，氢氧化锂水溶液作为碱的环境中进行碱性水解，得到第三化合物或第四化合物；
步骤三、再以孕烯醇酮为原料，溶于无水乙醇中，与乙酸钠和盐酸羟胺发生20-位羰基肟化反应得到第五化合物；将第五化合物溶于甲醇中，与一水合硫酸氢钠、氰基硼氢化钠和氯化钼发生肟基胺化反应得到第六化合物；
步骤四、将第六化合物溶于二氯甲烷，分别与第三化合物或第四化合物进行分子杂交反应，得到第七化合物或第八化合物即为中间产物；或再分别对第七化合物或第八化合物，用三氟乙酸进行脱三苯甲基保护反应得到第九化合物或第十化合物即为目的产物；
其中，第一化合物为6-氧基-((三苯氧基)氨基)己酸甲酯，结构如下：
Figure FDA0004065488650000021
第二化合物为8-氧基-((三氧基)氨基)辛酸甲酯，结构如下：
Figure FDA0004065488650000022
第三化合物为6-氧基-((三苯氧基)氨基)己酸，结构式如下：
Figure FDA0004065488650000023
第四化合物为8-氧基-((三氧基)氨基)辛酸，结构式如下：
Figure FDA0004065488650000024
第五化合物为20-孕烯醇酮肟，结构式如下：
Figure FDA0004065488650000025
第六化合物为20-孕烯醇酮胺，结构式如下：
Figure FDA0004065488650000031
第七化合物为N’-20孕烯醇酮胺基-N-(氧代三苯甲基)-己二酰胺，结构式如下：
Figure FDA0004065488650000032
第八化合物为N’-20孕烯醇酮胺基-N-(氧代三苯甲基)-辛二酰胺，结构式如下：
Figure FDA0004065488650000033
第九化合物为N’-20孕烯醇酮胺基-N-(羟基)-己二酰胺，结构如下：
Figure FDA0004065488650000034
第十化合物为N’-20孕烯醇酮胺基-N-(羟基)-辛二酰胺，结构如下：
Figure FDA0004065488650000035
3.如权利要求2所述的酰胺键链接的20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物的制备方法，其特征在于，所述步骤一具体为：取己二酸单甲酯或辛二酸单甲酯溶于无水四氢呋喃中，加入N-甲基吗啉，再加入氯甲酸异丁酯，冷却至0℃，加入氧代三苯甲基羟胺，20-25℃常温搅拌6-12小时，薄层色谱监测反应终点，待反应完成后，减压旋蒸，旋干溶剂后，乙酸乙酯萃取3次，水洗3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸，柱层析分析纯化，得到白色固体为第一化合物或第二化合物。
4.如权利要求3所述的酰胺键链接的20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物的制备方法，其特征在于，所述步骤二具体包括：
取第一化合物或第二化合物，加入无水四氢呋喃作为溶剂，再加入氢氧化锂水溶液，反应6-12小时，薄层色谱监测反应终点，待反应完成后，减压旋蒸，旋干溶剂后，乙酸乙酯萃取3次，水洗3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸，柱层析分析纯化，得到白色固体为第三化合物、第四化合物。
5.如权利要求4所述的酰胺键链接的20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物的制备方法，其特征在于，所述步骤四具体包括：
取第六化合物20-孕烯醇酮胺，溶于二氯甲烷中，加入第三化合物或第四化合物，再加入三乙胺，TLC跟踪反应，20-25℃常温反应3-4h，减压旋干，乙酸乙酯萃取3次，水洗2次，饱和食盐水洗涤1次，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析分离，分别得到白色固体为第七化合物或第八化合物。
6.如权利要求5所述的酰胺键链接的20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物的制备方法，其特征在于，取第七化合物或第八化合物，溶于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，20-25℃常温搅拌2h，TLC跟踪反应，20-25℃常温反应3-4h，减压旋干，乙酸乙酯萃取3次，水洗2次，饱和食盐水洗涤1次，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析分离，分别得到淡红色粘稠状物为第九化合物或第十化合物。
7.如权利要求1所述的或权利要求2～6所述制备方法制得的酰胺键链接的20-酰胺-(异羟肟酸)-孕烯醇酮类缀合物作为制备抗乳腺癌或卵巢癌药物的应用。
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