CN114807109B - 一种基于有机物梯级转化人粪便pplc的高效堆肥菌剂及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
一种基于有机物梯级转化人粪便PPLC的高效堆肥菌剂及其制备方法与应用，属于粪便堆肥处理技术领域。为解决现有菌剂处理人粪便速度慢、氮素损失大等问题，本发明将由高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母和解淀粉芽胞杆菌组成的混合微生物菌液与固定化载体混合制得了一种可以应用于旱厕中人粪便的处理，梯级转化其主要成分蛋白质、可溶性多糖、油脂和纤维素等主要成分的高效堆肥菌剂。将本发明获得的高效堆肥菌剂用于人粪便降解可降低粪便中的COD、氨氮含量，并减少人粪便堆肥过程中氮素的损失，可以快速达到堆肥的升温阶段，加快粪污堆肥过程，减少腐熟时间，实现人粪便的资源化处理。
Description
技术领域
本发明涉及一种基于有机物梯级转化人粪便PPLC的高效堆肥菌剂及其制备方法与应用，属于粪便堆肥处理技术领域。
背景技术
在我国大部分农村地区，旱厕仍然被广泛使用，而厕所内部的粪便经常在坑内堆积，未能及时处理，造成一系列的环境污染问题。因此，人粪便的快速资源化处理技术的研发变的越发重要。
人粪便主要为粪便和尿液，粪便的主要成分为蛋白质、多糖、纤维素、油脂，因此菌剂可以针对以上几种有机大分子目标物质进行筛选。
目前国内已经有许多人专注粪便堆肥菌剂的研发，但是这些菌剂因为过于复杂、成本高等问题，无法推广使用。而堆肥处理粪便污泥时间较长，且造成一定的氮素损失。因此，急需研发加快粪便堆肥速度、减少氮素损失的菌剂。
发明内容
为了解决现有菌剂处理人粪便速度慢、氮素损失大、组成复杂和成本高等问题，本发明提供了一种基于有机物梯级转化人粪便PPLC的高效堆肥菌剂，所述高效堆肥菌剂包含混合微生物菌液和固定化载体，所述混合微生物菌液的组成为：高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌。
进一步地限定，所述混合微生物菌液中高地芽胞杆菌的浓度为4×108-1.5×109CFU/mL，耐盐芽胞杆菌的浓度为3×108-7×108CFU/mL，甲基营养型芽胞杆菌的浓度为6×108-10×108CFU/mL，褐球固氮菌的浓度为3×108-7×108CFU/mL，蜡样芽孢杆菌的浓度为2×108-4×108CFU/mL，产朊假丝酵母的浓度为2×108-1.2×109CFU/mL，解淀粉芽胞杆菌的浓度为5×108-9×108CFU/mL。
进一步地限定，所述固定化载体以海藻酸钠和聚乙烯醇作为包埋剂，以改性玉米芯粉作为碳源。
本发明还提供了上述高效堆肥菌剂的制备方法，包括以下步骤：
S1、混合微生物菌液的制备：根据菌种比例，分别取高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌进行混合培养，得到混合微生物菌液；
S2、菌悬液的制备：将S1获得的混合微生物菌液进行离心，得到浓缩菌体，经无菌水稀释后，得到菌悬液；
S3、固定化颗粒的制备：将S2获得的菌悬液与固定化载体按照比例混合，加入到氯化钙溶液中，混匀，得到的固体化颗粒即为高效堆肥菌剂。
进一步地限定，S1所述混合微生物菌液的制备方法具体如下：
(1)菌种的斜面培养：将保种管中的高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌分别进行斜面活化，并接种于培养皿中进行纯化操作，分别得到高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌纯化菌种，备用；
(2)菌种液体培养：将步骤(1)得到的高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌纯化菌种分别接种于液体培养基培养，得到各菌种菌液，备用；
(3)一级种子培养：将步骤(2)得到的高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌菌液，以1:2:1:1:1:2:2的体积比接种到液体培养基中培养，得到混合菌液的一级种子；
(4)二级种子培养：将步骤(3)所得到的一级种子接种于已灭菌的液体发酵培养基中，摇床培养3-5天；
(5)成品种子培养：将步骤(4)得到的二级种子接种于液体发酵培养基中，摇床培养，得到所需混合微生物菌液的成品种子。
进一步地限定，S3所述固定化载体的制备方法为：将20g/L海藻酸钠、40g/L改性玉米芯粉和100g/L聚乙烯醇混合，固定化4h。
进一步地限定，所述改性玉米芯粉的制备方法为：将玉米芯粉与7％的NaOH溶液按照1g：7mL的固液比混合，90-95℃水浴加热，搅拌，再用蒸馏水冲洗、浸泡，重复三次，烘干，得到改性玉米芯粉。
本发明还提供了上述高效堆肥菌剂在梯级转化人粪便PPLC中的应用，该应用是将所述高效堆肥菌剂加入到粪便堆肥体系中，均匀搅拌，定期给氧翻抛。
进一步地限定，所述高效堆肥菌剂的接种量为10-20％。
本发明的有益效果：
本发明提供了一种基于有机物梯级转化人粪便PPLC的高效堆肥菌剂，该菌剂由微生物菌液和固定化载体制备获得，微生物菌液中的高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母和解淀粉芽胞杆菌之间可以很好的进行协同作用，快速梯级降解人排泄废物中的蛋白质、纤维素、多糖和油脂，加快堆肥的速度，同时减少氮素的损失，节约人工、能源和成本。根据实施例的记载，添加本发明所述的高效堆肥菌剂后，堆肥的升温时间缩短5天，并且COD去除率达到了82.61％，总氮保留率达到81.39％。
附图说明
图1为蛋白质降解效果比较结果图；
图2为多糖降解效果比较结果图；
图3为纤维素降解效果比较结果图；
图4为油脂降解效果比较结果图；
图5为COD去除率效果比较结果图；
图6为总氮损失率效果比较结果图。
具体实施方式
以下结合具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，实施本发明的过程、条件、实验方法及试剂等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和市场常规产品，本发明没有特别限制内容。
本发明使用的高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌均采购于中国工业微生物菌种保藏中心，保藏编号分别为CICC 10440、CICC 24340、CICC 20839、CICC 21686、CICC 24945、CICC1768、CICC 10063。
实施例1：高效堆肥菌剂的制备方法
步骤一、混合微生物菌液的制备
(1)菌种的斜面培养
将保种管中的高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌分别进行斜面活化，随后接种于培养皿中进行纯化操作，分别得到高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌纯种，备用。
步骤(1)中，高地芽胞杆菌在斜面活化的步骤为：高地芽胞杆菌通过接种环接种于灭菌的斜面培养基I上，于30℃培养1天。
步骤(1)中，耐盐芽胞杆菌在斜面活化的步骤为：耐盐芽胞杆菌通过接种环接种于灭菌的斜面培养基Ⅰ上，25℃培养1天。
步骤(1)中，甲基营养型芽胞杆菌在斜面活化的步骤为：甲基营养型芽胞杆菌通过接种环接种于灭菌的斜面培养基Ⅰ上，27℃培养2天。
步骤(1)中，褐球固氮菌杆菌在斜面活化的步骤为：褐球固氮菌杆菌通过接种环接种于灭菌的斜面培养基Ⅱ上，30℃培养2天。
步骤(1)中，蜡样芽孢杆菌在斜面活化的步骤为：蜡样芽孢杆菌通过接种环接种于灭菌的斜面培养基Ⅰ上，25℃培养1天。
步骤(1)中，产朊假丝酵母在斜面活化的步骤为：产朊假丝酵母通过接种环接种于灭菌的斜面培养基Ⅲ上，26℃培养2天。
步骤(1)中，解淀粉芽胞杆菌在斜面活化的步骤为：解淀粉芽胞杆菌通过接种环接种于灭菌的斜面培养基Ⅰ上，28℃培养1天。
步骤(1)中各培养基组成如下：培养基Ⅰ的组成为牛肉浸粉5g，蛋白胨10g，氯化钠5L，琼脂15-20g，水1L，pH 7.0。
培养基Ⅱ的组成为马铃薯提取液1.0L，葡萄糖20g，琼脂15-20g。
培养基Ⅲ的组成为蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.0。
(2)菌种液体培养
将步骤(1)得到的高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌纯化菌株分别接种于步骤(1)中对应的已灭菌的液体培养基，培养3天，得到各菌株的菌液。
步骤(2)中各培养基组成如下：
培养基Ⅰ的组成为牛肉浸粉5g，蛋白胨10g，氯化钠5L，水1L，pH 7.0。
培养基Ⅱ的组成为马铃薯提取液1.0L，葡萄糖20g。
培养基Ⅲ的组成为蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g，蒸馏水1.0L，pH 7.0。
(3)一级种子培养
将步骤(2)得到的高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌菌液，以1:2:1:1:1:2:2体积比接种到培养基Ⅰ中培养，得到混合菌剂的一级种子。培养基Ⅰ的组成为牛肉浸粉5g，蛋白胨10g，氯化钠5L，水1L，pH 7.0。
(4)二级种子培养
将步骤(3)所得到的一级种子接种于已灭菌的液体发酵培养基Ⅰ中，摇床培养3天。培养基Ⅰ的组成为牛肉浸粉5g，蛋白胨10g，氯化钠5L，水1L，pH 7.0。
(5)成品种子培养
将步骤(4)得到的二级种子接种于液体发酵培养基Ⅰ中，摇床培养，得到所需混合菌液的成品种子。培养基Ⅰ的组成为牛肉浸粉5g，蛋白胨10g，氯化钠5L，水1L，pH7.0。
步骤二、菌悬液的制备
将步骤一获得的成品种子进行离心，得到浓缩菌体，经无菌水稀释后，得到菌悬液。
所述菌悬液中各菌种的浓度如下：高地芽胞杆菌的浓度为4×108CFU/mL，耐盐芽胞杆菌的浓度为3×108CFU/mL，甲基营养型芽胞杆菌的浓度为6×108CFU/mL，褐球固氮菌的浓度为3×108CFU/mL，蜡样芽孢杆菌的浓度为2×108CFU/mL，产朊假丝酵母的浓度为2×108CFU/mL，解淀粉芽胞杆菌的浓度为5×108CFU/mL。
步骤三、菌种固定化颗粒的制备
将步骤二得到的菌悬液与固定化载体按照比例混合，加入到氯化钙溶液中，混匀，得到的固体化颗粒即为高效堆肥菌剂。
固定化载体选用的包埋剂为海藻酸钠和聚乙烯醇，碳源为改性玉米芯粉。固定化载体制备条件为：海藻酸钠20g/L，改性玉米芯粉40g/L，聚乙烯醇100g/L，固定化时间4h。
改性玉米芯粉的制备方法为：玉米芯粉与7％的NaOH溶液按照固液比1：7(g:mL)混合，90℃水浴加热，搅拌；处理后，用蒸馏水冲洗、浸泡，重复三次，烘干，得到改性玉米芯粉。
实施例2：高效堆肥菌剂的制备方法
步骤一、混合微生物菌液的制备
(1)菌种的斜面培养
将保种管中的高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌分别进行斜面活化，随后接种于培养皿中进行纯化操作，分别得到高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌纯种，备用。
步骤(1)中，高地芽胞杆菌在斜面活化的步骤为：高地芽胞杆菌通过接种环接种于灭菌的斜面培养基I上，于30℃培养2天。
步骤(1)中，耐盐芽胞杆菌在斜面活化的步骤为：耐盐芽胞杆菌通过接种环接种于灭菌的斜面培养基Ⅰ上，30℃培养3天。
步骤(1)中，甲基营养型芽胞杆菌在斜面活化的步骤为：甲基营养型芽胞杆菌通过接种环接种于灭菌的斜面培养基Ⅰ上，30℃培养3天。
步骤(1)中，褐球固氮菌杆菌在斜面活化的步骤为：褐球固氮菌杆菌通过接种环接种于灭菌的斜面培养基Ⅱ上，33℃培养3天。
步骤(1)中，蜡样芽孢杆菌在斜面活化的步骤为：蜡样芽孢杆菌通过接种环接种于灭菌的斜面培养基Ⅰ上，30℃培养2天。
步骤(1)中，产朊假丝酵母在斜面活化的步骤为：产朊假丝酵母通过接种环接种于灭菌的斜面培养基Ⅲ上，30℃培养4天。
步骤(1)中，解淀粉芽胞杆菌在斜面活化的步骤为：解淀粉芽胞杆菌通过接种环接种于灭菌的斜面培养基Ⅰ上，32℃培养3天。
步骤(1)中各培养基组成如下：培养基Ⅰ的组成为牛肉浸粉5g，蛋白胨10g，氯化钠5L，琼脂15-20g，水1L，pH 7.0。
培养基Ⅱ的组成为马铃薯提取液1.0L，葡萄糖20g，琼脂15-20g。
培养基Ⅲ的组成为蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.0。
(2)菌种液体培养
将步骤(1)得到的高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌纯化菌株分别接种于步骤(1)中对应的已灭菌的液体培养基，培养3天，得到各菌株的菌液。
步骤(2)中各培养基组成如下：
培养基Ⅰ的组成为牛肉浸粉5g，蛋白胨10g，氯化钠5L，水1L，pH 7.0。
培养基Ⅱ的组成为马铃薯提取液1.0L，葡萄糖20g。
培养基Ⅲ的组成为蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g，蒸馏水1.0L，pH 7.0。
(3)一级种子培养
将步骤(2)得到的高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌菌液，以1:2:1:1:1:2:2体积比接种到培养基Ⅰ中培养，得到混合菌剂的一级种子。培养基Ⅰ的组成为牛肉浸粉5g，蛋白胨10g，氯化钠5L，水1L，pH 7.0。
(4)二级种子培养
将步骤(3)所得到的一级种子接种于已灭菌的液体发酵培养基Ⅰ中，摇床培养3-5天。培养基Ⅰ的组成为牛肉浸粉5g，蛋白胨10g，氯化钠5L，水1L，pH 7.0。
(5)成品种子培养
将步骤(4)得到的二级种子接种于液体发酵培养基Ⅰ中，摇床培养，得到所需混合菌液的成品种子。培养基Ⅰ的组成为牛肉浸粉5g，蛋白胨10g，氯化钠5L，水1L，pH7.0。
步骤二、菌悬液的制备
将步骤一获得的成品种子进行离心，得到浓缩菌体，经无菌水稀释后，得到菌悬液。
所述菌悬液中各菌种的浓度如下：高地芽胞杆菌的浓度为1.5×109CFU/mL，耐盐芽胞杆菌的浓度为7×108CFU/mL，甲基营养型芽胞杆菌的浓度为10×108CFU/mL，褐球固氮菌的浓度为7×108CFU/mL，蜡样芽孢杆菌的浓度为4×108CFU/mL，产朊假丝酵母的浓度为1.2×109CFU/mL，解淀粉芽胞杆菌的浓度为9×108CFU/mL。
步骤三、菌种固定化颗粒的制备
将步骤二得到的菌悬液与固定化载体按照比例混合，加入到氯化钙溶液中，混匀，得到的固体化颗粒即为高效堆肥菌剂。
固定化载体选用的包埋剂为海藻酸钠和聚乙烯醇，碳源为改性玉米芯粉。固定化载体制备条件为：海藻酸钠20g/L，改性玉米芯粉40g/L，聚乙烯醇100g/L，固定化时间4h。
改性玉米芯粉的制备方法为：玉米芯粉与7％的NaOH溶液按照固液比1：7(g:mL)混合，90-95℃水浴加热，搅拌；处理后，用蒸馏水冲洗、浸泡，重复三次，烘干，得到改性玉米芯粉。
实施例3：利用高效堆肥菌剂进行人粪便堆肥处理的方法
将粪便装入发酵装置，与秸秆粉混合调节碳氮比，然后将本发明实施例2获得的高效堆肥菌剂以20％接种量接种于堆肥体系中，定期翻抛，给氧。
为了证实本发明所述高效堆肥菌剂进行人粪便堆肥处理的技术效果，将实施例3获得的效果与对照组(对照组未接种菌剂，采用同样的堆肥体系，在同样的时期定期翻抛，给氧)进行比较，堆肥结束后比较蛋白质降解效果(见图1)、多糖降解效果(见图2)、纤维素降解效果(见图3)、油脂降解效果(见图4)、COD去除率(见图5)和总氮损失率(见图6)。结果表明，本发明获得的高效堆肥菌剂与对照菌剂相比蛋白质、多糖、纤维素和油脂降解率及总氮去除率显著提高，且总氮损失率显著降低；堆肥的升温时间缩短5天，并且COD去除率达到了82.61％，总氮保留率达到81.39％。
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明精神和范围内，都可以做各种的改动与修饰，因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (6)
1.一种基于有机物梯级转化人粪便PPLC的高效堆肥菌剂，其特征在于，所述高效堆肥菌剂包含混合微生物菌液和固定化载体，所述混合微生物菌液的菌株组成为：高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌，上述菌株均购自于中国工业微生物菌种保藏中心，保藏编号分别为CICC10440、CICC 24340、CICC 20839、CICC 21686、CICC 24945、CICC 1768、CICC 10063；所述混合微生物菌液中高地芽胞杆菌的浓度为4×108-1.5×109CFU/mL，耐盐芽胞杆菌的浓度为3×108-7×108CFU/mL，甲基营养型芽胞杆菌的浓度为6×108-10×108CFU/mL，褐球固氮菌的浓度为3×108-7×108CFU/mL，蜡样芽孢杆菌的浓度为2×108-4×108CFU/mL，产朊假丝酵母的浓度为2×108-1.2×109CFU/mL，解淀粉芽胞杆菌的浓度为5×108-9×108CFU/mL；所述固定化载体以海藻酸钠和聚乙烯醇作为包埋剂，以改性玉米芯粉作为碳源。
2.权利要求1所述高效堆肥菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、混合微生物菌液的制备：将高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌的菌液按照1:2:1:1:1:2:2的体积比接种至液体培养基进行混合培养，得到一级种子液，再依次经过二级种子培养及成品种子培养得到混合微生物菌液；
S2、菌悬液的制备：将S1获得的混合微生物菌液进行离心，得到浓缩菌体，经无菌水稀释后，得到菌悬液；所述菌悬液中高地芽胞杆菌的浓度为4×108-1.5×109CFU/mL，耐盐芽胞杆菌的浓度为3×108-7×108CFU/mL，甲基营养型芽胞杆菌的浓度为6×108-10×108CFU/mL，褐球固氮菌的浓度为3×108-7×108CFU/mL，蜡样芽孢杆菌的浓度为2×108-4×108CFU/mL，产朊假丝酵母的浓度为2×108-1.2×109CFU/mL，解淀粉芽胞杆菌的浓度为5×108-9×108CFU/mL；
S3、固定化颗粒的制备：将S2获得的菌悬液与固定化载体按照比例混合，加入到氯化钙溶液中，混匀，得到的固体化颗粒即为高效堆肥菌剂；所述固定化载体的制备方法为：将20g/L海藻酸钠、40g/L改性玉米芯粉和100g/L聚乙烯醇混合，固定化4h。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，S1所述混合微生物菌液的制备方法具体如下：
(1)菌种的斜面培养：将保种管中的高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌分别进行斜面活化，并接种于培养皿中进行纯化操作，分别得到高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌纯化菌种，备用；
(2)菌种液体培养：将步骤(1)得到的高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌纯化菌种分别接种于液体培养基培养，得到各菌种菌液，备用；
(3)一级种子培养：将步骤(2)得到的高地芽胞杆菌、耐盐芽胞杆菌、甲基营养型芽胞杆菌、褐球固氮菌、蜡样芽孢杆菌、产朊假丝酵母、解淀粉芽胞杆菌菌液，以1:2:1:1:1:2:2的体积比接种到液体培养基中培养，得到混合菌液的一级种子；
(4)二级种子培养：将步骤(3)所得到的一级种子接种于已灭菌的液体发酵培养基中，摇床培养3-5天；
(5)成品种子培养：将步骤(4)得到的二级种子接种于液体发酵培养基中，摇床培养，得到所需混合微生物菌液的成品种子。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述改性玉米芯粉的制备方法为：将玉米芯粉与7％的NaOH溶液按照1g：7mL的固液比混合，90-95℃水浴加热，搅拌，再用蒸馏水冲洗、浸泡，重复三次，烘干，得到改性玉米芯粉。
5.权利要求1所述高效堆肥菌剂在利用人粪便进行堆肥中的应用，其特征在于，将所述高效堆肥菌剂加入到粪便堆肥体系中，均匀搅拌，定期给氧翻抛。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述高效堆肥菌剂的接种量为10-20％。
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