CN114794086A - 一种抗凝集的猪精液稀释粉及其应用 - Google Patents

一种抗凝集的猪精液稀释粉及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种抗凝集的猪精液稀释粉及其应用,包括:葡萄糖30.0~38.0份、柠檬酸2.0~3.5份、二水合柠檬酸三钠5.0~10.0份、EDTA 1.5~5.5份,三羟甲基氨基甲烷3.5~9.0份、碳酸氢钠0.5~5份、阿米卡星0.2~1份与悬浮剂组合物0.7~22份。本发明的稀释粉配方中加入了悬浮剂组合物,用以减缓保存过程中精子的沉淀速率,以及由于各种物理、化学等因素导致的精子凝集现象的产生。可以有效地减少由于精子凝集所引起的对精子的运动、代谢和受精能力的影响,减少对精子的损伤作用,提高精液质量,延长精液有效保存期。

Description

一种抗凝集的猪精液稀释粉及其应用
技术领域
本发明属于动物繁殖技术领域,涉及一种精液稀释粉,尤其涉及一种减少保存过程中精子的沉淀和凝集的抗凝集的猪精液稀释粉及其应用。
背景技术
猪人工授精技术是用人工器械采集公猪精液并对精液进行品质检查和稀释后,再用器械将精液注入发情母猪生殖道内,以代替公猪自然交配的一种配种方法。20世纪80年代在世界范围内迅速普及,目前在使用比较广的欧洲和北美等地区,普及率已超过80%,是进行科学养猪、实现养猪生产现代化的重要手段,它有如下优点:(1)节省公猪,并减少每头公猪的使用次数,克服时间和区域差异,可以方便地适时配种;(2)节省人力、物力、财力,提高经济效益,减少疾病的传播;(3)提高配种率,由于可以利用显微镜、密度仪等仪器对精子质量进行监控,有效提高了配种受胎率,并可及时调整精子质量较差的公猪;(4)增加遗传性能优良的公猪的利用率,扩大良种覆盖率,有利于品种改良和联合育种。在开展猪的人工授精工作中,必须配制公猪精液的稀释液,以便稀释保存。
申请号201310478237.6公开了一种猪精液稀释剂,申请号201010133910.9公开了一种猪精液常温保存稀释剂及其制备和稀释方法,保存精液时间均只有3天;申请号201410164618.1的猪抗病毒精液稀释液,保存精液时间只有4天。
申请号为201410527131.5的发明公开了一种猪抗病毒长效精液稀释液配方及制备方法,保存精液的时间为5-7天,其缺陷是在制备时配方中的聚乙烯乙醇需要在加热电磁搅拌器上溶解于150mL 30-50℃的蒸馏水中,搅拌20-40分钟,制备麻烦。
精子凝集是精液处理过程中较为常见的一种现象,其产生的原因主要来自于物理、化学和免疫方面的作用。轻微的凝集可使得部分精子发生交联,限制精子的运动,严重的凝集则促使大量精子发生膜融合并呈片状、条状、团块状,且单个精子结构丧失。
现有的保存液或稀释液难以解决精子凝集的现象。
发明内容
为了解决上述缺陷与问题,本发明提供了一种抗凝集的猪精液稀释粉及其应用,减少保存过程中精子的沉淀和凝集,减少人工翻动精液次数,精液保存时间长、保存效果好,成本低,使用方便。
为了实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
一种抗凝集的猪精液稀释粉,按重量份数计包括:葡萄糖30.0~38.0份、柠檬酸2.0~3.5份、二水合柠檬酸三钠5.0~10.0份、EDTA 1.5~5.5份,三羟甲基氨基甲烷3.5~9.0份、碳酸氢钠0.5~5份、阿米卡星0.2~1份与悬浮剂组合物0.7~22份。
作为本发明的一种优选方案,所述悬浮剂组合物为卡波姆0.1~10份、海藻酸钠0.4~8份与羧甲基纤维素钠0.2~4份。
作为本发明的一种优选方案,所述悬浮剂组合物为质量比4:2:1的卡波姆、海藻酸钠与羧甲基纤维素钠。
作为本发明的一种优选方案,所述悬浮剂组合物为黄原胶0.2~4份、海藻酸钠0.4~8份与羧甲基纤维素钠0.2~4份。
作为本发明的一种优选方案,所述悬浮剂组合物为质量比1:2:1的黄原胶、海藻酸钠与羧甲基纤维素钠。
作为本发明的一种优选方案,所述悬浮剂组合物为果胶0.4~8份、海藻酸钠0.4~8份与羧甲基纤维素钠0.2~4份。
作为本发明的一种优选方案,所述悬浮剂组合物为质量比2:2:1的果胶、海藻酸钠与羧甲基纤维素钠。
作为本发明的一种优选方案,还包括0.0025~0.2份的恩诺沙星。
上述的抗凝集的猪精液稀释粉在猪精液保存上的应用。
作为本发明的一种优选方案,包括以下步骤:
1)按配方量称取葡萄糖、柠檬酸、二水合柠檬酸三钠、EDTA、三羟甲基氨基甲烷、碳酸氢钠与阿米卡星;
2)加入悬浮剂组合物,与步骤1)的原料混合均匀;
3)向步骤2)的原料中加入1000mL双蒸水,充分搅拌溶解后静置,得到稀释液,使用前1h进行37℃预热处理。
4)稀释公猪原精液,将步骤3)得到的稀释液按一定比例缓慢倒入原精液中,稀释混合均匀,室温避光静置平衡30min后,再包裹后置于17℃恒温箱保存。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
1)在本发明的稀释粉配方中加入了悬浮剂组合物,用以减缓保存过程中精子的沉淀速率,以及由于各种物理、化学等因素导致的精子凝集现象的产生。可以有效地减少由于精子凝集所引起的对精子的运动、代谢和受精能力的影响,减少对精子的损伤作用,提高精液质量,延长精液有效保存期。
2)本发明的稀释粉配方减少保存过程中精子的沉淀和凝集,减少人工翻动精液次数,精液保存时间长、保存效果好,成本低,使用方便;
3)本发明的猪精液稀释粉配方稀释的猪精液于17℃保存,勿需每日翻动,能减缓精子的沉淀和凝集,经检测其精液有效保存期达到9d以上。
附图说明
图1是实施例1-5与对照组的抑菌圈示意图。
图2是实施例1与实施例3的精子凝集情况对比图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例提供了猪精液稀释粉的基础配方,其组分配比(按重量份数计)为:葡萄糖32.5份,柠檬酸3.5份,二水合柠檬酸三钠8.62份,EDTA 3.0份,三羟甲基氨基甲烷6.5份,碳酸氢钠2.5份,阿米卡星0.5份。
制备方法:
(1)分别准确计量称取葡萄糖32.5g,柠檬酸3.5g,二水合柠檬酸三钠8.62g,EDTA3.0g,三羟甲基氨基甲烷6.5g,碳酸氢钠2.5g,阿米卡星0.5g。
(2)将步骤(1)称量的稀释粉置于容器中,加入1000mL双蒸水,充分搅拌溶解后,置于37℃预热平衡处理1h,然后用于精液的稀释。
(3)使用时,根据原精液的密度确定稀释倍数,如需高倍稀释,先进行1:1稀释,1min后稀释到确定的稀释倍数。
(4)稀释时,将稀释液缓慢倒入精液中,注意以原精液的温度为标准,调节稀释液的温度,并与原精液的温度差不超过1℃。
(5)稀释分装后的精液在室温下避光放置30min后,用干净的毛巾包裹放置于17℃恒温箱保存。
(6)保存期间,每隔1天翻动和检测一次精液。
实施例2
在实施例1的基础上加入4份的卡波姆、2份的海藻酸钠和1份的羧甲基纤维素钠。
制备方法:
准确称量卡波姆4g、海藻酸钠2g和羧甲基纤维素钠1g,将三者充分混合后再与实施例1的稀释粉配方充分混合,然后加入1000mL双蒸水进行溶解,其余步骤同实施例1。
实施例3
在实施例2的基础上加入浓度为0.1份的恩诺沙星。
制备方法:
准确称量恩诺沙星0.1g,在实施例2中的配方混合完毕后加入并混匀。其余步骤同实施例1。
实施例4
在实施例1的基础上加入1份的黄原胶、2份的海藻酸钠和1份的羧甲基纤维素钠。
制备方法:
准确称量黄原胶1g、海藻酸钠2g和羧甲基纤维素钠1g,将三者充分混合后再与实施例1的稀释粉配方充分混合,然后加入1000mL蒸馏水进行溶解,其余步骤同实施例1。
实施例5
在实施例1的基础上加入2份的果胶、2份的海藻酸钠和1份的羧甲基纤维素钠。
制备方法:
准确称量果胶2g、海藻酸钠2g和羧甲基纤维素钠1g,将三者充分混合后再与实施例1的稀释粉配方充分混合,然后加入1000mL蒸馏水进行溶解,其余步骤同实施例1。
对比例,与实施例1唯一不同的是不加入阿米卡星。
用本发明实施例1-5制得的稀释液与对比例制得的稀释液对猪精液进行保存,表1是精液保存0~9d的精子活力比较。从表1中可以看出,精液保存至第9d,实施例1-5的精子活力均显著高于对比例,且在保存第9d,实施例3的精子活力最高。
表1各实施例配方组精液保存0~9d的精子活力
Figure BDA0003684560850000041
用本发明实施例1-5制得的稀释液与对比例制得的稀释液对猪精液进行保存,表2是各实施例配方组的精液有效保存时间比较。从表2中可以看出,实施例1-5的精液有效保存时间均显著高于对比例,且实施例3的精液有效保存时间最长。
表2各实施例配方组精液有效保存时间
配方分组 精液有效保存时间(d)
对比例 5.82
实施例1 9.87
实施例2 14.33
实施例3 16.36
实施例4 13.00
实施例5 13.63
用本发明实施例1-5制得的稀释液与对比例制得的稀释液作为抗菌液,对猪精液中培养的细菌进行药敏试验,表3是测得的各实施例配方组的抑菌圈直径大小比较。从表3中可以看出,实施例1-5与对比例相比,均具有明显的抗菌效果,且实施例3中加入恩诺沙星,使抗菌能力得到明显提升。
表3各实施例配方组抑菌圈直径大小
配方分组 抑菌圈直径(mm)
对比例
实施例1 15.08
实施例2 18.20
实施例3 20.46
实施例4 18.60
实施例5 19.50
注:抑菌圈直径>20mm为极度敏感;15mm<抑菌圈直径≤20mm为高度敏感;10mm≤抑菌圈直径≤15mm为中度敏感;抑菌圈直径<10mm为耐药;“—”表示无抑菌效果。
观察非悬浮配方实施例1与悬浮配方实施例3精液保存过程中的精子凝集情况,表4是非悬浮配方与悬浮配方精子凝集程度比较。从表4中可以看出,与悬浮配方实施例3相比,非悬浮配方实施例1随着保存时间的延长,精子凝集程度越发严重,从保存第9d开始产生明显的精子凝集现象,到保存后期,出现大量精子凝集的现象(图2A)。而悬浮配方实施例3在精液保存期间少有精子凝集,在保存后期,精子凝集率仅有10%~30%左右(图2B)。
表4非悬浮配方与悬浮配方精子凝集程度比较
Figure BDA0003684560850000051
Figure BDA0003684560850000061
注:—:没有精子凝集或极小数精子凝集;
+:10—30%精子凝集;
++:30—50%精子凝集;
+++:50—80%精子凝集;
++++:80%以上精子凝集。
由表1-4可见,本发明的稀释粉配方中加入了悬浮剂组合物,用以减缓保存过程中精子的沉淀速率,以及由于各种物理、化学等因素导致的精子凝集现象的产生。可以有效地减少由于精子凝集所引起的对精子的运动、代谢和受精能力的影响,减少对精子的损伤作用,提高精液质量,延长精液有效保存期。
参见图1,图1是对比例与实施例1-5制得的稀释液的抑菌圈检测图。
采用牛津杯法,对猪精液中培养的细菌进行药敏试验,测量抑菌圈直径大小。编号0、1、2、3、4、5分别为对比例、实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5的抑菌圈直径大小。
参见图2,图2是非悬浮配方实施例1与悬浮配方实施例3的精子凝集情况对比。
通过显微镜观察保存第15d精子的凝集情况。将预热好的精液滴在载片上放置2min后再观察精子凝集状态。编号A为实施例1的精子凝集情况;编号B为实施例3的精子凝集情况。
以上所述,仅为本发明的较佳实施例,并非对本发明任何形式上和实质上的限制,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员,在不脱离本发明方法的前提下,还将可以做出若干改进和补充,这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员,在不脱离本发明的精神和范围的情况下,当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化,均为本发明的等效实施例;同时,凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变,均仍属于本发明的技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种抗凝集的猪精液稀释粉,其特征在于,按重量份数计包括:葡萄糖30.0~38.0份、柠檬酸2.0~3.5份、二水合柠檬酸三钠5.0~10.0份、EDTA 1.5~5.5份,三羟甲基氨基甲烷3.5~9.0份、碳酸氢钠0.5~5份、阿米卡星0.2~1份与悬浮剂组合物0.7~22份。
2.根据权利要求1所述的一种抗凝集的猪精液稀释粉,其特征在于,所述悬浮剂组合物为卡波姆0.1~10份、海藻酸钠0.4~8份与羧甲基纤维素钠0.2~4份。
3.根据权利要求2所述的一种抗凝集的猪精液稀释粉,其特征在于,所述悬浮剂组合物为质量比4:2:1的卡波姆、海藻酸钠与羧甲基纤维素钠。
4.根据权利要求1所述的一种抗凝集的猪精液稀释粉,其特征在于,所述悬浮剂组合物为黄原胶0.2~4份、海藻酸钠0.4~8份与羧甲基纤维素钠0.2~4份。
5.根据权利要求4所述的一种抗凝集的猪精液稀释粉,其特征在于,所述悬浮剂组合物为质量比1:2:1的黄原胶、海藻酸钠与羧甲基纤维素钠。
6.根据权利要求1所述的一种抗凝集的猪精液稀释粉,其特征在于,所述悬浮剂组合物为果胶0.4~8份、海藻酸钠0.4~8份与羧甲基纤维素钠0.2~4份。
7.根据权利要求6所述的一种抗凝集的猪精液稀释粉,其特征在于,所述悬浮剂组合物为质量比2:2:1的果胶、海藻酸钠与羧甲基纤维素钠。
8.根据权利要求1-7任一项所述的一种抗凝集的猪精液稀释粉,其特征在于,还包括0.0025~0.2份的恩诺沙星。
9.一种如权利要求1-8任一项所述的抗凝集的猪精液稀释粉的应用,其特征在于,所述抗凝集的猪精液稀释粉在猪精液保存上的应用。
10.根据权利要求9所述的一种抗凝集的猪精液稀释粉的应用,其特征在于,包括以下步骤:
1)按配方量称取葡萄糖、柠檬酸、二水合柠檬酸三钠、EDTA、三羟甲基氨基甲烷、碳酸氢钠与阿米卡星;
2)加入悬浮剂组合物,与步骤1)的原料混合均匀;
3)向步骤2)的原料中加入1000mL双蒸水,充分搅拌溶解后静置,得到稀释液,使用前1h进行37℃预热处理;
4)稀释公猪原精液,将步骤3)得到的稀释液按一定比例缓慢倒入原精液中,稀释混合均匀,室温避光静置平衡30min后,再包裹后置于17℃恒温箱保存。
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