CN114790191A - 一种靶向脂滴的aie荧光探针及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种靶向脂滴的AIE荧光探针及其制备方法和应用。AIE荧光探针其具有以下结构：
Figure DDA0003603410180000011
其中，R＝(CH2)nCH3，n为2～6。该荧光探针具有优异的AIE性质，能够准确地定位于细胞内LDs，发出强烈的荧光信号，并且能够实时跟踪LDs在活细胞中脂滴自噬和铁死亡过程中的动态变化，具有广泛的应用前景。

Description

一种靶向脂滴的AIE荧光探针及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种AIE荧光探针，具体涉及一种靶向脂滴的AIE荧光探针，还涉及其制备方法和应用，属于有机小分子荧光探针技术领域。
背景技术
脂滴(LDs)是由中性脂质核组成的脂质储存细胞器，主要包含胆固醇酯和甘油三酯，由磷脂单层壳包裹。在最近的研究中，学者们发现LDs与许多病理过程有关，例如神经变性、脂肪肝疾病、动脉粥样硬化及糖尿病等，甚至癌症。此外，由于LDs是高度动态的细胞器，在众多重要的生理过程中也起着至关重要的作用，并且与细胞内其他重要的细胞器有着密切的联系。因此，在一些生理过程中监测LDs的动态行为是非常有意义的，所以许多荧光探针已经被设计出来用于监测LDs动态行为。然而，这些探针的一些固有缺陷极大地限制了它们在各个方面的应用。首先，大多数探针只揭示了脂滴的生理行为，并没有揭示脂滴与其他细胞器的协同作用。其次，受聚集诱导猝灭(aggregation-caused quenching，ACQ)效应的影响，许多探针在高浓度时会发生分子间π-π堆积，从而诱导荧光猝灭，导致信号减弱。第三，由于短发射波长生物相容性差和细胞穿透率低，不适用于细胞成像。最后，在长期生物成像过程中，一些探针容易从细胞中泄漏出来，很大程度上限制了在细胞生物学和临床医学研究中长期动态观察的保真度。
聚集诱导发光(AIE)和ACQ不同，在聚集态下产生强烈的荧光，进而为广大研究者设计荧光探针提供了一种全新的策略。此外，AIE分子具有极好的光稳定性和高信噪比，迄今为止，大量AIE材料已被开发并成功应用于化学传感、生物成像、光电器件和生物医药等领域。
发明内容
针对现有技术中用于监测LDs的聚集诱导发光荧光探针存在的缺陷，本发明的第一个目的是在于提供一种高精度靶向LDs的AIE荧光探针，该荧光探针具有优异的AIE性质，能够准确地定位于细胞内LDs，发出强烈的荧光信号，并且能够实时跟踪LDs在活细胞中脂滴自噬和铁死亡过程中的动态变化。
本发明的第二个目的是在于提供一种AIE荧光探针的制备方法，该制备方法操作简单、流程短、条件温和，有利于扩大生产。
本发明的第三个目的是在于提供一种AIE荧光探针在靶向LDs的成像应用，该荧光探针具有优异的AIE性质，能够准确地定位于细胞内LDs，发出强烈的荧光信号，并且能够实时跟踪LDs在活细胞中脂滴自噬和铁死亡过程中的动态变化，在监测LDs相关生理活动方面具有较大的应用潜力。
为了实现上述技术目的，本发明提供了一种聚集诱导发光荧光探针，其具有式1结构：
Figure BDA0003603410160000021
其中，R＝(CH2)nCH3，n为2～6。
本发明的荧光探针中具有喹啉丙二腈结构(QM)，QM是通过N-乙基取代二氰基亚甲基苯并吡喃(DCM)结构中的氧原子，相对DCM，能够有效抑制其在溶液中的旋转而获得优异的AIE效果，因此QM作为荧光探针的AIE部分，同时荧光探针中包含脂溶性较好的咔唑基团，并且咔唑基团与QM通过共轭双键交联，延长了其荧光发射，特别是咔唑的氮原子上通过引入不同长度的烷基链来改善整个探针的AIE性能和亲脂性。由于AIE基团QM的存在，所有探针都显示出非常强的AIE特性，并通过光谱和SEM测试得到了进一步验证。因为探针的疏水结构并具有优异亲脂性，可以准确地聚集在LDs中并发出很强的荧光。
作为一个优选的方案，式1结构中n为2、4或6。
本发明还提供了一种聚集诱导发光荧光探针的制备方法，该方法是将式2结构的含甲基化合物和式3结构的含醛基化合物进行缩合反应，即得。
Figure BDA0003603410160000031
其中，R＝(CH2)nCH3，n为2～6。
作为一个优选的方案，含甲基化合物和含醛基化合物按等摩尔比反应。
作为一个优选的方案，含甲基化合物和含醛基化合物在哌啶存在下于乙腈溶剂中进行缩合反应；所述哌啶用量为含甲基化合物摩尔量的4～8倍。
作为一个优选的方案，所述缩合反应的条件为：在80～85℃温度下，反应10～12h。
本发明还提供了一种聚集诱导发光荧光探针的应用，其在制备靶向LDs的AIE荧光探针中的应用
本发明的AIE荧光探针的合成路线如下：
Figure BDA0003603410160000032
本发明的AIE荧光探针的具体合成步骤为：将化合物1(式2结构的含甲基化合物)和化合物2(式3结构的含醛基化合物)在加入到氮气保护的双口烧瓶中，然后加入乙腈和哌啶，加热回流过夜，待冷却至室温后，先通过减压除去溶剂，得到粗产物。再将粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷)，得到化合物红色固体AIE-Cbz-LD-Cn(式1结构聚集诱导发光荧光探针)；其中，化合物1、化合物2和哌啶的物质的量比为1:1:4～8，乙腈的用量以化合物1的浓度为0.05～0.15mol/L，温度为80～85℃，时间为10～12h。
本发明的化合物2的合成路线如下：
Figure BDA0003603410160000041
具体合成步骤为：冰浴条件下，将N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和三氯氧磷(POCl3)在加入到氮气保护的双口烧瓶中。然后将溶解在二氯乙烷中的化合物3添加到上述体系中。混合体系先冰浴反应1h，然后再回流过夜。应完成后，待混合体系自然冷却至室温后，倒入冰水中，然后用二氯甲烷萃取。再用饱和食盐水洗涤，收集有机层，用无水Na2SO4干燥后过滤，减压除去溶剂，得到粗产物，通过快速柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚，1/4，v/v)，获得黄色固体。其中，化合物3、DMF和三氯氧磷的物质的量比为1:1.5:2，1,2-二氯乙烷的体积为10～15mL，冰浴条件温度为0～5℃，反应时间1h；回流温度为85～90℃，时间为8～10h。
相对现有技术，本发明技术方案带来的有益技术效果：
本发明提供的AIE荧光探针，基于AIE基团QM和亲脂性基团咔唑设计合成系列新型脂溶性AIE荧光探针AIE-Cbz-LD-Cn(例如n＝3，5，7)，通过在咔唑的氨基位点引入不同的烷基链来促进分子内运动(C3为丙烷、C5为戊烷、C7为庚烷)，从而改善它们的AIE性质和脂溶性。探针在四氢呋喃(THF)/H2O、二甲亚砜(DMSO)/H2O、乙醇(EtOH)/H2O和乙腈(MeCN)/H2O等混合溶液中均表现出非常出色的AIE效应。
本发明提供的AIE荧光探针通过细胞实验，表明探针AIE-Cbz-LD-C3、AIE-Cbz-LD-C5和AIE-Cbz-LD-C7可以在LDs中聚集并发出强烈的荧光。
本发明还将探针AIE-Cbz-LD-C7成功应用于跟踪活细胞中脂滴自噬过程中LDs动态变化，表明受损的LDs被溶酶体吞噬，数量减少。另外还利用探针AIE-Cbz-LD-C7清楚地观察到铁死亡过程中LDs的数量增加，同时研究了该过程中LDs的产生，表明新生的LDs起源于内质网(ER)附近，为LDs从ER产生的假说提供了强有力的证据。表明AIE-Cbz-LD-C7在监测LDs相关生理活动方面具有巨大潜力。
本发明的AIE荧光探针的制备方法操作简单、流程短、条件温和，有利于扩大生产。
附图说明
图1为探针AIE-Cbz-LD-Cn的合成路线。
图2为探针AIE-Cbz-LD-Cn在不同有机溶剂和纯水中的吸收光谱(20μM)；(A)AIE-Cbz-LD-C3，(B)AIE-Cbz-LD-C5，(C)AIE-Cbz-LD-C7。
图3为探针AIE-Cbz-LD-Cn在THF/H2O混合溶剂中不同水分数(fw)的荧光发射光谱和相对应荧光强度比值图(10μM)，激发波长为450nm；(A-B)AIE-Cbz-LD-C3，(C-D)AIE-Cbz-LD-C5，(E-F)AIE-Cbz-LD-C7；插图：探针AIE-Cbz-LD-Cn在纯THF溶剂和不同水分数的THF/H2O混合溶液中用365nm紫外灯照射下的荧光图。
图4为探针抗干扰能力测试的相对荧光柱状图，激发波长为450nm；1.probe only，10eq:2.Na+，3.Mg2+，4.K+，5.FeCl2，6.SO3 2-，7.Na2S2O3，8.NO2 -，9.ONOO-，10.HClO，11.1O2，12.O2 -，13.·OH，14.TBO，15.TBPH.100eq:16.Cys，17.GSH。
图5为探针SEM图片，(A)AIE-Cbz-LD-C3，(B)AIE-Cbz-LD-C5，(C)AIE-Cbz-LD-C7。
图6为HepG2细胞与探针AIE-Cbz-LD-Cn和LDs商业探针BODIPY493/503的共孵育后的细胞成像图以及两种探针的共定位系数；红色荧光信号(AIE-Cbz-LD-Cn,λex＝409nm，λem＝570～620nm)；绿色荧光信号(BODIPY493/503，λex＝487nm，λem＝500–550nm)，比例尺为20μm。
图7为HepG2细胞在无营养培养基(A)或者正常培养基(B)中与AIE-Cbz-LD-C7(0.5μM，λex＝487nm，λem＝570–620nm)and LysoTracker(0.2μM.λex＝409nm，λem＝430–470nm)孵育不同时间(0～4h)下细胞成像，比例尺为20μm。
图8为HeLa细胞与0.5μMAIE-Cbz-LD-C7孵育15min，然后用10μMErastin(A)处理或与10μMErastin和15μMFer-1(B)一起孵育不同时间(0-2h)的细胞成像图；λex＝487nm，λem＝570–620nm；(C)不同时间点LDs数量；比例尺为20μm。
图9为HeLa细胞用先用0.2μMER-Tracker Blue(λex＝409nm,λem＝425–475nm)预处理20min，然后用2μM AIE-Cbz-LD-C7(λex＝487nm，λem＝570–620nm)15min，最后用10μMErastin处理不同时间(0-2h)的细胞成像图，比例尺为20μm。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步详细说明，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所做的修改或替换，均属于本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法及未说明配方的试剂均为按照本领域常规条件。
实施例1
AIE荧光探针的制备方法，具体合成路线如图1所示。
化合物2的合成：冰浴条件下，将DMF，(1.4mL，17.7mmol)和POCl3，(0.8mL，8mmol)在加入到充好氮气的双口烧瓶中。然后将溶解在15mL二氯乙烷中的化合物3(6.0mmol)添加到上述体系中。混合体系先在0℃下反应1h，然后在90℃下过夜。反应完成后，待混合体系自然冷却至室温后，倒入冰水中，然后用二氯甲烷萃取。再用饱和食盐水洗涤，收集有机层，用无水Na2SO4干燥后过滤，减压除去溶剂，得到粗产物，通过快速柱层析纯化(EA/PE，1/4，v/v)，获得黄色固体。
Cbz-C3，1085.3mg,Yield:76.2％.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.09(s,1H),8.61(d,J＝1.1Hz,1H),8.16(d,J＝7.8Hz,1H),8.00(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),7.49(ddd,J＝14.7,8.1,6.8Hz,3H),7.36–7.28(m,1H),4.31(t,J＝7.2Hz,2H),1.94(d,J＝7.2Hz,2H),0.99(t,J＝7.4Hz,3H).
Cbz-C5,1195.6mg,Yield:75.1％.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.11(s,1H),8.62(s,1H),8.18(d,J＝7.7Hz,1H),8.03(d,J＝8.5Hz,1H),7.59–7.41(m,3H),7.36(d,J＝7.4Hz,1H),4.34(t,J＝7.2Hz,2H),1.94–1.82(m,2H),1.39(d,J＝3.2Hz,4H),0.91(s,3H).
Cbz-C7,1260.8mg,Yield:71.7％.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.09(s,1H),8.61(s,1H),8.16(d,J＝7.8Hz,1H),8.01(dd,J＝8.5,1.4Hz,1H),7.58–7.42(m,3H),7.33(t,J＝7.4Hz,1H),4.33(t,J＝7.3Hz,2H),1.96–1.80(m,2H),1.42–1.21(m,8H),0.86(t,J＝6.8Hz,3H).
探针AIE-Cbz-LD-Cn的合成：
将化合物1(235.5mg，1mmol)和化合物2(1mmol)在氮气保护下加入到双口烧瓶中。然后加入MeCN(10mL)和哌啶(0.6mL)。在80℃条件下将混合物搅拌12h。待冷却至室温后，先通过减压除去溶剂，得到粗产物。再将粗产物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：DCM)，得到化合物红色固体AIE-Cbz-LD-Cn。
AIE-Cbz-LD-C3,140.3mg,Yield:30.9％.1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.91(d,J＝7.7Hz,1H),8.61(s,1H),8.20(d,J＝7.7Hz,1H),8.08(d,J＝8.9Hz,1H),7.98–7.85(m,2H),7.71–7.40(m,6H),7.24(t,J＝7.5Hz,1H),7.08(s,1H),4.61(d,J＝7.1Hz,2H),4.38(t,J＝6.9Hz,2H),1.84–1.73(m,2H),1.43(t,J＝7.0Hz,3H),0.85(t,J＝7.3Hz,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ153.33,148.51,141.76,141.64,141.04,138.16,133.07,126.96,126.41,125.88,125.20,124.51,123.36,121.61,120.75,120.55,119.73,119.56,116.05,115.68,109.35,109.24,107.35,50.43,44.84,43.90,22.36,14.05,11.81,0.01.MS(TOF):[M]+calcd.454.6,found:455.3.
AIE-Cbz-LD-C5,145.7mg,Yield:30.2％.1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.90(d,J＝8.4Hz,1H),8.60(s,1H),8.20(d,J＝7.7Hz,1H),8.07(d,J＝8.9Hz,1H),7.98–7.83(m,2H),7.74–7.41(m,6H),7.24(t,J＝7.4Hz,1H),7.07(s,1H),4.60(d,J＝6.9Hz,2H),4.40(t,J＝6.8Hz,2H),1.86–1.67(m,2H),1.44(t,J＝7.0Hz,3H),1.26(d,J＝3.2Hz,4H),0.79(t,J＝6.6Hz,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ153.30,148.50,141.75,141.55,140.96,138.14,133.06,126.93,126.42,125.85,125.18,124.51,123.35,122.64,121.59,120.79,120.61,120.56,119.71,119.58,116.06,115.65,109.30,109.20,107.33,77.36,77.04,76.73,43.90,43.30,29.39,28.70,22.47,14.05,13.97,1.04.MS(TOF):[M]+calcd.482.6,found:483.3.
AIE-Cbz-LD-C7,150.4mg,Yield:29.5％.1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.93(d,J＝7.7Hz,1H),8.62(s,1H),8.21(d,J＝7.7Hz,1H),8.09(d,J＝9.0Hz,1H),8.01–7.86(m,2H),7.71–7.42(m,6H),7.24(t,J＝7.5Hz,1H),7.10(s,1H),4.62(d,J＝7.1Hz,2H),4.42(t,J＝6.7Hz,2H),1.77(s,2H),1.44(t,J＝7.0Hz,3H),1.20(dd,J＝20.9,13.9Hz,8H),0.79(t,J＝6.9Hz,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ153.37,148.51,141.79,141.56,140.98,138.17,133.07,127.00,126.42,125.86,125.23,124.52,123.38,122.65,121.63,120.74,120.57,119.72,119.54,116.03,115.66,109.30,109.21,107.38,77.35,77.04,76.72,50.51,43.89,43.34,31.72,29.07,29.02,27.27,22.59,14.07,1.04.MS(TOF):[M]+calcd.510.7,found 511.4.
实施例2
探针吸收光谱的测定：
准确称取0.005mmol探针AIE-Cbz-LD-Cn溶解在10mLDMSO中，配置成0.5mM的母液，超声使其完全溶解，放置20mL棕色瓶中，-20℃冰箱保存。用移液枪准确量取960μL有机溶剂(DMSO，THF，MeCN，EtOH，EA等)或纯水置于2mL离心管中，再从0.5mMAIE-Cbz-LD-Cn母液中准确量取40μL置于上述溶液中，配置成1mL探针溶液，探针浓度为20μM，充分摇匀后再测试其吸收波长。如图2所示，五个探针在纯的有机溶剂中吸收曲线差别不大，都有两个吸收峰，分别在400nm和450nm左右。而在纯水中的吸收差异较大，吸光度相对有机溶剂降低。
实施例3
探针AIE效应光谱测试：
从0.5mMAIE-Cbz-LD-Cn母液中准确量取20μL置于纯水与有机溶剂混合配置成1mL不同水分数的混合溶剂溶液中，配置成1mL探针溶液，浓度为10μM，测试三个探针在THF/H2O混合溶液体系中荧光发射及强度的变化。如图3所示，三个探针在纯的THF溶液中或fw较低时，荧光发射强度很弱。当fw>70％后，探针在混合溶液中发出很强的荧光，其中探针AIE-Cbz-LD-C5和AIE-Cbz-LD-C7在纯水中的荧光强度最大，荧光发射峰分别为623nm和620nm，相对于纯THF溶液分别增长了15倍和79倍。AIE-Cbz-LD-C3在fw＝90％时荧光强度最大，发射峰分别为625nm，相对于纯THF溶液分别增长了61倍。因此三个探针都能在聚集状态下发出很强的荧光，表现出优异的AIE效应。
实施例4
探针SEM测试：
将20μL AIE-Cbz-LD-Cn母液加入1mL纯水中，然后静置30min。接着将2μL按比例混合的溶液滴入单晶硅片(1cm x 1cm)中，置于室温下直至溶剂完全蒸发，制好的样品用于SEM测试。由图4所示，三个探针在纯水中的平均粒径分别为68nm，106nm和396nm，进一步表明三个探针有很好的AIE效应。
实施例5
探针抗干扰能力研究：
为了证明探针在生物体内的稳定性，通过实验探究了探针的抗干扰能力，因而选取了一些细胞内含量较多的物质(Na+、Mg2+、K+、FeCl2、SO3 2-、Na2S2O3、NO2 -、ONOO-、HClO、1O2、O2 -、·OH、TBO、TBPH、Cys和GSH)。选取1mL PBS缓冲溶液作为测试体系，并向其中加入探针AIE-Cbz-LD-Cn和不同的分析物，测试探针的稳定性。如图5所示，第一条柱状图为空白样，只存在探针，不存在其他分析物,将其荧光强度定为1。2～17加入了其他分析物，将他们的荧光强度除以空白样的荧光强度，得到柱状图的纵坐标荧光强度比值。测试结果表明，在加入了分析物之后，荧光强度比值都在0.85～1.15之间徘徊，在误差允许范围之内，说明了三个探针十分稳定，抗干扰性强，为探针进行细胞实验做好了铺垫。
实施例6
探针对细胞内LDs靶向能力测试：
将活的HepG2细胞与0.5μΜBODIPY493/503一起孵育20min，用PBS洗涤3次之后，然后与0.5μM AIE-Cbz-LD-Cn共孵育15min，再用共聚焦激光扫描显微镜对细胞进行成像。如图6所示，五个探针的共定位系数完全不同。探针AIE-Cbz-LD-C3、AIE-Cbz-LD-C5和AIE-Cbz-LD-C7的共定位系数分别是0.90，0.96和0.92，表明这三个探针在细胞内都能很好的定位于LDs。
实施例7
探究LDs自噬过程：
HepG2细胞在无营养培养基下用2μM AIE-Cbz-LD-C7和0.2μMLysoTracker Blue共孵育不同时间(0-4h)，在连续时间保持饥饿再进行细胞成像。如图7A所示，LDs中AIE-Cbz-LD-C7的红色荧光信号和溶酶体中LysoTracker Blue的蓝色荧光信号在不同通道中可以清楚地看到，粉红色的信号表示红色信号和蓝色信号的重叠。第一小时内，LDs与溶酶体明显分离，产生少量粉红色小点。但随着饥饿的时间的延长，LDs开始聚集，伴随着数量减少，粉红色的重叠信号逐渐增加。到了第四个小时，大量的粉色信号点出现。这一实验结果表明，在LDs自噬过程中，LDs数目减少，并且受损的LDs被溶酶体吞噬。此外，HepG2细胞用正常营养培养基作为对照进行培养(图7B)。相反，LDs和溶酶体没有明显变化，蓝色荧光信号和红色荧光信号重叠现象不明显，说明无明显LDs自噬过程发生。这一结果表明LDs自噬是由饥饿诱导的，并且探针AIE-Cbz-LD-C7成功用于监测LDs自噬过程中LDs行为动态变化。
实施例8
探究铁死亡过程中LDs动态行为：
首先用2μM AIE-Cbz-LD-C7与活的HepG2细胞共孵育15min，在细胞图像中可以看到较弱的荧光(图8A-B)，表明LDs的存在。当细胞用10μMErastin和2μM AIE-Cbz-LD-C7预处理0.5h后再进行细胞成像，与0h相比，红色通道中的荧光亮点显着增加(图8A)。这一结果表明了LDs数量的增加。1h或2h后，细胞中红色荧光信号较0.5h大大增加，表明LDs的数量在继续增加。这些结果清楚地表明，铁死亡过程可以加速LDs的产生并导致它们的数量急剧上升。Ferrostatin 1(Fer-1)，一种铁死亡抑制剂，可以防止脂质过氧化物和脂质活性氧在活细胞中大量积累。接下来研究了由AIE-Cbz-LD-C7、Erastin和Fer-1同时培养的活HepG2细胞中LDs的变化。如图8B所示，当HepG2细胞用2μM AIE-Cbz-LD-C7处理15分钟后，可以看到细胞中的强荧光信号出现。当与2μM AIE-Cbz-LD-C7和10μMErastin和15μM Fer-1同时孵育0.5h后，细胞中红色荧光信号和LDs的数量与0h相比没有明显变化(图8B)。随着时间到达2小时后，红色荧光信号和LDs数量依然没有太大变化。这些结果表明了Fer-1可以抑制由Erastin诱导的铁死亡过程，说明了AIE-Cbz-LD-C7成功用于追踪铁死亡过程中LDs动态变化。
实施例9
探究铁死亡过程中LDs的产生：
HepG2细胞用0.2μM ER-Tracker Blue预处理20min，然后用2μM AIE-Cbz-LD-C7染色15min，最后用10μMErastin处理不同时间(0-2h)。如图9所示，LDs中AIE-Cbz-LD-C7的红色信号和ER中ER-Tracker Blue的蓝色信号在不同的通道中可以清楚地看到，粉红色的点表示红点和蓝点信号重叠。在添加Erastin(0h)之前，AIE-Cbz-LD-C7的红点与ER-TrackerBlue的荧光信号重叠较少。加入Erastin0.5 h后，红色信号点较0h逐渐增多，部分与蓝色荧光点重叠。当细胞与Erastin一起孵育1h后，红点和粉红点的数量比0h增加很多。该结果表明大量LDs的产生和新生LDs产生在ER区域。随着铁死亡过程的持续进行，出现了更多的红点和粉点。这些结果有力地说明了铁死亡期间新生的LDs是在ER区域附近产生的，因此为LDs起源于ERs的假说提供了强有力的证据。

Claims (7)

1.一种聚集诱导发光荧光探针，其特征在于：具有式1结构：
Figure FDA0003603410150000011
其中，R＝(CH2)nCH3，n为2～6。
2.根据权利要求1所述的一种聚集诱导发光荧光探针，其特征在于：n为2、4或6。
3.权利要求1或2所述的一种聚集诱导发光荧光探针的制备方法，其特征在于：将式2结构的含甲基化合物和式3结构的含醛基化合物进行缩合反应，即得。
Figure FDA0003603410150000012
其中，R＝(CH2)nCH3，n为2～6。
4.根据权利要求3所述的一种聚集诱导发光荧光探针的制备方法，其特征在于：含甲基化合物和含醛基化合物按等摩尔比反应。
5.根据权利要求3所述的一种聚集诱导发光荧光探针的制备方法，其特征在于：含甲基化合物和含醛基化合物在哌啶存在下于乙腈溶剂中进行缩合反应；所述哌啶的用量为含甲基化合物摩尔量的4～8倍。
6.根据权利要求1或5所述的一种聚集诱导发光荧光探针的制备方法，其特征在于：所述缩合反应的条件为：在80～85℃温度下，反应10～12h。
7.权利要求1或2所述的一种聚集诱导发光荧光探针的应用，其特征在于：在制备靶向LDs的AIE荧光探针中的应用。
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