CN114773443A - 一种抗大豆白粉病基因GmRmd1及编码蛋白和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种大豆抗白粉病基因GmRmd1编码蛋白及其应用，属于基因工程技术领域。本发明提供如下任何一种物质在提高大豆抗白粉病中的应用：1)GmRmd1基因DNA分子；2)GmRmd1编码蛋白；3)含有GmRmd1基因DNA分子的重组质粒、表达盒、转基因细胞或者重组菌；所述GmRmd1基因氨基酸序列如序列表序列1所示。将本发明GmRmd1基因表达于易感大豆白粉病的大豆品种可以赋予转基因大豆抗白粉病的功能；突变抗大豆白粉病品种中的GmRmd1基因可以使白粉病抗性丧失。本发明公开的基因可作目的基因导入感大豆白粉品种中，赋予其白粉病抗性，对培育抗大豆白粉病大豆品种有重要的意义。

Description

一种抗大豆白粉病基因GmRmd1及编码蛋白和应用
技术领域
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及大豆抗白粉病基因GmRmd1、编码蛋白及其应用。
背景技术
大豆是重要的经济作物，在世界范围内普遍种植，是人类食用油和植物蛋白的主要来源。大豆白粉病(soybean powdery mildew)是由大豆白粉病菌(Microsphaeradiffusa Cooke&Peck)侵染引起的一种区域性和季节性较强的真菌性病害，在凉爽、湿度大、早晚温差较大的环境条件下较易发病，能导致感病品种减产30-40％。国内外关于大豆白粉病的研究报道较少，种质资源筛选、抗病遗传机制以及抗病基因功能分析等方面的研究极少，至今未克隆到大豆抗白粉病基因。近年来，在我国华南和西南大豆种植区，大豆白粉病发病面积呈快速扩展的趋势，选育和利用抗病品种是防治大豆白粉病最经济、有效的方法。克隆大豆抗白粉病基因对培育抗大豆白粉病新品种具有重要的意义。
发明内容
发明要解决的技术问题是提供一种大豆抗白粉病基因GmRmd1及其编码的蛋白，同时提供含有上述基因的重组质粒及其在大豆抗白粉病中和培育抗大豆白粉病品种的应用。
本发明提供一种来源于大豆的蛋白质，命名为GmRmd1，来源于抗白粉病的大豆B13，是如下A1)、A2)或A3)的蛋白质：
A1)氨基酸序列是序列表中序列2的蛋白质；
A2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有90％以上的同一性且与植物抗白粉病相关的蛋白质；
A3)在A1)或A2)的N末端或/和C末端连接蛋白标签得到的融合蛋白质。
上述蛋白质中，序列表中的序列2由641个氨基酸残基组成。
上述蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。
上述蛋白质中，所述蛋白标签(protein-tag)是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和/或纯化。所述蛋白标签可为Flag标签、His标签、MBP标签、HA标签、myc标签、 GST标签和/或SUMO标签等。
上述蛋白质中，同一性是指氨基酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如NCBI主页网站的BLAST网页。例如，可在高级BLAST2.1中，通过使用blastp作为程序，将Expect值设置为10，将所有Filter 设置为OFF，使用BLOSUM62作为Matrix，将Gap existence cost，Per residue gap cost和Lambdaratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索一对氨基酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。
上述蛋白质中，所述90％以上的同一性可为至少91％、92％、95％、96％、98％、99％或100％的同一性。
上述蛋白质中，所述GmRmd1可来源于大豆。
本发明提供与所述蛋白质相关的生物材料，为下述B1)至B9)中的任一种：
B1)编码所述蛋白质的核酸分子；
B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；
B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；
B4)含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物；
B5)含有B1)所述核酸分子的转基因植物细胞系、或含有B2)所述表达盒的转基因植物细胞系；
B6)含有B1)所述核酸分子的转基因植物组织、或含有B2)所述表达盒的转基因植物组织；
B7)含有B1)所述核酸分子的转基因植物器官、或含有B2)所述表达盒的转基因植物器官；
B8)降低权利要求1所述蛋白质表达的核酸分子；
B9)含有B8)所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因植物细胞系。
其中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。
上述生物材料中，B1)所述核酸分子为如下b1)或b2)所示的所述蛋白质的编码基因：
b1)编码序列是序列表中序列1的核苷酸的cDNA分子或DNA分子；
b2)核苷酸是序列表中序列1的的cDNA分子或DNA分子。
本发明提供一种植物抗病剂，所述植物抗病剂含有所述蛋白质、或/和权利要求 2或3所述生物材料。
上述蛋白质、或上述生物材料的下述P1-P9中的任一种应用也应在本发明的保护范围之内：
P1、所述蛋白质、或所述生物材料在调控植物白粉病抗性中的应用；
P2、所述蛋白质、或所述生物材料在制备提高植物抗白粉病性的产品中的应用；
P3、所述蛋白质、或所述生物材料在培育抗白粉病植物中的应用；
P4、所述蛋白质、或所述生物材料在制备植物抗白粉病产品中的应用；
P5、所述蛋白质、或所述生物材料在植物育种中的应用。
本发明提供一种培育抗白粉病植物的方法，包括提高目的植物中所述蛋白质或其编码基因的表达量，得到抗白粉病植物；所述抗白粉病植物的抗白粉病性高于所述目的种子植物的抗白粉病性。
发明提供一种培育抗白粉病性降低的转基因植物的方法，包括降低目的植物中所述蛋白质的编码基因的表达，得到抗白粉病性低于所述目的植物的转基因植物。
上述植物或者目的植物为单子叶植物或双子叶植物。
上述植物或者目的植物为为大豆
上述方法中，所述提高目的植物中所述蛋白质或其编码基因的表达量是通过将所述蛋白质的编码基因导入所述目的植物实现的；
所述破坏目的植物中所述蛋白质的编码基因的功能是通过利用CRISPR-Cas9介导的基因编辑技术对所述目的植物进行基因编辑实现的。
降低目的植物中所述蛋白质的编码基因的表达是指通过利用CRISPR-Cas9介导的基因编辑技术对所述目的植物进行基因编辑，从而破坏目的植物中所述蛋白质的编码基因的功能。
本发明的有益效果在于：
(1)利用转基因手段将携带本发明所供的大豆抗白粉病基因GmRmd1的植物表达载体转化易感大豆白粉病品种，如华夏3号。获得的转基因植株和对照材料华夏3 号在白粉病接种后发现，转基因具有完全抗大豆白粉病的表型。利用CRISPR-Cas9 介导的基因编辑技术对抗病品种(如大豆品种Young)进行基因编辑并获得基因编辑纯合植株，发现基因编辑纯合植株表现为易感白粉病表型。
(2)本发明所供的大豆抗白粉病基因GmRmd1，位于大豆第16号染色体，读码框长度为1926bp，编码641个蛋白；利用任何一种引导外源基因在植物中表达的载体，将本发明GmRmd1基因导入大豆植物细胞，可获得抗大豆白粉病转基因植株。
(3)使用大豆抗白粉病基因GmRmd1重组植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前加上任何一种增强型启动子或者组成型启动子，如花椰菜花叶病毒病35S启动子、玉米的泛素启动子，它们可单独使用或者与其它植物启动子结合使用；另外为了便于对转基因植物或者细胞的筛选，可对所有植物表达载体进行加工，可以加入在植物中表达可以产生颜色变化的酶基因或者发光化合物基因(荧光素酶基因、GUS基因等)、具有抗性的抗生素标记物(壮观霉素、卡那霉素等)或者是抗化学试剂标记基因(抗草甘膦基因、抗除草剂基因等)。
(4)本发明大豆抗白粉病基因GmRmd1可通过如下方式导入宿主中：将本发明大豆抗白粉病基因GmRmd1插入植物表达载体中，通过农杆菌导入宿主。携带本发明大豆抗白粉病基因GmRmd1的表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织。
(5)本发明的大豆抗白粉病基因GmRmd1对大豆抗白粉病具有决定性作用。经过实验证明，将该基表达到易感大豆品种中，可使易感大豆品种获得白粉病抗性；对抗性品种的大豆抗白粉病基因GmRmd1进行基因编辑获得纯合的基因编辑突变体可使白粉病抗性丧失，表明本发明的大豆抗白粉病基因GmRmd1对大豆抗白粉病具有决定性作用
附图说明
图1为实施例1中的植物表达载体的结构示意图；
图2为实施例1中的基因编辑载体的结构示意图；
图3为转大豆抗白粉病基因GmRmd1植株与感病品种华夏3号接种大豆白粉病菌后表型图；
图4为基因编辑植株与抗病品种Young接种大豆白粉病菌后表型图：(A)抗病品种Young(WT)和4个基因编辑植株基因编辑情况；(B)白粉病表型图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
所述大豆材料B13在文献Jiang B,Li M,Cheng Y,et al.Genetic mapping ofpowdery mildew resistance genes in soybean by high-throughput genome-widesequencing. Theor Appl Genet.2019；132(6):1833-1845.doi:10.1007/s00122-019-03319-y中公开，为抗大豆白粉病品种；桂早1号和华夏3号在文献钟彩霞,钟开珍,赵云云,陈林,年海,马启彬,杨存义.巴西大豆资源及其在华南地区衍生品种的磷效率评价[J].中国油料作物学报,2013,35(02):162-170.中公开，为感大豆白粉病品种；Young在文献Abdel-Haleem H,Jr T,Rufty T W,et al.Quantitative trait loci controllingaluminum tolerance in soybean:Candidate gene and single nucleotidepolymorphism marker discovery[J]. Molecular Breeding,2013,33(4):851-862.)中公开，为抗大豆白粉病品种；上述材料公众均可从华南农业大学农学院获得。
实施例1：大豆抗白粉病基因GmRmd1的克隆
本发明的发明人从大豆中分离克隆出一个大豆抗白粉病基因相关的基因GmRmd1，如序列表的序列1所示，将其编码蛋白命名为GmRmd1蛋白，如序列表的序列2所示。具体克隆方法如下：
用植物总RNA提取试剂盒(TR02，GeneMark)提取大豆材料B13叶片总RNA，经1％琼脂糖电泳检测其完整性；cDNA合成参照PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser试剂盒说明书操作。以上述cDNA为模板，以序列3和序列4(序列3： 5’-ATGGCTGCAACAACACGTTC-3’；序列4：5’-TTAGGCTAGATTGCCATACT-3’) 为引物，进行PCR扩增。按照以下组分顺序配置PCR反应液(50μl体系)：2×Phanta Max Buffer(25μl)，ddH2O(19μl)，dNTP Mix(1μl)，序列3引物F(2μl)，序列4引物 R(2μl)，cDNA(1μl)，Phanta Max Super-Fidelity DNAPolymerase(1μl)。扩增程序为： 95℃预变性3分钟，95℃变性15秒，56℃退火15秒，72℃延伸1分钟，共35个循环；然后72℃彻底延伸5分钟；4℃保存。
扩增结束后，将PCR产物纯化回收参照普通DNA产物纯化试剂盒(DP204，天根)，纯化回收后连接pLB载体(pLB零背景快速连接试剂盒，天根)，转化大肠杆菌TOP10，挑取单菌落摇菌测序，测序结果表明，该PCR扩增产物的核苷酸序列是序列表中序列1，其中序列1中的第474-667位为内含子序列，其于1926位为编码序列，其编码序列2所示的641位氨基酸组成的蛋白质GmRmd1；将序列表中序列1 所示的DNA命名为GmRmd1基因。
实施例2：大豆抗白粉病基因GmRmd1转基因大豆和基因编辑突变体的获得
1、载体的构建
植物表达载体的构建：用序列1的序列替代载体pTF101(BioVector NTCC典型培养物保藏中心)的XbaI位点与SacI位点之间的序列并保持其他序列不变，得到重组载体pTF101-GmRmd1，其结构如图1所示。
基因编辑载体的构建：将本发明的GmRmd1的供基因靶点(序列5)替换载体pGES201(Bai M,Yuan J,Kuang H,et al.Generation of a multiplex mutagenesispopulation via pooled CRISPR-Cas9 in soya bean.Plant Biotechnol J.2020；18(3):721-731. doi:10.1111/pbi.13239)中的靶点基因序列，得到重组载体pGES201-GmRmd1，其结构如图2所示。
2、用Bio-rad电击转化仪分别将重组载体pTF101-GmRmd1和pGES201-GmRmd1 转入农杆菌EHA105(BioVector NTCC Inc.)中，然后通过农杆菌EHA105介导的大豆子叶节转化法转化大豆(Li等Optimization of Agrobacterium-Mediated Transformation inSoybean.Front Plant Sci.2017；8:246.Published 2017Feb 24. doi:10.3389/fpls.2017.00246)。使用的培养基配方均与参考文献相同，具体如下：种子灭菌：选择均匀一致的大豆种子，用氯气灭菌12小时，置于超净工作台中吹净氯气后置于4℃冰箱保存备用。子叶节侵染：将含有重组质粒的EHA105菌种在YEP 固体培养基+壮观霉素(50mg/L)上划线，28℃培养36小时后挑取单菌落于YEP液体培养+壮观霉素(50mg/L)，220r/min、28℃过夜振荡培养后配置菌液侵染液。将灭菌的种子置于灭菌水中吸涨12小时后，在超净工作台中用手术刀进行子叶节划伤。待划伤完毕后，将划伤的子叶节置于菌液侵染液中侵染1小时。共培养：将侵染好的子叶节置于共培养培养基CCM上共培养5天，待子叶变为绿色。芽诱导：将共培养好的子叶转移至芽诱导培养基SI上培养15天后更换芽诱导培养基SI再次培养15天后可见丛生芽。芽伸长：将2次共培养后带有丛生芽的子叶外植体置于芽伸长培养基 SE中培养，其中以15天为一个培养周期。生根：待芽伸长至5cm左右时转移至生根培养基中培养至根部生长较大后转移至土壤中培养，直至收获到大豆种子。转基因株系鉴定：将收获的转基因种子播种于土壤中。待生长至第一次三出复叶时涂抹草铵膦进行转基因株系的阳性鉴定。
通过上述方法共获得2个独立的转基因株系(将重组载体pTF101-GmRmd1转入大豆华夏3号中)和4个基因编辑突变体(将重组载体pGES201-GmRmd1转大豆Young 中)；将2个转基因株系分别命名为Com-1和Com-2，将4个基因编辑突变体株系分别命名为ko-1，ko-2，ko-3和ko-4。
实施例3：大豆抗白粉病基因GmRmd1的功能验证
分别将实施例2制备的2个独立的转基因株系和4个基因编辑突变体、感病对照品种桂早1号和华夏3号(钟彩霞,钟开珍,赵云云,陈林,年海,马启彬,杨存义.巴西大豆资源及其在华南地区衍生品种的磷效率评价[J].中国油料作物学报,2013,35(02):162-170.)以及抗性对照材料Young接种白粉病菌，人工接种后15天开始表型观察，植株叶片表面分布白粉病菌的植株为易感植株，叶面无白粉病菌的植株为抗性植株。其中，接种方法为：在培养箱内采集布满白粉病菌的病叶，后用毛笔刷取病叶上的孢子，置于无菌水的烧杯中，搅拌均匀配制成大于1×105cfu/ml的孢子悬浮液后进行喷雾接种，人工接种时要确保每一株的顶部叶片完全湿润。
按照实施例1中的方法，分别以上述植株的叶片总RNA为模板，序列3和序列 4为引物，按照实施例1中的方法进行扩增，并对扩增结果进行测序，验证其知否含有GmRmd1基因，结果如表1所示。
表1不同大豆株系的白粉病抗性与GmRmd1基因之间的关系
抗白粉病表型 是否含有GmRmd1基因
Young 抗病 含有
桂早1号 感病 不含
华夏3号 感病 不含
Com-1 抗病 含有
Com-2 抗病 含有
ko-1 感病 不含
ko-2 感病 不含
ko-3 感病 不含
ko-4 感病 不含
从表1和图3-4中可以看出，本发明提供2个独立的转基因株系和4个基因编辑突变体，在人工接种后发现2个含有GmRmd1基因的独立转基因植株(Com-1和 Com-2)表现为白粉病菌抗性；不含GmRmd1基因的4个基因编辑纯合植株(ko-1， ko-2，ko-3和ko-4)表现为白粉病菌感性，感病对照品种桂早1号和华夏3号表现为白粉病菌感病并且不含GmRmd1基因，而抗性对照材料Young表现为白粉病菌抗病并含有GmRmd1基因。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。
序列表
<110> 华南农业大学
<120> 一种抗大豆白粉病基因GmRmd1及编码蛋白和应用
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 2120
<212> DNA
<213> 大豆(Glycine max)
<400> 1
atggctgcaa caacacgttc ccttccattc atctatgatg tgttcctcag cttcagaggg 60
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ataagttcac agtaataaac aatgcactga caacccccgg tggtgtgaga ttccgtgaca 1560
aaataggagc tgaatacgca aaccgaacac ttgagttggc cacccaattc gtatggagga 1620
tctttcagca aaaaaaccct tctgacagaa aaaatgtgca gaaggtgagc ttagtcgtgg 1680
atgacatgga gggtattgca tacactagga acaacgagat tcacgtgagt gcaagatatg 1740
ttaatgggta tagtggtggg gatgtgaaaa gagagatcac aggggtgctg tttcatcaag 1800
tttgctacgt ttggcagtgg tatgggaatg gtgaggctcc tggtggatta attggaggta 1860
ttgcagattt tgtgaggctg aaggcaaact atgcagccag tcattggaga aaaccagggc 1920
aaggacagag atgggatgag ggttatgata ttactgctca ttttttggat tattgtgatt 1980
ctctcaaaag tgggtttgtg gctcaactta accagttgat gaggactggt tatagtgatc 2040
agttcttcgt tcagttactg ggaaagccag ttgatcagct ctggcgagac tataaggccc 2100
agtatggcaa tctagcctaa 2120
<210> 2
<211> 641
<212> PRT
<213> 大豆(Glycine max)
<400> 2
Met Ala Ala Thr Thr Arg Ser Leu Pro Phe Ile Tyr Asp Val Phe Leu
1 5 10 15
Ser Phe Arg Gly Glu Asp Thr Arg Tyr Gly Phe Thr Gly Asn Leu Tyr
20 25 30
Arg Ala Leu Cys Glu Lys Gly Ile His Thr Phe Phe Asp Glu Glu Lys
35 40 45
Leu His Gly Gly Asp Glu Ile Thr Pro Ala Leu Ser Lys Ala Ile Gln
50 55 60
Glu Ser Arg Ile Ala Ile Thr Val Leu Ser Gln Asn Tyr Ala Phe Ser
65 70 75 80
Ser Phe Cys Leu Asp Glu Leu Val Thr Ile Leu His Cys Lys Ser Glu
85 90 95
Gly Leu Leu Val Ile Pro Val Phe Tyr Asn Val Asp Pro Ser Asp Leu
100 105 110
Arg His Gln Lys Gly Ser Tyr Gly Glu Ala Met Thr Lys His Gln Lys
115 120 125
Arg Phe Glu Ser Lys Met Glu Lys Leu Gln Lys Trp Arg Met Ala Leu
130 135 140
Lys Gln Val Ala Asp Leu Ser Gly His His Phe Lys Asp Gly Asp Ala
145 150 155 160
Tyr Glu Tyr Lys Phe Ile Gly Ser Ile Val Glu Glu Val Ser Arg Lys
165 170 175
Ile Asn Arg Ala Ser Leu His Val Pro Asp Tyr Pro Val Gly Leu Glu
180 185 190
Ser Gln Val Thr Asp Leu Met Lys Leu Leu Asp Val Gly Ser Asp Asp
195 200 205
Val Val His Ile Ile Gly Ile His Gly Met Arg Gly Leu Gly Lys Thr
210 215 220
Thr Leu Ala Leu Ala Val Tyr Asn Leu Ile Ala Leu His Phe Asp Glu
225 230 235 240
Ser Cys Phe Leu Gln Asn Val Arg Glu Glu Ser Asn Lys His Gly Leu
245 250 255
Lys His Leu Gln Ser Ile Leu Leu Leu Lys Leu Leu Gly Glu Lys Asp
260 265 270
Ile Asn Leu Thr Ser Trp Gln Glu Gly Ala Ser Met Ile Gln His Arg
275 280 285
Leu Arg Arg Lys Lys Val Leu Leu Ile Leu Asp Asp Ala Asp Arg His
290 295 300
Glu Gln Leu Lys Ala Ile Val Gly Arg Pro Asp Trp Phe Gly Pro Gly
305 310 315 320
Ser Arg Val Ile Ile Thr Thr Arg Asp Lys His Leu Leu Lys Tyr His
325 330 335
Gly Ile Glu Arg Thr Tyr Glu Val Lys Val Leu Asn His Asn Ala Ala
340 345 350
Leu Gln Leu Leu Thr Trp Asn Ala Phe Arg Arg Glu Lys Ile Asp Pro
355 360 365
Ser Tyr Glu His Val Leu Asn Arg Val Val Ala Tyr Ala Ser Gly Leu
370 375 380
Pro Leu Ala Leu Glu Val Ile Gly Ser His Leu Phe Glu Lys Thr Val
385 390 395 400
Ala Glu Trp Glu Tyr Ala Val Glu His Tyr Ser Arg Ile Pro Ile Asp
405 410 415
Glu Ile Val Asp Ile Leu Lys Val Ser Phe Asp Ala Thr Thr Gln Glu
420 425 430
Thr Gln Gly Tyr Lys Phe Thr Val Ile Asn Asn Ala Leu Thr Thr Pro
435 440 445
Gly Gly Val Arg Phe Arg Asp Lys Ile Gly Ala Glu Tyr Ala Asn Arg
450 455 460
Thr Leu Glu Leu Ala Thr Gln Phe Val Trp Arg Ile Phe Gln Gln Lys
465 470 475 480
Asn Pro Ser Asp Arg Lys Asn Val Gln Lys Val Ser Leu Val Val Asp
485 490 495
Asp Met Glu Gly Ile Ala Tyr Thr Arg Asn Asn Glu Ile His Val Ser
500 505 510
Ala Arg Tyr Val Asn Gly Tyr Ser Gly Gly Asp Val Lys Arg Glu Ile
515 520 525
Thr Gly Val Leu Phe His Gln Val Cys Tyr Val Trp Gln Trp Tyr Gly
530 535 540
Asn Gly Glu Ala Pro Gly Gly Leu Ile Gly Gly Ile Ala Asp Phe Val
545 550 555 560
Arg Leu Lys Ala Asn Tyr Ala Ala Ser His Trp Arg Lys Pro Gly Gln
565 570 575
Gly Gln Arg Trp Asp Glu Gly Tyr Asp Ile Thr Ala His Phe Leu Asp
580 585 590
Tyr Cys Asp Ser Leu Lys Ser Gly Phe Val Ala Gln Leu Asn Gln Leu
595 600 605
Met Arg Thr Gly Tyr Ser Asp Gln Phe Phe Val Gln Leu Leu Gly Lys
610 615 620
Pro Val Asp Gln Leu Trp Arg Asp Tyr Lys Ala Gln Tyr Gly Asn Leu
625 630 635 640
Ala
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
atggctgcaa caacacgttc 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ttaggctaga ttgccatact 20
<210> 5
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
atgaagagaa gcttcacggt gg 22

Claims (10)

1.蛋白质，是如下A1)、A2)或A3)的蛋白质：
A1)氨基酸序列是序列表中序列2的蛋白质；
A2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有90％以上的同一性且与植物抗白粉病相关的蛋白质；
A3)在A1)或A2)的N末端或/和C末端连接蛋白标签得到的融合蛋白质。
2.与权利要求1所述蛋白质相关的生物材料，为下述B1)至B9)中的任一种：
B1)编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子；
B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；
B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；
B4)含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物；
B5)含有B1)所述核酸分子的转基因植物细胞系、或含有B2)所述表达盒的转基因植物细胞系；
B6)含有B1)所述核酸分子的转基因植物组织、或含有B2)所述表达盒的转基因植物组织；
B7)含有B1)所述核酸分子的转基因植物器官、或含有B2)所述表达盒的转基因植物器官；
B8)降低权利要求1所述蛋白质表达的核酸分子；
B9)含有B8)所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因植物细胞系。
3.根据权利要求2所述的相关生物材料，其特征在于：B1)所述核酸分子为如下b1)或b2)所示的所述蛋白质的编码基因：
b1)编码序列是序列表中序列1的核苷酸的cDNA分子或DNA分子；
b2)核苷酸是序列表中序列1的的cDNA分子或DNA分子。
4.植物抗病剂，其特征在于：所述植物抗病剂含有权利要求1所述蛋白质、或/和权利要求2或3所述生物材料。
5.权利要求1所述蛋白质、或权利要求2或3所述生物材料的下述P1-P9中的任一种应用：
P1、权利要求1所述蛋白质、或权利要求2或3所述生物材料在调控植物白粉病抗性中的应用；
P2、权利要求1所述蛋白质、或权利要求2或3所述生物材料在制备提高植物抗白粉病性的产品中的应用；
P3、权利要求1所述蛋白质、或权利要求2或3所述生物材料在培育抗白粉病植物中的应用；
P4、权利要求1所述蛋白质、或权利要求2或3所述生物材料在制备植物抗白粉病产品中的应用；
P5、权利要求1所述蛋白质、或权利要求2或3所述生物材料在植物育种中的应用。
6.一种培育抗白粉病植物的方法，包括提高目的植物中权利要求1所述蛋白质或其编码基因的表达量，得到抗白粉病植物；所述抗白粉病植物的抗白粉病性高于所述目的种子植物的抗白粉病性。
7.一种培育抗白粉病性降低的转基因植物的方法，包括降低目的植物中权利要求1所述蛋白质的编码基因的表达，得到抗白粉病性低于所述目的植物的转基因植物。
8.根据权利要求4所述抗病剂，或权利要求5所述应用，或权利要求6或7所述的方法，其特征在于：权利要求4或5所述植物、权利要求6或权利要求7所述目的植物为单子叶植物或双子叶植物。
9.根据权利要求4所述抗病剂，或权利要求5所述应用，或权利要求6或7所述的方法，其特征在于：权利要求4或5所述植物、权利要求6或权利要求7所述目的植物为大豆。
10.根据权利要求6-8中任一所述的方法，其特征在于：所述提高目的植物中权利要求1所述蛋白质或其编码基因的表达量是通过将权利要求1所述蛋白质的编码基因导入所述目的植物实现的；
所述破坏目的植物中权利要求1所述蛋白质的编码基因的功能是通过利用CRISPR-Cas9介导的基因编辑技术对所述目的植物进行基因编辑实现的。
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