CN114751905A - 新的吡啶并嘧啶衍生物化合物、其药物组合物及其用途 - Google Patents

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CN114751905A CN202210592377.5A CN202210592377A CN114751905A CN 114751905 A CN114751905 A CN 114751905A CN 202210592377 A CN202210592377 A CN 202210592377A CN 114751905 A CN114751905 A CN 114751905A
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Abstract

本发明描述了结构由通式(IV)和通式(IV)表示的新的吡啶并嘧啶衍生物化合物：通式(IV)和通式(IV)或其药学上可接受的盐、或它们的混合物(以任何比率)、含有它们的药物组合物、以及它们在制备用于抑制环核苷酸合成的药物中的用途、在制备用于抑制cAMP和cGMP合成的药物中以及的用途及在制备用于预防性和/或治愈性治疗腹泻、结肠炎和肠易激综合征的药物中的用途。结果显示了通式(IV)和通式(IV)表示的新的吡啶并嘧啶衍生物化合物治疗肠道疾病的巨大治疗潜力，原因是无绝对生物利用率大大减少这些化合物展示某种全身毒性的可能性。

Description

新的吡啶并嘧啶衍生物化合物、其药物组合物及其用途
本申请是申请日为2015年09月11日，国际申请号PCT/BR2015/050147，国家申请号为201580048066.0，发明名称为“新的吡啶并嘧啶衍生物化合物”的申请的分案申请。
技术领域
本发明描述了新的吡啶并嘧啶衍生物化合物或其药学上可接受的盐，或它们的混合物(以任何比率)、一种含有它们的药物组合物、一种使用所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物作为环核苷酸合成抑制剂的方法、一种使用所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物作为cAMP和cGMP合成抑制剂的方法以及它们在预防性和/或治愈性治疗腹泻、结肠炎和肠易激综合征中的用途。
背景技术
根据联合国儿童基金会(United Nations Children's Fund，UNICEF)和世界卫生组织(WHO)，腹泻疾病是五岁以下儿童中死亡的第二主要原因和营养不良的主要原因。可以通过安全饮水和足够的公共卫生和个人卫生防止显著比例的腹泻疾病。
腹泻以排便频率与正常排便相比增加或粪便形成减少为特征。虽然排便频率的变化和粪便的疏松性可以彼此独立地变动，但是变化经常同时出现。
在大多数情况下，腹泻体征和症状通常持续几天。但是有时腹泻可以持续数周。在这些情况下，腹泻可能是严重疾病(如炎症性肠病)或严重程度较小疾病(如肠易激综合征)的体征。
腹泻可以是由寄生虫引起的传染性细菌疾病或病毒性疾病。腹泻也可以是由食物中毒、食品添加剂、食物过敏、吸收不良综合征(如谷蛋白或乳糖不耐受)、抗生素治疗、肠疾病(克罗恩氏病(Crohn's disease)、溃疡性结肠炎)等引起的非传染性腹泻。常见治疗是给予流体(fluids)以防止脱水并且继续进食，同时针对基本病因施用药物。
如果是由细菌引起的传染病，引起腹泻的大肠杆菌(Escherichia coli)(一种革兰氏阴性菌)的致病机理可能包括分泌热稳定毒素(STa)。
因此，本发明人努力开发环核苷酸合成的新的吡啶并嘧啶衍生物化合物抑制剂，该环核苷酸合成是由大肠杆菌的稳定毒素(STa)引起的。当STa与肠上皮细胞膜受体、C型鸟苷酰环化酶(GC-C)结合时，STa引起腹泻。这激活该酶以转化鸟苷三磷酸(GTP)成环鸟苷3',5'-单磷酸(cyclic guanosine 3',5'-monophosphate，cGMP)，造成cGMP胞内水平骤增。这转而诱导cGMP-依赖性蛋白激酶和氯离子通道(囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR))激活。CFTR的激活触发氯离子流入肠管腔及水和钠离子积累，因此造成腹泻。
国际公开号WO2008/008704描述了环核苷酸合成抑制剂及其治疗多种疾病的用途。
另一个类别的cAMP和cGMP合成抑制剂和环核苷酸合成抑制剂在TANI FUM[E.A.TANIFUM等人，“作为稳定的素毒(STa)诱导的cGMP合成的抑制剂的新的吡啶并嘧啶衍生物(Novel pyridopyrimidine derivatives as inhibitors of stable toxin a(STa)induced cGMP synthesis)”。生物有机化学与医药化学通讯(Bioorganic&MedicinalChemistry Letters)，2009，19:3067-3071]的出版物中描述。依据这份出版物，鉴定的最佳化合物之一是具有以下结构形式的化合物24(FPIPP)：
Figure BDA0003665938740000021
还根据TANI FUM[E.A.TANIFUM等人，“作为稳定的素毒(STa)诱导的cGMP合成的抑制剂的新的吡啶并嘧啶衍生物”。生物有机化学与医药化学通讯，2009，19:3061-3071]，开发有效对抗造成肠内流体失衡的生理学机制的药物将是治疗药物宝库中的有意义补充。
基于以上，本发明的发明人开发了可以用于治疗、预防或改善腹泻症状的新化合物，吡啶并嘧啶的新衍生物。
发明内容
本发明的主要目的是提供结构由通式(I)表示的新的吡啶并嘧啶衍生物化合物：
Figure BDA0003665938740000031
或其药学上可接受的盐，或它们的混合物(以任何比率)、一种含有它们的药物组合物、一种使用所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物作为环核苷酸合成抑制剂的方法、一种使用所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物作为cAMP和cGMP合成抑制剂的方法及它们在预防性和/或治愈性治疗腹泻、结肠炎和肠易激综合征中的用途。
在一些方面，本发明提供包含有效量所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物或其药学上可接受的盐或它们的混合物(以任何比率)作为有效成分和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
本发明的另一个目的是所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物、它们的药学上可接受的盐或它们的混合物(以任何比率)抑制环核苷酸合成的用途。另外，本发明的目的是所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物、它们的药学上可接受的盐或它们的混合物(以任何比率)之一抑制cAMP和cGMP合成的用途。
本发明的目的还是所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物、它们的药学上可接受的盐或它们的混合物(以任何比率)之一在预防性和/或治愈性治疗腹泻、结肠炎和肠易激综合征中的用途。
附图说明
图1：化合物II、IV、VI、VIII和X对T84细胞中STa(1μM)引起的cGMP积累的影响
图2：化合物I、III、V和XII对T84细胞中STa(1μM)引起的cGMP积累的影响
图3：化合物VII对T84细胞中STa(1μM)引起的cGMP积累的影响
图4：化合物IX对T84细胞中STa(1μM)引起的cGMP积累的影响
图5：化合物XI对T84细胞中STa(1μM)引起的cGMP积累的影响
具体实施方式
本发明描述了结构由通式(I)表示的新的吡啶并嘧啶衍生物化合物：
Figure BDA0003665938740000041
或其药学上可接受的盐，或它们的混合物(以任何比率)，其中：
R1选自由C1-6烷基、氨基C1-6烷基、二甲基氨基C1-6烷基、卤代C1-6烷基、胍基C1-6烷基和巯基C1-6烷基组成的组；
R2选自由4-(三氟甲基)噻吩、3-氟-5-三氟甲基苯基、3,5-双三氟甲基苯基、1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基、1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基、2,1,3-苯并噻二唑-4-基、2,1,3-苯并噻二唑-5-基和取代的芳基组成的组，其中取代基选自由C1-6烷氧基、卤素、C1-6杂芳烷基或C2-6杂芳烯基组成的组；并且
X选自由O、S和Se组成的组。
如上文所用并且贯穿本申请，除非另外说明，否则以下术语应当理解成具有以下含义：
术语“烷基”代表直链、支链或环状烷基链，例如，C1-6烷基可以是甲基、乙基、丙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。
术语“链烯基”包括直链、支链或环状链的链烯基，如，烯丙基、苄基、乙烯基、苯乙烯基、吲哚基等。术语“酰氨基”表示氨基的任何酰基衍生物，如乙酰氨基、苯甲酰胺基等。
术语“芳基”指衍生自芳环的任何官能团或取代基，例如，苯基、萘基、噻吩基、吲哚基等。
术语“卤素或卤代”表示氟、氯、溴或碘原子。
术语“患者”是人类或非人类哺乳动物。在一个实施方案中，患者是人类。在另一个实施方案中，患者是非人类哺乳动物，包括但不限于猴、犬、猫、狒狒、恒河猴、小鼠、大鼠、马、兔、牛等。
如本文所用的术语“有效量”指新的吡啶并嘧啶衍生物化合物或其药物组合物的量，所述量在施用至患有疾病的患者时有效产生想要的治疗、改善、抑制或预防作用。
在一个优选的实施方案中，本发明的化合物具有通式(I)表示表示的结构、或其药学上可接受的盐，或它们的混合物(以任何比率)，其中：
R1是选自由甲基、乙基、丙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基组成的组的C1-6烷基；
R2选自：由4-(三氟甲基)噻吩、3-氟-5-三氟甲基苯基、3,5-双三氟甲基苯基、1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基、1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基、2,1,3-苯并噻二唑-4-基和2,1,3-苯并噻二唑-5-基组成的组；并且
X表示O或S。
在一个更优选的实施方案中，本发明的化合物具有通式(I)表示的结构、或其药学上可接受的盐，或它们的混合物(以任何比率)，其中：
R1是甲基或乙基；
R2选自：由4-(三氟甲基)噻吩、3-氟-5-三氟甲基苯基、3,5-双三氟甲基苯基、1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基、1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基、2,1,3-苯并噻二唑-4-基和2,1,3-苯并噻二唑-5-基组成的组；并且
X是O或S。
具体地说，优选的化合物是如实施例中作为单独的化合物所描述的通式(I)的化合物以及其药学上可接受的盐。优选的取代基是表1中描述的具体实施例的那些取代基。
表1
Figure BDA0003665938740000071
Figure BDA0003665938740000081
优选的通式(I)化合物是选自由以下化合物组成的组的那些：
-化合物I：(5-(4-三氟甲基噻吩)-1,3-二甲基-5,11-二氢-1H-茚并-[2',1':5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,6-三酮，其化学结构是：
Figure BDA0003665938740000082
-化合物II：5-(4-三氟甲基噻吩)-1,3-二甲基-5,11-二氢-1H-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-硫代-4,6-二酮，其化学结构是
Figure BDA0003665938740000091
-化合物III：5-(3-氟-5-三氟甲基苯基)-1,3-二甲基-5,11-二氢-1H-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-硫代-4,6-二酮，其化学结构是
Figure BDA0003665938740000092
-化合物IV：5-(3-氟-5-三氟甲基苯基)-1-乙基-3-甲基-5,11-二氢-1H-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,6-三酮
Figure BDA0003665938740000093
-化合物V：5-(3,5-双三氟甲基苯基)-1,3-二甲基-5,11-二氢-1H-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-硫代-4,6-二酮，其化学结构是：
Figure BDA0003665938740000094
-化合物VI：5-(3,5-双三氟甲基苯基)-1-乙基-3-甲基-5,11-二氢-1H-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,6-三酮，其化学结构是：
Figure BDA0003665938740000101
-化合物VII：5-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基)-1,3-二甲基-5,11-二氢-1H-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,6-三酮，其化学结构是：
Figure BDA0003665938740000102
-化合物VIII：5-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-4-基)-1,3-二甲基-5,11-二氢-1H-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-硫代-4,6-二酮，其化学结构是：
Figure BDA0003665938740000103
-化合物IX：5-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)-1,3-二甲基-5,11-二氢-1H-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,6-三酮，其化学结构是：
Figure BDA0003665938740000104
-化合物X：5-(2,1,3-苯并噻二唑-4-基)-1,3-二甲基-5,11-二氢-1H-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,6-三酮，其化学结构是：
Figure BDA0003665938740000111
-化合物XI：5-(2,1,3-苯并噻二唑-5-基)-1,3-二甲基-5,11-二氢-1H-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,6-三酮，其化学结构是：
Figure BDA0003665938740000112
-化合物XII：5-(2,1,3-苯并噻二唑-5-基)-1,3-二甲基-5,11-二氢-1H-茚并-[2’,1’:5,6]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-硫代-4,6-二酮，其化学结构是：
Figure BDA0003665938740000113
及它们药学上可接受的盐。
所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物可以形成也在本发明范围内的药学上可接受的盐。
本发明的通式(I)化合物的药学上可接受的盐的例子是与无机酸如氢氯酸、硫酸、硝酸、磷酸、氢氟酸、氢溴酸等形成的盐，与有机酸如甲酸、乙酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、延胡索酸、马来酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘磺酸、樟脑磺酸等形成的盐，和与碱金属或碱土金属如钠、钾、钙等形成的盐。
可以通过以下一般合成途径制备根据本发明的新的吡啶并嘧啶衍生物化合物。
一般合成途径
材料和方法
5-(三氟甲基)噻吩-3-甲醛(5-(trifluoromethyl)thiophene-3-carbaldehyde)购自奥罗拉基础材料(Aurora Building Blocks)，1-乙基-3-甲基脲购自阿克斯基础材料(AKos Building Blocks)并且全部其他商品已经购买自西格玛奥瑞奇(Sigma Aldrich)。全部反应均通过TLC(薄层色谱法)追踪，在含有荧光指示剂的默克(Merck)硅凝胶60F254板上实施并且该板已经用紫外线(254nm)可视化。已经使用硅胶柱(Kieselgel 60)进行制备性柱色谱纯化。溶液已经用布奇(Büchi)旋转蒸发器在低压力下浓缩。使用Buchi熔点B-540仪测定的熔点未校正并且表示对重结晶或色谱纯化的材料所获得的值。已经通过API2000应用生物系统(Applied Biosystems)质谱仪上进行的电喷雾电离质谱法(ESI/MS)评定中间体和最终化合物的分子量。1H-NMR谱已经记录在瓦里安(Varian)Mercury Plus 400MHz仪上。全部波谱已经均在DMSO-d6中记录。当适宜时，以下缩写用来描述峰型：s(单峰)、bs(宽单峰)、d(二重峰)、dd(双二重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)。
一般步骤
合成的一般步骤基于HANTZSCH和AGARWAL，二氢吡啶三组分环化法[A.HANTZSC，“醛氨和酮类化合物的缩聚产物(Condensationsprodukte aus Aldehydammoniak undketonartigen Verbindungen)”，化学学报(Chem.Ber.)，1881，14:1637-1638]和[A.AGARWAL等人，“关于在与6-氨基-1,3-二甲基尿嘧啶的一步法hantzch合成中异常脱芳基化/烷基化的第一次报告(First Report on the abnormal dearylation/alkylationreaction in one-pot hantzch synthesis with6-Amino-1,3-Dimethyl Uracil)”，合成通讯(Synthetic Communications)，2004，34:4447-4461]。具体地说，伯胺(c)(无市售时合成)(实施例中描述合成步骤)与醛(b)(无市售时合成)和1,3-茚二酮(a)在乙酸中的反应提供所需的通式(I)化合物。
所述的通式(I)新的吡啶并嘧啶衍生物化合物已经遵循以下总体方案中描述的一般合成途径合成。
总体方案
Figure BDA0003665938740000131
以下实施例更详细地描述本发明。应当指出本发明不受以下实施例限制。
实施例1：
化合物I的制备
5-(三氟甲基)噻吩-3-甲醛的合成：
遵循宾德尔(BINDER)先前发表的步骤获得化合物5-(三氟甲基)噻吩-3-甲醛(5-(trifluoromethyl)thiophene-3-carbaldehyde)[D.BINDER等人，“噻吩作为生理学活性物质的结构单元(Thiophen als Strukturelement physiologisch aktiver Substanzen)”，药物文献(Arch.Pharm)，(魏因海姆(Weinheim))1985，318:243-249]。将20mL DIBAL在正己烷中的20％溶液在30分钟期间在低于-45℃的温度在N2气氛下逐滴添加至3.1g(17.5mmol)5-(三氟甲基)噻吩-3-甲腈在32.0mL无水醚中的溶液。随后将混合物在-30℃搅拌45分钟并且接着添加3次5％H2SO4溶液(3.0mL)，并且用二乙醚提取水相。在MgSO4上干燥合并的有机相。将溶剂蒸发，以获得作为油的所需化合物，不作进一步纯化，并且提出ESI-MS(Mw179.99)：180.8(M+H+)。1H-NMR(DMSO-d6)：δ9.95(s,1H),8.35(s,1H),7.95(s,1H)。
化合物I的合成
向圆底烧瓶中的乙酸(15mL)添加(a)1,3-茚二酮(0.56g，3.83mmol)、(b)5-(三氟甲基)噻吩-3-甲醛(0.697g，3.93mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基尿嘧啶(0.5g，3.22mmol)。将混合物在氮气氛下回流加热8小时。随后将它冷却至0℃。过滤所得到的沉淀物并用冷水淋洗以获得粗产物。在硅胶柱上的纯化(CH2Cl2/CH3OH，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物I。
熔点：265℃
ESI-MS(Mw 445.07)：445.9(M+H+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ9.87(s,1H,NH),7.87(d,1H),7.63(s,1H),7.59(d,1H),7.48(t,1H),7.36(m,2H),4.88(s,1H),3.55(s,3H),3.13(s,3H)。
方案1
Figure BDA0003665938740000141
实施例2：
化合物II的制备
6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氢嘧啶-4(1H)-酮的合成。
遵循胡(HU)先前发表的方法[S.HU等人，“单胺氧化酶B上8-(取代的苯乙烯-甲酰胺)苯基-黄嘌呤衍生物的设计、合成和抑制活性(Design,Synthesis and inhibitoryactivities of 8-(Substituted styrol-formamido)phenyl-xanthine derivatives onmonoamine oxidase B)”，化学药物通报(Chem.Pharm.Bull.)，2012，60(3)：385-390](适当地修改)，获得化合物6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氢嘧啶-4(1H)-酮。
向1,3-二甲基硫脲(1.83g，17.57mmol)在乙酸酐(30mL)中的搅拌溶液添加氰基乙酸(1.5g，1.76mmol)，并且将所产生的混合物在70℃搅拌过夜。将反应混合物浓缩并且将所产生的油质残余物用H2O(40mL)稀释并用5N NaOH(15mL)处理。通过过滤法收集如此形成的沉淀物，用冷水洗涤和通过从MeOH/H2O重结晶而纯化，以产生6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氢嘧啶-4(1H)-酮。
熔点：289℃。
ESI-MS(Mw 171.05)：172.1(M+H+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.01(s,2H,NH2),5.01(s,1H),3.74(s,3H),3.50(s,3H)。
化合物II的合成
通过(a)1,3-茚二酮(170mg，1.16mmol)、(b)5-(三氟甲基)噻吩-3-甲醛(209mg，1.18mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氢嘧啶-4(1H)-酮(166mg，0.97mmol)反应，采用实施例1中对化合物I所述的相同方法获得化合物II。将混合物在氮气氛下回流加热8小时。随后将它冷却至0℃。过滤所得到的沉淀物并用冷水淋洗以获得粗产物。在硅胶柱上的纯化(CH2Cl2/CH3OH，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物II。
熔点：178℃。
ESI-MS(Mw 461.05)：461.9(M+H+)；483.9(M+Na+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ10.09(s,1H,NH),7.87(bs,1H),7.66(bs,1H),7.60(s,1H),7.49(bs,1H),7.37(m,2H),4.96(s,1H),4.07(s,3H),3.58(s,3H)。
方案2
Figure BDA0003665938740000151
实施例3：
化合物III的制备
化合物III的合成
通过(a)1,3-茚二酮(1.11g，7.57mmol)、(b)3-氟-5-三氟甲基苯甲醛(1.46g，7.60mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氢嘧啶-4(1H)-酮(1.08g，6.30mmol)反应，采用实施例1中对化合物I所述的相同方法获得化合物III。将混合物在氮气氛下回流加热8小时。随后将它冷却至0℃。过滤所得到的沉淀物并用冷水淋洗以获得粗产物。在硅胶柱上的纯化(CH2Cl2/CH3OH，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物III。
熔点：313℃
ESI-MS(Mw 473.08)：474.1(M+H+)；496.0(M+Na+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ10.12(s,1H,NH),8.05(d,1H),7.66(s,1H),7.56(s,1H),7.51(d,1H),7.43(t,1H),7.35(t,1H),7.28(s,1H),4.96(s,1H),4.08(s,3H),3.53(s,3H)。
方案3
Figure BDA0003665938740000161
实施例4：
化合物IV的制备
6-氨基-1-乙基-3-甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。
遵循胡(HU)先前发表的方法[S.HU等人，“单胺氧化酶B上8-(取代的苯乙烯-甲酰胺)苯基-黄嘌呤衍生物的设计、合成和抑制活性(Design,Synthesis and inhibitoryactivities of 8-(Substituted styrol-formamido)phenyl-xanthine derivatives onmonoamine oxidase B)”，化学药物通报(Chem.Pharm.Bull.)，2012，60(3)：385-390](适当地修改)，获得化合物6-氨基-1-乙基-3-甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。
向1-乙基-3-甲基脲(1.36g，13.3mmol)在乙酸酐(30mL)中的搅拌溶液添加氰基乙酸(1.13g，1.33mmol)，并且将所产生的混合物在70℃搅拌过夜。将反应混合物浓缩并且将所产生的油质残余物用H2O(40mL)稀释并用5N NaOH(15mL)处理。通过过滤法收集如此形成的沉淀物，用冷水洗涤和通过从MeOH/H2O重结晶而纯化，以产生1.91g 6-氨基-1-乙基-3-甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮。
熔点：232℃。
ESI-MS(Mw 169.09)：170.1(M+H+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ6.76(s,2H,NH2),4.64(s,1H),3.80(q,2H),3.29(s,3H),1.08(t,3H)。
化合物IV的合成
通过(a)1,3-茚二酮(970mg，6.64mmol)、(b)3-氟-5-三氟甲基苯甲醛(1.27g，6.61mmol)和(c)6-氨基-1-乙基-3-甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(936mg，5.53mmol)反应，采用实施例1中对化合物I所述的相同方法获得化合物IV。将混合物在氮气氛下回流加热8小时。随后将它冷却至0℃。过滤所得到的沉淀物并用冷水淋洗以获得粗产物。在硅胶柱上的纯化(CH2Cl2/CH3OH，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物IV。
熔点：177℃。
ESI-MS(Mw 471.12)：471.9(M+H+)；498.8(M+Na+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ9.81(s,1H,NH),7.94(d,1H),7.49(m,3H),7.40(d,1H),7.33(t,1H),7.27(t,1H),4.91(s,1H),4.26(m,2H),3.10(s,3H),1.24(t,3H)。
方案4
Figure BDA0003665938740000171
实施例5：
化合物V的制备
化合物V的合成
通过(a)1,3-茚二酮(503mg，3.44mmol)、(b)3,5-双三氟甲基苯甲醛(833mg，3.44mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氢嘧啶-4(1H)-酮(490mg，2.86mmol)反应，采用实施例1中对化合物I所述的相同方法获得化合物V。将混合物在氮气氛下回流加热8小时。随后将它冷却至0℃。过滤所得到的沉淀物并用冷水淋洗以获得粗产物。在硅胶柱上的纯化(CH2Cl2/CH3OH，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物V。
熔点：314℃。
ESI-MS(Mw 523.08)：524.0(M+H+)；546.1(M+Na+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ10.14(s,1H,NH),8.08(d,1H),7.97(s,2H),7.87(s,1H),7.53(t,1H),7.37(t,1H),7.27(d,1H),5.06(s,1H),4.08(s,3H),3.51(s,3H)。
方案5
Figure BDA0003665938740000181
实施例6：
化合物VI的制备
化合物VI的合成
通过(a)1,3-茚二酮(708mg，4.84mmol)、(b)3,5-双三氟甲基苯甲醛(1.17g，4.83mmol)和(c)6-氨基-1-乙基-3-甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(683mg，4.04mmol)反应，采用实施例1中对化合物I所述的相同方法获得化合物VI。将混合物在氮气氛下回流加热8小时。随后将它冷却至0℃。过滤所得到的沉淀物并用冷水淋洗以获得粗产物。在硅胶柱上的纯化(CH2Cl2/CH3OH，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物VI。
熔点：166℃。
ESI-MS(Mw 521.12)：522.1(M+H+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ9.87(s,1H,NH),7.94(bs,3H),7.88(s,1H),7.50(t,1H),7.37(t,1H),7.30(d,1H),5.03(s,1H),4.32(m,2H),3.09(s,3H),1.24(t,3H)。
方案6
Figure BDA0003665938740000191
实施例7：
化合物VII的制备
2,3-亚甲二氧基)苯甲醛的合成
遵循德沃(DEVEAU)先前发表的方法获得化合物2,3-亚甲二氧基)苯甲醛[A.M.DEVEAU、T.L.MACDONALD“通过在水中与与无配体钯Suzuki交叉偶联实际合成含有3',4'-邻苯二酚醚基A-环的联芳基秋水仙素(Practical synthesis ofbiarylcolchicinoids containing 3',4'-catechol ether-based A-rings via Suzukicross-coupling with ligandless palladium in water)”，四面体通讯(TetrahedronLetters)，2004，45:803-807]。
向配备有回流冷凝器的火焰干燥的平底烧瓶依次添加2,3-二羟苯甲醛(1g；7.24mmol)、DMF(干的，30mL)和碳酸铯(1.5eq)。在彻底混合后，借助注射器添加二溴甲烷(1.5eq)。将混合物在110℃加热2小时，随后冷却至室温。通过一层硅藻土过滤后，将滤饼用EtOAc淋洗。将所得到的有机滤液浓缩，用水稀释，并且用EtOAc提取三次。将合并的有机相用水洗涤，在MgSO4上干燥并浓缩，获得良好产率的粗制油。通过快速色谱和球管(kugelrohr)蒸馏纯化粗制黄色油提供了所需的醛，所述的醛在冷却时形成无色半透明晶体。
熔点：35℃。
ESI-MS(Mw 150.03)：151.1(M+H+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ10.35(s,1H),7.51(dd,1H),7.24(dd,1H),7.16(dd,1H),6.36(s,2H)。
化合物VII的合成
通过(a)1,3-茚二酮(1.61g，11.02mmol)、(b)2,3-(亚甲二氧基)苯甲醛(1.66g，11.06mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基尿嘧啶(1.43g，9.22mmol)反应，采用实施例1中对化合物I所述的相同方法获得化合物VII。将混合物在氮气氛下回流加热8小时。随后将它冷却至0℃。过滤所得到的沉淀物并用冷水淋洗以获得粗产物。在硅胶柱上的纯化(CH2Cl2/CH3OH，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物VII。
熔点：300℃.
ESI-MS(Mw 415.12)：416.0(M+H+)；438.0(M+Na+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ9.88(s,1H,NH),7.83(d,1H),7.45(t,1H),7.32(t,1H),7.24(d,1H),6.73(t,1H),6.66(d,2H),5.90(d,2H),4.81(s,1H),3.56(s,3H),3.08(s,3H)。
方案7
Figure BDA0003665938740000201
实施例8：
化合物VIII的制备
化合物VIII的合成
通过(a)1,3-茚二酮(535mg，3.66mmol)、(b)2,3-(亚甲二氧基)苯甲醛(549mg，3.66mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氢嘧啶-4(1H)-酮(521mg，3.05mmol)反应，采用对化合物I所述的相同方法获得化合物VIII。将混合物在氮气氛下回流加热8小时。随后将它冷却至0℃。过滤所得到的沉淀物并用冷水淋洗以获得粗产物。在硅胶柱上的纯化(CH2Cl2/CH3OH，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物VIII。
熔点：310℃。
ESI-MS(Mw 431.09)：432.0(M+H+)；453.9(M+Na+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ10.11(s,1H,NH),7.83(d,1H),7.47(t,1H),7.34(t,1H),7.27(d,1H),6.77(bs,1H),6.68(bs,2H),5.93(d,2H),4.88(s,1H),4.08(s,3H),3.53(s,3H)。
方案8
Figure BDA0003665938740000211
实施例9：
化合物IX的制备
3,4-(亚甲二氧基)苯甲醛的合成
遵循波里(POLI)先前发表的方法获得化合物3,4-(亚甲二氧基)苯甲醛[G.POLI、G.GIANBASTIANI，“通过钯催化的假多米诺环化的Epiisopicropodophyllin硫唑嘌呤类似物(An Epiisopicropodophyllin aza analogue via Palladium-catalyzed pseudo-domino cyclization)”，有机化学期刊(J.Org.Chem.)，2002，67:9456-9459]。
向胡椒基醇(10g，65.73mmol)在CH2Cl2(250mL)中的溶液按一个部分添加MnO2(49.3g，567.32mmol)。将所产生的深色悬液在室温搅拌24小时，并且随后经硅藻土垫(celite pad)过滤，所述硅藻土垫用CH2Cl2洗涤。在真空中移除溶剂并且所产生的粗制晶态浅黄色固体在不作进一步纯化的情况下使用，
熔点：338℃
ESI-MS(Mw 150.03)：151.1(M+H+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ9.80(s,1H),7.40(m,2H),6.92(d,1H),6.07(s,2H)。
化合物IX的合成：
通过(a)1,3-茚二酮(203mg，1.39mmol)、(b)3,4-(亚甲二氧基)苯甲醛(209mg，1.39mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基尿嘧啶(180mg，1.16mmol)反应，采用实施例1中对化合物I所述的相同方法获得化合物IX。将混合物在氮气氛下回流加热8小时。随后将它冷却至0℃。过滤所得到的沉淀物并用冷水淋洗以获得粗产物。在硅胶柱上的纯化(CH2Cl2/CH3OH，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物IX。
熔点：338℃。
ESI-MS(Mw 415.12)：416.0(M+H+)；437.9(M+Na+)；453.9(M+K+).
1H-NMR(DMSO-d6)：δ9.79(s,1H,NH),7.98(d,1H),7.46(t,1H),7.33(t,1H),7.27(d,1H),6.81(s,1H),6.72(bs,2H),5.89(s,2H),4.69(s,1H),3.57(s,3H),3.10(s,3H)。
方案9
Figure BDA0003665938740000221
实施例10：
化合物X的制备
2,1,3-苯并噻二唑-4-甲醛(2,1,3-benzothiadiazol-4-caboxaldehyde)的合成遵循VANELLE先前发表的方法获得化合物2,1,3-苯并噻二唑-4-甲醛(2,1,3-benzothiadiazol-4-caboxaldehyde)[P.VANELLE、C.T.LLEGEOLS、J.MEUCHE、J.MALDONADO、M.P.CROZET，“一种用于合成新的硝基苯并噻二唑衍生物的创新方式(An original wayfor synthesis of new nitrobenzothiadiazole derivatives)”，杂环化合物(Heterocycles)，1997，45(5):955-962]。
将2-硝基丙烷的锂盐(2.48g，27.84mmol)添加至4-溴甲基-2,1,3-苯并噻二唑(5.82g，25.40mmol)在甲醇(60mL)中的溶液。在室温(大约25℃)搅拌24小时后，在旋转蒸发器上在降低的压力下蒸馏去甲醇。将残余物溶解于二氯甲烷中，并用水洗涤溶剂，在无水硫酸镁上干燥，在真空下蒸发。通过从环己烷重结晶而纯化后，获得作为黄色固体的2,1,3-苯并噻二唑-4-甲醛。
熔点：99℃。
ESI-MS(Mw 164.18)：165.2(M+H+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ10.60(s,1H),8.43(d,1H),8.27(d,1H),7.91(t,1H)。
化合物X的合成
通过(a)1,3-茚二酮(420mg，2.87mmol)、(b)2,1,3-苯并噻二唑-4-甲醛(471mg，2.87mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基尿嘧啶(359mg，2.31mmol)反应，采用实施例1中对化合物I所述的相同方法获得化合物X。将混合物在氮气氛下回流加热8小时。随后将它冷却至0℃。过滤所得到的沉淀物并用冷水淋洗以获得粗产物。在硅胶柱上的纯化(CH2Cl2/CH3OH，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物X。
熔点：331℃。
ESI-MS(Mw 429.09)：430.1(M+H+)；452.0(M+Na+)；467.9(M+K+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ10.08(s,1H,NH),7.88(d,1H),7.62(d,3H),7.50(t,1H),7.32(t,1H),7.23(d,1H),5.46(s,1H),3.64(s,3H)，3.01(s,3H)。
方案10
Figure BDA0003665938740000231
实施例11：
化合物XI的制备
2,1,3-苯并噻二唑-5-甲醛(2,1,3-benzothiadiazol-5-caboxaldehyde)的合成
遵循卡罗尔(CARROLL)先前发表的方法获得化合物2,1,3-苯并噻二唑-5-甲醛[W.A.CARROLL等人，“合成和结构-一系列新的2,3,5,6,7,9-六氢噻吩并[3,2-b]喹啉-8(4H)-酮1,1-二氧化物KATP通道开放剂：(-)-(9S)-9-(3-溴-4-氟苯基)-2,3,5,6,7,9-六氢噻吩并[3,2-b]喹啉-8(4H)-酮1,1-二氧化物(Α-278637)的发现，有效的KATP开放剂选择性抑制自主膀胱收缩(Synthesis and Structure-Activity relationships of a novelseries of 2,3,5,6,7,9-hexahydrothieno[3,2-b]quinolin-8(4H)-one 1,1-dioxideKATP channel openers:Discovery of(-)-(9S)-9-(3-bromo-4-fl uorophenyl)-2,3,5,6,7,9-hexahydrothieno[3,2-b]quinlin-8(4H)-one 1,1-Dioxide(Α-278637),a PotentKATP Opener that selectively inhibits spontaneous bladder contractions)”，医药化学期刊(J.Med.Chem.)，2004，47:3163-3179]。
将CHCl3(150mL)中的5-羟甲基苯并-2,1,3-噻二唑(2.6g，16mmol)和MnO2(5.6g，64.41mmol)在室温搅拌(大约25℃)过夜。过滤反应混合物并蒸发滤液。将粗制残余物进行硅胶上色谱(EtOAc/己烷，7/3，v/v)以提供1.9g 2,1,3-苯并噻二唑-5-甲醛。熔点：93℃。
ESI-MS(Mw164.18)：165.2(M+H+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：10.21(s,1H),8.78(d,1H),8.19(d,1H),8.04(s,1H)。
化合物XI的合成
通过(a)1,3-茚二酮(468mg，3.20mmol)、(b)2,1,3-苯并噻二唑-5-甲醛(525mg，3.20mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基尿嘧啶(415mg，2.67mmol)反应，采用实施例1中对化合物I所述的相同方法获得化合物XI。将混合物在氮气氛下回流加热8小时。随后将它冷却至0℃。过滤所得到的沉淀物并用冷水淋洗以获得粗产物。在硅胶柱上的纯化(CH2Cl2/CH3OH，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物XI。
熔点：358℃。
ESI-MS(Mw 429.09)：430.1(M+H+)；452.1(M+Na+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ9.92(s,1H,NH),7.93(m,3H),7.77(d,1H),7.47(t,1H),7.33(t,1H),7.26(d,1H),4.99(s,1H),3.61(s,3H)，3.08(s,3H)。
方案11
Figure BDA0003665938740000251
实施例12：
化合物XII的制备
化合物XII的合成：
通过(a)1,3-茚二酮(456mg，3.12mmol)、(b)2,1,3-苯并噻二唑-5-甲醛(512mg，3.12mmol)和(c)6-氨基-1,3-二甲基-2-硫代-2,3-二氢嘧啶-4(1H)-酮(445mg，2.60mmol)反应，采用实施例1中对化合物I所述的相同方法获得该化合物。将混合物在氮气氛下回流加热8小时。随后将它冷却至0℃。过滤所得到的沉淀物并用冷水淋洗以获得粗产物。在硅胶柱上的纯化(CH2Cl2/CH3OH，9.5/0.5，v/v)提供所需化合物XII。
熔点：362℃。
ESI-MS(Mw 445.07)：446.0(M+H+)；468.0(M+Na+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ10.14(s,1H,NH),7.96(m,3H),7.80(d,1H),7.48(t,1H),7.34(t,1H),7.27(d,1H),5.04(s,1H),4.11(s,3H),3.51(s,3H)。
方案12
Figure BDA0003665938740000252
在一些方面，本发明还提供药物组合物，例如，适当的剂型，其中所述组合物包含有效量的结构由通式(I)表示的一种或多种化合物、或其药学上可接受的盐，或它们的混合物(以任何比率)作为有效成分；和药学上可接受的赋形剂。
根据本发明，通过任何适当的途径施用药物组合物，例如，通过口服、舌下、直肠、阴道、经鼻、腹膜内或胃肠道外途径施用，但不限于这些例子。优选的途径是口服。
用于口服施用的药物组合物可以按多样的药物形式呈现，如，但不限于：(i)片剂，任选地包衣、可咀嚼、泡腾、多层或可分散片剂；(ii)丸剂；(iii)粉剂，任选地可分散粉剂或泡腾粉剂；(iv)胶囊剂、任选地硬质凝胶胶囊剂、软质或淀粉质凝胶胶囊剂；(v)糖锭；(vi)颗粒剂，任选地以微粒子、微胶囊、或载体化制剂形式，如脂质体；(vii)栓剂；(viii)溶液剂；(ix)糖浆剂；(x)混悬剂；(xi)注射剂；和其他。
根据本发明，药物组合物作为环核苷酸合成的抑制剂使用。在另一个实施方案中，药物组合物作为cAMP和cGMP合成的抑制剂使用。
根据本发明，药物组合物用于预防性和/或治愈性治疗腹泻、结肠炎和肠易激综合征。
根据本发明，可以通过现有技术熟知的方法制备药物组合物。适当地，雷明顿药学大全(Remington's Pharmaceutical Sciences)或相似信息源可以用来制备根据本发明的合适制剂。
测试的化合物
实施例13：
在T84细胞中由毒素STa诱导的刺激鸟苷酰环化酶-C的方案
a)细胞生长
来自T84系(ATCC CCL-248)的细胞根据供应商的说明继代培养。简而言之，在使用3mL 0.25％胰蛋白酶溶液(w/v)和0.53mM EDTA溶液洗涤培养瓶(75cm2)以移除痕量血清后，添加相同体积的胰蛋白酶至每个瓶中，并且在显微镜下观察细胞直至细胞层脱离(通常8-10分钟)。
准备分析平板(12孔板)，此后添加补充有10％胎牛血清和青霉素-链霉素(50IU/mL:50μg/mL)的8mL培养基(DMEM-F12)后，在2000rpm离心细胞匀浆5分钟(在25℃)。
借助1mL与真空泵连接的移液管，吸出上清液并将细胞用培养基重悬(采用必需体积维持比率1:4，即1个培养瓶衍生4块12孔板)。在细胞均匀化后，借助移液管，将2mL细胞悬液添加至平板的每个孔。生长在培养箱中受控条件下(37℃，5％CO2气氛)进行直至每个孔汇合(一般8-10天)。
b)方法
起初，使用1mL与真空泵连接的移液管吸出培养基，并且使用1mL与真空泵接合的移液管，将细胞用0.5mL杜尔贝科磷酸盐缓冲盐水(DPBS；37℃)洗涤至少3次。依次，将0.5mLDPBS在1-甲基(metil)-3-异丁基黄嘌呤(1mM)、二甲基亚砜(0.1％v/v)和测试化合物存在和/或不存下添加并且在温箱(37℃，5％CO2气氛)中温育10分钟。
在温育期后，细胞用STa毒素(1μΜ，5μL)刺激并在培养箱(37℃，5％CO2气氛)中温育10分钟。在刺激期后，使用与真空泵连接的1mL移液管吸出上清液体积，并且在振荡器型“摇床”(Lab-line仪器(Lab-line Instruments)，型号4625)中恒定搅拌(速度4)下通过添加氢氯酸溶液0.1M(使用移液管，0.3mL)，pH 4持续20分钟，提取cGMP。在提取期后，将每个孔的体积离心(15000rpm，5分钟，25℃)并将一个等分试样的上清液(0.3mL)迅速贮存于-20℃的制冷器中以便后续通过HORTON等人(1992)开发和描述的免疫测定法对cGMP的含量定量[Horton,J.K.、Martin,R.C.、Kalinka,S.、Cushing,A.、Kitcher,J.P.、O'Sullivan,M.J.、Baxendale,P.M.，“用于估计在生物液体中腺苷3',5'环单磷酸和鸟苷3',5'环单磷酸的酶免疫分析法(Enzime immunoassays for the estimation of adenosine 3',5'cyclic monophosphate and guanosine 3',5'cyclic monophosphate in biologicalfluids)”，免疫方法期刊(JImmunol Methods)1992，155:31-40]。
在振荡器型“摇床”中恒定搅拌下(速度7)通过添加0.5mL 0.1M氢氧化钠溶液，直接消化蛋白质沉淀物或“颗粒状物(pellets)”30分钟。之后，使用BRADFORD(1976)开发的方法[M.M.BRADFORD，“一种利用蛋白质染色结合原理定量微克量蛋白质的快速和灵敏的的方法(A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantitiesof protein utilizing the principle of protein-dye binding)，分析生物化学(Analytical Biochemistry)，1976，72:248-254]，这种蛋白质级分在试验中用来确定蛋白质。
c)测试的化合物
测试化合物是表1中描述的I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI和XII。
d)结果
表2
化合物II、IV、VI、VIII和X对T84细胞中STa(1μM)引起的cGMP积累的影响(参见图1)。
一种或多种化合物 cGMP,pmol/10分钟/mg 抑制％(化合物x STa)
基线 6.18±0.49 -
STa(1μM) 1044.0±55.42<sup>#</sup> -
FPIPP(50μM) 53.53±6.22* ～94
II(50μM) 57.50±3.16* ～94
IV(50μM) 146.80±22.94* ～86
VI(50μM) 22.83±3.30* ～97
VIII(50μM) 350.70±35.80* ～66
X(50μM) 668.40±75.46* ～36
结果表述为均值±SEM。与基线组相比，#p<0.05；与STa组相比，*p<0.05；(ANOVA，接着杜凯氏检验(Tukey's test))。
表3
化合物I、III、V和XII对T84细胞中STa(1μM)引起的cGMP积累的影响(参见图2)
一种或多种化合物 cGMP,pmol/10分钟/mg 抑制％(化合物x STa)
基线 0.02±0.01 -
STa(1μM) 554.20±49.43<sup>#</sup> -
FPIPP(50μM) 74.83±13.26* ～86
I(50μM) 210.70±6.11* ～62
III(50μM) 201.50±44.93* ～64
V(50μM) 215.50±34.57* ～62
XII(50μM) 201.50±23.51* ～64
结果表述为均值±SEM。与基线组相比，#p<0.05；与STa组相比，*p<0.05；(ANOVA，接着杜凯氏检验)。
表4化合物VII对T84细胞中STa(1μM)引起的cGMP积累的影响(参见图3)
一种或多种化合物 cGMP,pmol/10分钟/mg 抑制％(化合物x STa)
基线 0.25±0.06 -
STa(1μM) 334.60±40.74<sup>#</sup> -
FPIPP(50μM) 56.25±13.61* ～83
VII(50μM) 297.30±39.06* ～12
结果表述为均值±SEM。与基线组相比，#p<0.05；与STa组相比，*p<0.05；(ANOVA，接着杜凯氏检验)。
表5化合物IX对T84细胞中STa(1μM)引起的cGMP积累的影响(参见图4)
一种或多种化合物 cGMP,pmol/10分钟/mg 抑制％(化合物x STa)
基线 5.62±0.59 -
STa(1μM) 642.80±11.60<sup>#</sup> -
FPIPP(50μM) 81.00±14.38* ～87
IX(50μM) 703.50±43.11* -
结果表述为均值±SEM。与基线组相比，#p<0.05；与STa组相比，*p<0.05；(ANOVA，接着杜凯氏检验)。
表6化合物XI对T84细胞中STa(1μM)引起的cGMP积累的影响(参见图5)
一种或多种化合物 cGMP,pmol/10分钟/mg 抑制％(化合物x STa)
基线 0.02±0.01 -
STa(1μM) 575.50±33.01<sup>#</sup> -
FPIPP(50μM) 74.83±13.26* ～86
XI(50μM) 171.30±31.68* ～70
结果表述为均值±SEM。与基线组相比，#p<0.05；与STa组相比，*p<0.05；(ANOVA，接着杜凯氏检验)。
实施例14：
确定绝对生物利用率的方案
a)动物
本研究使用年龄2岁至4岁、体重在8kg至12kg之间并且在研究期间保持食物控制且给予自由饮水的雄性比格犬(Beagle dog)。
b)动物准备
犬在前爪的分叉部分剃毛，借助70％乙醇润湿的纱布维持现场无菌。
插入21G导管(在静脉内施用方案中每个爪内一个和在口服施用方案中单个爪)以抵达头静脉。
根据建立的采样时间，通过使用3mL注射器取得1.5mL血液，从动物采集血液样品。将样品转移至肝素化采集管。
c)给药途径
经口和静脉内给药研究化合物。
以推注实施化合物的静脉内给药，并且经过犬的头静脉之一。在不同的日期，对一只犬给药多个浓度1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg。
将药物作为胶囊中的粉末按剂量3mg/kg提供口服给药，所述胶囊均由犬完全摄入。
d)采样时间
对于静脉内施用，血液样品(1.5ml)按以下预定时间间隔采集：0、0.033、0.083、0.17、0.25、0.33、0.5、1、2、3、4、6、8、12和24小时。
对于口服给药，血液样品(1.5ml)按以下预定时间间隔采集：0、0.33、0.67、1、1.5、2、3、4和6、8、12和24小时。
e)测试的化合物
测试的化合物是表1中描述的II、IV、VI和XI。
f)分析方法
肝素化采集管置于离心机中并在2500转每分钟下处理10分钟。分离血浆并置入其他管中。通过液相色谱法-串联质谱法(LC-MS/MS)分析血浆。
g)结果
表7
化合物II、IV、VI和XI的所得结果是：
Figure BDA0003665938740000311
对环核苷酸抑制所测试的全部四种化合物均显示可忽略的绝对生物利用率。这些结果显示了其治疗肠道疾病的巨大治疗潜力，原因是无绝对生物利用率大大减少这些化合物展示某种全身毒性的可能性。
本发明的化合物，新的吡啶并嘧啶衍生物化合物，可用于人类医学和兽医学中治疗患者中的疾病。
根据本发明，所述化合物可以施用至需要预防和/或治疗某疾病的患者。
本发明还描述一种使用所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物作为环核苷酸合成抑制剂的方法。在另一个实施方案中，描述了一种使用所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物作为cAMP和cGMP合成抑制剂的方法。
本发明的另一个目的是所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物、它们药学上可接受的盐或它们的混合物(以任何比率)抑制环核苷酸合成的用途。另外，本发明的另一个目的是所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物、它们药学上可接受的盐或它们的混合物(以任何比率)之一抑制cAMP和cGMP合成的用途。
本发明的目的还是所述新的吡啶并嘧啶衍生物化合物、它们药学上可接受的盐或它们的混合物(以任何比率)之一在预防性和/或治愈性治疗腹泻、结肠炎和肠易激综合征中的用途。

Claims (8)

1.一种化合物，所述化合物具有下式：
Figure FDA0003665938730000011
或者它们的药学上可接受的盐。
2.一种药物组合物，所述组合物包含有效量的根据权利要求1所述的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分；和药学上可接受的赋形剂。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述组合物用于抑制环核苷酸合成。
4.根据权利要求3所述的药物组合物，其中所述组合物用于抑制cAMP和cGMP合成。
5.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述组合物用于治疗腹泻、结肠炎和肠易激综合征。
6.根据权利要求1的化合物、或其药学上可接受的盐、或它们的任意比例的混合物在制备用于抑制环核苷酸合成的药物中的用途。
7.根据权利要求1的化合物、或其药学上可接受的盐、或它们的任意比例的混合物在制备用于抑制cAMP和cGMP合成的药物中的用途。
8.根据权利要求1的化合物、或其药学上可接受的盐、或它们的任意比例的混合物在制备用于预防性和/或治愈性治疗腹泻、结肠炎和肠易激综合征的药物中的用途。
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