CN114728053A - 抗肠道疾病的免疫原性组合物和用于制备其的方法 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及一种新的免疫原性单价和多价多糖‑蛋白质缀合疫苗组合物，所述组合无包括选自伤寒沙门氏毒株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌的多糖，以及多糖发酵、多糖纯化、多糖蛋白缀合和稳定配制的替代改进方法。本公开还涉及使用本文公开的组合物在受试者中诱导针对伤寒沙门氏菌和非伤寒沙门氏菌相关疾病的免疫应答和/或在受试者中减少或预防伤寒沙门氏菌和非伤寒沙门氏菌相关疾病的方法。疫苗引发杀菌抗体，并可用于预防胃肠炎、肠热病和伤寒。

Description

抗肠道疾病的免疫原性组合物和用于制备其的方法
技术领域
本公开涉及疫苗制造领域，更具体地，涉及用于预防沙门氏菌和非伤寒沙门氏菌感染引起的感染的免疫原性组合物和其制备方法。
背景技术
以下的背景信息涉及本公开，但不必须是现有技术。
沙门氏菌(Salmonella)感染在世界各地仍然是严重的健康问题，特别是在发展中国家，每年影响数百万人。沙门氏菌感染可在正常和免疫低下的个体中引起并发菌血症(肠热)的肠炎和胃肠炎。
沙门氏菌属属于肠杆菌科，包括革兰氏阴性、非孢子形成兼性厌氧杆菌。伤寒沙门氏菌(S.typhi)和副伤寒沙门氏菌(S.paratyphi)A和B引起肠热病，一种仅发生于人类的全身性发热疾病，与其他许多沙门氏菌血清型引起的更常见的自限性急性胃肠炎不同。由沙门氏菌属成员引起的肠热病，包括伤寒和副伤寒，继续构成发展中国家人口的重大疾病和死亡负担(Lancet 2005；366：749 762)并且对旅行者来说代表显著的风险(Lancet InfectDis.2005：5(10)：623-628)。伤寒仍在中低收入国家(LMIC)流行。在LMIC，特别是南亚和撒哈拉以南非洲，每年发生1250万至2060万例肠热病(Lancet Glob Heal.2014；2：e570-e580&J Glob Health.2012；2：10401)。在亚洲部分地区，包括尼泊尔、柬埔寨和中国，副伤寒沙门氏菌是造成肠道疾病比例增加的原因。副伤寒沙门氏菌在印度次大陆和东南亚的负担最重。在伤寒高度流行的尼泊尔的一项研究中，发现市政用水被伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌A同时污染(PLoS Negl Trop Dis.2016Jan；10(1)：e0004346&PLoS Negl TropDis.2013；7(8)：e2391).
非伤寒性肠炎沙门氏菌(NTS)血清型是全世界侵袭性沙门氏菌疾病的重要原因。在超过2500种NTS血清型中，NTS血清型鼠伤寒沙门氏菌(typhimurium)和NTS血清型肠炎沙门氏菌(enteritidis)占全球报告的所有NTS人类分离菌的近80％。此外，由血清型肠炎沙门氏菌(SE)和血清型鼠伤寒沙门氏菌(STm)引起的侵袭性非伤寒沙门氏菌(iNTS)感染是撒哈拉以南非洲的主要儿科健康问题。最近，人们越来越认识至NTS是全世界幼儿和免疫低下个体以及老年人中侵袭性细菌感染的主要原因。这两种血清型也是工业化国家健康儿童和成人的胃肠炎的主要原因。NTS还可以引起严重的肠外侵袭性菌血症，这被称为iNTS。它通常表现为发热性疾病。事实上，iNTS在成人和儿童中经常发生且没有消化道症状。
在超过2500种非伤寒血清型中，沙门氏菌肠亚种鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)和肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)占全球报告的所有人类分离的NTS的近80％。最近，人们越来越认识至NTS是撒哈拉以南非洲的幼儿和HIV感染者以及全世界的老年人和免疫低下个体发生侵袭性细菌感染的主要原因。
2010年全球NTS胃肠炎的发病率估计为9300万例，其中约8030万例是通过食源性传播的，有15.5万人死亡。在发达国家，NTS的经济负担很重。仅在美国，NTS每年花费33亿美元，损失17000个生活质量调整年，是所有食源性病原体中最多的。如前所述，NTS也可引起严重的肠外侵袭性菌血症，这被称为iNTS。沙门氏菌的侵袭性感染在整个发展中国家比较常见，并已成为非洲热带地区最常见的菌血症原因，特别是在幼儿和患有HIV的个体中。它通常表现为发热性疾病。事实上，iNTS经常在成人和儿童中发生且没有消化道症状。iNTS的症状与疟疾相似，包括发烧和出汗(超过90％)以及脾肿大(40％)。目前还不清楚为什么iNTS在非洲会成为此类问题，但这可能与以下因素有关：在非洲而不是其他地方发现的iNTS细菌(如鼠伤寒沙门氏菌ST313)的不同支系的侵袭性增加；与HIV感染、疟疾和营养不良有关的宿主免疫力下降；以及例如通过受污染的供水人与人之间传染的机会增加，在HIV感染的非洲成人中的NTS菌血症具有相关高死亡率(高达47％)和复发率(43％)。
抗生素已被用于治疗伤寒和非伤寒沙门氏菌相关的感染，抗菌剂的选择和治疗时长由抗生素的成本和可用性、局部抗药性模式以及患者的治疗反应决定。在发达国家和发展中国家，人们越来越认识到，多重抗生素耐药毒株正在成为侵袭性菌血症和胃肠炎并发症的重要原因，导致住院和死亡。
随着用于治疗的可用手段变得较不有效，伤沙门氏菌和非伤寒沙门氏菌相关感染的问题可能继续增加，使得疫苗开发成为重要的优先疾病控制努力。其也是旅行到其中流行伤寒沙门氏菌和非伤寒沙门氏菌相关感染的地区的人们的重要的保护手段。
目前三种类型的伤寒疫苗获准使用：i)伤寒缀合物疫苗(TCV)；ii)未缀合的Vi多糖(ViP)疫苗和iii)减毒活Ty21a疫苗。世界卫生组织(WHO)建议更多地使用伤寒疫苗，优先使用伤寒缀合物疫苗(TCV)(WHO意见书，Wkl Epidemiol Rec 2018；93:153-72)。
目前尚无副伤寒沙门氏菌疫苗。同样，需要能够同时赋予针对伤寒和非伤寒沙门氏菌的免疫原性组合物/疫苗。
目前可用疫苗的缺点是它们都针对仅伤寒沙门氏菌。副伤寒沙门氏菌A引起肠热病，其地理分布与伤寒沙门氏菌相同，并且这两种疾病临床上难以区分。因此，对于南亚和东南亚而言，可以预防两种血清型的疫苗将比仅限于一种血清型的疫苗更有价值。此外，在撒哈拉以南非洲，鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌也是如此，这表明对于该地区可以额外预防NTS血清型的疫苗的重要性。
尚不清楚正在研发的候选疫苗是否将预防胃肠炎和iNTS的侵袭性表现。虽然在LMIC中对伤寒的负担的了解越来越多，但全球对预防伤寒和非伤寒沙门氏菌感染的缀合疫苗的医疗需求已变得重要。据估计，伤寒缀合物疫苗的需求高峰可能出现在2023年至2026年之间，133个国家的年剂量接近3亿剂(Clin Infect Dis.2019Mar 15；68(Suppl 2)：S154-S160)。
此外，上游、下游、缀合和制剂开发通常是早期将生物制药引入市场并且满足人群需求的限速步骤。上游包括从早期细胞分离和培养到细胞库，再到细菌发酵过程的培养扩大和最终收获的整个过程。细胞培养物从100ml至500ml放大到3升至20,000升的生物反应器。进一步的步骤包括沙门氏菌多糖的初步回收，以及细胞和碎片的消除。进一步，为了促进具有成本有效的基于沙门氏菌多糖的缀合疫苗的开发，有必要获得具有更高产率以及高纯度的结构完整的多糖。先前已报道沙门氏菌物种多糖的产率小于40％。通过采用新的进料策略提高荚膜多糖(CPS)“发酵收获阶段产率”，改进的发酵培养基已成为实现所述目标的优选方法之一。Merritt等(2000)表明，当与分批培养相比时，500升制造规模生物反应器的补料分批使细胞密度和荚膜多糖的产量提高了大约四倍。
由其他致病菌如B型流感嗜血杆菌和脑膜炎奈氏球菌产生荚膜多糖的研究表明，生产取决于发酵条件(温度、pH、DO、重量克分子渗透浓度)和培养基成分，每种细菌的最佳条件不同。Zhan等(2002)同样表明，pH控制和改为补料分批发酵提高细胞的产率和荚膜多糖的产生。
荚膜多糖的表达相对于某些发酵条件例如重量克分子渗透浓度被高度调节，其中据报道当重量克分子渗透浓度高时，多糖的合成减少。
胶囊多糖的表达在某些发酵条件下受到高度调节，比如重量克分子渗透浓度，已经报道了其中当重量克分子渗透浓度高时，减少了多糖的合成。
多糖是在不同浓度的葡萄糖、酪蛋白氨基酸和磷酸根离子下产生的。
Baruque-Ramos等2005表明，当葡萄糖浓度保持在1.0g/l以下并且低氧张力有利于更高的多糖产量时，在培养基中培养脑膜炎奈氏球菌(血清组C)时获得更高产量的荚膜多糖。此外，已经观察到进料溶液中的浓缩酪蛋白氨基酸限制了最终的细胞密度。进一步，限定培养基中的生长和多糖产量也取决于碳水化合物与氮源的比例。在伤寒沙门氏菌的补料分批发酵方法之一中，氨作为氮源与进料培养基一起进料。然而，据观察，出芽短梗霉的多糖形成受到培养基中氨氮源的影响，当存在过量的铵离子时，即使在其他支持其合成的条件下，其产量也会下降(Appl Microbiol Biotechnol(1990)32:637-644)。
当氨基酸代替氨作为氮源时，在限定的培养基中的生长和多糖合成最大。
已有报道使用酪蛋白氨基酸作为限定培养基中的氮源。然而，动物来源很可能源自牛酪蛋白的酪蛋白氨基酸被已报道为过敏原，并被限制使用。此外，据报道使用酪蛋白消化/胰蛋白胨培养基作为限定培养基中的氮源，但它可能不支持苛求生物的生长。
向化学成分限定的培养基中添加不含动物成分的水解产物(Bacto TCYeastolate、Phytone Peptone)是及时提高细胞密度、培养活力和产率的方法之一。水解产物是由氨基酸、小肽、碳水化合物、维生素和矿物质组成的蛋白质消化物，可为培养基提供营养补充。源自大豆、小麦和酵母的非动物源性水解产物通常用于细胞培养基和进料中以提高多糖产率(见US9284371)。然而，由于其成分复杂、批次间差异、使培养物变得粘稠的不良属性，酵母提取物和水解产物可能是培养基可变性的重要来源。在大规模发酵过程中形成泡沫可i)由于在泡沫阶段细胞和培养基的损失而降低荚膜多糖产量，ii)可对细胞有害，因为当气泡破裂时它们会施加剪切力，iii)如果泡沫逸出导致无菌性丧失和iv)如果泡沫溢出堵塞出口过滤器，可能会导致过压。
发酵细胞上清液经过分离纯化的多糖，去除宿主细胞杂质，如蛋白质、核酸和脂多糖的不同步骤。过滤技术在下游处理或从宿主细胞杂质中纯化细菌多糖中发挥重要作用。下游涉及细菌培养的灭活、细胞与培养基的分离、产物的分离、浓缩、纯化。由于其复杂性，下游处理是该过程中最具挑战性的部分。
每种细菌具有不同的荚膜多糖，同一细菌的不同血清型的细菌荚膜多糖化学结构也不同。典型的示例是表达Vi多糖荚膜的伤寒沙门氏菌，Vi多糖荚膜是C-2处α(1-4)-D-GalpA N-乙酰化且C-3处O-乙酰化的直链均聚物。N和O乙酰基在表面占主导地位，对于Vi的抗原性和免疫原性都是必不可少的，而相比之下，副伤寒沙门氏菌A和B以及NTS(极少数例外)不表达荚膜多糖。相反，它们的表面多糖是脂多糖的O多糖(OPS)。它们共享共同的三糖骨架→2)-α-D-Manp-(1→4)-α-L-Rhap-(1→3)-α-D-Galp-(1→)(血清学上构成表位12)。然而，在重复三糖的甘露糖上连接α-(3→6)的双脱氧己糖会产生免疫显性表位，该表位赋予沙门氏菌群同一性。在鼠伤寒沙门氏菌的情况下，三糖骨架表位12的半乳糖变成α-(1→6)葡糖基化。(见：Lindberg AA，Le Minor L.Serology of Salmonella In：Bergan T，ed.Methods in Microbiology：Academic Press，1984:1-141)。
这种细菌多糖结构的多样性使得这些多糖的纯化更具挑战性和困难。包括多糖的疫苗需要满足某些质量标准。
可大规模体积进行的前纯化工艺包括使用溶剂、pH操作和使用比如脱氧胆酸钠、Triton-X的去污剂对比如核酸和脂质的杂质进行裂解和沉淀。
脱氧胆酸钠(DOC)是温和的去污剂，并且是多糖纯化中最常用的去污剂之一。具有核心甾体结构的脱氧胆酸钠较小变性，并且增溶强度有限，其在不影响化学结构的情况下破坏内毒素；并且因此，在去除脱氧胆酸钠后，内毒素恢复其生物活性。并且，基于DOC的程序不能有效地去除多糖，尤其是含唾液酸的多糖中的污染物。这可能是由于DOC对下游加工过程中形成的脂多糖-蛋白质缔合的去污剂活性较弱，导致最终分离的多糖中内毒素和蛋白质含量的高水平。此外，脱氧胆酸钠是动物源产品，即使最终产品中的其残留存在也可能导致监管机构和某些宗教团体不接受产品。
使用Triton-X的缺点是残留的去污剂在萃取阶段持续存在，并且需要大量洗涤以去除所有残留物。
对于某些CPS类型，还包括使用乙酸锌/硫酸铵/柠檬酸钠进行沉淀以去除蛋白质污染物。然而，为了实现高纯度，需要重复进行硫酸铵沉淀，这使得该过程更加繁琐且劳动强度大。此外，有时它还会沉淀荚膜多糖，导致总多糖损失。
其他一些方法利用有助于降解蛋白质和核酸污染物的酶；然而，酶和水解产物质的去除是艰巨的任务，可能会导致目标产物的损失。此外，由于存在朊病毒污染的风险，监管机构已限制在人类产品中使用动物酶。酶的使用，除了成本高的事实外，还会在cGMP框架中引入更多的监管问题，例如酶的来源(源自动物或重组体)、不同供应商和批次之间的酶活性差异等。
其他一些方法利用核酸酶、蛋白酶K或Nargase降解残留的蛋白质和/或核酸物质，然后进行色谱纯化，导致成本高，并且工艺难以放大。
其他一些方法利用苯酚、丁醇、甲苯和氯仿等有毒有机溶剂分离细菌多糖的内毒素。这种方法既昂贵又耗时。此外，使用会产生有毒废物的有毒有机溶剂是令人不快的。
疫苗特异性多糖期望的高纯度导致开发基于级分沉淀；离子交换色谱法；凝胶过滤；和亲和层析的新纯化工艺。色谱技术(如尺寸排阻色谱、离子交换色谱和疏水相互作用色谱)已成功用于分离细菌多糖，有效去除了蛋白质和核酸污染物。尽管成功分离出符合WHO规范的细菌多糖，但是色谱技术的使用涉及多步劳动和耗时的样品制备，涉及可扩展性问题，大大降低了荚膜多糖的回收率，并且因此对于下游加工工业规模而言不是可行的低成本选择。此外，增加新的纯化步骤以消除这些污染物会增加工艺的复杂性，降低最终产率并且增加经济成本。
通过先前报道的纯化工艺获得的伤寒沙门氏菌纯化多糖的内毒素含量为25-50EU/μg。
因此，需要替代的纯化工艺，旨在最大限度地回收沙门氏菌多糖，同时将杂质去除至可接受的水平。
已经描述了各种方法，例如酸水解、碱降解、通过高碘酸盐的氧化、臭氧分解(Wang等，Carb.Res.1999，319，1-4,141-147)、酶水解、超声法(Pawlowski等，Vaccine，2000，18.18，1873-1885)、电子束碎裂(Pawlowski等，Micro Lett，1999，174.2，255-263)用于细菌和非细菌多糖的解聚(改变尺寸)。然而，酸水解和碱降解是耗时的，并且所得的尺寸减小的样品具有高多分散性。高碘酸盐氧化对一些多糖的不稳定抗原表位也有不利影响。此外，臭氧分解只能与含有β-D-醛糖苷键的多糖一起使用，并且迄今为止仅分离出很少的内切聚糖酶。US 20090041802公开了通过Emulsiflex C-50(常规均质器)(Avestin)对脑膜炎球菌多糖的片段化。然而，传统的均质器在每个循环的仅瞬间(约7％)的峰值压力下运行，导致偏差更大、产品稳定性降低以及需要运行更多次或使用比要求更高的压力。
已经使用超声波处理来解聚多糖(见例如WO 2010/055250)。然而，超声解聚法由于其效率低，不适用于大量多糖的工业解聚。
US20090234108描述了通过用碳酸钠缓冲液(pH 9.0)进行化学处理使肺炎球菌血清型1多糖部分脱乙酰化的方法。该工艺耗时并且易于破坏可能影响缀合物的免疫原性的免疫原性部分。
由于上述所有原因，本领域仍需要用于多糖或多糖衍生物的解聚的简单且低成本的方法。
生产多糖-蛋白缀合疫苗对缀合方法中涉及的特定载体蛋白和天然多糖具有特异性。
各种缀合技术是本领域已知的。可以通过直接还原胺化方法、碳二亚胺缀合化学反应、酰肼、活性酯、降硼烷、对硝基苯甲酸、N-羟基琥珀酰亚胺、S-NHS、EDC、使用TSTU 1-氰基-4-二甲氨基吡啶鎓四氟硼酸盐(CDAP)缀合化学反应制备缀合物。
活化的多糖直接或通过间隔子(接头)基团与载体蛋白上的氨基缀合。如现有技术中公开的用于缀合的接头是N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)(SZU等；1987)。其他接头、B-丙酰胺(WO 00/10599)、硝基苯基-乙胺(Gever等(1979)Med MicrobiolImmunol 165；171-288)、卤代烷基卤化物(美国专利号4,057,685)糖苷键(美国专利号4,673,574)、己二胺和6-氨基己酸(美国专利4,459,286)。Marburg等J.Am.Chem.Soc.，108，5282(1986)公开了一种通过属间间隔子缀合多糖和免疫原性蛋白质的方法。蛋白质(PRO)被衍生化以表现出侧基亲核或亲电基团(PRO*)，而伴侣多糖(Ps)被官能化以表现出具有相反反应性的侧基(Ps*)。在将Ps*与PRO*结合后，形成了属间间隔子，将Ps共价连接至PRO(Ps-PRO)。在酸水解后，属间间隔子(接头)被释放为不常见的氨基酸，通过氨基酸分析进行定量，从而提供了证明共价性的方法。
多糖-蛋白质缀合疫苗的多糖成分以取决于缀合物的类型、制剂成分和储存条件的速度逐渐解聚。这导致游离多糖的增加，可对产品的稳定性产生不利影响。已知多糖-载体蛋白缀合物在缀合后当进一步加工、冻干或以液体和固体制剂储存时释放游离多糖。只有与载体蛋白共价键合的沙门氏菌多糖(即缀合的多糖在免疫学上对临床保护很重要，未键合的多糖的过高水平可导致对多糖的免疫低反应性(见WHO/TRS/924第14页，A.3.3.5)。特别是文献报道的伤寒沙门氏菌缀合物具有高达34％的高游离多糖含量和高于5％的高游离蛋白含量，这表明较低的缀合效率且较低的缀合物稳定性，这是不可取的。因此，需要证明疫苗的游离多糖含量小于10％。
事实上，如果可能有可以用于制造和配制所有候选疫苗的通用方法，它将大大减少方法开发期望的时间和资源。这会对可以引入临床试验的临床候选者的数量产生重大影响。此外，为早期临床试验开发的方法，包括使用平台开发的方法，可能在方法经济性、产量、池容量和吞吐量方面不是最佳的，并且可能不适合生产后期或商业活动期望的数量。另一个重要的考虑因素是方法开发的速度，因为方法开发需要在将治疗候选物引入临床试验之前进行。见Abhinav A.Shukla等，Journal of Chromatography B，848(2007)28-39。
此外，发展中国家的沙门氏菌疾病负担很重，那里的电力和制冷设备通常不足，因此在温度变化范围内的疫苗稳定性对这些地区具有更大的相关性。
因此，需要用于生产满足多种标准，包括良好的免疫原性、安全性和可负担性的针对沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的有效疫苗的有效的平台方法，特别地提供i)在发酵和纯化工艺中提高的多糖产量的平台；ii)显示出最佳的回收率和最低的杂质水平的改进纯化工艺；iii)疫苗中提高的多糖-蛋白质缀合物比例iv)显示出低粘度，没有聚集；在宽温度范围内显示长期稳定性的改进制剂。
为了克服现有技术的上述限制并解决长期感到未满足的全球医疗需求，申请人提出了用于制备单价伤寒沙门氏菌缀合物的改进的替代发酵、纯化、缀合方法、制剂以及包括源自副伤寒沙门氏菌(S.paratyphi A，B，C)和非伤寒性鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)和肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)的至少一种另外缀合物的多价疫苗。
目的
本公开的目的是改进现有技术的一个或多个问题，或至少提供有用的替代方案。
本公开的目的是开发有效的疫苗制剂，用于在人类中预防和治疗由沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌引起的感染。
本公开的另一目的是提供改进的用于生产包括源自沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多糖的多糖-蛋白质缀合疫苗的方法，该方法可在工业规模上使用。
本公开的另一目的是提供包括源自沙门氏菌血清型毒株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌中的任一种的多糖的单价多糖-蛋白质缀合疫苗。
本公开的另一目的是提供包括源自源自沙门氏菌血清型毒株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌中任一的多糖以其任何组合的二价多糖-蛋白质缀合疫苗。
本公开的另一目的是提供包括源自沙门氏菌血清型株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多糖的以其任何组合的多价多糖-蛋白质缀合疫苗。
本公开的另一目的是提供用于产生沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多糖的改进的补料分批工艺。
本公开的另一目的是提供从沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌中提取多糖的改进的纯化工艺。
本公开的另一目的是提供将源自沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多糖(有或没有尺寸减少)与载体蛋白缀合的改进的方法。
本公开的另一目的是提供与用或不用接头(间隔子)将源自沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多糖(有或没有尺寸减少)分子的载体蛋白缀合的方法。
本公开的另一目的是提供包括多糖-蛋白缀合物的免疫原性疫苗制剂，制剂以有效地赋予保护或治疗针对沙门氏菌血清变型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的感染，或预防、改善或推迟其临床表现的发生或发展的适当浓度以适当的单剂量和多剂量瓶中，以施用至婴儿和成人。
从以下描述来看，本公开的其他目的和优点将更加明显，这些描述并不旨在限制本公开的范围。
发明内容
本公开提供了：
a)包括一种或多种多糖-蛋白缀合物的免疫原性组合物，其中多糖源自沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌；
b)用于培养和加工源自沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多糖的补料分批工艺；
c)用于获得源自沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多糖的下游加工步骤；
d)在存在或不存在接头分子的情况下，将源自沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌等的多糖(有或没有尺寸减少)与载体蛋白缀合的方法；以及
e)通过向受试者施用治疗有效量的免疫原性组合物在受试者中激发免疫应答以赋予保护或治疗针对沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的感染或预防、改善或推迟其临床表现的发生或发展的方法。
具体实施方式
尽管本公开可能容易受到不同实施方式的影响，但是在以下详细讨论中示出了某些实施方式，应理解本公开可视为是本公开的原理的示例并且不旨在将公开的范围限制为本说明书中说明和公开的内容。
提供实施方式以便将本公开的范围透彻和充分地传达给本领域技术人员。阐述了与特定组分和工艺相关的许多细节，以提供对本公开的实施方式的完整理解。对于本领域技术人员来说，实施方式中提供的细节不应被解释为限制本公开的范围。在一些实施方式中，未详细描述公知的组成、公知的工艺和公知的技术。
在本公开中使用的术语仅用于解释特定实施方式的目的，并且这些术语不应被视为限制本公开的范围。如在本公开中使用的，形式“一个(a)”、“一个(an)”和“该”也可以旨在包括复数形式，除非上下文另外明确地指示。
术语“包括(comprises)”、“包括(comprising)”、“包含(including)”和“具有”是开放式过渡短语，并且因此指定存在叙述的特征、整数、步骤、操作、元件、模块、单元和/或组分，但不排除存在或添加一个或多个其他特征、整数、步骤、操作、元件、组成和/或其组。在本公开的工艺中公开的步骤的特定顺序不应被解释为必然要求它们如所描述或图示的性能。还应理解，可以采用另外的或替代的步骤。
术语第一、第二、第三等不应被解释为限制本公开的范围，如前述的术语可仅用于将一个元件、组分、区域、层或部分与另一组分、区域、层或部分区分开。比如第一、第二、第三等的术语在本文中使用时并不暗示特定的顺序或次序，除非本公开明确地提示。本公开提供了免疫原性组合物和用于制备其的方法。
术语“疫苗”任选地可用术语“免疫原性组合物”代替，反之亦然。
“D抗原单位”(也称为“国际单位”或IU)：脊髓灰质炎病毒的D抗原形式诱导保护性中和抗体。本文提到的(例如在本发明的疫苗中)D抗原单位是在配制最终疫苗之前测量的每种未吸附的大量IPV抗原类型的总D抗原单位，其添加至每个人剂量的配制疫苗中(通常为0.5ml最终体积)。测量D抗原单位的可靠方法是本领域熟知的并且例如由欧洲药典出版的。例如，可使用下文实施例1中描述的ELISA测试(“通过ELISA量化D抗原”)来测量D抗原单位。欧洲药典提供了测试样品(欧洲药典生物参考制剂-可从Ph.Eur.秘书处获得，例如代码P 2160000)，用于在制造商之间对此类方法进行标准化(Pharmeuropa Special Issue，Bio96-2)。因此，D抗原单位值在本领域中是熟知的。
本文中的术语“剂量”通常是本发明疫苗的一次施用，通常是一次注射。典型的人体剂量为0.5mL。当然，可在疫苗施用方案中施用各种剂量。
本文中的术语“IPV”或包括这些组分的免疫原性组合物意指灭活的脊髓灰质炎病毒1型(例如，优选使用的Mahoney)、2型(例如MEF-1)或3型(例如Saukett)，或Sabin血清型1、2、3两种或所有三种类型的组合。用于本发明目的全(或标准)剂量(分别为40-8-32D抗原单位的基于Salk的IPV 1、2和3型)IPV免疫原性组合物的示例可为
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(印度血清研究生私营有限公司)。
遍及本说明书的术语“糖”可表示多糖或寡糖并且包括两者。荚膜糖抗原可为全长多糖，或其可延伸到细菌“特定大小的糖”和“寡糖”(天然具有少量重复单元，或为便于控制而缩小尺寸的多糖，但仍能够在宿主中诱导保护性免疫应答。
根据本公开的第一实施方式，免疫原性组合物可包括一种或多种多糖-蛋白缀合物，其中多糖源自沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌。
根据本公开的第二实施方式，通过补料分批工艺获得源自沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎伤寒沙门氏菌的多糖的方法可包括下述步骤中的任何子集或全部。
1.在发酵培养基组合物中接种、培养和收获细菌，
2.灭活，
3.分离，
4.澄清，和
5.无菌过滤。
根据第二实施方式的第一方面，发酵培养基组合物可包括碳源、镁盐、磷酸盐源、酵母提取物和大豆水解产物。碳源可选自由下述组成的组中：葡萄糖、甘露醇、蔗糖、乳糖、果糖和海藻糖，优选葡萄糖。镁盐可选自氯化镁、硫酸镁，优选硫酸镁七水化物。钾源可选自磷酸氢二钠七水化物、磷酸二氢钠一水化物、磷酸钾和磷酸氢二钾。优选地，钾源是磷酸氢二钠七水化物、磷酸二氢钠的组合。优选地，大豆水解产物为hysoy。
仍相应地，发酵培养基可另外包括选自由止泡剂204、止泡剂C、SE-15、Y-30、止泡剂EX-Cell、S184(纯硅油)、SLM54474(聚丙二醇：PPG)、VP1133(硅油/PPG混合物)、BREOX(聚亚烷基二醇)、J673STRUKTOL(植物基烷氧基化脂肪酸酯)和Wacker-Chemie公司的SE9(含10％硅油成分的水性乳液)组成的组中。与大豆水解产物和酵母提取物组合的消沫剂可有助于提高多糖的产率。更优选地，止泡剂可为止泡剂C或J673STRUKTOL。
根据本发明的实施方式，酵母提取物可为酵母自溶物、超滤酵母提取物或合成酵母提取物。酵母提取物可选自BD BBLTM、BD BACTOTM、DifcoTM等。在优选的实施方式中，酵母提取物可为超滤酵母提取物，比如Difco TM酵母提取物UF。大豆水解产物可选自但不限于豆粕、大豆蛋白胨和大豆粉。在一个实施方式中，大豆水解产物可为DifcoTM SelectPhytoneTM UF。在另一实施方式中，大豆水解产物可为hysoy。
与其他培养基相比，止泡剂、大豆蛋白胨和酵母提取物的组合产生提高的收获产率。
根据第二实施方式的第二个方面，该工艺可通过在发酵已经进行和/或允许在整个补料分批模式中连续进料期间以特定固定时间间隔子以固定比例掺入进料内容物来遵循双投料策略，所述发酵包括多个阶段，每个阶段的批量大小成比例增加。
根据第二实施方式的第三方面，发酵参数可包括下述：
温度：36.0±2℃
搅拌：150rpm至600rpm
pH：7.0±0.5
溶解氧：30％至90％
空气(nl/分钟)：2至10
气体流量：60nl至600nl/分钟
重量克分子渗透浓度：400mOsm至600mOsm/kg
根据第二实施方式的第四方面，细菌培养物的灭活可使用福尔马林进行。
更优选地，可通过使用范围为0.1至2％v/v，优选地0.5％v/v的甲醛来进行细菌培养物的灭活；在34℃至38℃，优选36℃下温育5小时至12小时，优选8小时至12小时。
根据第二实施方式的第五方面，可通过离心进行分离。更优选地，可通过以设置在2℃至8℃的温度；7000至8000的RPM；40分钟至60分钟的离心时间的参数的离心来进行分离。
根据第二实施方式的第六方面，可通过深层过滤进行澄清。
根据第二实施方式的第七方面，澄清的收获物可以通过使用0.2μM无菌过滤器的过滤进行灭菌。
根据第二实施方式的第八方面，在发酵阶段的粗伤寒沙门氏菌Vi-多糖(ViP)产率可至少为40％，并且平均Vi-多糖产率的范围可为100mg/L至5000mg/L；更优选100mg/L至700mg/L。
根据本公开的第三实施方式，发酵收获物可进行下述下游纯化步骤的任何子集或以任何顺序或所有以获得期望量的Vi-多糖(ViP)：
a)通过至少一个孔径为约0.2微米的膜的直流过滤(DFF)澄清细菌荚膜多糖收获物；
b)通过切向流超滤(TFF)进行浓缩并且通过使用具有10kDa至300kDa或kD截留分子量(MWCO)的膜的透析过滤(DF)进行缓冲液交换；
c)用阴离子或阳离子去污剂、乙二胺四乙酸(EDTA)(4mM至10mM)和乙酸钠(5％至10％)处理，用于蛋白质、核酸和脂多糖的变性；
d)醇沉淀(40％至70％)；
e)离心并且通过至少一个孔径为约0.2μM的澄清过滤器，经直流过滤(DFF)进行过滤；
f)用碱金属盐处理以去除过量的去污剂，然后离心，并且通过至少一个孔径为约0.2μM的澄清过滤器经直流过滤(DFF)进行过滤；
g)通过切向流过滤(TFF)进行浓缩并且通过使用具有10kDa至300kDa或kD截留分子量(MWCO)的膜的透析过滤(DF)进行缓冲液交换；
h)用阴离子或阳离子去污剂处理；
i)离心并且通过至少一个孔径为约0.45微米至约0.2微米的澄清过滤器经直流过滤(DFF)进行过滤；
j)在存在氯化钠(0.1M至2M)的情况下，用酒精(50％至70％)洗涤沉淀，去除蛋白质和核酸杂质；
k)利用酒精选择性沉淀多糖(<75％或>95％)；
l)将多糖溶解在WFI中，并且通过切向流过滤(TFF)进行浓缩并且通过使用具有10kDa至300kDa或kD截留分子量(MWCO)的膜的透析过滤(DF)进行缓冲液交换；以及
m)在无菌条件下通过至少一个孔径为约0.2微米的无菌过滤器进行无菌过滤。
根据第三实施方式的第一方面，纯化工艺可没有任何色谱步骤。
根据第三实施方式的第二方面，纯化工艺可产生约40％至65％的显著回收率，具有期望的O-乙酰基水平(大于2.0mmol/g多糖)，纯化的Vi多糖产率范围可为1000mg/L至4000mg/L，平均分子量范围可为40kDa至400kDa，含有少于1％的蛋白质/肽，小于2％的核酸，每μg多糖小于100EU的内毒素(PS)，分子尺寸分布(在实现0.25的分布系数(KD)之前大于50％的PS被洗脱)。
更优选地，纯化的Vi多糖的平均分子量范围可为40kDa至400kDa。
根据第三实施方式的第三方面，阴离子去污剂可选自由烷基硫酸盐、十二烷基硫酸钠(SDS)、脱氧胆酸钠、十二烷基磺酸钠、s-烷基硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、油烯基硫酸钠、N-油酰基聚(氨基酸)钠、烷基苯磺酸钠、α-烯烃磺酸钠、烷基磺酸钠、α-磺基单羧酸酯、脂肪酸磺基烷基酯、琥珀酸磺酸酯、烷基萘磺酸酯、烷烃磺酸钠、木质素磺酸钠和烷基甘油醚磺酸钠组成的组。
更优选地，所述阴离子去污剂可为最终浓度范围为0.1％至20％，更优选1％至20％的烷基硫酸盐，更优选十二烷基硫酸钠，其可添加至截留物中并且在25℃至30℃搅拌2小时。
根据第三实施方式的第四方面，醇沉可使用甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丙酮或叔丁醇或其组合进行。
更优选地，所述醇可为乙醇。
根据第三实施方式的第五方面，碱金属盐可选自由钠盐、钾盐、钙盐和镁盐组成的组。更优选地，碱金属盐可为选自由氯化钾、乙酸钾、硫酸钾、碳酸钾、碳酸氢钾、磷酸钾、磷酸氢钾、磷酸二氢钾、硝酸钾和其他钾盐，或其两种或多种的组合组成的组。
更优选地，所述钾盐可为与上清液混合的最终浓度范围为0.1M至2M的氯化钾，并且在其溶解后，混合物在2℃至8℃下温育>3小时。
根据第三实施方式的第六方面，阳离子去污剂可选自由十六烷基三甲基铵盐、四丁基铵盐、肉豆蔻基三甲基铵盐和海地美溴铵或其组合组成的组。
更优选地，所述阳离子去污剂可为最终浓度范围为0.1％至12％的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)；优选地以2％至3％添加至截留物中并且在25℃至30℃下搅拌1小时至2小时。
根据第三实施方式的第七个方面，可以在小于或等于-20℃储存最终纯化的多糖原液。
根据本公开的第四实施方式，可对发酵收获物进行下述下游纯化步骤的任何子集或以任何顺序或所有，以获得期望质量的来自副伤寒沙门氏菌A脂多糖(LPS)的O-特异性多糖：
a)离心和分离
b)通过切向流超滤(TFF)进行浓缩并且通过使用截留分子量为10kDa至300kDa的膜(MWCO)的透析过滤(DF)进行缓冲液交换；
c)LPS的酸解
d)离心和分离
e)中和
f)通过至少一种孔径为约0.45微米和0.2微米的膜的直流过滤(DFF)对LPS进行澄清；
g)用阴离子或阳离子去污剂处理，
h)离心和分离
i)通过至少一个孔径为约0.45微米和0.2微米的膜进行直流过滤(DFF)；
j)通过切向流超滤(TFF)进行浓缩并且通过使用截留分子量为10kDa至300kDa的膜(MWCO)的透析过滤(DF)进行缓冲液交换；
k)醇沉淀(40％至70％)；
l)离心并且通过至少一个孔径为约0.2μM的澄清过滤器经直流过滤(DFF)进行过滤；
m)用碱金属盐处理以去除过量的去污剂，随后离心并且通过至少一个孔径为约0.2μM的澄清过滤器经直流过滤(DFF)进行过滤；
n)通过切向流过滤(TFF)进行浓缩并且通过使用截留分子量为10kDa至300kDa的膜(MWCO)的透析过滤(DF)进行缓冲液交换；
o)在存在氯化钠(0.1M至2M)的情况下，用醇(50％至70％)洗涤沉淀，去除蛋白质和核酸杂质；
p)将多糖溶解在WFI中并且通过切向流过滤(TFF)进行浓缩，并且通过使用具有10kDa至300kDa截留分子量(MWCO)的膜的透析过滤(DF)进行缓冲液交换；以及
q)在无菌条件下通过至少一个孔径为约0.2微米的无菌过滤器进行无菌过滤。
根据第四实施方式的第一方面，LPS的酸水解可以优选使用pH～2.0-3.0的乙酸(终浓度0.5％至5％)，在30℃至90℃的温度下进行约100分钟至200分钟的时间。
根据第四实施方式的第二方面，可优选使用氨水进行酸水解中和，以实现7.0的最终pH。
根据第四实施方式的第三方面，阴离子去污剂可选自由烷基硫酸盐、十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸钠、十二烷基磺酸钠、s-烷基硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、油烯基硫酸钠、N-油酰基聚(氨基酸)钠、烷基苯磺酸钠、α-烯烃磺酸钠、烷基磺酸钠、α-磺基单羧酸酯、脂肪酸磺基烷基酯、琥珀酸磺酸酯、烷基萘磺酸酯、烷烃磺酸钠、木质素磺酸钠和烷基甘油醚磺酸钠组成的组。
更优选地，所述阴离子去污剂可为最终浓度范围为0.1％至20％，更优选地，1％至2％的脱氧胆酸钠，可以将其添加至截留物中并且在25℃至30℃下搅拌10分钟至120分钟。
根据第四实施方式的第四方面，醇沉淀可使用甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丙酮或叔丁醇或其组合进行。
更优选地，所述醇可为乙醇。
根据第四实施方式的第五方面，碱金属盐可选自由钠盐、钾盐、钙盐和镁盐组成的组。更优选地，碱金属盐可为选自由氯化钾、乙酸钾、硫酸钾、碳酸钾、碳酸氢钾、磷酸钾、磷酸氢钾、磷酸二氢钾、硝酸钾和其他钾盐的钾盐或其中两种或多种的组合组成的组。
更优选地，所述钾盐可为与上清液混合的最终浓度范围为0.1M至2M的氯化钾，并且在其溶解后，将混合物在2℃至8℃下温育>3小时。
根据第四实施方式的第六方面，阳离子去污剂可选自由十六烷基三甲基铵盐、四丁基铵盐、肉豆蔻基三甲基铵盐和溴化六溴二甲基铵或其组合组成的组。
根据第四实施方式的第七方面，纯化工艺可没有任何色谱步骤。
根据第四实施例的第八方面，纯化工艺可产生。
根据第四实施方式的第九方面，该工艺使得内毒素(<100EU/μg PS)、蛋白质(<1％)和核酸(<2％)杂质显著减少，适当地在40％至65％的范围内提高荚膜多糖的回收率，具有期望的O-乙酰基水平(>2.0mmol/g多糖)，分子尺寸分布(在实现0.25的分布系数(KD)之前>50％的PS被洗脱)，纯化的O-特异性多糖的平均分子量范围可为40kDa至200kDa。
根据第四实施方式的第十方面，可以在小于或等于-20℃下储存最终纯化的多糖原液。
根据本发明的第五实施方式，可使用碳二亚胺、还原胺化或氰化缀合反应，将纯化的沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖与载体蛋白(CP)共价键合。
根据第五实施方式的第一方面，纯化的沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖可以与载体蛋白(CP)共价键合，该载体蛋白选自包括下述的组中：带有或不带有接头的破伤风毒素、破伤风类毒素(TT)、白喉类毒素(DT)、CRM197、铜绿假单胞菌类毒素、百日咳博德特氏菌类毒素、产气荚膜梭菌类毒素、大肠埃希杆菌LT、大肠埃希杆菌ST、大肠埃希杆菌不耐热毒素-B亚单位、脑膜炎奈氏球菌外膜复合物、rEPA、流感嗜血杆菌的蛋白D、鞭毛蛋白FliC、马蹄蟹血蓝蛋白、来自铜绿假单胞菌的外毒素A、外膜复合物c(OMPC)、孔蛋白、运铁蛋白结合蛋白、肺炎球菌溶血素、肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎链球菌表面粘附素A(PsaA)、肺炎链球菌PhtD、肺炎链球菌表面蛋白BVH-3和BVH-11、炭疽杆菌的保护性抗原(PA)以及炭疽杆菌解毒水肿因子(EF)和致死因子(LF)、卵白蛋白、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、结核菌素的纯化蛋白衍生物(PPD)、合成肽、热休克蛋白、百日咳蛋白、细胞因子、淋巴因子、激素、生长因子、包括来自各种病原体衍生抗原(比如N19)的多个人CD4+T细胞表位的人工蛋白、铁摄取蛋白、来自艰难梭菌的毒素A或B和无乳链球菌蛋白质以及其片段、衍生物、修饰。
更优选地，用于与伤寒沙门氏菌Vi多糖缀合的载体蛋白可为破伤风类毒素。源自副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多糖可优选分别与选自破伤风类毒素、白喉类毒素或CRM197的载体蛋白缀合。根据本发明涉及了包括下述多糖-载体蛋白缀合物的免疫原性组合物：与破伤风类毒素缀合的伤寒沙门氏菌、与TT或DT或CRM197缀合的副伤寒沙门氏菌A；与TT或DT或CRM197缀合的鼠伤寒沙门氏菌和与TT或DT或CRM197缀合的肠炎沙门氏菌；与破伤风类毒素缀合的伤寒沙门氏菌、与破伤风类毒素缀合的副伤寒沙门氏菌A；与CRM197缀合的鼠伤寒沙门氏菌和与CRM197缀合的肠炎沙门氏菌；与破伤风类毒素缀合的伤寒沙门氏菌、与DT缀合的副伤寒沙门氏菌A；与CRM197缀合的鼠伤寒沙门氏菌和与破伤风类毒素缀合的肠炎沙门氏菌和与破伤风类毒素缀合的伤寒沙门氏菌、与CRM197缀合的副伤寒沙门氏菌A；与CRM197缀合的鼠伤寒沙门氏菌和与破伤风类毒素缀合的肠炎沙门氏菌。
根据本公开，CRM197购自Pfenex USA的荧光假单胞菌的重组毒株CS463-003(MB101)。
根据本公开，TT是从印度喜马偕尔邦卡索里国家控制局中央研究所(CRI)采购的破伤风梭菌(Harvard No 49205)获得的。中央研究所(CRI从荷兰NVI采购了这种毒株。
根据本公开，DT由白喉玉米杆菌Park-Williams 8号毒株的培养物产生，该毒株获自印度喜马偕尔邦卡索里国家控制局中央研究所(CRI)。
根据第五实施方式的第二方面，在缀合纯化的沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖之前，可通过选自由FeCl3、H2O2、偏高碘酸钠和乙酸钠组成的化学方法或选自由高压细胞破碎和均化器组成的机械方法进行解聚/改变尺寸。
更优选地，纯化的沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖可通过高压细胞破坏进行解聚/改变尺寸。
更优选地，纯化的伤寒沙门氏菌多糖(ViP)可通过乙酸钠(5％至10％)进行解聚/改变尺寸，其中ViP的平均分子量范围可为40kDa至400kDa。
更优选地，纯化的伤寒沙门氏菌多糖(ViP)可通过乙酸钠(5％至10％)进行解聚/改变尺寸，其中ViP的平均分子量范围可为100kDa至250kDa。
申请人发现，与由全长多糖制备的缀合物相比，使用部分尺寸减小的多糖制备的缀合物的缀合效率/缀合物产率、免疫原性更高。此外，多糖的尺寸减小降低了溶液的粘度并且增加了反应性末端基团的数量，这两个因素都有助于提高共价键形成的频率。
仍可选地，纯化的沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖不进行解聚/改变尺寸。
根据第五实施方式的第三方面，在缀合之前，可使用碳二亚胺、还原胺化或氰化反应通过杂双功能接头或同双功能接头衍生化载体蛋白(CP)以包括氨基和/或羧基，所述接头选自肼、碳酰肼、盐酸肼、二酰肼、ε-氨基己酸、氯己醇二甲基缩醛、D-葡糖醛酸内酯、胱胺和对硝基苯乙胺、己二胺、乙二胺、1,6-二氨基氧己烷或β-丙酰胺、硝基苯乙胺、卤代烷基卤化物、6-氨基己酸和其组合组成的组。
更优选地，杂双功能接头或同双功能接头可为二酰肼，更优选己二酸二酰肼。
可使用碳二亚胺、还原胺化、氰化反应，例如通过在存在碳二亚胺如1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)的情况下，与肼、碳酰肼、琥珀酰二酰肼、己二酸二酰肼、盐酸肼(例如二盐酸肼)或任何其他二酰肼的反应通过蛋白质上的天冬氨酸和谷氨酸残基的羧基将酰肼基团引入蛋白质中。EDC用作催化剂以用肼或二酰肼活化和修饰蛋白质反应物。
更优选地，在存在碳二亚胺例如1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)的情况下，载体蛋白(CP)与己二酸二酰肼(ADH)的反应可在5至7，更优选6的pH下进行。
因此，可通过将pH从约6至约7升高至8来停止在存在碳二亚胺比如1-乙基-3(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDC)的情况下，载体蛋白(CP)与己二酸二酰肼(ADH)的反应。
可选地，在用ADH衍生化载体蛋白之后，该方法可另外包括通过使用10kDa或30kDa或50kDa截留分子量(MWCO)的膜的透析过滤(DF)进行缓冲液交换和使用0.2u过滤器进行无菌过滤；由此，ADH衍生化的载体蛋白被缓冲液交换至少10体积，或流过适当的凝胶过滤柱，并且基本上所有未反应的化合物、残留的ADH和残留的EDC被去除，产生纯化的ADH衍生化的载体蛋白。
仍可选地，在缀合之前，载体蛋白可不经杂双功能接头或同双功能接头被衍生化以包括氨基和/或羧基。
根据第五实施方式的第三方面，在缀合之前，可使用碳二亚胺、还原胺化或氰化反应通过杂双功能接头或同双功能接头衍生化纯化的沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖以包括氨基和/或羧基，所述接头选自由肼、碳酰肼、盐酸肼、二酰肼、其混合物、ε-氨基己酸、氯己醇二甲基缩醛、D-葡萄糖醛酸内酯、胱胺和对硝基苯乙胺、己二胺、乙二胺、1,6-二氨基氧己烷或β-丙酰胺、硝基苯乙胺、卤代烷基卤化物、6-氨基己酸和其组合组成的组。
更优选地，杂双功能接头或同双功能接头可为二酰肼，更优选己二酸二酰肼。
在存在溴化氰(CNBr)的情况下，通过使用碳二亚胺、还原胺化、氰化反应，例如多糖与肼、碳酰肼、琥珀酰二酰肼、己二酸二酰肼、盐酸肼(例如二盐酸肼)或任何其他二酰肼的反应可以将酰肼基团引入沙门氏菌血清型伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖中，可形成Vi多糖的酰肼衍生物。
更优选地，使用氰化缀合化学反应，用己二酸二酰肼(ADH)接头衍生化副伤寒沙门氏菌A OSP，其中氰基化试剂选自下述的组中：1-氰基-4-吡咯烷吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)(CPIP)、1-氰基-咪唑(1-CI)、1-氰基苯并三唑(1-CBT)、1-氰基-4-(二甲基氨基)-吡啶鎓四氟硼酸盐(CDAP)、对硝基苯基氰酸酯和N-氰基三乙基四氟硼酸铵(CTEA)或2-氰基哒嗪-3(2H)酮(2-CPO)。
更优选地，使用氰化缀合化学反应，用己二酸二酰肼(ADH)接头衍生化副伤寒沙门氏菌A OSP，其中氰基化试剂是1-氰基-4-吡咯烷吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)(CPIP)，OSP:ADH以1:1至1:10的重量比混合，OSP:CPPT的比例可为0.5至1.5，反应在范围为7至10的pH下进行，反应持续时间为1小时至2小时，温度范围为2℃至30℃。
第五实施方式的又一方面，在缀合之前，可不通过杂双功能接头或同双功能接头衍生化多糖以包括氨基和/或羧基。
第五实施方式的优选方面，其中可使用碳二亚胺缀合化学反应，将伤寒沙门氏菌多糖(ViP)共价键合至载体蛋白，其中任何水溶性碳二亚胺，更优选1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)可用作催化剂。
更优选地，可使用碳二亚胺缀合化学反应，将Vi多糖共价缀合至ADH衍生化的载体蛋白，其中任何水溶性碳二亚胺，更优选1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)可用作催化剂。
更优选地，可使用碳二亚胺缀合化学反应，将Vi多糖共价缀合至ADH衍生化的破伤风类毒素，其中任何水溶性碳二亚胺，更优选1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)可用作催化剂。
仍可选地，可使用碳二亚胺缀合化学反应，将ADH衍生化的Vi多糖共价键合至ADH衍生化的破伤风类毒素，其中任何水溶性碳二亚胺，更优选1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)可用作催化剂。
仍可选地，可使用碳二亚胺缀合化学反应，将ADH衍生化的Vi多糖共价键合至破伤风类毒素，其中任何水溶性碳二亚胺，更优选1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)可用作催化剂。
更优选地，在存在1-乙基-3(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDAC)的情况下，使用碳二亚胺缀合反应，将纯化的ViP共价键合至载体蛋白(CP)，ViP:EDAC以1:0.5至1:2的重量比混合，并且Vi多糖与载体蛋白的比例可为0.5至1.5，反应在范围为5至7的pH，范围为2℃至30℃的温度下进行。
第五实施方式的又一方面，可在存在1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)的情况下，将Vi多糖(ViP)共价键合至ADH衍生化的破伤风类毒素(TT)，其中ViP:TT:EDC的重量比可为1:1:2，并且Vi多糖和破伤风类毒素的浓度可为0.1mg/mL至10.0mg/mL，并且Vi多糖和破伤风类毒素的比例可为0.5至1.5。
第五实施方式的又一方面，可在存在1-乙基-3(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDC)的情况下，在范围为5至7，更优选6的pH下；范围为2℃至30℃；更优选10℃至25℃的温度下，进行Vi多糖(ViP)与衍生破伤风类毒素(TT)的反应，并且缀合转化效率≥70％，更优选≥90％并且缀合物的分子尺寸优选为1000kDa至1600kDa。
进一步，可通过将pH从约6至约7升高到8来停止在存在碳二亚胺如1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)的情况下衍生化的破伤风类毒素(TT)和Vi多糖(ViP)的反应。
根据第五实施方式的一个方面，可使用氰化缀合化学反应，将副伤寒沙门氏菌A多糖(OSP)缀合至载体蛋白，其中氰基化试剂选自下述的组中：1-氰基-4-吡咯烷基吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)、1-氰基-咪唑(1-CI)、1-氰基苯并三唑(1-CBT)、1-氰基-4-(二甲基氨基)-吡啶鎓四氟硼酸盐(CDAP)、对硝基苯基氰酸酯和N-氰基三乙基四氟硼酸铵(CTEA)或2-氰基哒嗪-3(2H)酮(2-CPO)。
更优选地，可使用氰化缀合化学反应，将副伤寒沙门氏菌A OSP缀合至载体蛋白，其中氰基化试剂是1-氰基-4-吡咯烷吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)或(CPIP)。
更优选地，使用氰化缀合化学反应，将纯化的副伤寒沙门氏菌A OSP共价键合至载体蛋白(CP)，其中氰基化试剂是1-氰基-4-吡咯烷吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)，OSP:CPPT以1:0.5至1:2的重量比混合，并且OSP和载体蛋白的比例可为0.5至1.5，反应在范围为5至7的pH、范围为2℃至30℃的温度下进行。
更优选地，用于与副伤寒沙门氏菌A多糖OSP缀合的载体蛋白可为破伤风类毒素。
更优选地，用于与副伤寒沙门氏菌A多糖OSP缀合的载体蛋白可为白喉类毒素。
更优选地，用于与副伤寒沙门氏菌A多糖OSP缀合的载体蛋白可为CRM197。
第五实施方式的又一方面，可使用氰化缀合化学反应，将鼠伤寒沙门氏菌多糖缀合至载体蛋白，其中氰基化试剂选自下述的组中：1-氰基-4-吡咯烷基吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)、1-氰基-咪唑(1-CI)、1-氰基苯并三唑(1-CBT)、1-氰基-4-(二甲基氨基)-吡啶鎓四氟硼酸盐(CDAP)、对硝基苯基氰酸酯和N-氰基三乙基四氟硼酸铵(CTEA)或2-氰基哒嗪-3(2H)酮(2-CPO)。
更优选地，可使用氰化缀合化学反应，将鼠伤寒沙门氏菌多糖缀合至载体蛋白，其中氰基化试剂是1-氰基-4-吡咯烷吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)。
更优选地，用于与鼠伤寒沙门氏菌多糖缀合的载体蛋白可为破伤风类毒素。
更优选地，用于与鼠伤寒沙门氏菌多糖缀合的载体蛋白可为白喉类毒素。
更优选地，用于与鼠伤寒沙门氏菌多糖缀合的载体蛋白可为CRM 197。
第五实施方式的又一方面，可使用氰化缀合化学反应，将肠炎沙门氏菌多糖缀合至载体蛋白，其中氰基化试剂选自下述的组中：1-氰基-4-吡咯烷吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)、1-氰基-咪唑(1-CI)、1-氰基苯并三唑(1-CBT)、1-氰基-4-(二甲基氨基)-吡啶鎓四氟硼酸盐(CDAP)、对硝基苯基氰酸酯和N-氰基三乙基四氟硼酸铵(CTEA)或2-氰基哒嗪-3(2H)酮(2-CPO)。
更优选地，可使用氰化缀合化学反应，将肠炎沙门氏菌多糖缀合至载体蛋白，其中氰基化试剂是1-氰基-4-吡咯烷吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)。
更优选地，用于与肠炎沙门氏菌多糖缀合的载体蛋白可为破伤风类毒素。
更优选地，用于与肠炎沙门氏菌多糖缀合的载体蛋白可为白喉类毒素。
更优选地，用于与肠炎沙门氏菌多糖缀合的载体蛋白可为CRM 197。
申请人已经发现了通过利用替代的缀合方法、多糖与蛋白质的比例、多糖与缀合剂的比例、使用适当的接头、合适多糖的尺寸来稳定最终多糖-蛋白质缀合物的方法。其可使得疫苗中多糖-蛋白质缀合物的比例提高，进而可减少缀合物中游离糖和游离蛋白的数量，降低载体蛋白抑制，提高缀合物的无菌过滤性，更好地控制缀合，并且更大的内部部分交联间接地提供了良好的免疫应答。
申请人发现多种因素影响多糖和蛋白质的偶联，这取决于ViP的分子量、选择的载体蛋白的类型、使用的多糖:载体蛋白的量的比例、官能团的活化、间隔子和缀合化学反应的使用。
第五实施方式的又一方面，在缀合反应之后，该方法可包括通过切向流超滤(TFF)进行浓缩和通过使用具有100kDa或300kDa截留分子量(MWCO)的膜的透析过滤(DF)进行缓冲液交换的步骤；从而将缀合物原液浓缩至少3倍，并且基本上去除所有未反应的化合物、未缀合的多糖、未缀合的蛋白质和残留的EDC，产生纯化的Vi多糖缀合物疫苗。
此外，该方法可包括凝胶过滤色谱，由此缀合物原液被浓缩至少3倍，并且基本上去除所有未反应的化合物、未缀合的多糖、未缀合的蛋白质和残留的EDC，产生纯化的伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖缀合物疫苗，其中缀合物产率≥50％。
进一步，纯化工艺可包括超滤和凝胶过滤色谱的组合。
根据第六实施方式，免疫原性组合物可为单价疫苗，其包括与载体蛋白缀合的伤寒沙门氏菌Vi多糖或与载体蛋白缀合的副伤寒沙门氏菌A多糖或与载体蛋白缀合的鼠伤寒沙门氏菌或与载体蛋白缀合的肠炎沙门氏菌。
根据本公开的第七实施方式，其中所述免疫原性组合物可包括至少一种二价组合：
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白(CP)缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白(CP)缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白(CP)缀合物抗原；
b)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白(CP)缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
根据本公开的第八实施方式，其中所述免疫原性组合物可包括至少一种三价组合：
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白(CP)缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
根据本公开的第九实施方式，其中四价免疫原性组合物可包括：i)与载体蛋白(CP)缀合的伤寒沙门氏菌Vi多糖，ii)与载体蛋白缀合的副伤寒沙门氏菌多糖，iii)与载体蛋白缀合的肠炎沙门氏菌多糖，和iv)与载体蛋白缀合的鼠伤寒沙门氏菌多糖。
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
根据本发明的第十实施方式，免疫原性组合物可进一步包括一种或多种抗原，所述抗原选自但不限于副伤寒沙门氏菌B、副伤寒沙门氏菌C、沙门氏菌抗原比如外膜囊泡、外膜蛋白(例如，OmpC、OmpD、OmpF)、铁载体(siderophores)(肠杆菌素)、III型分泌系统蛋白(例如，SipB、SipD、SseB、SseC和Prgi)、鞭毛蛋白、非伤寒沙门氏菌物种(Non-typhoidalSalmonella spp)、志贺杆菌(Shigella)、索氏志贺杆菌(Shigella sonnei)、痢疾志贺杆菌(Shigella dysenteriae)、福氏志贺杆菌(Shigella flexneri)、鲍氏志贺杆菌(Shigellaboydii)、大肠埃希杆菌(Escherichia coli)、阴沟肠杆菌物种(Enterobacter species)、耶尔森菌物种(Yersinia species)、假单胞菌物种(Pseudomonas species)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)(a、c、d、e、f血清型和未包封的毒株)、肝炎(A、C、D、E、F和G毒株)、流感、葡萄球菌物种(Staphylococcusspp.)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、5型金黄色葡萄球菌、8型金黄色葡萄球菌、链球菌物种(Streptococcus spp)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)(1、2、3、4、5、6A、6B、6C、6D、6E、6G、6H、7A、7B、7C、7F、8、9A、9L、9F、9N、9V、10F、10B、10C、10A、11A、11F、11B、11C、11D、11E、12A、12B、12F、13、14、15A、15C、15B、15F、16A、16F、17A、17F、18C、18F、18A、18B、19A、19B、19C、19F、20、20A、20B、21、22A、22F、23A、23B、23F、24A、24B、24F、25F、25A、27、28F、28A、29、31、32F、32A、33A、33C、33D、33E、33F、33B、34、45、38、35A、35B、35C、35F、36、37、38、39、40、41F、41A、42、43、44、45、46、47F、47A、48)、A组链球菌、B组链球菌(Streptococcus)(Ia、Ib、II、III、IV、V、VI、VII、VII、VIII和IX组)、脑膜炎奈氏球菌(Neisseria meningitidis)、肺炎嗜血杆菌(Haemophilus pneumonia)、幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)、肺炎衣原体(hlamydia pneumoniae)、沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis)、解脲尿支原体(Ureaplasma urealyticum)、肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、无乳链球菌(Streptococcuspyogenes)、草绿色链球菌(Streptococcus viridans)、粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、粪肠球菌淋病奈瑟菌(Enterococcusfaecalis Neisseria gonorrhoeae)、炭疽杆菌(Bacillus anthracis)、霍乱弧菌(Vibriocholerae)、鼠疫杆菌(Pasteurella pestis)、弯曲杆菌物种(Campylobacter spp)、空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)、梭菌物种(Clostridium spp)、破伤风梭菌(Clostridiumtetani)、艰难梭菌(Clostridium difficile)、分枝杆菌物种(Mycobacterium spp)、结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、粘膜炎莫拉氏菌(M.catarrhalis)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、密螺旋体物种(Treponema spp)、疏螺旋体物种(Borreliaspp)、布氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、细螺旋体物种(Leptospira spp)、杜克雷嗜血杆菌(Hemophilus ducreyi)、白喉棒状杆菌(Corynebacterium diphtheria)、百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、副百日咳博德特氏菌(Bordetella parapertussis)、支气管炎博德特氏菌(Bordetella bronchiseptica)、志贺杆菌物种(Shigella spp)、埃立克体物种(Erlichia spp)、立克次氏体(Rickettsia spp)和脑膜炎奈氏球菌多糖(A、B、C、D、W135、X、Y、Z和29E)无细胞百日咳抗原、修饰的腺苷酸环化酶、疟疾抗原(RTS，S)、炭疽热(anthrax)、登革热(dengue)、疟疾(malaria)、麻疹(measles)、腮腺炎(mumps)、风疹(rubella)、BCG、人乳头瘤病毒(Human papilloma virus)、日本脑炎(Japaneseencephalitis)、登革热(Dengue)、寨卡(Zika)、埃博拉(Ebola)、基孔肯雅病毒(Chikungunya)、脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)、轮状病毒(Rotavirus)、天花(smallpox)、黄热病(yellow fever)、黄病毒(Shingles)、带状疱疹(Flavivirus)和水痘病毒(Varicella virus)抗原。
根据本公开的第十一实施方式，其中所述组合物包括下述的至少一种组合：
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌W-135糖-载体蛋白缀合物抗原；
f)脑膜炎奈氏球菌X糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
f)脑膜炎奈氏球菌W-135糖-载体蛋白缀合物抗原；
g)脑膜炎奈氏球菌X糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
f)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
g)脑膜炎奈氏球菌W-135糖-载体蛋白缀合物抗原；
h)脑膜炎奈氏球菌X糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
f)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
g)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
h)脑膜炎奈氏球菌W-135糖-载体蛋白缀合物抗原；
i)脑膜炎奈氏球菌X糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
f)脑膜炎奈氏球菌W-135糖-载体蛋白缀合物抗原；
g)脑膜炎奈氏球菌X糖-载体蛋白缀合物抗原
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌W-135糖-载体蛋白缀合物抗原
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
f)脑膜炎奈氏球菌W-135糖类-载体蛋白缀合物抗原
或
a)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
f)脑膜炎奈氏球菌W-135糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
更优选地，0.5ml的组合物包括5μg剂量的脑膜炎奈氏球菌A糖-TT缀合物抗原
更优选地，0.5ml的组合物包括5μg剂量的脑膜炎奈氏球菌C糖-CRM197缀合物抗原
更优选地，0.5ml的组合物包括5μg剂量的脑膜炎奈瑟球菌Y糖-CRM197缀合物抗原
更优选地，0.5ml的组合物包括5μg剂量的脑膜炎奈氏球菌W糖-CRM197缀合物抗原
更优选地，0.5ml的组合物包括5μg剂量的脑膜炎奈氏球菌X糖-TT缀合物抗原
根据本公开的第十二实施方式，其中所述免疫原性组合物包括下述的至少一种组合：
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原
c)白喉类毒素(D)抗原
d)破伤风类毒素(T)抗原
e)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
f)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和
g)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原
c)轮状病毒抗原；
d)白喉类毒素(D)抗原
e)破伤风类毒素(T)抗原
f)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
g)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和
h)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原
d)白喉类毒素(D)抗原
e)破伤风类毒素(T)抗原
f)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
g)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和
h)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)轮状病毒抗原；
d)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原
e)白喉类毒素(D)抗原
f)破伤风类毒素(T)抗原
g)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
h)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和
i)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原
e)白喉类毒素(D)抗原
f)破伤风类毒素(T)抗原
g)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
h)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和
i)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)轮状病毒抗原；
e)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原
f)白喉类毒素(D)抗原
g)破伤风类毒素(T)抗原
h)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
i)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和
j)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原
f)白喉类毒素(D)抗原
g)破伤风类毒素(T)抗原
h)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
i)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和
j)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)轮状病毒抗原；
f)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原
g)白喉类毒素(D)抗原
h)破伤风类毒素(T)抗原
i)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
j)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和
k)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
更优选地，每0.5ml的组合物包括量为1Lf至50Lf的白喉类毒素(D)抗原
更优选地，每0.5ml的组合物包括量为1Lf至30Lf的破伤风类毒素(T)
更优选地，组合物包括量为1IOU至50IOU/0.5ml的全细胞百日咳(wP)抗原或选自下述的包括一种或多种修饰的腺苷酸环化酶的无细胞百日咳(aP)抗原：每0.5ml，1μg至50μg的百日咳类毒素(PT)、1μg至50μg的丝状血凝素(FHA)、1μg至20μg的百日咳杆菌粘附素(P69或PRN)或2μg至25μg的菌毛蛋白(FIM 1、2和3)；
更优选地，该组合物包括含量为1μg至20μg/0.5ml的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；
更优选地，该组合物包括含量为1μg至20μg/0.5ml的流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
更优选地，该组合物包括选自CDC-9、CDC-66或任何其他灭活轮状病毒毒株的灭活轮状病毒抗原，以范围为1μg至50μg/0.5ml的量存在；
更优选地，该组合物包括选自Sabin或Salk毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原，其中每0.5ml中1至50D抗原单位(DU)剂量的1型IPV、1至50D抗原单位(DU)剂量的2型IPV或1至50D抗原单位(DU)剂量的3型IPV；
根据本公开的第十三实施方式，其中免疫原性组合物包括下述的至少一种组合：
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)轮状病毒抗原；
c)致泻大肠埃希杆菌物种(产肠毒素大肠埃希杆菌和肠出血性大肠埃希杆菌)抗原；
d)志贺杆菌物种抗原；
e)空肠弯曲杆菌抗原；
f)霍乱弧菌抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)轮状病毒抗原；
d)致泻大肠埃希杆菌物种(产肠毒素大肠埃希杆菌和肠出血性大肠埃希杆菌)抗原；
e)志贺杆菌物种抗原；
f)空肠弯曲杆菌抗原；
g)霍乱弧菌抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)轮状病毒抗原；
d)致泻大肠埃希杆菌物种(产肠毒素大肠埃希杆菌和肠出血性大肠埃希杆菌)抗原；
e)志贺杆菌物种抗原；
f)空肠弯曲杆菌抗原
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)轮状病毒抗原；
d)致泻大肠埃希杆菌物种(产肠毒素大肠埃希杆菌和肠出血性大肠埃希杆菌)抗原；
e)志贺杆菌属抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)轮状病毒抗原；
d)志贺杆菌物种抗原；
或
a)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)轮状病毒抗原；
d)致泻大肠埃希杆菌物种(产肠毒素大肠埃希杆菌和肠出血性大肠埃希杆菌)抗原；
e)志贺杆菌物种抗原；
f)空肠弯曲杆菌抗原；
g)霍乱弧菌抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)轮状病毒抗原；
e)致泻大肠埃希杆菌物种(产肠毒素大肠埃希杆菌和肠出血性大肠埃希杆菌)抗原；
f)志贺杆菌物种抗原；
g)空肠弯曲杆菌抗原；
h)霍乱弧菌抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)轮状病毒抗原；
f)致泻大肠埃希杆菌属(产肠毒素和肠出血)抗原；
g)志贺杆菌物种抗原；
h)空肠弯曲杆菌抗原；
i)霍乱弧菌抗原；
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
更优选地，0.5ml的组合物包括剂量范围为1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197
更优选地，该组合物包括选自CDC-9、CDC-66或任何其他灭活轮状病毒毒株的灭活轮状病毒抗原，以范围为1μg至50μg/0.5ml的量存在；
根据实施方式的一个方面，免疫原性组合物还可包括选自碳酸盐、磷酸盐、乙酸盐、HEPES、琥珀酸盐、组氨酸、TRIS、硼酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、葡糖酸盐和酒石酸盐的组的缓冲液以及更复杂的有机缓冲液，其包括含有经选择实现期望的pH值的比例的磷酸钠和/或磷酸钾的磷酸盐缓冲液。在另一实施例中，缓冲液含有三(羟甲基)氨基甲烷或“Tris”，其配制为实现期望的pH。在另一实施例中，缓冲液可为含有汉克斯盐的最低限度基本培养基。本公开还设计了其他缓冲液，例如HEPES、哌嗪-N,N’-双(PIPES)和2-乙磺酸(MES)。缓冲液有助于稳定本公开的免疫原性组合物。缓冲液的量可在0.1mM至100mM范围内，优选选自5mM、6mM、7mM、22mM、23mM、24mM、25mM、26mM、27mM、28mM、29mM和30mM。缓冲液的量可在0.1mg至2.0mg的范围内。
柠檬酸盐缓冲液可通过溶解范围为1.05mg至2.63mg的柠檬酸一水化物(CAM)和范围为1.47mg至3.68mg的无水柠檬酸三钠(TCD)来制备。
优选地，免疫原性组合物可另外包括范围为0.1mg至2.0mg的TRIS或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液。
优选地，免疫原性组合物可另外包括范围为0.61mg至1.52mg的TRIS缓冲液。
优选地，免疫原性组合物可另外包括范围为10mM至25mM的柠檬酸盐缓冲液。
优选地，免疫原性组合物可另外包括范围为0.78mg至1.94mg的组氨酸缓冲液。
优选地，免疫原性组合物可另外包括范围为0.59mg至1.48mg的琥珀酸盐缓冲液。
该实施方式的又一方面，免疫原性组合物可另外包括药学上可接受的赋形剂，所述赋形剂选自由糖、表面活性剂、聚合物、盐、氨基酸或pH调节剂组成的组。
表面活性剂的示例可包括离子和非离子表面活性剂，比如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85、壬基苯氧基聚乙醇、叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇、辛苯醇醚40、壬氧基醇-9、三乙醇胺、三乙醇胺多肽油酸盐、聚氧乙烯660羟基硬脂酸酯、聚氧乙烯35蓖麻酸盐、大豆卵磷脂和泊洛沙姆。
优选地，免疫原性组合物可包括作为药学上可接受的赋形剂的聚山梨醇酯20。
聚合物的示例可包括葡聚糖、羧甲基纤维素、透明质酸、环糊精等。
盐的示例可包括NaCl、KCl、KH2PO4、Na2HPO4·2H2O、CaCl2、MgCl2等。优选地，盐可为NaCl。通常盐的量的范围可为100mM至200mM。
优选地，免疫原性组合物可包括范围为1mg至10mg的氯化钠。
作为赋形剂的氨基酸的示例选自由以下的组：L-组氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、三(羟甲基)甲基甘氨酸、精氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、肽、水解蛋白质或蛋白质比如血清白蛋白。
优选地，免疫原性组合物可包括组氨酸。
作为赋形剂的糖的示例选自下述的组中：蔗糖、甘露糖醇、海藻糖、甘露糖、棉子糖、乳糖醇、乳糖醛酸、葡萄糖、麦芽酮糖、异麦芽酮糖、麦芽糖、乳糖山梨糖醇、右旋糖、果糖、甘油或其组合。
优选地，免疫原性组合物可另外包括蔗糖。
作为赋形剂的聚合物的示例选自下述的组中：葡聚糖、羧甲基纤维素、透明质酸、环糊精。
更优选地，单剂量组合物不含防腐剂。
更优选地，多剂量免疫原性组合物可另外包括防腐剂，该防腐剂选自由下述组成的组中：2-苯氧乙醇、苄索氯铵(苯乙酮)、苯酚、间甲酚、硫柳汞、甲醛、对羟基苯甲酸酯(例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯或对羟基苯甲酸丁酯)、苯扎氯铵、苯甲醇、氯丁醇、对氯间甲酚或苯甲醇或其组合。疫苗组合物可包括用于单次免疫的材料，或可包括用于多次免疫的材料(即“多剂量”试剂盒)。在多剂量布置中优选包括防腐剂。作为在多剂量组合物中包括防腐剂的替代(或补充)，组合物可被包括在具有用于去除材料的无菌适配器的容器中。优选地，防腐剂可为范围为0.1mg至50mg，更优选1mg至10mg的2-苯氧乙醇。
在实施方式的又一方面中，取决于施用途径和期望的制备，免疫原性组合物可另外包括辅助物质，比如润湿剂或乳化剂、稀释剂、pH缓冲液、凝胶或增粘添加剂、防腐剂、调味剂、色素等。
在实施方式的又一优选方面中，免疫原性组合物可另外包括作为稀释剂的注射用水。
在实施方式的又一方面中，免疫原性组合物可另外包括选自铝盐、氢氧化铝、磷酸铝、羟基磷酸铝和硫酸铝钾的组的佐剂。
在实施方式的又一方面中，免疫原性组合物可另外包括选自由下述组成的组中的免疫刺激组分：油水乳液、MF-59、脂质体、脂多糖、皂苷、脂质A、脂质A衍生物、单磷酰基脂质A、3-脱酰基单磷酰脂质A、AS01、AS03、寡核苷酸、包括至少一个未甲基化的CPG和/或脂质体的寡核苷酸、弗氏佐剂、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、聚合物，比如包括嵌段共聚物、聚合物p 1005的聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物的共聚物、CRL-8300佐剂、胞壁酰二肽、TLR-4激动剂、鞭毛蛋白、源自革兰氏阴性菌的鞭毛蛋白、TLR-5激动剂、能够结合TLR-5受体的鞭毛蛋白的片段、α-C-半乳糖基神经酰胺、壳聚糖、白细胞介素2、QS-21、ISCOMS、角鲨烯混合物(SAF-1)、Quil A、霍乱毒素B亚单位、聚磷腈和衍生物、分支杆菌细胞壁制剂、分枝菌酸衍生物、非离子嵌段共聚物表面活性剂、OMV、fHbp、皂苷与甾醇和脂质的组合。
在实施方式的又一方面中，免疫原性组合物可为全液体。液体制剂的合适形式可包括缓冲至选定pH的溶液、悬液、乳液、糖浆、等渗水溶液、粘性组合物和酏剂。
更优选地，免疫原性组合物可为全液体，可以在2℃至8℃、25℃和40℃下稳定超过六个月的时间，并且，在6个月后对于180kDa至220kDa多糖，游离多糖不大于7.5％，并且在6个月后对于388/80/45kDa多糖，游离多糖不大于10.5％。
本公开的免疫原性组合物可为经皮制剂的形式，包括洗液、凝胶、喷雾剂、药膏或其他适当的技术形式。如果期望鼻腔或呼吸道(粘膜)施用(例如，气溶胶吸入或吹入)，则组合物可为采用挤压喷雾分配器、泵分配器或气溶胶分配器分配的形式。气溶胶通常由于碳氢化合物的作用而处于压力下。泵分配器可优选地分配计量剂量或具有特定粒度的剂量。当为溶液、悬液和凝胶形式时，在一些实施方式中，除了活性成分外，免疫原性组合物还含有大量的水(优选纯化水)。在实施方式的又一可选方面中，免疫原性组合物可为冻干或冷冻干燥的组合物。
如本文使用的，术语“冷冻干燥”或“冻干的”或“冻干”涉及冻干并且指将悬液/溶液冷冻，之后通过在低压下升华除去水的工艺。如本文使用的，术语“升华”是指组合物物理性质的变化，其中组合物直接从固态变为气态而不变成液态。
相应地，冻干的免疫原性组合物可在2℃至8℃下稳定12至36个月；在25℃下稳定2至6个月；在37℃下稳定1至4周，在42℃下稳定2至7天，在55℃下稳定2至7天。
根据实施方式的一个方面，用于重构冻干的免疫原性组合物的方法可包括用水溶液(任选盐水或注射用水(WFI))重构冻干的免疫原性组合物的步骤，其中，重构后的免疫原性组合物的最终pH在pH 6.0至pH 8.0的范围内；更优选在pH 7.0至pH 8.0的范围内；仍更优选在pH 7.2至pH 7.9的范围内；并且最优选在pH7.5至pH 7.9的范围内。
根据本公开的第九实施方式，免疫原性组合物可被配制用于减少包括伤寒沙门氏菌血清型伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌感染的健康状况的发作或预防该健康状况的方法，其涉及通过肠胃外或皮下或皮内、肌内或腹膜内或静脉内施用或注射施用或从植入物中持续释放或通过滴眼剂或鼻或直肠或颊或阴道、经口腔或胃内或粘膜或腹膜、肺泡或牙龈或嗅觉或呼吸道粘膜或任何其他免疫途径向人类受试者施用免疫有效量的免疫原性组合物。
根据实施方式的优选方面，可通过肌内途径或皮下向人类受试者施用免疫原性组合物。
根据实施方式的优选方面，用于针对沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌感染细菌感染的疫苗接种的免疫有效量的包括多糖-蛋白质缀合物的免疫原性组合物可为约1μg/0.5ml的沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌或肠炎沙门氏菌的多糖缀合物或小于约100μg/0.5ml的沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌或肠炎沙门氏菌的多糖缀合物或更多。在一些其他方面中，其可为每0.5ml单次剂量约2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45或50μg至约55、60、65、70、75、80、85、90或95μg。在一些实施方式中，用于针对沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌感染细菌感染疫苗接种的免疫有效量为1μg/0.5ml至50μg/0.5ml；更优选伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原以约5ug/0.5ml至约30ug/0.5ml的剂量范围存在；更优选伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原以约25ug/0.5ml的剂量存在。
根据本公开的第十实施方式，可以有效产生中和抗体和保护的剂量肌内或皮下施用免疫原性组合物。疫苗以与剂型相容的方式施用，施用量将预防和/或治疗伤寒和NTS感染。在有感染风险的老年人、青少年、成人或儿童中可施用作为初级预防剂的本公开的免疫原性组合物，或可作为治疗感染患者的次级试剂施用。例如，如本文公开的免疫原性组合物可用于有沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌感染风险的老年人、青少年、成人或2岁以下或2岁以上的儿童，或可作为治疗沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌感染的患者的次级试剂。
仍可选地，可在12个月左右的年龄出现高峰发病率之前，在2至4个月大的婴儿中施用NTS的疫苗。此外，疫苗实施可能还包括感染HIV的人群，因为他们感染NTS的风险更高。在发达国家中，NTS疫苗可针对经历非常高(高达50％)的病死率的老年人。有人建议，在儿童中，可能在6、10和14周，计划性实地实施将直接与现有的扩大免疫计划整合。
更优选地，可以约0.5ml或1ml的剂量体积肌内或皮下施用免疫原性组合物。
根据本公开的第十一实施方式，免疫原性组合物可配制成单剂量小瓶或多剂量小瓶(2剂量或5剂量或10剂量小瓶)或多剂量试剂盒或预填充注射器，其中可在单剂量方案中或优选在多剂量方案中给予所述免疫原性组合物，其中在疫苗接种的主要过程之后，如果需要，在1-3年后的后续时间间隔子内给予1-3次单独的剂量。也将至少部分地根据赋予保护性免疫期望的加强剂量的需要来确定剂量方案。
更优选地，免疫原性组合物可配制用于根据一剂或两剂方案或三剂方案施用至人类受试者的老年人、青少年、成人或小于2岁或大于2岁的儿童，所述方案由下述组成：第一剂和/或在第一剂之后3个月至2年内施用的第二剂和/或在第二剂之后3个月至2年内施用的第三剂。
根据本公开的第十一实施方式，免疫原性组合物可以与其他药物或任何其他疫苗同时施用。
根据第十一实施方式的又一方面，其中单剂量疫苗试剂盒可包括：
含有冻干(冷冻干燥)免疫原性组合物的第一容器：
a)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌A糖类-TT缀合物抗原；
b)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌C糖-CRM197缀合物抗原；
c)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌Y糖-CRM197缀合物抗原；
d)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌W-135糖类-CRM197缀合物抗原；
e)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌X糖-TT缀合物抗原；
f)1mg至12mg/0.5ml的蔗糖；
g)0.1mg至2mg/0.5ml的柠檬酸钠二水化物；
h)0.05mg至0.5mg/0.5ml的Tris缓冲液；
和
包括用于重构冻干(冷冻干燥)免疫原性组合物的液体组合物的第二个容器，包括：
a)1.25μg至50μg/0.5ml的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1mg至10mg/0.5ml的氯化钠；
c)适量的注射用水(WFI)；
其中ViP-TT与脑膜炎奈氏球菌抗原没有抗原性干扰，用于预防由伤寒沙门氏菌和脑膜炎奈氏球菌抗原引起的伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对伤寒沙门氏菌期望的T依赖性免疫应答。
根据第十一实施方式的第二方面，其中单剂量疫苗试剂盒可包括：
含有冻干(冷冻干燥)免疫原性组合物的第一容器：
a)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌A糖类-TT缀合物抗原；
b)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌C糖-CRM197缀合物抗原；
c)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌Y糖-CRM197缀合物抗原；
d)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌W-135糖类-CRM197缀合物抗原；
e)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌X糖-TT缀合物抗原；
f)1mg至12mg/0.5ml的蔗糖；
g)0.1mg至2mg/0.5ml的柠檬酸钠二水化物；
h)0.05mg至0.5mg/0.5ml的Tris缓冲液；
和
包括用于重构冻干(冷冻干燥)免疫原性组合物的液体组合物的第二个容器，包括：
a)1.25μg至50μg/0.5ml的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg/0.5ml的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg/0.5ml的氯化钠；
d)适量的注射用水(WFI)；
其中ViP-TT、OSP抗原与脑膜炎奈氏球菌抗原无抗原干扰，用于预防由伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌和脑膜炎奈氏球菌抗原引起的伤寒和副伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌期望的T依赖性免疫应答。
根据第十一实施方式的第三方面，其中单剂量疫苗试剂盒可包括：
含有全液体六价免疫原性组合物的第一容器：
a)选自Sabin或Salk毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原，其中每0.5ml中1至50D抗原单位(DU)剂量的1型IPV、1至50D抗原单位(DU)剂量的2型IPV或1至50D抗原单位(DU)剂量的3型IPV；
b)量为1Lf至50Lf/0.5ml的白喉类毒素(D)抗原；
c)量为1Lf至30Lf/0.5mlde破伤风类毒素(T)抗原；
d)量为1IOU至50IOU/0.5ml的全细胞百日咳(wP)抗原或选自下述的包括一种或多种修饰的腺苷酸环化酶的无细胞百日咳(aP)抗原：每0.5ml，1μg至50μg的百日咳类毒素(PT)、1μg至50μg的丝状血凝素(FHA)、1μg至20μg的百日咳杆菌粘附素(P69或PRN)或2μg至25μg的菌毛蛋白(FIM 1、2和3)；
e)量为1μg至20μg/0.5ml的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；
f)量为1μg至20μg/0.5ml的流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
和
含有全液体免疫原性组合物的第二容器，包括：
a)1.25μg至50μg/0.5ml的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1mg至10mg/0.5ml的氯化钠；和/或
c)0.1mg至1.6mg/0.5ml的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；和/或
d)量为25μg至500μg/0.5ml的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯、壬基苯氧基聚乙氧基乙醇、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇、辛苯醇醚40、壬苯醇醚-9、三乙醇胺、三乙醇胺多肽油酸盐、聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐、聚氧乙烯-35蓖麻酸酯、大豆卵磷脂和泊洛沙姆；和/或
e)1mg至10mg/0.5ml的2-苯氧乙醇；和/或
f)适量的注射用水(WFI)。
其中ViP-TT与六价免疫原性组合物无抗原干扰，用于预防由伤寒沙门氏菌和六价抗原引起的伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对伤寒沙门氏菌期望的T依赖性免疫应答。
根据第十一实施方式的第四方面，其中单剂量疫苗试剂盒可包括：
含有全液体六价免疫原性组合物的第一容器：
a)选自Sabin或Salk毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原，其中每0.5ml中1至50D抗原单位(DU)剂量的1型IPV、1至50D抗原单位(DU)剂量的2型IPV或1至50D抗原单位(DU)剂量的3型IPV；
b)量为1Lf至50Lf/0.5ml的白喉类毒素(D)抗原；
c)量为1Lf至30Lf/0.5m的破伤风类毒素(T)抗原；
d)量为1IOU至50IOU/0.5ml的全细胞百日咳(wP)抗原或选自下述的包括一种或多种修饰的腺苷酸环化酶的无细胞百日咳(aP)抗原：每0.5ml，1μg至50μg的百日咳类毒素(PT)、1μg至50μg的丝状血凝素(FHA)、1μg至20μg的百日咳杆菌粘附素(P69或PRN)或2μg至25μg的菌毛蛋白(FIM 1、2和3)；
e)量为1μg至20μg/0.5ml的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；
f)量为1μg至20μg/0.5ml的流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
和
含有全液体免疫原性组合物的第二容器，包括：
a)1.25μg至50μg/0.5ml的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg/0.5ml的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；和/或
d)0.1mg-1.6mg/0.5ml的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；和/或
g)量为25μg至500μg/0.5ml的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯、壬基苯氧基聚乙氧基乙醇、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇、辛苯醇醚40、壬苯醇醚-9、三乙醇胺、三乙醇胺多肽油酸盐、聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐、聚氧乙烯-35蓖麻酸盐、大豆卵磷脂和泊洛沙姆；和/或
h)1mg至10mg/0.5ml的2-苯氧乙醇；和/或
e)适量的注射用水(WFI)。
其中ViP-TT、OSP抗原与六价抗原无抗原干扰；用于预防由伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌和六价抗原引起的伤寒和副伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌期望的T依赖性免疫应答。
根据第十一实施方式的第五方面，其中单剂量疫苗试剂盒可包括：
含有全液体七价免疫原性组合物的第一容器：
a)选自Sabin或Salk毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原，其中每0.5ml中1至50D抗原单位(DU)剂量的1型IPV、1至50D抗原单位(DU)剂量的2型IPV或1至50D抗原单位(DU)剂量的3型IPV；
b)量的范围为1μg至50μg/0.5ml的选自CDC-9、CDC-66或任何其他灭活轮状病毒毒株的灭活轮状病毒抗原；
c)量为1Lf至50Lf/0.5ml的白喉类毒素(D)抗原；
d)量为1Lf至30Lf/0.5mlde破伤风类毒素(T)抗原；
e)量为1IOU至50IOU/0.5ml的全细胞百日咳(wP)抗原或选自下述的包括一种或多种修饰的腺苷酸环化酶的无细胞百日咳(aP)抗原：每0.5ml，1μg至50μg的百日咳类毒素(PT)、1μg至50μg的丝状血凝素(FHA)、1μg至20μg的百日咳杆菌粘附素(P69或PRN)或2μg至25μg的菌毛蛋白(FIM 1、2和3)；
f)量为1μg至20μg/0.5ml的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；
g)量为1μg至20μg/0.5ml的流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
和
包括用于重构冻干(冷冻干燥)免疫原性组合物的液体组合物的第二个容器，包括：
a)1.25μg至50μg/0.5ml的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1mg至10mg/0.5ml的氯化钠；
c)适量的注射用水(WFI)；
其中ViP-TT与七价免疫原性组合物无抗原干扰，用于预防由伤寒沙门氏菌和七价抗原引起的伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对伤寒沙门氏菌期望的T依赖性免疫应答。
根据第十一实施方式的第六方面，其中单剂量疫苗试剂盒可包括：
含有全液体七价免疫原性组合物的第一容器：
a)选自Sabin或Salk毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原，其中每0.5ml中1至50D抗原单位(DU)剂量的1型IPV、1至50D抗原单位(DU)剂量的2型IPV或1至50D抗原单位(DU)剂量的3型IPV；
b)量的范围为1μg至50μg/0.5ml的选自CDC-9、CDC-66或任何其他灭活轮状病毒毒株的灭活轮状病毒抗原；
c)量为1Lf至50Lf/0.5ml的白喉类毒素(D)抗原；
d)量为1Lf至30Lf/0.5ml的破伤风类毒素(T)抗原；
e)量为1IOU至50IOU/0.5ml的全细胞百日咳(wP)抗原或选自下述的包括一种或多种修饰的腺苷酸环化酶的无细胞百日咳(aP)抗原：每0.5ml，1μg至50μg的百日咳类毒素(PT)、1μg至50μg的丝状血凝素(FHA)、1μg至20μg的百日咳杆菌粘附素(P69或PRN)或2μg至25μg的菌毛蛋白(FIM 1、2和3)；
f)量为1μg至20μg/0.5ml的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；
g)量为1μg至20μg/0.5ml的流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
和
含有全液体免疫原性组合物的第二容器，包括：
a)1.25μg至50μg/0.5ml的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg/0.5ml的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg/0.5ml的氯化钠；和/或
d)0.1mg至1.6mg/0.5ml的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；和/或
g)量为25μg至500μg/0.5ml的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯、壬基苯氧基聚乙氧基乙醇、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇、辛苯醇醚40、壬苯醇醚-9、三乙醇胺、三乙醇胺多肽油酸盐、聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐、聚氧乙烯-35蓖麻酸盐、大豆卵磷脂和泊洛沙姆；和/或
h)1mg至10mg/0.5ml的2-苯氧乙醇；和/或
e)适量的注射用水(WFI)。
其中ViP-TT、OSP抗原与七价抗原无抗原干扰；用于预防由伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌和七价抗原引起的伤寒和副伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌期望的T依赖性免疫应答。
用于开发本公开的免疫原性组合物的沙门氏菌血清型伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌可包括：具有对Vi多糖特异的“tviB”基因的伤寒沙门氏菌TY2毒株(由Geneombio Technologies Private Limited，Pune鉴定的并从VillooPoonawalla Memorial Hospital，Pune的伤寒证实患者的粪便样本分离的)；伤寒沙门氏菌：ATCC 19430；C6524(NICED，印度，加尔各答)；购自Chromachemie LaboratorY PrivateLimited，Bangalore的副伤寒沙门氏菌A：ATCC 9150、CMCC50073、CMCC50973；肠炎沙门氏菌：ATCC 4931；ATCC 13076；肠炎沙门氏菌R11；肠炎沙门氏菌D24359；肠炎沙门氏菌618；肠炎沙门氏菌502；肠炎沙门氏菌IV3453219；鼠伤寒沙门氏菌：鼠伤寒沙门氏菌2192；ATCC14208；鼠伤寒沙门氏菌2189；鼠伤寒沙门氏菌D23580；ATCC 19585；ATCC700408；(LT2/SL134(ST19))；鼠伤寒沙门氏菌177(ST19)CDC 6516-60；ATCC700720。此外，任何减毒沙门氏菌血清型菌株(伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌)均可用于制备本公开的免疫原性组合物。
伤寒沙门氏菌保藏在普纳(Pune)国际保藏单位NCMR-NCCS，分配的保藏号为MCC0193，毒株名称为PDL-1。
本文公开的其他实施方式还涵盖疫苗试剂盒，其包括含有冻干(冷冻干燥)免疫原性组合物的第一容器和含有用于重构冻干(冷冻干燥)免疫原性组合物的任选盐水或WFI(注射用水)的水溶液的第二容器。
上面特定实施方式的描述充分揭示了本文实施方式的大体性质，使得其他人可通过应用当前的知识容易地修改和/或改编用于这种特定实施方式的各种应用而不背离一般的概念，并且因此，这种改编和修改应该并且旨在包括在公开的实施方式的等同方式的含义和范围内。应理解，本文使用的措辞或术语是为了描述的目的而不是限制的目的。因此，尽管本文已经根据优选实施方式描述了本文的实施方式，但是本领域技术人员将认识到可在如本文描述的实施方式的精神和范围内通过修改来实践本文的实施方式。
在整个本说明书中，词语“包括(comprise)”或比如“包括(comprises)”或“包括(comprising)”的变型将被理解为暗示包括陈述的元件、整数或步骤，或元件的组、整数或步骤，而不是排除任何其他元件、整数或步骤，或元件的组、整数或步骤。
使用表述“一种或多种”或“至少一种”表明使用一种或多种元件或成分或量，因为在本发明的实施例中可使用以实现一个或多个期望的目的或结果。
已包括在本说明书中的对文件、行为、材料、设备、文章等的任何讨论仅用于为本公开提供背景的目的。不应被视为承认任何或所有这些事项构成现有技术基础的一部分，或是与本申请的优先权日期之前任何地方存在的公开相关的领域中的公知常识。
除非说明书中有相反的说明，否则为各种物理参数、尺寸和数量给出的数值仅为近似值，并且预期高于分配给物理参数、尺寸和数量的数值的值落入本发明的范围内。
尽管本文相当强调了优选实施方式的具体特征，但是应理解，可以添加许多附加特征并且可以在优选实施方式中做出许多改变而不背离本公开的原理。对于本领域技术人员而言，从本文的公开来看本公开的优选实施方式中的这些和其他变化将是显而易见的，由此应当清楚地理解，前述描述性事项仅被解释为对公开的说明而不被解释为限制性的。
技术优势：
1、本公开提供了单价和多价多糖-蛋白质缀合疫苗，其包括源自沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的任何组合的多糖；有效保护或治疗针对沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的感染，或预防、改善或延缓其临床表现的发作或进展。
2、改进的上游、下游和缀合工艺。
3、上游发酵培养基不含酪蛋白消化物/蛋白胨、酪蛋白氨基酸。
4、使用i)止泡剂、大豆蛋白胨和酵母提取物的组合；ii)特定DO 36％至39％和iii)重量克分子渗透浓度400mOsmol/kg至600mOsmol/kg，从而使得收获阶段多糖产率提高>50％。
5、改进的纯化方法，具有低内毒素<10EU/μg，低蛋白<1％和低核酸含量<2％，其中纯化工艺i)不含动物源性产品的脱氧胆酸钠(DOC)，甚至最终产品中存在的其残留物可能导致监管机构和某些宗教团体不接受产品；ii)不含Triton X；iii)不含硫酸铵；iv)不含任何吸附剂(羟基磷灰石、磷酸钙或磷灰石)。
6、提高的缀合效率(>60％)，提高的缀合物产率(≥50％)和缀合物的稳定性，其中i)Ps:Pr:EDAC比例为1:1:2；ii)稳定性表明游离多糖<5％(优选<3％)并且游离蛋白<5％(优选<4％)。
7、提高的缀合物的免疫原性，归因于i)具有1200kDa至1600kDa的特定尺寸的Vi多糖-蛋白质缀合物；和ii)用于缀合的多糖的平均分子量为150kDa至300kDa(优选为150kDa至250kDa)。
8、免疫原性组合物在2℃至8℃、25℃和40℃下可稳定6个月以上，6个月后对于180kDa至220kDa多糖，游离多糖不大于7.5％，6个月后对于388/80/45kDa多糖，游离多糖不大于10.5％。
9、用二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗例如a)SIIPL Vi PS-TT+SIIPL O-SP A DT、b)SIIPL Vi PS-TT+SIIPL O-SP ATT和c)SIIPL Vi PS-TT+SIIPL O-SP A CRM Vi TT注射的小鼠组表现出高4倍的IgG诱导(与施用未缀合的Vi PS或未缀合的SIIPL O-SP A的小鼠相比)，因此表明包括Vi TT和SIIPL O-SP A(DT/TT/CRM)的组合的二价SIIPL疫苗的免疫原性潜力。
10、疫苗组成中涉及最少的组分。
实施例
包括以下实施例以展示本发明的优选实施方式。本领域技术人员应理解，以下实施例中公开的组合物和技术代表了发明人发现的在本发明的实践中发挥良好作用的技术，并且因此可认为构成用于其实践的优选模式。然而，本领域的技术人员应该根据本公开内容理解，在不背离本发明的精神和范围的情况下，可对公开的具体实施例进行许多改变并且仍然获得相同或相似的结果。
实施例1：
A)毒株：
用于开发本公开的免疫原性组合物的沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒寒沙门氏菌和肠炎寒沙门氏菌可包括：具有对Vi多糖特异的“tviB”基因的伤寒沙门氏菌TY2毒株(由Geneombio Technologies Private Limited，Pune鉴定并且从Villoo Poonawalla Memorial Hospital，Pune的伤寒证实病人的粪便样本分离)；保藏在普纳国际保藏单位NCMR-NCCS分配保藏号MCC0193的伤寒沙门氏菌；毒株名称PDL-1，伤寒沙门氏菌：ATCC 19430；C6524(NICED，印度，加尔各答)；购自Chromachemie LaboratoryPrivate Limited，Bangalore的副伤寒沙门氏菌A：ATCC 9150，CMCC50073，CMCC50973；肠炎沙门氏菌：ATCC 4931；ATCC 13076；肠炎沙门氏菌R11；肠炎沙门氏菌D24359；肠炎沙门氏菌618；肠炎沙门氏菌502；肠炎沙门氏菌IV3453219；鼠伤寒沙门氏菌：鼠伤寒沙门氏菌2192；ATCC 14208；鼠伤寒沙门氏菌2189；鼠伤寒沙门氏菌D23580；ATCC 19585；ATCC 700408；(LT2/SL134(ST19))；鼠伤寒沙门氏菌177(ST19)CDC 6516-60；ATCC 700720。此外，任何减毒沙门氏菌血清型菌株(伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌)都可以用于制备本公开的免疫原性组合物。
并入WO2018037365、WO2019016654和WO2020075184，以参考白喉类毒素(DT)、破伤风类毒素(TT)、灭活全细胞百日咳(wP)、无细胞百日咳(aP)、乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、流感嗜血杆菌B型抗原(Hib)和灭活脊髓灰质炎病毒(标准剂量和剂量减少的脊髓灰质炎病毒)的制备。
并入WO2018037365，以参考灭活脊髓灰质炎病毒和灭活轮状病毒的制备。
并入WO2013114268，以参考从血清型A、C、W、X和Y制备脑膜炎球菌多糖抗原。
B)通过补料分批工艺获得源自沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多糖的方法，包括以下步骤：
(上游发酵)
1)S1阶段的接种和收获：
用培养基将细胞库小瓶中的0.5ml培养物稀释至5ml，并且将来自其的铂环量的培养物在SCDA平板上划线并且在36±0.5℃培养28小时至32小时。
2)S2阶段的接种和收获。
将来自S1阶段平板的10个分离良好的菌落接种至含有40ml培养基的锥形烧瓶中。在36±0.5℃和150±10RPM下培养烧瓶，直至培养物的光密度(OD)实现2.5至3.5。
3)S3阶段的接种和收获。
当S2阶段培养物的光密度(OD)实现2.5至3.5时，将40ml的培养物扩大至800ml，并且将160ml内容物分配至5个各自1L烧瓶中。在36±0.5℃和150±10rpm下培养烧瓶，直至培养物的OD值实现2.5至3.5的范围。
4)S4阶段的接种和收获(20L发酵罐)。
当S3阶段的培养物的OD值实现2.5至3.5的范围时，将所有五个烧瓶的培养物合并至种子瓶组件中，并且接种在20L发酵罐中。使用下述参数继续发酵。
发酵过程参数。
Figure BDA0003607443070000491
从第三小时开始启动进料培养基，并且按OD值的比例增加。继续发酵13小时至15小时。
5)S4阶段的福尔马林灭活。
S4阶段完成后，向发酵罐中添加甲醛溶液，使其最终浓度为0.5％至1.0％，并且在36℃±2℃下培养8小时至10小时。
6)通过离心分离细胞。
灭活步骤完成后，通过离心使发酵液澄清，并且收集上清液。
使用下述参数进行离心。
Figure BDA0003607443070000501
7)通过深层过滤进行澄清。
离心结束后，用深层过滤器过滤上清液。
8)0.2μ过滤。
深层过滤后，滤液经过0.2μ过滤。
B1.用于伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌生长的培养基优化。
进行下述实验用于培养基优化和分批参数。
实验编号：01-选择Frantz培养基用于实验，因为其被广泛用于革兰氏阴性生物的生长，并且被评估用于伤寒沙门氏菌的生长。Frantz培养基用于种子的发育和发酵。葡萄糖作为碳源包括在进料培养基中。
Figure BDA0003607443070000502
Figure BDA0003607443070000503
种子在一次性烧瓶(125ml和500ml)中发育，并且接种在2L发酵罐中。接种之后，以补料分批模式进行发酵。在发酵罐中添加进料以支持伤寒沙门氏菌生物体的生长。分批发酵在36℃的温度，7.00的pH，25％的溶解氧(DO)和150RPM至500RPM的搅拌速度下操作(以级联模式保持DO)。在发酵期间，间歇性地添加止泡剂以控制起泡。
观察结果:
Figure BDA0003607443070000511
结论：发现Frantz培养基在有限的程度上支持伤寒沙门氏菌的生长。需要进一步优化培养基。
实验编号：02-酵母提取物被添加至发酵和进料培养基中以支持细胞的生长。
Figure BDA0003607443070000512
Figure BDA0003607443070000521
过程：
种子在一次性烧瓶(125ml和500ml)中发育，并且接种至2L发酵罐中。接种之后，以补料分批模式进行发酵。在发酵罐中添加进料以支持伤寒沙门氏菌的生长。分批发酵在36℃的温度，7.00的pH，25％的溶解氧(DO)，150RPM至500RPM的搅拌速度下操作(以级联模式保持DO)。在发酵期间，间歇性地添加止泡剂以控制起泡。
观察结果：
Figure BDA0003607443070000522
结论：发现酵母提取物的添加在有限程度上支持伤寒沙门氏菌的生长。需要进一步优化培养基。
实验编号：03-将大豆蛋白胨添加至发酵和进料培养基中以支持细胞的生长。
Figure BDA0003607443070000531
Figure BDA0003607443070000532
过程：
种子在一次性烧瓶(125ml和500ml)中发育，并且接种至2L发酵罐中。接种之后，以补料分批模式进行发酵。在发酵罐中添加进料以支持伤寒沙门氏菌生物的生长。分批发酵在36℃的温度，7.00的pH，25％的溶解氧(DO)，150RPM至500RPM的搅拌速度下操作(以级联模式保持DO)。在发酵期间，间歇性地添加止泡剂以控制起泡。
观察结果：
Figure BDA0003607443070000533
Figure BDA0003607443070000541
结论：发现添加大豆蛋白胨可以支持伤寒沙门氏菌的生长。需要优化生产的批次参数。
实验编号：04-用止泡剂Struktol取代止泡剂Ctobe以改善细胞生长。
Figure BDA0003607443070000542
Figure BDA0003607443070000543
过程：
种子在一次性烧瓶(125ml和500ml)中发育，并且接种至2L发酵罐中。接种之后，以补料分批模式进行发酵。在发酵罐中添加进料以支持伤寒沙门氏菌生物的生长。分批发酵在36℃的温度，7.00的pH，25％的溶解氧(DO)，150RPM至500RPM的搅拌速度下操作(以级联模式保持DO)。在发酵期间，间歇性地添加止泡剂以控制起泡。
观察结果：
Figure BDA0003607443070000551
结论：发现用止泡剂Struktol替换止泡剂C，可改善伤寒沙门氏菌生物体的生长。
实验编号：05-研究了在下述发酵参数下20L规模批次的伤寒沙门氏菌的生长模式。对于伤寒沙门氏菌的分批发酵，限定适当的参数。溶解氧和重量克分子渗透浓度被控制在实验设定点附近。
Figure BDA0003607443070000552
Figure BDA0003607443070000553
Figure BDA0003607443070000561
Figure BDA0003607443070000562
过程：种子在一次性烧瓶(250ml和1L)中发育，并且接种在20L发酵罐中。接种之后，以补料分批模式进行发酵。在发酵罐中添加进料以支持伤寒沙门氏菌生物的生长。分批发酵在36℃的温度，7.00的pH，150RPM至500RPM的搅拌速度下操作(以级联模式保持DO)。在发酵期间，间歇性地添加止泡剂以控制起泡。
观察结果：
Figure BDA0003607443070000563
结论：从观察中得出的结论是，伤寒沙门氏菌生物体的生长需要优化本实验的实验设定点的表中提及的参数。
实验编号：06-研究了在下述发酵参数下20L规模批次的伤寒沙门氏菌的生长模式。对于伤寒沙门氏菌的分批发酵，限定适当的参数。溶解氧和重量克分子渗透浓度被控制在实验设定点附近。
Figure BDA0003607443070000571
Figure BDA0003607443070000572
Figure BDA0003607443070000573
过程：种子在一次性烧瓶(250ml和1L)中发育，并且接种在20L发酵罐中。接种之后，以补料分批模式进行发酵。在发酵罐中添加进料以支持伤寒沙门氏菌生物的生长。分批发酵在36℃的温度，7.00的pH，150RPM至500RPM的搅拌速度下操作(以级联模式保持DO)。在发酵期间，间歇性地添加止泡剂以控制起泡。
观察结果：
Figure BDA0003607443070000581
结论：从观察中得出的结论是，伤寒沙门氏菌生物体的生长需要该实验的实验设定点表中提及的参数的优化。
实验编号：07-研究了在下述发酵参数下20L规模批次的伤寒沙门氏菌的生长模式。对于伤寒沙门氏菌的分批发酵，限定适当的参数。溶解氧和重量克分子渗透浓度被控制在实验设定点附近。
Figure BDA0003607443070000582
Figure BDA0003607443070000583
Figure BDA0003607443070000591
Figure BDA0003607443070000592
过程：种子在一次性烧瓶(250ml和1L)中发育，并且接种在20L发酵罐中。接种之后，以补料分批模式进行发酵。在发酵罐中添加进料以支持伤寒沙门氏菌生物的生长。分批发酵在36℃的温度，7.00的pH，150RPM至500RPM的搅拌速度下操作(以级联模式保持DO)。在发酵期间，间歇性地添加止泡剂以控制起泡。
观察结果：
Figure BDA0003607443070000593
结论：从观察中得出的结论是，伤寒沙门氏菌生物体的生长需要该实验的实验设定点表中提及的参数的优化。
实验编号：08-研究了在下述发酵参数下20L规模批次的伤寒沙门氏菌的生长模式。对于伤寒沙门氏菌的分批发酵，限定适当的参数。溶解氧和重量克分子渗透浓度被控制在实验设定点附近。
Figure BDA0003607443070000601
Figure BDA0003607443070000602
Figure BDA0003607443070000603
过程：种子在一次性烧瓶(250ml和1L)中发育，并且接种在20L发酵罐中。接种之后，以补料分批模式进行发酵。在发酵罐中添加进料以支持伤寒沙门氏菌生物的生长。分批发酵在36℃的温度，7.00的pH，150RPM至500RPM的搅拌速度下操作(以级联模式保持DO)。在发酵期间，间歇性地添加止泡剂以控制起泡。
观察结果：
Figure BDA0003607443070000611
结论：从观察中得出的结论是，伤寒沙门氏菌生物体的生长需要该实验的实验设定点表中提及的参数的优化。
实验编号：09-研究在下述发酵参数下了20L规模批次的伤寒沙门氏菌的生长模式。对于伤寒沙门氏菌的分批发酵，限定适当的参数。溶解氧和重量克分子渗透浓度被控制在实验设定点附近。
Figure BDA0003607443070000612
Figure BDA0003607443070000613
Figure BDA0003607443070000621
Figure BDA0003607443070000622
过程：种子在一次性烧瓶(250ml和1L)中发育，并且接种在20L发酵罐中。接种之后，以补料分批模式进行发酵。在发酵罐中添加进料以支持伤寒沙门氏菌生物的生长。分批发酵在36℃的温度，7.00的pH，150RPM至500RPM的搅拌速度下操作(以级联模式保持DO)。在发酵期间，间歇性地添加止泡剂以控制起泡。
观察结果：
Figure BDA0003607443070000623
结论：从观察中得出的结论是，伤寒沙门氏菌生物体的生长需要该实验的实验设定点表中提及的参数的优化。
实验编号：10-研究了在下述发酵参数下20L规模批次的伤寒沙门氏菌的生长模式。对于伤寒沙门氏菌的分批发酵，限定适当的参数。溶解氧和重量克分子渗透浓度被控制在实验设定点附近。
Figure BDA0003607443070000631
Figure BDA0003607443070000632
Figure BDA0003607443070000633
过程：种子在一次性烧瓶(250ml和1L)中发育，并且接种在20L发酵罐中。接种之后，以补料分批模式进行发酵。在发酵罐中添加进料以支持伤寒沙门氏菌生物的生长。分批发酵在36℃的温度，7.00的pH，150RPM至500RPM的搅拌速度下操作(以级联模式保持DO)。在发酵期间，间歇性地添加止泡剂以控制起泡。
观察结果：
Figure BDA0003607443070000634
Figure BDA0003607443070000641
结论：
Figure BDA0003607443070000642
通过包括在培养期间使用止泡剂J673STRUKTOL、大豆蛋白胨DifcoTM SelectPhytoneTM UF(范围为40g/L至70g/L)和酵母提取物DifcoTM酵母提取物、40g/L至70g/L范围的UF的补料分批工艺，并且发酵参数包括pH保持在6.7至7.1范围内，温度保持在34.0℃至38.0℃范围内，溶解氧水平保持在36％至39％之间，搅拌(rpm)保持在150至500，并且重量克分子渗透浓度为400mOsmol/kg至600mOsmol/kg，用于获得源自沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多糖的高产收获的补料分批模式产生提高的收获产率(100mg/L至700mg/L)。
实施例2
C)纯化源自沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多糖的方法(下游纯化)
C1)ViP发酵收获进行下述下游纯化步骤，以获得期望质量的Vi-多糖(ViP)：
n)通过至少一个孔径为约0.2微米的膜的直流过滤(DFF)澄清细菌荚膜多糖的收获；
o)通过切向流超滤(TFF)进行浓缩并且通过使用具有10 0kDa截留分子量(MWCO)的膜的透析过滤(DF)进行缓冲液交换(含有5mM EDTA的20mM的Tris缓冲液，pH-7.5)；
p)用SDS(20％SDS原液输入)、乙二胺四乙酸(EDTA)(4mM至10mM)和乙酸钠(5％至10％)处理，以使蛋白质、核酸和脂多糖变性；
q)乙醇沉淀(40％至70％)；
r)通过至少一个孔径为约0.2μM的澄清过滤器通过直流过滤(DFF)进行离心和过滤；
s)用2M氯化钾(KCl)处理，以去除过量的去污剂，然后离心并且通过至少一个孔径为约0.2μM的澄清过滤器通过直流过滤(DFF)过滤；
t)通过切向流过滤(TFF)进行浓缩并且通过使用截留分子量为30kDa的膜(MWCO)的透析过滤(DF)进行缓冲液交换；
u)通过CTAB选择性沉淀PS(12％的CTAB原液输入)；
v)通过至少一个孔径为约0.45微米至约0.2微米的澄清过滤器进行离心和过滤；
w)在存在1M的NaCl(0.1M至2M)的情况下，用60％的乙醇(50％至70％)洗涤沉淀，去除蛋白质和核酸杂质；
x)利用60％乙醇(<75％或>95％)选择性沉淀多糖；
y)将多糖溶解在WFI或1M的NaCl中，并且使用通过切向流过滤(TFF)进行浓缩和通过具有30kDa截留分子量(MWCO)的膜的透析过滤(DF)进行缓冲液交换；以及
z)在无菌条件下通过至少一个孔径为约0.2微米的无菌过滤器进行无菌过滤，并且储存在≤-20℃下。
C2)将脂多糖(LPS)发酵收获的副伤寒沙门氏菌O-特异性多糖(OSP)进行下述下游纯化步骤，以从副伤寒沙门氏菌A脂多糖(LPS)获得期望质量的O-特异性多糖：
r)在4℃下以7000rpm离心30分钟，收集细胞沉淀(～1Kg)和上清液并且将细胞沉淀悬浮在15L的1M的NaCl中，并且在室温下搅拌1小时。
s)通过切向流超滤(TFF)进行浓缩并且使用0.45μm Prostak盒和具有30kDa截留分子量(MWCO)的膜的透析过滤(DF)进行缓冲液交换；
t)用1％乙酸(pH～2.8-3.0)在90℃温度下，将LPS酸水解180分钟；
u)将混合物冷却至室温(RT)并且通过在25℃下以7000rpm离心45分钟去除杂质沉淀；
v)在玻璃瓶中中和收集上清液并且用氨水中和至pH-7.0；
w)通过至少一种孔径为约0.45微米和0.2微米的膜通过直流过滤(DFF)进行澄清；
x)添加脱氧胆酸钠原液至终浓度为1％，并且在30℃的温度下搅拌温育30分钟，用乙酸调节pH至2.0，并且在30℃下搅拌温育15分钟；
y)在25℃下，以7000rpm离心45分钟；
z)通过至少一种孔径为约0.45微米和0.2微米的膜的直流过滤(DFF)；
aa)通过切向流超滤(TFF)进行浓缩并且通过使用具有10kDa截留分子量(MWCO)的膜的透析过滤(DF)进行缓冲液交换；
bb)在无菌条件下通过至少一种孔径为约0.2微米的无菌过滤器进行无菌过滤，以获得纯化的O-特异性多糖(OSP)。
Figure BDA0003607443070000661
Figure BDA0003607443070000671
Figure BDA0003607443070000681
结果和解释：
Figure BDA0003607443070000682
Figure BDA0003607443070000691
改进后的Vi PS纯化工艺在操作简便方面有明显的优势，同时还有其他一些优势，比如，
使用的乙酸钠(6％)与乙酸钠(2％)相比时，改善的多糖纯化(在回收率、O-乙酰基、内毒素、蛋白质、核酸含量、多分散性、粘度方面)。
当使用乙酸钠(6％)时-数值为
DSP％回收率-50％。
Ps粘度-数据不可用
Ps多分散性-数据不可用
O-乙酰基-2.9mmol/mg PS
当使用乙酸钠(2％)时-数值为
DSP％回收率-40％。
Ps粘度-数据不可用
Ps多分散性-数据不可用
O-乙酰基-2.6mmol/mg PS
乙酸钠与核酸反应。其分解成Na+和(CH3COO)-。带正电的钠离子中和核酸中带负电的PO3 -；因此有助于核酸的沉淀。因此，较高的浓度，即6％的乙酸钠能有效地沉淀宿主细胞的杂质，如核酸。
CTAB(3％)与CTAB(0.5，1％)相比，改善的多糖纯化(在回收率、O-乙酰基、内毒素、蛋白质、核酸含量、多分散性、粘度方面)。CTAB是胺类阳离子型季铵盐表面活性剂。其与阴离子多糖相互作用(离子相互作用)，并且然后降低它们的溶解度，从而使多糖从溶液中沉淀出。因此，较高浓度的CTAB(2％)总是能沉淀出较高量的多糖，从而获得较高的产量，而且去除蛋白质杂质也是额外的优势。
不使用DOC的当前方法与基于DOC的方法相比，改善的多糖纯化(在回收率、O-乙酰基、内毒素、蛋白质、核酸含量、多分散性、粘度方面)。
不使用DOC方法的改进方法的优点
1.监管问题：DOC是动物源成分，并且不符合HALAL。其由世界各地的个体供应商制造和供应，而SDS为合成的去污剂，被HALAL认证，在全球范围内有多家供应商。
2.功能问题：DOC在不影响化学成分的情况下分解内毒素，一旦去除去污剂，它就可恢复其生物活性，而SDS由于其两亲性和较高的聚集数，可很好地变性和溶解蛋白质，并且还不可逆地将内毒素破坏成其单体单元。
不使用动物源性成分脱氧胆酸钠(DOC)或苯酚，开发了新的改进的Vi PS纯化工艺。基于多糖反向纯化的改进方法，其中在初始步骤中使用乙酸钠(6％)、十二烷基硫酸钠(2％)和乙醇(40％)去除宿主细胞杂质如蛋白质、核酸和脂多糖以及在不同步骤使用30kDa截留膜进行浓缩和透析，然后通过阳离子去污剂CTAB沉淀多糖并进行精制纯化步骤，以实现符合WHO规范的纯化的Vi多糖的更高产率。
纯化工艺产生了约40％至65％的显著回收，具有期望的O-乙酰基水平(大于2.0mmol/g多糖)，纯化的Vi多糖产率范围为400mg/L至4000mg/L，发现平均分子量范围为40kDa至400kDa，含有少于1％的蛋白质/肽、小于2％的核酸，每μg多糖(PS)的内毒素小于100EU，分子尺寸分布(在实现0.25的分布系数(KD)之前大于50％PS被洗脱)
O-特异性多糖(OSP)纯化工艺使得显著减少内毒素(<100EU/μg PS)、蛋白质(<1％)和核酸(<2％)杂质，适当地在40％至65％的范围内的荚膜多糖的较高回收率，具有期望的O-乙酰基水平(>2.0mmol/g多糖)，分子尺寸分布(在实现0.25的分布系数(KD)之前>50％的PS被洗脱)，并且发现纯化的O-特异性多糖(OSP)的平均分子量范围为40kDa至200kDa。
实施例3：
D)将源自沙门氏菌血清型菌株伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多糖缀合至载体蛋白的方法。
用于与伤寒沙门氏菌Vi多糖缀合的载体蛋白为破伤风类毒素。衍生自副伤寒沙门氏菌A、鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多糖分别与选自破伤风类毒素(TT)、白喉类毒素(DT)或CRM197的载体蛋白缀合。
根据本公开，CRM197购自Pfenex USA的荧光假单胞菌的重组毒株CS463-003(MB101)。
根据本公开，TT是从印度喜马偕尔邦卡索里国家控制局中央研究所(CRI)获得的破伤风梭菌(Harvard No 49205)获得的。中央研究所(CRI)从荷兰NVI采购了这种毒株。
根据本公开，DT由白喉棒状杆菌Park-Williams 8号毒株的培养物产生的，该毒株获自印度喜马偕尔邦卡索里国家控制局中央研究所(CRI)。中央研究所(CRI)从Wellcome研究实验室采购了这种毒株。
D1)使用碳二亚胺化学法制备单价伤寒沙门氏菌缀合物:
步骤1：TT的浓缩和衍生化
过程：
a)使用10kDa的膜浓缩GFC纯化的TT(单体含量大于90％)以实现不小于12mg/ml蛋白质浓度(Lowry测定)
b)使用的衍生化比例如下所示，并且相应地计算需要的量。
Pr:ADH:EDC为1:6.0:1
衍生规模：13mg
c)依次添加浓缩的TT(在0.9％的NaCl中)、1M MES pH 6.0、ADH溶液(溶解在0.1MMES中，pH 6.0)和EDC溶液(溶解在0.1M MES中，pH 6.0)并且通过添加0.1M的MES缓冲液pH6.0实现最终所需体积。反应中的最终Pr浓度为～4.5mg/ml。
d)搅拌反应混合物并且使其在pH 5.90下持续约1小时。然后通过使用pH8.0含EDTA的0.1M磷酸盐缓冲液将pH调节至高于7.5来淬灭衍生化反应。
e)使用10kDa截留膜，针对10mM的磷酸盐缓冲液使用22体积，然后使用至少12体积0.1M的MES缓冲液pH 6.0透析淬灭的反应混合物，以去除未反应的部分和其他残留物。
f)通过Lowry测定分析衍生样品的总Pr浓度，通过比色法(TNBS)测定衍生化值的程度。
结果：
通过Lowry测定的衍生化Pr浓度：15mg/ml
衍生化值的程度(DOA)：19
回收率百分数：～75％
步骤2：Vi Ps缀合至衍生化的TT
过程：
使用碳二亚胺化学进行Vi PS-衍生化的TT缀合。
下述PS和Pr参数用于缀合。
a.缀合反应的比例使用Ps:Pr:EDC::1:0.9:1.75(Pr和EDC为+0.5)，缀合规模10mg。
b.将所需批次体积的PS添加至预灭菌的玻璃瓶中。
c.将1M的MES缓冲液pH 6.0(储备缓冲液)添加至测量体积的PS中，以实现0.1MMES浓度。
d.在～100rpm下，搅拌混合物用于均匀混合。
e.然后将测量体积的衍生TT添加至含Ps的瓶中。
f.添加TT后，立即将新制备的EDC(溶于0.1M的MES缓冲液pH 6.0)添加至上述反应中。
g.观察并记录pH(pH 6.0+0.5)
h.使用SE-HPLC以不同的时间间隔子分析样品。监测缀合转化百分比和蛋白质消耗。
i.1.45小时后，当<90％蛋白质消耗时，通过使用含EDTA的0.1M磷酸盐缓冲液将pH升高至7.5来淬灭反应。
j.将淬灭的反应混合物储存在2℃至8℃直至进一步使用。
步骤3：淬灭的Vi-TT缀合物的纯化
使用下述参数，通过两种方法进行淬灭的缀合物的纯化，以去除未反应的Ps、未反应的Pr和其他残留物：
1.超滤法：
透析使用的参数如下；
透析过滤规模：8.5mg
D/F期间的Ps浓度：～2mg/ml
膜截留：300kDa
膜的制作：Pall
膜面积：2.5m2
使用的缓冲液A：10mM的PBS，至少25体积
使用的缓冲液B：0.9％的NaCl，30体积。
最终体积：6.5Lts
用0.2μM过滤器过滤纯化的缀合物。
2.凝胶过滤色谱：
约1.5mg淬灭的缀合物在0.1m2 300kDa截留膜上浓缩～2-4mg/ml。使用凝胶过滤色谱对缀合物进行纯化以去除未结合的PS、未结合的TT和残留的EDC。
用相同的参数进行两次独立的GFC运行，以进行纯化。
以下是用于纯化的色谱条件。
Figure BDA0003607443070000731
1在SE-HPLC上分析收集总共27个级分(每个100ml)，并且根据色谱图合并在一起。
2通过HPAD法分析级分中的Ps含量，通过Lowry法分析级分中的Pr含量，通过DOC-HPAD法分析级分中的游离Ps％。
3基于分析，合并级分(1至23)并且使用0.22μM过滤器过滤。
4分析样品的Ps含量、Pr含量和游离Ps以及内毒素、O-乙酰基含量、无菌性、pH值和内毒素分析。
结果和解释：
Figure BDA0003607443070000732
比较缀合工艺数据-SIIPL伤寒缀合物的提高的缀合效率、提高的缀合物产量和稳定性(游离Ps、游离Pr)，其中Ps:Pr：EDAC比例为1:1:2与其他Ps:Pr：EDAC比例相比
提高的缀合物率：观察的缀合转化率大于90％。
提高的缀合物产量：使用不同的方法即超滤法和凝胶过滤法以不同缀合物纯化规模进行纯化，发现回收率为40％至87％。
对于Vi-TT缀合，与1:1.5:1.2、1:0.9:2、1:0.9:1.75、1:0.8:1.8:、1:0.7:1.8、1:0.9:0.6、1:0.9:1和1:0.7:1.5比例相比，发现使用1:1:2比例具有1.5EDC的较低蛋白质可提供最佳缀合转化率(％)。
发现具有不同尺寸的Vi Ps可与ADH活化的TT缀合。
在不同的纯化技术下在较低pH值下使用不同的比例，如Ps:Pr:EDC::1:0.7:1.8、1:0.8:1.8、1:0.9:2和1:1:2产生大于0.5的Ps/Pr比例，较低的游离Ps和良好的缀合物回收率。
D2)单价副伤寒沙门氏菌缀合物的制备:
两种类型的缀合化学反应(氰化和碳二亚胺化学反应)用于将副伤寒沙门氏菌OSP缀合至载体蛋白，白喉类毒素(DT)、CRM197和破伤风类毒素(TT)。
1)副伤寒OSP与载体蛋白白喉类毒素(DT)、CRM197和破伤风类毒素(TT)的基于氰化化学反应的缀合
A)使用碳二亚胺化学对白喉类毒素(DT)衍生化(添加接头ADH)，并且使用氰化化学反应与浓缩的OSP缀合。
B)使用碳二亚胺化学反应对CRM197、破伤风类毒素(TT)进行衍生化(添加接头ADH)，并且使用氰化化学反应与浓缩的OSP缀合。
C)使用碳二亚胺化学反应对破伤风类毒素(TT)进行衍生化(添加接头ADH)，并且使用氰化化学反应与浓缩的OSP缀合。
1A)使用白喉类毒素作为载体蛋白制备副伤寒沙门氏菌缀合物。
1)蛋白质衍生化。
在10kDa的膜上浓缩高单体白喉类毒素(DT)至10mg至20mg/ml，并且分析其蛋白质含量。
Figure BDA0003607443070000741
向浓缩的DT中添加新制备的1M的MES缓冲液，以1:10的重量比添加己二酸二酰肼(ADH)并且以1:1的重量比添加EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺)(溶解在100mM的MES缓冲液中，pH:5.8，30mg至40mg/ml)。反应在5.8pH下继续进行约1小时，然后将反应混合物在10kDa的TFF上在50mM的硼酸盐缓冲液中，pH 9.0透析以去除残留物和未反应的组分。分析最终样品的蛋白质含量和衍生化的程度。
Figure BDA0003607443070000751
2)副伤寒沙门氏菌A多糖(OSP)与ADH衍生化的DT的缀合。
通过改变1-氰基-4-吡咯烷吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)(CPIP)的比例进行两个实验
实验编号：1-在10kDa的膜上浓缩OSP以实现10mg至15mg/ml的浓度。
Figure BDA0003607443070000752
向浓缩的PS添加0.9％的NaCl，并且以1:1.3的重量比将新制备的CPIP溶液(乙腈中的114mg/ml)添加至多糖中。立即用2.5M的NaOH将pH值调至9.5并且保持多达3分钟。然后以1:0.8的重量比添加蛋白质，PS:PR:CPIP为1:0.8:1.3。
依次使用Shodex柱SB-804HQ和SB-805HQ，PBS作为流动相，流速为1ml/分钟，以监测蛋白质转化。3小时至4小时后，通过添加按重量计10倍PS的2M甘氨酸来淬灭反应。
参考图1：比较多糖、蛋白质和缀合物(PS:PR:CPCIP 1:0.8:1.3)
3)通过GFC纯化缀合物。使用GFC树脂(Tyopearl HW65F)制备床高为40厘米的柱XK16/70。以100cm/小时的流速填充柱子并且使其沉降，并且通过1M的NaCl 1％色谱柱体积以评估填充的色谱柱的完整性。使用0.9％的NaCl以30cm/小时平衡柱子，将缀合物加载到柱子上，并且以1分钟的间隔，收集级分。根据HPLC上的概况合并级分2-9。过滤最终合并的级分并送去分析。
Figure BDA0003607443070000761
参考图2：GFC纯化的OSP-DT ADH缀合物(PS:PR:CPIP为1:0.8:1.3)的色谱图
实验编号2-
向浓缩的PS添加0.9％的NaCl，并且以1:1.1的重量比将新制备的CPIP溶液(乙腈中的114mg/ml)添加多糖中。立即用2.5M的NaOH将pH值调至9.5并且保持多达3分钟。然后按重量比1:0.8添加蛋白质，PS:PR:CPIP为1:0.8:1.1。
依次使用Shodex色谱柱SB-804HQ和SB-805HQ，PBS作为流动相，流速为1ml/分钟，以监测蛋白质转化。3小时至4小时后，通过添加按重量计10倍PS的2M甘氨酸来淬灭反应。
参考图3：比较多糖、蛋白质和缀合物(PS:PR:CPIP 1:0.8:1.1)
通过GFC纯化缀合物:使用GFC树脂(Tyoperal HW65F)制备床高为40厘米的柱XK16/70。以100cm/小时的流速填充柱子并且使其沉降，并且1％色谱柱体积的1M的NaCl通过以评估填充的色谱柱的完整性。使用0.9％的NaCl以30cm/小时平衡柱子，将缀合物加载到柱子上，并且以1分钟的间隔收集级分。根据HPLC上的概况合并级分2-8。过滤最终合并的级分并送去分析。
Figure BDA0003607443070000762
参考图4：GFC纯化的OSP-DT ADH缀合物(PS:PR:CPIP 1:0.8:1.1)的色谱图
结论：发现使用ADH衍生化的DT的副伤寒沙门氏菌A PS的缀合是成功的，并且发现PS/PR比例是令人满意的。
1B.使用CRM197作为载体蛋白制备副伤寒沙门氏菌缀合物
1)蛋白质衍生化:从生产部门(SIIPL)接收的交叉反应突变体(CRM197)被用于衍生化
Figure BDA0003607443070000771
向浓缩的CRM197添加新制备的1M的MES缓冲液，以1:3.5的重量比添加己二酸二酰肼(ADH)并且以1:0.25的重量比添加EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺)(溶解在100mM的MES缓冲液中，pH:6.5中，30mg至40mg/ml)。添加5％的Tween 80。使用100mM的MES缓冲液补足最终反应体积以实现3mg至4mg/ml的最终浓度。在6.5的pH下继续反应约3小时，然后反应混合物在50mM的硼酸盐缓冲液和0.005％的Tween 80pH 9.0中在10kDa的TFF上透析以去除残留物和未反应的组分。分析最终样品的蛋白质含量和衍生化的程度。
检测或参考的简要描述：通过BCA(二辛可宁酸)测定蛋白质含量。
Figure BDA0003607443070000772
2)副伤寒沙门氏菌A多糖(OSP)和ADH衍生化的CRM197的缀合：
从DSP接收的OSP在10kDa的膜上浓缩以实现10mg至15mg/ml的浓度。
Figure BDA0003607443070000773
向浓缩的PS添加0.9％的NaCl，并且以1:1.3的重量比将新制备的CPIP溶液(乙腈中的114mg/ml)添加至多糖中。立即用2.5M的NaOH将pH值调至9.5并且保持多达3分钟。然后以1:1的重量比添加蛋白质，PS:PR:CPIP为1:1:1.3。
依次使用Shodex色谱柱SB-804HQ和SB-805HQ，PBS作为流动相，流速为1ml/分钟，以监测蛋白质转化。3小时至4小时后，通过添加按重量计10倍PS的2M甘氨酸来淬灭反应。
参考图5和图6：比较多糖、蛋白质和缀合物(PS:PR:CPIP为1:1:1.3)
3)通过GFC纯化缀合物。使用GFC树脂(Tyoperal HW65F)制备床高为40厘米柱XK16/70。以100cm/小时的流速填充柱子并且使其沉降并且使1M的NaCl1％色谱柱体积通过以评估填充的色谱柱的完整性。使用0.9％的NaCl以30cm/小时平衡柱子，将缀合物加载到柱子上，以1分钟间隔收集级分，根据HPLC上的概况合并级分2-7。过滤最终合并的级分并送去分析。
Figure BDA0003607443070000781
参考图7：GFC纯化的OSP-DT ADH缀合物(PS:PR:CPIP为1:1:1.3)的色谱图
结论：发现使用ADH衍生化的CRM197的副伤寒沙门氏菌APS的缀合是成功的，并且发现PS/PR的比例也令人满意。
1C)使用破伤风类毒素作为载体蛋白制备副伤寒沙门氏菌缀合物。
1)蛋白质衍生化：在30kDa的膜上浓缩从生产部门(SIIPL)接收的高单体破伤风类毒素(TT)至15mg至20mg/ml，并且分析其蛋白质含量。
Figure BDA0003607443070000782
向浓缩的TT添加新制备的1M的MES缓冲液，并且以1:10的重量比添加己二酸二酰肼(ADH)(溶解在100mM的MES缓冲液中，pH:6.0)并且以1:1的重量比添加EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺)(溶解在100mM的MES缓冲液pH 6.0中，30mg至40mg/ml)。反应在6.0pH下继续约1小时，然后反应混合物在10mM的磷酸盐缓冲液pH 7.2中在30kDa的TFF上进行透析过滤，以去除残留物和未反应的组分。分析最终样品的蛋白质含量和衍生化的程度。
检测或参考的简要描述：通过Lowry测定法测量蛋白质含量。
Figure BDA0003607443070000783
2)副伤寒沙门氏菌A多糖(OSP)和ADH衍生化的TT的缀合。
在10kDa的膜上浓缩从DSP小组接收的OSP，实现10mg至13mg/ml的浓度。
Figure BDA0003607443070000791
通过改变1-氰基-4-吡咯烷吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)(CPIP)的比例进行了两次实验
实验编号：1
向浓缩的PS添加0.9％的NaCl，并且以1:1.25的重量比将新制备的CPIP溶液(乙腈中，114mg/ml)添加至多糖中。立即用2.5M的NaOH将pH值调至9.5，并且保持多达3分钟。然后以1:0.8的重量比添加蛋白质，PS:PR:CPIP为1:0.8:1.25。
依次使用Shodex柱SB-804HQ和SB-805HQ，以PBS为流动相，流速为1ml/分钟，监测蛋白质转化。3小时至4小时后，添加按重量计10倍PS的2M甘氨酸来淬灭反应。
参考图8：比较多糖、蛋白质和缀合物(PS:PR:CPIP 1:0.8:1.25)
3)通过超滤纯化缀合物：在10mM的PBS pH7.2和10mM的Tris缓冲液pH7.2中通过300kDa的TFF膜透析而纯化淬灭的缀合物。最终浓缩的样品被送去分析。
Figure BDA0003607443070000792
参考图9：GFC纯化的OSP-DT ADH缀合物的色谱图(PS:PR:CPIP为1:0.8:1.25)
实验编号：2
向浓缩的PS添加0.9％的NaCl，并且以1:1.3的重量比将新制备的CPIP溶液(乙腈中，114mg/ml)添加多糖中。立即用2.5M的NaOH将pH值调至9.5并且保持多达3分钟。然后以1:0.9的重量比添加蛋白质，PS:PR:CPIP 1:0.9:1.3。
依次使用Shodex柱SB-804HQ和SB-805HQ，PBS作为流动相，流速为1ml/分钟，以监测蛋白质转化。3小时至4小时后，通过添加按重量计10倍PS的2M甘氨酸来淬灭反应。
参考图10：比较多糖、蛋白质和缀合物(PS:PR:CPIP 1:0.9:1.3)
3)通过超滤纯化缀合物：在10mM的PBS pH 7.2和10mM的Tris缓冲液pH7.2中通过300kDa的TFF膜透析而纯化淬灭的缀合物。最终浓缩的样品被送去分析。
Figure BDA0003607443070000801
参考图11：GFC纯化的OSP-DT ADH缀合物(PS:PR:CPIP 1:0.9:1.3)的色谱图
结论：发现使用ADH衍生化的TT的副伤寒沙门氏菌APS的缀合是成功的，应用了两种不同类型的透析过滤策略，并且两个工艺都得到了满意的PS/Pr比例。
2)基于碳二亚胺化学的副伤寒沙门氏菌OSP与载体蛋白白喉类毒素(DT)、CRM197和破伤风类毒素(TT)的缀合
A)使用氰化化学反应对浓缩的OSP进行衍生化(添加接头ADH)，并且使用碳二亚胺化学反应与破伤风类毒素(TT)进行缀合。
B)使用氰化化学反应对浓缩OSP进行衍生化(添加接头ADH)，并且使用碳二亚胺化学反应与白喉类毒素(DT)进行缀合。
C)使用氰化化学反应对浓缩OSP进行衍生化(添加接头ADH)，并且使用碳二亚胺化学反应与CRM197进行缀合。
2A)使用破伤风类毒素作为载体蛋白制备副伤寒沙门氏菌缀合物。
1)多糖衍生化。在10kDa的膜上浓缩从DSP Team接收的OSP以实现10mg至13mg/ml的浓度。
Figure BDA0003607443070000802
向浓缩的PS添加0.9％的NaCl，并且以1:0.7的重量比将新制备的CPIP溶液(乙腈中，114mg/ml)添加至多糖中。立即用2.5M的NaOH将pH值调至9.5并且保持多达3分钟。然后以1:10的重量比添加己二酸二酰肼(ADH)(溶解在0.5M碳酸氢钠缓冲液pH:8.0中，75mg至100mg/ml)，PS:ADH:CPIP为1:10:0.7。在9.5的pH下继续反应约2小时，使用2M甘氨酸10进行淬灭，然后在10kDa的TFF上在100mM的MES缓冲液pH 6.0中对反应混合物进行透析过滤，以去除残留物和未反应的组分。分析最终样品的多糖含量。
Figure BDA0003607443070000811
2)蛋白质制备：在30kDa的膜上将从生产部门(SIIPL)接收的高单体破伤风类毒素(TT)浓缩至10mg至15mg/ml，并且分析蛋白质含量。
检测或参考的简要描述。通过Lowry测定法测量蛋白质含量。
Figure BDA0003607443070000812
3)ADH衍生化的副伤寒沙门氏菌A多糖(OSP)和浓缩的TT的缀合：在不同的温度下进行两个实验以检查Pr转化。
实验编号：1
向ADH衍生化的PS，以1:0.9重量比添加蛋白质和新制备的EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺)(溶解在100mM的MES缓冲液中，30mg至40mg/ml)。反应在6.0的pH，6℃的温度下继续进行，PS:PR:EDC的比例为1:0.9:0.86。
依次使用Shodex柱SB-804HQ和SB-805HQ，以PBS为流动相，流速为1ml/分钟，监测蛋白质转化。23小时后，添加含EDTA的100mM的磷酸盐缓冲液来淬灭反应。
参考图12：描述了缀合的进展(在23小时反应淬灭)的色谱图。
4)通过超滤纯化缀合物。在10mM的PBS pH7.2和10mM的Tris缓冲液pH7.2中通过300kDa的TFF膜透析纯化淬灭的缀合物，最终浓缩的样品被送去分析。
Figure BDA0003607443070000821
实验编号：2
向ADH衍生化的PS，以1:0.9的重量比添加蛋白质，以1:0.86的重量比添加新制备的EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺)(溶解在100mM的MES缓冲液中，30mg至40mg/ml)。在6.0的pH，10℃的温度下继续反应，PS:PR:EDC比例为1:0.9:0.86。
依次使用Shodex柱SB-804HQ和SB-805HQ，以PBS为流动相，流速为1ml/分钟，监测蛋白质转化。4小时后，添加含EDTA的100mM的磷酸盐缓冲液来淬灭反应。
参考图13：描述缀合反应进展的色谱图
4)通过GFC纯化缀合物。使用GFC树脂(Tyoperal HW65F)制备床高为40厘米的柱XK16/70。以100cm/小时的流速填充柱子并且使其沉降，并且使1％色谱柱体积的1M的NaCl通过以评估填充的色谱柱的完整性。使用0.9％的NaCl以30cm/小时平衡柱子，将缀合物加载到柱上并且以1分钟间隔收集级分，根据HPLC上的概况合并级分2-10。过滤最终合并的级分并送去分析。
Figure BDA0003607443070000822
结论：使用反向缀合化学反应(活化PS)，通过将温度从6℃升高至10℃，发现ADH衍生化的副伤寒沙门氏菌APS和浓缩的TT的缀合是成功的。反应的缀合率增加，在两个反应中PS/Pr比例都非常低。
2B)使用白喉类毒素作为载体蛋白制备副伤寒沙门氏菌缀合物。
1)多糖衍生化：在10kDa的膜上浓缩从DSP Team接收的OSP，以实现10mg至13mg/ml的浓度。
Figure BDA0003607443070000831
向浓缩的PS添加0.9％的NaCl，并且以1:0.7的重量比将新制备的CPIP溶液(乙腈中，0.114mg/ml)添加至多糖中。立即用2.5M的NaOH将pH值调至9.5并且保持多达3分钟。然后以1:10的重量比添加己二酸二酰肼(ADH)(溶解在0.5M碳酸氢钠缓冲液pH:8.0中，75mg至100mg/ml)，PS:ADH:CPIP为1:10:0.7。反应在9.5的pH下继续约2小时，使用2M甘氨酸10淬灭，然后在100mM的MES缓冲液pH 6.0中在10kDa的TFF上对反应混合物进行透析过滤，以去除残留物和未反应的组分。分析最终样品的多糖含量。
Figure BDA0003607443070000832
2)蛋白质制备：在10kDa的膜上浓缩从生产部门(SIIPL)接收的高单体白喉类毒素(DT)至10mg至20mg/ml，并且分析蛋白质含量。
检测或参考的简要描述：通过Lowry法测定蛋白质含量。
Figure BDA0003607443070000833
3)ADH衍生化的副伤寒沙门氏菌A多糖(OSP)和浓缩的DT的缀合：将TT缀合物的相同条件应用于DT以检查Pr转化。
实验编号：1
向ADH衍生化的PS，以1:0.8的重量比添加蛋白质和新制备的EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺)(溶解在100mM的MES缓冲液中，30mg至40mg/ml)。反应在6.0的pH、6℃的温度下继续进行，PS:PR:EDC的比例为1:0.8：0.86。
依次使用Shodex柱SB-804HQ和SB-805HQ，以PBS为流动相，流速为1ml/分钟，监测蛋白质转化。20小时后，添加含EDTA的100mM的磷酸盐缓冲液来淬灭反应。
参考图14：描述了缀合反应的进展情况(在20小时反应淬灭)的色谱图。
4)通过GFC纯化缀合物：使用GFC树脂(Tyoperal HW65F)制备床高为40厘米的柱XK16/70。以100cm/小时的流速填充柱子并且使其沉降，并且使1％色谱柱体积的1M的NaCl通过以评估填充的色谱柱的完整性。使用0.9％的NaCl以30cm/小时平衡柱子，将缀合物加载到柱子上，以1分钟间隔收集级分，根据HPLC上的概况合并级分2-12。过滤最终合并的级分并送去分析。
Figure BDA0003607443070000841
参考图15：描述了纯化的缀合物(合并的级分)的色谱图。
实验编号：2
向ADH衍生化的PS，以1:1.0的重量比添加蛋白质，以1:0.9的重量比添加新制备的EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺)(溶解在100mM的MES缓冲液中，30mg至40mg/ml)。在6.0的pH、10℃的温度下继续反应，PS:PR:EDC的比例为1:1.0:0.9。
依次使用Shodex柱SB-804HQ和SB-805HQ，以PBS为流动相，流速为1ml/分钟，监测蛋白质转化。4小时后，添加含EDTA的100mM的磷酸盐缓冲液来淬灭反应。
参考图16：描述了缀合反应的进展情况(在4小时反应淬灭)的色谱图。
4)通过超滤纯化缀合物：在10mM的PBS pH 7.2和10mM的Tris缓冲液pH7.2中通过300kDa的TFF膜透析过滤来纯化淬灭的缀合物。最终浓缩的样品被送去分析。
参考图17：描述了纯化的缀合物的色谱图
Figure BDA0003607443070000842
结论：发现使用浓缩的DT使用碳化二亚胺化学反应的ADH衍生化的副伤寒沙门氏菌A PS的缀合是成功的。随着温度的升高，缀合反应的速度也升高，但在两个实验中，PS/Pr的比例都低。
D3)将源自沙门氏菌血清型菌株鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多糖与选自破伤风类毒素(TT)、白喉类毒素(DT)或CRM197的载体蛋白缀合的方法。
1)基于氰化化学反应的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖与载体蛋白白喉类毒素(DT)、CRM197和破伤风类毒素(TT)的缀合。
A)使用碳二亚胺化学反应对白喉类毒素(DT)进行衍生化(添加接头ADH)，并且使用氰化化学反应与浓缩的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖缀合。
B)使用碳二亚胺化学反应对CRM197进行衍生化(添加接头ADH)，并且使用氰化化学反应与浓缩的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌进行缀合
C)使用碳二亚胺化学反应对破伤风类毒素(TT)进行衍生化(添加接头ADH)，并且使用氰化化学反应与浓缩的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌缀合。
D)在不将多糖或载体蛋白进行衍生化的情况下，基于氰化化学反应(CPPT)的副伤寒沙门氏菌OSP与载体蛋白白喉类毒素(DT)、CRM197和破伤风类毒素(TT)的缀合。
遵循的过程：
A)使用白喉类毒素(DT)作为载体蛋白制备鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖缀合物。
1)蛋白质衍生化。
在10kDa的膜上将高单体白喉类毒素(DT)浓缩至10mg至20mg/ml并且分析蛋白质含量。
向浓缩的DT，添加新制备的1M的MES缓冲液，以1:10的重量比添加己二酸二酰肼(ADH)(溶解在100mM的MES缓冲液中，pH：5.8)，并且以1:1的重量比添加EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺)(溶解在100mM的MES缓冲液中，pH:5.8，30mg至40mg/ml)。反应在5.8的pH下继续进行约1小时，然后在50mM的硼酸盐缓冲液中，pH 9.0在10kDa的TFF上对反应混合物进行透析过滤，以去除残留物和未反应的组分。分析最终样品的蛋白质含量和衍生化的程度。
2)鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖(PS)与ADH衍生化的DT的缀合。
通过改变1-氰基-4-吡咯烷吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)(CPIP)的比例进行两个实验
实验编号：1-在10kDa的膜上浓缩鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖，以实现10mg至15mg/ml的浓度。
向浓缩的多糖添加0.9％的氯化钠，并且以1:1.3的重量比将新制备的CPIP溶液(乙腈中，114mg/ml)添加至多糖中。立即用2.5M的NaOH使pH调至9.5并且保持多达3分钟。然后以1:0.8的重量比添加蛋白质，PS:PR:CPIP为1:0.8:1.3。
依次使用Shodex柱SB-804HQ和SB-805HQ，以PBS为流动相，流速为1ml/分钟，监测蛋白质转化。3小时至4小时后，添加按重量计10倍PS的2M甘氨酸来淬灭反应。
3)通过GFC纯化的缀合物：使用GFC树脂(Tyopearl HW65F)制备床高为40厘米的柱XK16/70。以100cm/小时的流速填充柱子并且使其沉降，并且1M的NaCl的1％色谱柱体积通过以评估填充柱子的完整性。使用0.9％的NaCl以30cm/小时平衡柱子，将缀合物加载到柱上，并且以1分钟的间隔收集级分。过滤最终合并的级分并送去分析。
实验编号2-
向浓缩的PS添加0.9％的NaCl，并且以1:1.1的重量比将新制备的CPIP溶液(乙腈中，114mg/ml)添加至多糖中。立即用2.5M的NaOH将pH调至9.5并且保持多达3分钟。然后以1:0.8的重量比添加蛋白质，PS:PR:CPIP为1:0.8:1.1。
依次使用Shodex柱SB-804HQ和SB-805HQ，以PBS为流动相，流速为1ml/分钟，监测蛋白质转化。3小时至4小时后，添加按重量计10倍PS的2M甘氨酸来淬灭反应。
通过GFC纯化缀合物：使用GFC树脂(Tyoperal HW65F)制作床高为40厘米的XK16/70柱。以100cm/小时的流速填充柱并且使其沉降，通过1％的柱体积的1M的NaCl来评估填充的柱的完整性。使用0.9％的NaCl以30cm/小时平衡柱，并将缀合物装载在柱上，以1分钟间隔收集级分。过滤最终合并的级分并送去分析。
结论：发现使用ADH衍生化的DT的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖的缀合是成功的，并且发现PS/PR比例是令人满意的。
B.使用CRM197作为载体蛋白制备鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖缀合物
1)蛋白质衍生化：对从生产部门(SIIPL)接收的交叉反应突变体(CRM197)进行衍生化。
向浓缩的CRM197添加新制备的1M的MES缓冲液，以1:3.5的重量比添加己二酸二酰肼(ADH)(溶解在100mM的MES缓冲液中，pH:6.5，75mg至100mg/ml)并且以1:0.25的重量比添加EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺)(溶解在100mM的MES缓冲液中，pH:6.5，30mg至40mg/ml)。添加5％的Tween80。使用100mM的MES缓冲液补足最终反应体积以实现3mg至4mg/ml的最终浓度。在6.5的pH下继续反应约3小时，然后在50mM的硼酸盐缓冲液和0.005％的Tween 80中，pH 9.0下，在10kDa的TFF上对反应混合物进行透析过滤，以去除残留物和未反应的组分。分析最终样品的蛋白质含量和衍生化的程度。
2)鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖(PS)和ADH衍生化的CRM197的缀合：
在10kDa的膜上浓缩从DSP接收的PS以实现10mg至15mg/ml的浓度。
向浓缩的PS添加0.9％的NaCl，并且以1:1.3的重量比将新制备的CPIP溶液(乙腈中，114mg/ml)添加至多糖中。立即用2.5M的NaOH将pH调至9.5，并且保持多达3分钟。然后以1:1的重量比添加蛋白质，PS:PR:CPIP为1:1:1.3。
依次使用Shodex色谱柱SB-804HQ和SB-805HQ，PBS作为流动相，流速为1ml/分钟，以监测蛋白质转化。3小时至4小时后，通过添加按重量计10倍PS的2M甘氨酸来淬灭反应。
3)通过GFC纯化缀合物：使用GFC树脂(Tyoperal HW65F)制作床高为40厘米的XK16/70柱。以100cm/小时的流速填充柱并且使其沉降，使1％的柱体积的1M的NaCl通过以评估填充的柱的完整性。使用0.9％的NaCl以30cm/小时平衡柱，并且以1分钟间隔收集级分，将缀合物加载到柱上。过滤最终合并的级分并送去分析。
结论：发现使用ADH衍生化的CRM197的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌PS的缀合是成功的，并且发现PS/PR比例是令人满意的。
C)使用破伤风类毒素作为载体蛋白制备副伤寒沙门氏菌缀合物：
1)蛋白质衍生化：在30kDa的膜上浓缩从生产部门(SIIPL)接收的高单体破伤风类毒素(TT)至15mg至20mg/ml，并且分析蛋白质含量。向浓缩的TT添加新制备的1M的MES缓冲液，以1:10的重量比添加己二酸二酰肼(ADH)(溶解在100mM的MES缓冲液中，pH:6.0，并且以1:1的重量比添加EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺)(溶解在100mM的MES缓冲液中，pH：6.0，30mg至40mg/ml)。反应在6.0的pH下继续约1小时，然后在10mM的磷酸盐缓冲液pH 7.2中在30kDa的TFF上对反应混合物进行透析过滤，以去除残留物和未反应的组分。分析最终样品的蛋白质含量和衍生化的程度。
2)鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖(PS)与ADH衍生化的TT的缀合：
在10kDa的膜上浓缩从DSP Team接收的OSP以实现10mg至13mg/ml的浓度。
通过改变1-氰基-4-吡咯烷吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)(CPIP)的比例进行两个实验
实验编号：1
向浓缩的PS添加0.9％的NaCl，并且以1:1.25的重量比将新制备的CPIP溶液(乙腈中，114mg/ml)添加至多糖中。立即用2.5M的NaOH将pH调至9.5并且保持多达3分钟。然后以1:0.8的重量比添加蛋白质，PS:PR:CPIP为1:0.8:1.25。
依次使用Shodex柱SB-804HQ和SB-805HQ，PBS作为流动相，流速为1ml/分钟，以监测蛋白质转化。3小时至4小时后，通过添加按重量计10倍PS的2M甘氨酸来淬灭反应。
3)通过超滤纯化缀合物：通过在10mM的PBS中，pH 7.2下然后在10mM的Tris缓冲液中，pH 7.2下的300kDa的TFF膜透析过滤来纯化淬灭的缀合物。最终浓缩的样品送去分析。
实验编号：2
向浓缩的PS添加0.9％的NaCl，并且以1:1.3的重量比将新制备的CPIP溶液(乙腈中，114mg/ml)添加至多糖中。立即用2.5M的NaOH将pH调至9.5并且保持多达3分钟。然后以1:0.9的重量比添加蛋白质，PS:PR:CPIP 1:0.9:1.3。
依次使用Shodex柱SB-804HQ和SB-805HQ，PBS作为流动相，流速为1ml/分钟，以监测蛋白质转化。3小时至4小时后，通过添加按重量计10倍PS的甘氨酸来淬灭反应。
3)通过超滤纯化缀合物：通过在10mM的PBS中，pH 7.2下，然后在10mM的Tris缓冲液中，pH 7.2下的300kDa的TFF膜透析过滤来纯化淬灭的缀合物。将最终浓缩的样品送去分析。
结论：发现使用ADH衍生化的TT的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖(PS)的缀合是成功的，应用两种不同类型的透析过滤策略，并且两种工艺都得到令人满意的PS/Pr比例。
2)鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖与载体蛋白白喉类毒素(DT)、CRM197和破伤风类毒素(TT)的基于碳二亚胺化学反应的缀合
A)使用氰化化学反应衍生化浓缩的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖(添加接头ADH)，并且使用碳二亚胺化学反应与破伤风类毒素(TT)缀合。
B)使用氰化化学反应衍生化浓缩的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖(添加接头ADH)，并且使用碳二亚胺化学反应与白喉类毒素(DT)缀合。
C)使用氰化化学反应衍生化浓缩的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖(添加接头ADH)，并且使用碳二亚胺化学反应与CRM197缀合。
D)在不将多糖或载体蛋白衍生化的情况下，基于碳二亚胺化学反应(EDAC)的副伤寒沙门氏菌OSP与载体蛋白白喉类毒素(DT)、CRM197和破伤风类毒素(TT)的缀合。
遵循的过程：
1)多糖(PS)衍生化：将接收的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖在10kDa的膜上浓缩以实现10mg至13mg/ml的浓度。向浓缩的PS加入0.9％的NaCl，并且以1:0.5至1:2(1:0.7)的重量比将新制备的CPIP溶液(乙腈中的114mg/ml)添加至多糖中。立即用2.5M的NaOH将pH值调至9.5并且保持多达3分钟。然后以1:10的重量比添加己二酸二酰肼(ADH)(溶解在0.5M碳酸氢钠缓冲液pH:8.0，75mg至100mg/ml)，PS:ADH:CPIP比例为1:2:0.7至1:10:0.7。反应在9.5pH持续约2小时，使用2M甘氨酸10淬灭，然后在100mM的MES缓冲液pH 6.0中在10kDa的TFF上对反应混合物进行透析以去除残留物和未反应的组分。分析最终样品的多糖含量。
2)蛋白质制剂：
2A)蛋白质制剂：在30kDa的膜上浓缩从生产部门(SIIPL)接收的高单体破伤风毒素(TT)至10mg至15mg/ml，并且分析蛋白质含量
2B)蛋白质制剂：在10kDa的膜上浓缩从生产部门(SIIPL)接收的高单体白喉毒素(DT)至10mg至20mg/ml，并且分析蛋白质含量
2C)蛋白质制剂：在10kDa的膜上浓缩从生产部门(SIIPL)接收的高单体CRM197至10mg至20mg/ml，并且分析蛋白质含量
3)缀合
3A)ADH衍生化的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖和浓缩TT的缀合：
向ADH衍生化的PS，以1:9.9的重量比添加蛋白质，并且以1:0.86的重量比添加新制备的EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳化二亚胺)(溶解于100mM的MES缓冲液中，30mg至40mg/ml)。在6.0的pH，6℃的温度下继续反应，PS:PR:EDC比例为1:0.9:0.86。
依次使用Shodex柱SB-804HQ和SB-805HQ，PBS作为流动相，流速为1ml/分钟，以监测蛋白质转化。23小时后通过添加含EDTA的100mM的磷酸盐缓冲液来淬灭反应。
3B)ADH衍生化的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖与浓缩的DT的缀合：将TT缀合物的相同条件应用于DT以检查Pr转化。
向ADH衍生化的PS，以1:0.8的重量比添加蛋白质并且以1:0.86的重量比添加新制备的EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺)(溶解在100mM的MES缓冲液中，30mg至40mg/ml)。反应在6.0的pH，6℃的温度下继续进行，PS:PR:EDC比例为1:0.8:0.86。
依次使用Shodex柱SB-804HQ和SB-805HQ，PBS作为流动相，流速为1ml/分钟，以监测蛋白质转化。20小时后通过添加含EDTA的100mM的磷酸盐缓冲液来淬灭反应。
3C)ADH衍生化的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖与浓缩的CRM197的缀合：将TT和DT缀合物的相同条件应用于CRM197以检查Pr转化。
向ADH衍生化的PS，以1:0.8的重量比添加蛋白质并且以1:0.86的重量比添加新制备的EDAC(1-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺)(溶解在100mM的MES缓冲液中，30mg至40mg/ml)。反应在6.0的pH，6℃的温度下继续进行，PS:PR:EDC比例为1:0.8:0.86。
依次使用Shodex柱SB-804HQ和SB-805HQ，PBS作为流动相，流速为1ml/分钟，以监测蛋白质转化。20小时后通过添加含EDTA的100mM的磷酸盐缓冲液来淬灭反应。
4)缀合物纯化
4a)通过超滤纯化缀合物：通过在10mM的PBS pH7.2和10mM的Tris缓冲液pH7.2中的300kDa的TFF膜透析来纯化淬灭的缀合物。将最终浓缩的样品送去分析。
4B)通过GFC纯化缀合物：用GFC树脂(Tyoperal HW65F)制备床高为40厘米的柱XK16/70。以100cm/小时的流速填充柱子并且使其沉降，并且1％的色谱柱体积的1M的NaCl通过以评估填充的色谱柱的完整性。使用0.9％的NaCl以30cm/小时平衡柱，将缀合物加载到柱上，以1分钟间隔收集级分，根据HPLC上的概况合并级分2-12。过滤最终合并的级分并送去分析。
结论：使用反向缀合化学反应(活化PS)，通过将温度从6℃升高到10℃，发现ADH衍生化的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖与浓缩的TT、DT和CRM197的缀合是成功的。随着温度升高，缀合反应的速率升高；PS/Pr比例在所有反应中都是低的。
发现使用碳二亚胺化学反应将ADH衍生化的鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌多糖与浓缩的TT、DT和CRM197缀合是成功的。随着温度的升高，缀合反应的速率升高，但PS/Pr比例在两个实验中都是低的。
实施例4：免疫原性组合物
Figure BDA0003607443070000911
Figure BDA0003607443070000921
单剂量不包括防腐剂2-苯氧乙醇
多剂量组合物可另外包括2-苯氧乙醇-5mg(1mg至10mg)
Figure BDA0003607443070000922
Figure BDA0003607443070000931
Figure BDA0003607443070000932
Figure BDA0003607443070000941
Figure BDA0003607443070000951
Figure BDA0003607443070000961
Figure BDA0003607443070000971
Figure BDA0003607443070000981
Figure BDA0003607443070000991
Figure BDA0003607443070001001
Figure BDA0003607443070001011
Figure BDA0003607443070001021
Figure BDA0003607443070001031
Figure BDA0003607443070001041
Figure BDA0003607443070001051
Figure BDA0003607443070001061
Figure BDA0003607443070001071
Figure BDA0003607443070001081
Figure BDA0003607443070001091
Figure BDA0003607443070001101
Figure BDA0003607443070001111
Figure BDA0003607443070001121
Figure BDA0003607443070001131
Figure BDA0003607443070001141
Figure BDA0003607443070001151
Figure BDA0003607443070001161
Vi-TT缀合物的粘度和重量克分子渗透浓度测量
A部分：不含缀合物的Tris缓冲液和氯化钠的粘度和重量克分子渗透浓度结果
Figure BDA0003607443070001171
B部分：具有缀合物的Tris缓冲液和氯化钠的粘度和重量克分子渗透浓度结果
Figure BDA0003607443070001172
结论：
发现具有不同Tris浓度的缀合物是等渗的，并且发现具有150mM NaCl的缀合物是等渗的。
发现具有不同Tris缓冲液和NaCl浓度的缀合物的粘度相似，并且该粘度适合用作肠胃外制剂。
实施例6：免疫原性数据
A.单价缀合疫苗的免疫原性研究；
在小鼠模型中评估SIIP Vi TT疫苗的免疫原性潜力。
小鼠免疫原性研究#1：
在小鼠中进行免疫原性研究，其中向小鼠(每组8只动物)肌内注射未缀合的和TT缀合的SIIPL疫苗(Vi TT)。在第1天和第14天接种动物，并且在第14天(数据未显示)和第21天收集血清样品。详见表86。可从每组中的所有动物获得配对的血清样品。使用适当的血清学免疫化学方法，例如内部IgG ELISA，将血清样品用于测定针对注射多糖的抗体。接收未缀合的SIIPL多糖(Vi PS)的小鼠的血清用作用于诱导接收缀合形式的Vi PS(不同PS尺寸的)的小鼠的血清中的IgG反应的比较对照。
小鼠免疫原性研究#2：
在小鼠中进行另一类似研究。这两项研究都采用了类似的动物处理方案。下面简要描述动物方案。通过相同的免疫学/血清学分析即IgG ELISA测定两项研究的血清。在研究中使用IAEC批准的动物研究方案使用5至6周龄的雌性小鼠(Balb C品系；内部饲养)。所有动物均无特殊病原体，并且在接种和血液样品采集期间在生物安全柜的无菌条件下处理。在研究开始时，小鼠重约18g至20g。每只小鼠通过肌内途径接收2.5μg缀合的Vi TT疫苗。SIIPL Vi TT疫苗稀释在作为载体的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。研究中没有对任何处理组使用佐剂。
处理方案：下表总结了该研究的总体处理计划。
Figure BDA0003607443070001191
用于血清型学分析的方法和技术：
使用无菌玻璃毛细管从实验动物的眶后静脉收集血样。在采血过程中，用异氟醚作安全的麻醉剂。使用内部IgG ELISA对血清进行响应于注射的未缀合或缀合的Vi TT疫苗而产生的IgG抗体的分析。ELISA使用NIBSC Vi PS参考标准(目录号16/126；伤寒沙门氏菌Vi PS的第一国际标准)作为包被抗原。通过分析在接收缀合的Vi PS(不同PS尺寸的Vi TT)的小鼠血清中观察到的光密度(OD)与在接收未缀合的SIIPL多糖(Vi PS)的小鼠血清样品中观察到的OD进行比较来估计IgG水平。
下表显示了源自不同Vi TT PS的免疫原性诱导数据(第21天)。
表87、88、89和90：免疫原性结果
Figure BDA0003607443070001201
Figure BDA0003607443070001202
观察结果：
具有Vi TT的小鼠组表现出>4倍的IgG诱导(与施用未缀合的Vi PS的小鼠相比)，因此强烈表明SIIPL VI TT在所有PS尺寸上的免疫原性潜力。用Vi TT进行了两项独立的研究，并且这两项研究均表明对Vi TT的反应优于Vi PS。
Figure BDA0003607443070001211
Figure BDA0003607443070001221
B.二价缀合疫苗的免疫原性研究
在小鼠模型中评估二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗的免疫原性潜力。
小鼠免疫原性研究#1：
在小鼠中进行免疫原性研究，其中使用了包括单价Vi TT疫苗和与载体蛋白如TT、DT和CRM缀合的单价O-SP A(副伤寒沙门氏菌O-特异性多糖抗原)的组合的二价疫苗。向小鼠(每组8只动物)肌肉注射这些疫苗的单价和二价形式。在第1、14和28天接种动物，同时在第14、28和42天收集血清样品。可从每组中的所有动物获得配对的血清样品。有关处理计划的详细信息，参考下面的表92。使用适当的血清学免疫化学方法，例如内部IgG ELISA，使用血清样品以测定针对注射的多糖的抗体。源自分别接收未缀合的SIIPL多糖(Vi PS)和单独的O-SP的小鼠的血清用作用于诱导IgG反应的比较对照。
下表简要描述了动物方案。
通过免疫学/血清学分析即IgG ELISA测试血清样品。在研究中使用IAEC批准的动物研究方案使用5-6周大的雌性小鼠(Balb C品系；内部饲养)。所有动物均无特定病原体，并在接种和血液样品采集期间在生物安全柜的无菌条件下处理。在研究中使用的小鼠的体重在～18g至20g范围内。每只小鼠通过肌内途径接收2.5g单独的单价缀合的Vi TT或单独的O-SP A DT/TT/CRM和2.5g二价疫苗(与O-SP A DT/TT/CRM混合的单价缀合的Vi TT)。疫苗被稀释在作为载体的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。研究中对任何处理组没有使用佐剂。
处理方案：下表总结了该研究的总体处理计划。
Figure BDA0003607443070001231
Figure BDA0003607443070001241
用于血清型学分析的方法和技术：
使用无菌玻璃毛细管从眶后静脉从实验动物收集血样。在采血过程中，异氟醚用作安全的麻醉剂。使用内部IgG ELISA对血清进行响应于注射抗原产生的IgG抗体的分析。通过比色分析估计源自所有研究组的血清样品中的IgG水平。
观察结果：
下表显示了源自不同二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗的免疫原性诱导数据(第21天)。
表93、94、95、96：免疫原性结果
Figure BDA0003607443070001242
Figure BDA0003607443070001243
Figure BDA0003607443070001251
观察结果：
注射二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗比如a)SIIPL Vi PS-TT+SIIPL O-SP A DT，b)SIIPL Vi PS-TT+SIIPL O-SP A TT和c)SIIPL Vi PS-TT+SIIPL O-SP A CRM Vi TT的小鼠组表现出(与施用未缀合的Vi PS或未缀合的SIIPL O-SP A的小鼠相比)高>4倍的IgG诱导，因此表明含有Vi TT和SIIPL O-SP A(DT/TT/CRM)的组合的二价SIIPL疫苗的免疫原性潜力。
二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗的IgG诱导高于在含有SIIPL O-SP A CRM和商业Vi TT疫苗Typbar TCV的二价疫苗中观察到的IgG诱导。
在各个组之间比较了下述参数：
a.>4倍增加：平均倍数增加>10倍
b.抗体效价中的GM：所有组都表现出比未缀合PS中观察到的更高的GM
c.阳性反应的小鼠％：所有Vi TT组中的所有小鼠都表现出较高的抗体反应(100％阳性)。
血清型学数据分析的结论：
对每组8只(雌性)小鼠进行小鼠免疫原性研究。在所有组中，响应于注射的二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗与未缀合的Vi PS和O-SP A PS相比，评估了抗体诱导。与单独的PS(Vi和O-SP A)组相比，所有二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗强烈表明诱导PS特异性IgG抗体(第21天；第一次加强免疫后)。小鼠血清中IgG的诱导是对二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗的血清学反应的强有力的决定因素。因此，二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗能够在小鼠模型中诱导强烈的免疫原性反应，并为高等动物的未来研究提供有希望的潜力。
观察结果：
1.根据在小鼠模型中响应于二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗观察到的IgG抗体水平评估免疫原性数据。
2.IgG诱导以在IgG ELISA中观察到的比色反应(OD)的几何平均值(geometricmean)来衡量。
3.如果在VI TT处理中OD的倍数增加比在响应于未缀合的Vi PS观察到的OD高4倍，则响应于二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗观察到的GM被认为是免疫原性的。
结论：
1.通过血清学分析，发现所有二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗缀合物均能诱导免疫原性反应。
2.所有二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗缀合物均表现出高于未缀合的疫苗的IgG水平。
3.二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗的IgG诱导高于在含SIIPL O-SP ACRM和商业ViTT疫苗TYpvar TCV的二价疫苗中观察到的IgG诱导。
4.在接收“二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗”的小鼠中观察到诱导免疫原性反应(GM和>4倍增加)，因此可以得出结论，在小鼠模型中二价(伤寒和副伤寒)SIIPL疫苗能够诱导强烈的免疫原性反应，表明其具有临床免疫原性潜力。
实施例7：单剂量疫苗试剂盒
a)单剂量疫苗试剂盒，包括：
含有冻干(冷冻干燥)免疫原性组合物的第一容器：
a)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌A糖-TT缀合物抗原；
b)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌C糖-CRM197缀合物抗原；
c)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌Y糖-CRM197缀合物抗原；
d)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌W-135糖-CRM197缀合物抗原；
e)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌X糖-TT缀合物抗原；
f)1mg至12mg/0.5ml的蔗糖；
g)0.1mg至2mg/0.5ml的柠檬酸钠二水化物；
h)0.05mg至0.5mg/0.5ml的Tris缓冲液；
和
包括用于重构冻干(冷冻干燥)免疫原性组合物的液体组合物的第二个容器，包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1mg至10mg的氯化钠；
c)适量的注射用水(WFI)；
解释：
ViP-TT与脑膜炎奈氏球菌抗原无抗原干扰，用于伤寒沙门氏菌和脑膜炎奈氏球菌抗原引起的伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对伤寒沙门氏菌期望的T依赖性免疫应答。
B)单剂量疫苗试剂盒，包括：
含有冻干(冷冻干燥)免疫原性组合物的第一容器：
a)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌A糖-TT缀合物抗原；
b)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌C糖-CRM197缀合物抗原；
c)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌Y糖-CRM197缀合物抗原；
d)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌W-135糖-CRM197缀合物抗原；
e)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌X糖-TT缀合物抗原；
f)1mg至12mg/0.5ml的蔗糖；
g)0.1mg至2mg/0.5ml的柠檬酸钠二水化物；
h)0.05mg至0.5mg/0.5ml的Tris缓冲液；
和
包括用于重构冻干(冷冻干燥)免疫原性组合物的液体组合物的第二个容器，包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)适量的注射用水(WFI)；
解释：
ViP-TT、OSP抗原与脑膜炎奈氏球菌抗原无抗原干扰，用于预防由伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌和脑膜炎奈氏球菌抗原引起的伤寒和副伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌期望的T依赖性免疫应答。
C)单剂量疫苗试剂盒，包括：
含有全液体六价免疫原性组合物的第一容器：
a)选自Sabin或Salk毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原，其中每0.5ml，1至50D抗原单位(DU)剂量的1型IPV、1至50D抗原单位(DU)剂量的2型IPV或1至50D抗原单位剂量(DU)的3型IPV；
b)量为1Lf至50Lf/0.5ml的白喉类毒素(D)抗原；
c)量为1Lf至30Lf/0.5ml的破伤风类毒素(T)抗原；
d)量为1IOU至50IOU/0.5ml的全细胞百日咳(wP)抗原或选自下述的包括一种或多种修饰的腺苷酸环化酶的无细胞百日咳(aP)抗原：每0.5ml，1μg至50μg的百日咳类毒素(PT)、1μg至50μg的丝状血凝素(FHA)、1μg至20μg的百日咳杆菌粘附素(P69或PRN)或2μg至25μg的菌毛蛋白(FIM 1、2和3)；
e)量为1μg至20μg百日咳杆菌粘附素的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；
f)量为1μg至20μg/0.5ml的流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
和
含有全液体免疫原性组合物的第二容器，包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1mg至10mg的氯化钠；和/或
c)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；和/或
d)聚山梨醇酯20；和/或
e)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；和/或
f)适量的注射用水(WFI)。
解释：
ViP-TT与六价免疫原性组合物无抗原干扰，用于预防伤寒沙门氏菌和六价抗原引起的伤寒，其中所述疫苗制剂足以通过一次注射包括完整的疫苗接种方案引起针对伤寒沙门氏菌期望的T依赖性免疫应答，包括在小于2岁的儿童、青少年、成人、和老年人中。
D)单剂量疫苗试剂盒，包括：
含有全液体六价免疫原性组合物的第一容器：
a)选自Sabin或Salk毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原，其中每0.5ml 1至50D抗原单位(DU)剂量的1型IPV、1至50D抗原单位(DU)剂量的2型IPV或1至50D抗原单位(DU)剂量的3型IPV；
b)量为1Lf至50Lf/0.5ml的白喉类毒素(D)抗原；
c)量为1Lf至30Lf/0.5ml的破伤风类毒素(T)抗原；
d)量为1IOU至50IOU/0.5ml的全细胞百日咳(wP)抗原或选自下述的包括一种或多种修饰的腺苷酸环化酶的无细胞百日咳(aP)抗原：每0.5ml，1μg至50μg的百日咳类毒素(PT)、1μg至50μg的丝状血凝素(FHA)、1μg至20μg的百日咳杆菌粘附素(P69或PRN)或2μg至25μg的菌毛蛋白(FIM 1、2和3)；
e)量为1μg至20μg/0.5ml的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；
f)量为1μg至20μg/0.5ml的流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
和
含有全液体免疫原性组合物的第二容器，包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；和/或
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；和/或
g)选自聚山梨醇酯20的聚山梨醇酯；和/或
h)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；和/或
e)适量的注射用水(WFI)
解释：
ViP-TT、OSP抗原与六价抗原无抗原干扰；用于预防由伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌和六价抗原引起的伤寒和副伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对伤寒沙门氏菌和副伤寒期望的T依赖性免疫应答。
E)单剂量疫苗试剂盒，包括：
含有全液体七价免疫原性组合物的第一容器：
a)选自Sabin或Salk毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原，其中每0.5ml，1至50D抗原单位(DU)剂量的1型IPV、1至50D抗原单位(DU)剂量的2型IPV或1至50D抗原单位(DU)剂量的3型IPV；
b)量的范围为1μg至50μg/0.5ml的选自CDC-9、CDC-66或任何其他灭活轮状病毒毒株的灭活轮状病毒抗原；
c)量为1Lf至50Lf/0.5ml的白喉类毒素(D)抗原；
d)量为1Lf至30Lf/0.5ml的破伤风类毒素(T)抗原；
e)全细胞百日咳(wP)抗原或选自下述的包括一种或多种修饰的腺苷酸环化酶的无细胞百日咳(aP)抗原：每0.5ml，1μg至50μg的百日咳类毒素(PT)、1μg至50μg的丝状血凝素(FHA)、1μg至20μg的百日咳杆菌粘附素(P69或PRN)或2μg至25μg的菌毛蛋白(FIM 1、2和3)；
f)量为1μg至20μg/0.5ml的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；
g)量为1μg至20μg/0.5ml的流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
和
含有全液体免疫原性组合物的第二容器，包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1mg至10mg的氯化钠；
c)适量的注射用水(WFI)；
解释：
其中ViP-TT与七价免疫原性组合物无抗原干扰，用于预防伤寒沙门氏菌和七价抗原引起的伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对伤寒沙门氏菌的所需T依赖性免疫应答。
F)单剂量疫苗试剂盒，包括：
含有全液体六价免疫原性组合物的第一容器：
a)选自Sabin或Salk毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原，其中每0.5ml 1至50D抗原单位(DU)剂量的1型IPV、1至50D抗原单位(DU)剂量的2型IPV或1至50D抗原单位(DU)剂量的3型IPV；
b)量的范围为1μg至50μg/0.5ml的选自CDC-9、CDC-66或任何其他灭活轮状病毒毒株的灭活轮状病毒抗原；
c)1Lf至50Lf/0.5ml的白喉类毒素(D)抗原；
d)1Lf至30Lf/0.5ml的破伤风类毒素(T)抗原；
e)全细胞百日咳(wP)抗原或选自下述的包括一种或多种修饰的腺苷酸环化酶的无细胞百日咳(aP)抗原：每0.5ml，1μg至50μg的百日咳类毒素(PT)、1μg至50μg的丝状血凝素(FHA)、1μg至20μg的百日咳杆菌粘附素(P69或PRN)或2μg至25μg的菌毛蛋白(FIM 1、2和3)；
f)量为1μg至20μg/0.5ml的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；
g)量为1μg至20μg/0.5ml的流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
和
含有全液体免疫原性组合物的第二容器，包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原；其中CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；和/或
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；和/或
g)选自聚山梨醇酯20的聚山梨醇酯；
h)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；和/或
e)适量的注射用水(WFI)
解释：
ViP-TT、OSP抗原与七价抗原无抗原干扰，用于预防由伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌和七价抗原引起的伤寒和副伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对伤寒沙门氏菌和副伤寒期望的T依赖性免疫应答。

Claims (129)

1.一种免疫原性组合物，包括：
i)至少一种选自下述的抗原：
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物；
c)副伤寒沙门氏菌B糖-载体蛋白缀合物；
d)副伤寒沙门氏菌C糖-载体蛋白缀合物；
e)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物；
f)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物；
g)猪霍乱沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物；
h)都柏林沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物；和
ii)任选地选自包括下述的组中的抗原：沙门氏菌(非伤寒)、白喉类毒素(D)、破伤风类毒素(T)、全细胞百日咳(wP)、乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、流感嗜血杆菌b PRP-载体蛋白缀合物(Hib)、流感嗜血杆菌(a、c、d、e、f血清型和未被包封的毒株)、脊髓灰质炎病毒、包括脑膜炎奈氏球菌抗原(A、B、C、D、W135、X、Y、Z和29E)的缀合物、肺炎链球菌抗原(1、2、3、4、5、6A、6B、6C、6D、6E、6G、6H、7A、7B、7C、7F、8、9A、9L、9F、9N、9V、10F、10B、10C、10A、11A、11F、11B、11C、11D、11E、12A、12B、12F、13、14、15A、15C、15B、15F、16A、16F、17A、17F、18C、18F、18A、18B、19A、19B、19C、19F、20、20A、20B、21、22A、22F、23A、23B、23F、24A、24B、24F、25F、25A、27、28F、28A、29、31、32F、32A、33A、33C、33D、33E、33F、33B、34、45、38、35A、35B、35C、35F、36、37、38、39、40、41F、41A、42、43、44、45、46、47F、47A、48)、链球菌物种A组、链球菌B组(Ia、Ib、II、III、IV、V、Vl、VII、VIII和IX组)、脑膜炎奈氏球菌B疱疹或抗原(fHbp、PorA、嵌合fHbp-porA)、金黄色葡萄球菌抗原、炭疽、BCG、肝炎(A、C、D、E、F和G毒株)抗原、人乳头瘤病毒、HIV、无细胞百日咳、修饰的腺苷酸环化酶、疟疾抗原(RTS,S)、麻疹、腮腺炎、风疹、登革热、寨卡、埃博拉、基孔肯雅热、日本脑炎、轮状病毒、腹泻抗原(大肠埃希杆菌物种、志贺杆菌物种、弯曲杆菌物种、霍乱弧菌)、黄病毒、天花、黄热病、带状疱疹、水痘病毒抗原。
2.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包括下述的至少一种二价组合：
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
A)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原。
3.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包括下述的至少一种三价组合：
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原。
4.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包括下述的四价组合：
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原。
5.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包括下述的至少一种组合：
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌W-135糖-载体蛋白缀合物抗原；
f)脑膜炎奈氏球菌X糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
f)脑膜炎奈氏球菌W-135糖-载体蛋白缀合物抗原；
g)脑膜炎奈氏球菌X糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
f)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
g)脑膜炎奈氏球菌W-135糖-载体蛋白缀合物抗原；
h)脑膜炎奈氏球菌X糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
f)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
g)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
h)脑膜炎奈氏球菌W-135糖-载体蛋白缀合物抗原；
i)脑膜炎奈氏球菌X糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
f)脑膜炎奈氏球菌W-135糖-载体蛋白缀合物抗原；
g)脑膜炎奈氏球菌X糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌W-135糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌A糖类载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
f)脑膜炎奈氏球菌W-135糖-载体蛋白缀合物抗原
或
a)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)脑膜炎奈氏球菌Y糖-载体蛋白缀合物抗原；
f)脑膜炎奈氏球菌W-135糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原；
或
a)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)脑膜炎奈氏球菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)脑膜炎奈氏球菌C糖-载体蛋白缀合物抗原。
6.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包括下述的至少一种组合：
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质病毒(IPV)抗原；
c)白喉类毒素(D)抗原；
d)破伤风类毒素(T)抗原；
e)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
f)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；和
g)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质病毒(IPV)抗原；
c)轮状病毒抗原；
d)白喉类毒素(D)抗原；
e)破伤风类毒素(T)抗原；
f)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
g)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；和
h)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质病毒(IPV)抗原；
d)白喉类毒素(D)抗原；
e)破伤风类毒素(T)抗原；
f)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
g)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；和
h)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)轮状病毒抗原；
d)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原
e)白喉类毒素(D)抗原；
f)破伤风类毒素(T)抗原；
g)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
h)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；和
i)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原；
e)白喉类毒素(D)抗原；
f)破伤风类毒素(T)抗原；
g)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
h)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；和
i)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)轮状病毒抗原；
e)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原；
f)白喉类毒素(D)抗原；
g)破伤风类毒素(T)抗原；
h)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
i)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；和
j)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原；
f)白喉类毒素(D)抗原；
g)破伤风类毒素(T)抗原；
h)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
i)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；和
j)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)轮状病毒抗原；
f)选自Salk或Sabin毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原
g)白喉类毒素(D)抗原；
h)破伤风类毒素(T)抗原；
i)全细胞百日咳(wP)抗原或无细胞百日咳(aP)；
j)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；和
k)流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)。
7.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包括下述的至少一种组合：
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)轮状病毒抗原；
c)致泻大肠埃希杆菌物种(产肠毒素大肠埃希杆菌和肠出血性大肠埃希杆菌)抗原；
d)志贺杆菌物种抗原；
e)空肠弯曲杆菌抗原；
f)霍乱弧菌抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)轮状病毒抗原；
d)致泻大肠埃希杆菌物种(产肠毒素大肠埃希杆菌和肠出血性大肠埃希杆菌)抗原；
e)志贺杆菌物种抗原；
f)空肠弯曲杆菌抗原；
g)霍乱弧菌抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)轮状病毒抗原；
d)致泻大肠埃希杆菌物种(产肠毒素大肠埃希杆菌和肠出血性大肠埃希杆菌)抗原；
e)志贺杆菌物种抗原；
f)空肠弯曲杆菌抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)轮状病毒抗原；
d)致泻大肠埃希杆菌物种(产肠毒素大肠埃希杆菌和肠出血性大肠埃希杆菌)抗原；
e)志贺杆菌物种抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)轮状病毒抗原；
d)志贺杆菌物种抗原；
或
a)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)轮状病毒抗原；
d)致泻大肠埃希杆菌物种(产肠毒素大肠埃希杆菌和肠出血性大肠埃希杆菌)抗原；
e)志贺杆菌物种抗原；
f)空肠弯曲杆菌抗原；
g)霍乱弧菌抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)轮状病毒抗原；
e)致泻大肠埃希杆菌物种(产肠毒素大肠埃希杆菌和肠出血性大肠埃希杆菌)抗原；
f)志贺杆菌物种抗原；
g)空肠弯曲杆菌抗原；
h)霍乱弧菌抗原；
或
a)伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
b)副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；
c)鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
d)肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；
e)轮状病毒抗原；
f)致泻大肠埃希杆菌物种(产肠毒素大肠埃希杆菌和肠出血性大肠埃希杆菌)抗原；
g)志贺杆菌物种抗原；
h)空肠弯曲杆菌抗原；
i)霍乱弧菌抗原。
8.根据权利要求1至7所述的免疫原性组合物，其中所述载体蛋白(CP)选自包括下述的组中：带有或不带有接头的破伤风毒素、破伤风类毒素(TT)、破伤风类毒素的片段、白喉类毒素(DT)、CRM197、铜绿假单胞菌类毒素、百日咳博德特氏菌类毒素、产气荚膜梭菌类毒素、大肠埃希杆菌LT、大肠埃希杆菌ST、大肠埃希杆菌不耐热毒素-B亚单位、脑膜炎奈氏球菌外膜复合物、rEPA、流感嗜血杆菌的蛋白D、鞭毛蛋白FliC、马蹄蟹血蓝蛋白、来自铜绿假单胞菌的外毒素A、外膜复合物c(OMPC)、孔蛋白、运铁蛋白结合蛋白、肺炎球菌溶血素、肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎链球菌表面粘附素A(PsaA)、肺炎链球菌PhtD、肺炎链球菌表面蛋白BVH-3和BVH-11、炭疽杆菌的保护性抗原(PA)和炭疽杆菌解毒水肿因子(EF)和致死因子(LF)、卵白蛋白、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、结核菌素的纯化蛋白衍生物(PPD)、合成的肽、热休克蛋白、百日咳蛋白、细胞因子、淋巴因子、激素、生长因子、包括来自各种病原体衍生化的抗原(比如N19)的多个人类CD4+T细胞表位的人工蛋白、铁摄取蛋白、来自艰难梭菌和无乳链球菌蛋白的毒素A或B和其片段、衍生物、修饰。
9.根据权利要求1至7所述的免疫原性组合物，其中伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物抗原；鼠伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原；肠炎沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物抗原以5μg/剂至30μg/剂的剂量范围存在。
10.根据权利要求1至7所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包括选自下述的组中的药学上可接受的缓冲液：氯化钠、乙酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、葡萄糖酸盐、酒石酸盐、磷酸盐缓冲液、硼酸盐、组氨酸缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、HEPES、TRIS或柠檬酸盐-磷酸盐。
11.根据权利要求1至7所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包括选自下述的组中的药学上可接受的赋形剂：糖、表面活性剂、聚合物、盐、氨基酸或pH调节剂。
12.根据权利要求11所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包括作为赋形剂的氨基酸或蛋白质，所述氨基酸或蛋白质选自下述的组中：L-组氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、三(羟甲基)甲基甘氨酸、精氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、肽、水解蛋白质或比如血清白蛋白的蛋白质。
13.根据权利要求11所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包括作为赋形剂的糖，所述糖选自下述的组中：蔗糖、甘露醇、海藻糖、甘露糖、棉子糖、乳糖醇、乳糖醛酸、葡萄糖、麦芽酮糖、异麦芽酮糖、麦芽糖、乳糖山梨糖醇、右旋糖、果糖、甘油或其组合。
14.根据权利要求11所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包括作为赋形剂的非离子表面活性剂，所述非离子表面活性剂选自下述的组中：聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85、壬基苯氧基聚乙氧基乙醇、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇、辛苯醇醚40、壬苯醇醚-9、三乙醇胺、三乙醇胺多肽油酸盐、聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐、聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐、大豆卵磷脂和泊咯沙姆。
15.根据权利要求11所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包括作为赋形剂的聚合物，所述聚合物选自下述的组中：葡聚糖、羧甲基纤维素、透明质酸、环糊精。
16.根据权利要求11所述的免疫原性组合物，其中所述组合物包括作为赋形剂的盐，所述盐选自下述的组中：NaCl、KCl、KH2PO4、Na2HPO4.2H2O、CaCl2和MgC12。
17.根据权利要求1至7所述的免疫原性组合物，其中所述单剂量组合物不含防腐剂。
18.根据权利要求1至7所述的免疫原性组合物，其中所述多剂量组合物包括一种或多种防腐剂，所述防腐剂选自下述的组中：2-苯氧乙醇、苄索氯铵(Phemerol)、苯酚、硫柳汞、甲醛、对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯或对羟基苯甲酸丁酯)、苯甲醇、间甲酚、苯扎氯铵、苯甲醇、氯丁醇、对氯间甲酚。
19.根据权利要求1至7所述的免疫原性组合物，其中所述组合物另外包括选自下述的组中的佐剂：氢氧化铝、磷酸铝、羟基磷酸铝和硫酸铝钾或其混合物。
20.根据权利要求1至7所述的免疫原性组合物，其中所述组合物另外包括免疫刺激组分，所述免疫刺激组分选自下述的组中：油和水乳液、MF-59、脂质体、脂多糖、皂苷、脂质A、脂质A衍生物、单磷酰脂A、3-脱酰基单磷酰脂A、AS01、AS03、寡核苷酸、包括至少一种未甲基化的CPG的寡核苷酸和/或脂质体、弗氏佐剂、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、CRL-8300佐剂、胞壁酰二肽、TLR-4激动剂、鞭毛蛋白、源自革兰氏阴性菌的鞭毛蛋白、dmLT、TLR-5激动剂、能够与TLR-5受体结合的鞭毛蛋白的片段、QS-21、ISCOMS、壳聚糖、皂苷结合甾醇和脂质。
21.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1mg至10mg的氯化钠；
c)适量的注射用水(WFI)。
22.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1mg至10mg的氯化钠；
c)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
d)适量的注射用水(WFI)。
23.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)适量的注射用水(WFI)。
24.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
e)适量的注射用水(WFI)。
25.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)适量的注射用水(WFI)。
26.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
e)适量的注射用水(WFI)。
27.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)适量的注射用水(WFI)。
28.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
g)适量的注射用水(WFI)。
29.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)2.5mg至25mg的蔗糖；
g)适量的注射用水(WFI)。
30.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)2.5mg至25mg的蔗糖；
g)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
h)适量的注射用水(WFI)。
31.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)适量的注射用水(WFI)。
32.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
e)适量的注射用水(WFI)。
33.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)适量的注射用水(WFI)。
34.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)2.5mg至25mg的蔗糖；
g)适量的注射用水(WFI)。
35.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
g)适量的注射用水(WFI)。
36.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)2.5mg至25mg的蔗糖；
g)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
h)适量的注射用水(WFI)。
37.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)适量的注射用水(WFI)。
38.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
e)适量的注射用水(WFI)。
39.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)适量的注射用水(WFI)。
40.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)2.5mg至25mg的蔗糖；
g)适量的注射用水(WFI)。
41.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
g)适量的注射用水(WFI)。
42.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)2.5mg至25mg的蔗糖；
g)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
h)适量的注射用水(WFI)。
43.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)适量的注射用水(WFI)。
44.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
e)适量的注射用水(WFI)。
45.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)适量的注射用水(WFI)。
46.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)2.5mg至25mg的蔗糖；
g)适量的注射用水(WFI)。
47.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
g)适量的注射用水(WFI)。
48.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)2.5mg至25mg的蔗糖；
g)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
h)适量的注射用水(WFI)。
49.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)适量的注射用水(WFI)。
50.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
e)适量的注射用水(WFI)。
51.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)适量的注射用水(WFI)。
52.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)2.5mg至25mg的蔗糖；
g)适量的注射用水(WFI)。
53.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
g)适量的注射用水(WFI)。
54.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)2.5mg至25mg的蔗糖；
g)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
h)适量的注射用水(WFI)。
55.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)适量的注射用水(WFI)。
56.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
e)适量的注射用水(WFI)。
57.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)适量的注射用水(WFI)。
58.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)2.5mg至25mg的蔗糖；
g)适量的注射用水(WFI)。
59.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
g)适量的注射用水(WFI)。
60.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg的氯化钠；
d)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)2.5mg至25mg的蔗糖；
g)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
h)适量的注射用水(WFI)。
61.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)适量的注射用水(WFI)。
62.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
f)适量的注射用水(WFI)。
63.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)适量的注射用水(WFI)。
64.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)2.5mg至25mg的蔗糖；
g)适量的注射用水(WFI)。
65.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
g)适量的注射用水(WFI)。
66.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
f)2.5mg至25mg的蔗糖；
g)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
h)适量的注射用水(WFI)。
67.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液
f)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
g)适量的注射用水(WFI)。
68.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
f)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
g)2.5mg至25mg的蔗糖；
h)适量的注射用水(WFI)。
69.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
f)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
g)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
h)适量的注射用水(WFI)。
70.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
f)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
g)2.5mg至25mg的蔗糖；
h)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
i)适量的注射用水(WFI)。
71.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)适量的注射用水(WFI)。
72.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
f)适量的注射用水(WFI)。
73.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
f)适量的注射用水(WFI)。
74.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
f)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
g)适量的注射用水(WFI)。
75.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
f)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
g)适量的注射用水(WFI)。
76.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
f)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
g)2.5mg至25mg的蔗糖；
h)适量的注射用水(WFI)。
77.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
f)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
g)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
h)适量的注射用水(WFI)。
78.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
f)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
g)2.5mg至25mg的蔗糖；
h)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
i)适量的注射用水(WFI)。
79.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)适量的注射用水(WFI)。
80.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)1mg至10mg的2-苯氧乙醇
f)适量的注射用水(WFI)。
81.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
f)适量的注射用水(WFI)。
82.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
f)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
g)适量的注射用水(WFI)。
83.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
f)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
g)适量的注射用水(WFI)。
84.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
f)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
g)2.5mg至25mg的蔗糖；
h)适量的注射用水(WFI)。
85.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液
f)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
g)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
h)适量的注射用水(WFI)。
86.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1mg至10mg的氯化钠；
e)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
f)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
g)2.5mg至25mg的蔗糖；
h)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
i)适量的注射用水(WFI)。
87.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
e)1mg至10mg的氯化钠；
f)适量的注射用水(WFI)。
88.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
e)1mg至10mg的氯化钠；
f)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
g)适量的注射用水(WFI)。
89.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
e)1mg至10mg的氯化钠；
f)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
g)适量的注射用水(WFI)。
90.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
e)1mg至10mg的氯化钠；
f)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
g)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
h)适量的注射用水(WFI)。
91.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
e)1mg至10mg的氯化钠；
f)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液
g)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
h)适量的注射用水(WFI)。
92.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
e)1mg至10mg的氯化钠；
f)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液
g)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
h)2.5mg至25mg的蔗糖；
i)适量的注射用水(WFI)。
93.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
e)1mg至10mg的氯化钠；
f)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
g)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
h)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
i)适量的注射用水(WFI)。
94.根据权利要求1所述的免疫原性组合物，其中0.5ml的所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg的副伤寒沙门氏菌AOSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1.25μg至50μg的鼠伤寒沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
d)1.25μg至50μg的肠炎沙门氏菌糖-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
e)1mg至10mg的氯化钠；
f)0.1mg至1.6mg的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；
g)量为25μg至500μg的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；
h)2.5mg至25mg的蔗糖；
i)1mg至10mg的2-苯氧乙醇；
j)适量的注射用水(WFI)。
95.一种单剂量疫苗试剂盒，包括：
含有冻干(冷冻干燥)免疫原性组合物的第一容器：
a)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌A糖-TT缀合物抗原；
b)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌C糖-CRM197缀合物抗原；
c)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌Y糖-CRM197缀合物抗原；
d)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌W-135糖-CRM197缀合物抗原；
e)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌X糖-TT缀合物抗原；
f)1mg至12mg/0.5ml的蔗糖；
g)0.1mg至2mg/0.5ml的柠檬酸钠二水化物；
h)0.05mg至0.5mg/0.5ml的Tris缓冲液；
和
含有用于重构所述冻干(冷冻干燥)免疫原性组合物的液体组合物的第二容器，包括：
a)1.25μg至50μg/0.5ml的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1mg至10mg/0.5ml的氯化钠；
c)适量的注射用水(WFI)；
其中ViP-TT与脑膜炎奈氏球菌抗原无抗原干扰，用于预防由伤寒沙门氏菌和脑膜炎奈氏球菌抗原引起的伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对伤寒沙门氏菌期望的T-依赖性免疫应答。
96.一种单剂量疫苗试剂盒，包括：
含有冻干(冷冻干燥)免疫原性组合物的第一容器：
a)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌A糖-TT缀合物抗原；
b)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌C糖-CRM197缀合物抗原；
c)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌Y糖-CRM197缀合物抗原；
d)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌W-135糖-CRM197缀合物抗原；
e)5μg/0.5ml的脑膜炎奈氏球菌X糖-TT缀合物抗原；
f)1mg至12mg/0.5ml的蔗糖；
g)0.1mg至2mg/0.5ml的柠檬酸钠二水化物；
h)0.05mg至0.5mg/0.5ml的Tris缓冲液；
和
含有用于重构所述冻干(冷冻干燥)免疫原性组合物的液体组合物的第二容器，包括：
a)1.25μg至50μg/0.5ml的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg/0.5ml的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg/0.5ml的氯化钠；
d)适量的注射用水(WFI)；
其中ViP-TT、OSP抗原与脑膜炎奈氏球菌抗原无抗原干扰，用于预防由伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌和脑膜炎奈氏球菌抗原引起的伤寒和副伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对鼠伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌期望的T依赖性免疫应答。
97.一种单剂量疫苗试剂盒，包括：
含有全液体六价免疫原性组合物的第一容器；
a)选自Sabin或Salk毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原，其中每0.5ml中1至50D抗原单位(DU)剂量的1型IPV、1至50D抗原单位(DU)剂量的2型IPV或1至50D抗原单位(DU)剂量的3型IPV；
b)量为1Lf至50Lf/0.5ml的白喉类毒素(D)抗原；
c)量为1Lf至30Lf/0.5ml的破伤风类毒素(T)抗原；
d)量为1IOU至50IOU/0.5ml的全细胞百日咳(wP)抗原或选自下述的包括一种或多种修饰的腺苷酸环化酶的无细胞百日咳(aP)抗原：每0.5ml，1μg至50μg的百日咳类毒素(PT)、1μg至50μg的丝状血凝素(FHA)、1μg至20μg的百日咳杆菌粘附素(P69或PRN)或2μg至25μg的菌毛蛋白(FIM 1、2和3)；
e)量为1μg至20μg/0.5ml的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；
f)量为1μg至20μg/0.5ml的流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
和
含有全液体免疫原性组合物的第二容器，所述组合物包括：
a)1.25μg至50μg/0.5ml的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1mg至10mg/0.5ml的氯化钠；和/或
c)0.1mg至1.6mg/0.5ml的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；和/或
d)量为25μg至500μg/0.5ml的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；和/或
e)1mg至10mg/0.5ml的2-苯氧乙醇；和/或
f)适量的注射用水(WFI)；
其中ViP-TT与六价免疫原性组合物无抗原干扰，用于预防由伤寒沙门氏菌和六价抗原引起的伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对鼠伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌期望的T依赖性免疫应答。
98.一种单剂量疫苗试剂盒，包括：
含有全液体六价免疫原性组合物的第一容器；
a)选自Sabin或Salk毒株的灭活脊髓灰质病毒(IPV)抗原，其中每0.5ml中1至50D抗原单元(DU)剂量的1型IPV、1至50D抗原单元(DU)剂量的2型IPV或1至50D抗原单元(DU)剂量的3型IPV；
b)量为1Lf至50Lf/0.5ml的白喉类毒素(D)抗原；
c)量为1Lf至30Lf/0.5ml的破伤风类毒素(T)抗原；
d)量为1IOU至50IOU/0.5ml的全细胞百日咳(wP)抗原或选自下述的包括一种或多种修饰的腺苷酸环化酶的无细胞百日咳(aP)抗原：每0.5ml，1μg至50μg的百日咳类毒素(PT)、1μg至50μg的丝状血凝素(FHA)、1μg至20μg的百日咳杆菌粘附素(P69或PRN)或2μg至25μg的菌毛蛋白(FIM 1、2和3)；
e)量为1μg至20μg/0.5ml的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；
f)量为1μg至20μg/0.5ml的流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
和
含有全液体免疫原性组合物的第二容器，包括：
a)1.25μg至50μg/0.5ml的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg/0.5ml的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg/0.5ml的氯化钠；和/或
d)0.1mg至1.6mg/0.5ml的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；和/或
e)量为25μg至500μg/0.5ml的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；和/或
f)1mg至10mg/0.5ml的2-苯氧乙醇；和/或
g)适量的注射用水(WFI)；
其中ViP-TT、OSP抗原与六价抗原无抗原干扰，用于预防由伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌和六价抗原引起的伤寒和副伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对鼠伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌期望的T依赖性免疫应答。
99.一种单剂量疫苗试剂盒，包括：
含有全液体七价免疫原性组合物的第一容器：
a)选自Sabin或Salk毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原，其中每0.5ml中1至50D抗原单位(DU)剂量的1型IPV、1至50D抗原单位(DU)剂量的2型IPV或1至50D抗原单位(DU)剂量的3型IPV；
b)以范围为1μg至50μg/0.5ml的量存在的选自CDC-9、CDC-66或任何其他灭活轮状病毒毒株的灭活轮状病毒抗原；
c)量为1Lf至50Lf/0.5ml的白喉类毒素(D)抗原；
d)量为1Lf至30Lf/0.5ml的破伤风类毒素(T)抗原；
e)量为1IOU至50IOU/0.5ml的全细胞百日咳(wP)抗原或选自下述的包括一种或多种修饰的腺苷酸环化酶的无细胞百日咳(aP)抗原：每0.5ml，1μg至50μg的百日咳类毒素(PT)、1μg至50μg的丝状血凝素(FHA)、1μg至20μg的百日咳杆菌粘附素(P69或PRN)或2μg至25μg的菌毛蛋白(FIM 1、2和3)；
f)量为1μg至20μg/0.5ml的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；
g)量为1μg至20μg/0.5ml的流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
和
含有全液体免疫原性组合物的第二容器，包括：
a)1.25μg至50μg/0.5ml的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1mg至10mg/0.5ml的氯化钠；
c)适量的注射用水(WFI)；
其中ViP-TT与七价免疫原性组合物无抗原干扰，用于预防针对由伤寒沙门氏菌和七价抗原引起的伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对鼠伤寒沙门氏菌期望的T依赖性免疫应答。
100.一种单剂量疫苗试剂盒，包括：
含有全液体七价免疫原性组合物的第一容器：
a)选自Sabin或Salk毒株的灭活脊髓灰质炎病毒(IPV)抗原，其中每0.5ml中1至50D抗原单位(DU)剂量的1型IPV、1至50D抗原单位(DU)剂量的2型IPV或1至50D抗原单位(DU)剂量的3型IPV；
b)以范围为1μg至50μg/0.5ml的量存在的选自CDC-9、CDC-66或任何其他灭活轮状病毒毒株的灭活轮状病毒抗原；
c)量为1Lf至50Lf/0.5ml的白喉类毒素(D)抗原；
d)量为1Lf至30Lf/0.5ml的破伤风类毒素(T)抗原；
e)量为1IOU至50IOU/0.5ml的全细胞百日咳(wP)抗原或选自下述的包括一种或多种修饰的腺苷酸环化酶的无细胞百日咳(aP)抗原：每0.5ml，1μg至50μg的百日咳类毒素(PT)、1μg至50μg的丝状血凝素(FHA)、1μg至20μg的百日咳杆菌粘附素(P69或PRN)或2μg至25μg的菌毛蛋白(FIM 1、2和3)；
f)量为1μg至20μg/0.5ml的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)；
g)量为1μg至20μg/0.5ml的流感嗜血杆菌b型抗原(Ηib)；
和
含有全液体免疫原性组合物的第二容器，包括：
a)1.25μg至50μg/0.5ml的伤寒沙门氏菌ViP-TT缀合物抗原；
b)1.25μg至50μg/0.5ml的副伤寒沙门氏菌A OSP-CP缀合物抗原，其中所述CP是TT或DT或CRM197；
c)1mg至10mg/0.5ml的氯化钠；和/或
d)0.1mg至1.6mg/0.5ml的Tris缓冲液或柠檬酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液；和/或
g)量为25μg至500μg/0.5ml的选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85的聚山梨醇酯，壬基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，辛苯醇醚40，壬苯醇醚-9，三乙醇胺，三乙醇胺多肽油酸盐，聚氧乙烯-660羟基硬脂酸盐，聚氧乙烯-35蓖麻醇酸盐，大豆卵磷脂和泊咯沙姆；和/或
h)1mg至10mg/0.5ml的2-苯氧乙醇；和/或
e)适量的注射用水(WFI)；
其中ViP-TT、OSP抗原与七价抗原无抗原干扰，用于预防由伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌和七价抗原引起的伤寒和副伤寒，其中所述疫苗制剂仅通过包括完整疫苗接种方案的一次注射足以在包括小于2岁的儿童、青少年、成人和老年人中引起针对鼠伤寒沙门氏菌期望的T依赖性免疫应答。
101.一种制造伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物的方法，包括：
a.补料分批模式的培养，以获得高产伤寒沙门氏菌荚膜Vi-多糖(ViP)，其中在培养期间使用止泡剂、范围为40g/L至70g/L的大豆蛋白胨和范围为40g/L至70g/L的酵母提取物的组合，产生提高的收获产率(100mg/L至700mg/L)，发酵参数包括保持在6.7至7.1范围内的pH值、保持在34.0℃至38.0℃范围内的温度、保持在36％至39％的溶解氧水平、保持在150(rpm)至500(rpm)的搅拌、400mOsmol/kg至600mOsmol/kg的重量克分子渗透浓度；
b.通过用阴离子去污剂更优选小于2％的十二烷基硫酸钠(SDS)和阳离子去污剂优选CTAB、乙二胺四乙酸(EDTA)(4mM至10mM)、乙酸钠(5％至10％)处理，醇沉淀(30％至60％)以及浓缩和在不同步骤使用30kDa截留膜进行透析，纯化伤寒沙门氏菌荚膜ViP，其中工艺使得明显减少内毒素(<100EU内毒素/μg PS)、蛋白质(<1％)和核酸(<2％)杂质，适当地在40％至65％范围内的高荚膜多糖回收率，具有期望的O-乙酰基水平(>2.0mmol/g多糖)，范围为100mg/L至4000mg/L的纯化的Vi多糖产率，分子尺寸分布(在实现0.25的分布系数(KD)之前>50％的PS被洗脱)，纯化的Vi多糖的平均分子量可在40kDa至400kDa，优选150kDa至250kDa的范围内；
c.使用碳二亚胺、还原胺化或氰化缀合反应，将纯化的ViP缀合至载体蛋白(CP)；
d.使用凝胶过滤色谱或超滤来纯化ViP-载体蛋白缀合物，由此将缀合物原液浓缩至少3倍，并且基本上去除所有未反应的化合物、未缀合的多糖、未缀合的蛋白质，产生尺寸为1000kDa至1500kDa的纯化的Vi多糖缀合物疫苗，其中缀合物产率≥50％。
102.根据权利要求101所述的制备伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物的方法，其中在缀合之前通过选自FeCl3、H2O2、偏高碘酸钠和乙酸钠的组中的化学方式或选自高压细胞破碎、均质器、超声法的组中的机械方式对ViP进行解聚/改变尺寸。
103.根据权利要求101所述的制备伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物的方法，其中在存在1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDAC)的情况下，使用碳二亚胺缀合反应，将纯化的ViP共价键合至载体蛋白(CP)，ViP:EDAC以1:0.5至1:2的重量比混合，反应在范围为5至7的pH、范围为2℃至30℃的温度下进行，Vi多糖与载体蛋白的比例为0.5至1.5，ViP:CP:EDAC的比例优选为1:1:2或1:0.9:2或1:0.8:1.8或1:0.7:1.8。
104.根据权利要求101和103所述的制备伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物的方法，其中在缀合之前，使用碳二亚胺、还原胺化或氰化反应，用选自由肼、碳酰肼、盐酸肼、二酰肼、ε-氨基己酸、氯己醇二甲基缩醛、D-葡萄糖醛酸内酯、胱胺和对硝基苯乙胺、己二胺、乙二胺、1,6-二氨基氧基己烷或β-丙酰胺、硝基苯乙胺、卤代烷基卤化物、6-氨基己酸组成的组中的异型或同型双功能接头衍生化所述多糖或载体蛋白。
105.根据权利要求104所述的制备伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物的方法，其中在缀合之前，在存在碳二亚胺比如1-乙基-3(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDAC)的情况下，用己二酸二酰肼(ADH)接头衍生化载体蛋白(CP)，反应持续时间1小时，在范围为5至7的pH下进行。
106.根据权利要求101、102、103、104和105所述的制备伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物的方法，其中所述载体蛋白选自包括下述的组中：带有或不带有接头的破伤风毒素、破伤风类毒素、破伤风类毒素的片段、白喉类毒素、CRM197、铜绿假单胞菌类毒素、百日咳博德特氏菌类毒素、产气荚膜梭菌类毒素、大肠埃希杆菌LT、大肠埃希杆菌ST、大肠埃希杆菌不耐热毒素-B亚单位、脑膜炎奈氏球菌外膜复合物、rEPA、流感嗜血杆菌的蛋白D、鞭毛蛋白FliC、马蹄蟹血蓝蛋白、来自铜绿假单胞菌的外毒素A、外膜复合物c(OMPC)、孔蛋白、运铁蛋白结合蛋白、肺炎球菌溶血素、肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎链球菌表面粘附素A(PsaA)、肺炎链球菌PhtD、肺炎链球菌表面蛋白BVH-3和BVH-11、炭疽杆菌的保护性抗原(PA)和炭疽杆菌的解毒水肿因子(EF)和致死因子(LF)、卵白蛋白、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、结核菌素的纯化蛋白衍生物(PPD)、合成肽、热休克蛋白、百日咳蛋白、细胞因子、淋巴因子、激素、生长因子、包括来自各种病原体衍生化的抗原(比如N19)的多个人CD4+T细胞表位的人工蛋白、铁摄取蛋白、来自艰难梭菌的毒素A或B和无乳链球菌蛋白和其片段、衍生物、修饰。
107.根据权利要求106所述的制备伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物的方法，其中所述载体蛋白为破伤风类毒素(TT)。
108.根据权利要求106所述的制备伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物的方法，其中所述载体蛋白为白喉类毒素(DT)。
109.根据权利要求106所述的制备伤寒沙门氏菌糖-载体蛋白缀合物的方法，其中所述载体蛋白为CRM197。
110.制备副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物的方法，包括：
a.通过LPS的酸水解，优选pH为2.0至3.0的乙酸(终浓度0.5％至5％)，用氨水、脱氧胆酸钠(终浓度0.5％至5％)中和至pH 7.0，以及浓缩和在不同步骤使用10kDa至30kDa截留膜的透析纯化副伤寒沙门氏菌A脂多糖(LPS)的O-特异性多糖(OSP)，其中所述方法使得显著减少内毒素(每μg PS<100EU的内毒素)、蛋白质(<1％)和核酸(<2％)杂质，适当地40％至65％范围内的较高荚膜多糖回收率，具有期望的O-乙酰基水平(>2.0mmol/g多糖)，分子尺寸分布(在实现0.25的分配系数(KD)之前>50％的PS被洗脱)，并且纯化的O-特异性多糖(OSP)的平均分子量可在40kDa至400kDa的范围内；
b)使用碳二亚胺、还原胺化或氰化缀合反应，将纯化的OSP与载体蛋白(CP)缀合；
c)使用凝胶过滤色谱或超滤来纯化OSP-载体蛋白缀合物，由此将缀合物原液浓缩至少3倍，并且基本上除去所有未反应的化合物、未缀合的多糖、未缀合的蛋白质，产生纯化的OSP-载体蛋白缀合疫苗，其中缀合物产率≥50％。
111.根据权利要求110所述的制备副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物的方法，其中在缀合之前通过选自FeCl3、H2O2、偏高碘酸钠和乙酸钠的组中的化学方式或选自高压细胞破碎、超声法和均质器的组中的机械方式对OSP进行解聚/改变尺寸。
112.根据权利要求110所述的制备副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物的方法，其中使用氰化缀合化学反应使纯化的OSP共价键合至载体蛋白(CP)，其中氰基化试剂选自下述的组中：1-氰基-4-吡咯烷吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)(CPIP)、1-氰基-咪唑(1-CI)、1-氰基苯并三唑(1-CBT)、1-氰基-4-(二甲基氨基)-吡啶鎓四氟硼酸盐(CDAP)、对硝基苯基氰酸酯和N-氰基三乙基四氟硼酸铵(CTEA)或2-氰基哒嗪-3(2H)酮(2-CPO)。
113.根据权利要求112所述的制备副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物的方法，其中使用氰化缀合化学反应，使纯化的OSP共价键合至载体蛋白(CP)，其中氰基化试剂为1-氰基-4-吡咯烷吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)，OSP:CPPT以1:0.5至1:2的重量比混合，并且OSP和载体蛋白的比例可为0.5至1.5，反应在范围为5至7的pH、范围为2℃至30℃的温度下进行。
114.根据权利要求112和113所述的制备副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物的方法，其中在缀合之前，使用碳二亚胺、还原胺化或氰化反应，用选自由肼、碳酰肼、盐酸肼、二酰肼、ε-氨基己酸、氯己醇二甲基缩醛、D-葡萄糖醛酸内酯、胱胺和对硝基苯乙胺、己二胺、乙二胺、1,6-二氨基氧基己烷或β-丙酰胺、硝基苯乙胺、卤代烷基卤化物、6-氨基己酸组成的组中的异型或同型双功能接头衍生化所述多糖或载体蛋白。
115.根据权利要求114所述的制备副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物的方法，其中在缀合之前，在存在碳二亚胺比如1-乙基-3(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDAC)的情况下，用己二酸二酰肼(ADH)接头衍生化载体蛋白(CP)，OSP:ADH以1:1至1:10的重量比混合，并且OSP:EDAC的比例可为0.5至1.5，反应在范围为5至7的pH下进行、反应持续时间为1小时至2小时，温度范围为2℃至30℃。
116.根据权利要求110所述的制备副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物的方法，其中在存在1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDAC)的情况下，使用碳二亚胺缀合反应使纯化的OSP共价键合至载体蛋白(CP)，OSP:EDAC以1:0.5至1:2的重量比混合，并且OSP多糖与载体蛋白的比例可为0.5至1.5，反应在范围为5至7的pH，范围为2℃至30℃的温度下进行。
117.根据权利要求116所述的制备副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物的方法，其中在缀合之前，使用碳二亚胺、还原胺化或氰化反应，用选自由肼、碳酰肼、盐酸肼、二酰肼、ε-氨基己酸、氯己醇二甲基缩醛、D-葡萄糖醛酸内酯、胱胺和对硝基苯乙胺、己二胺、乙二胺、1,6-二氨基氧基己烷或β-丙酰胺、硝基苯乙胺、卤代烷基卤化物、6-氨基己酸组成的组中的异型或同型双功能接头衍生化所述多糖或载体蛋白。
118.根据权利要求117所述的制备副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物的方法，其中在缀合之前，使用氰化缀合化学反应使OSP与己二酸二酰肼(ADH)接头衍生化，氰基化试剂选自下述的组中：1-氰基-4-吡咯烷吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)(CPIP)、1-氰基-咪唑(1-CI)、1-氰基苯并三唑(1-CBT)、1-氰基-4-(二甲基氨基)-吡啶鎓四氟硼酸盐(CDAP)、对硝基苯基氰酸酯和N-氰基三乙基四氟硼酸铵(CTEA)或2-氰基哒嗪-3(2H)酮(2-CPO)。
119.根据权利要求118所述的制备副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物的方法，其中在缀合之前，使用氰化缀合化学反应使OSP与己二酸二酰肼(ADH)接头衍生化，其中氰基化试剂为1-氰基-4-吡咯烷吡啶鎓四氟硼酸盐(CPPT)(CPIP)，OSP:ADH以1:1至1:10的重量比混合，OSP:CPPT的重量比可为0.5至1.5，反应在范围为7-10的pH下进行，反应持续时间为1小时至2小时，温度范围为2℃至30℃。
120.根据权利要求110至119所述的制备副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物的方法，其中所述载体蛋白选自包括下述的组中：带有或不带有接头的破伤风毒素、破伤风类毒素、破伤风类毒素的片段、白喉类毒素、CRM197、铜绿假单胞菌类毒素、百日咳博德特氏菌类毒素、产气荚膜梭菌类毒素、大肠埃希杆菌LT、大肠埃希杆菌ST、大肠埃希杆菌不耐热毒素-B亚单位、脑膜炎奈氏球菌外膜复合物、rEPA、流感嗜血杆菌的蛋白D、鞭毛蛋白FliC、马蹄蟹血蓝蛋白、来自铜绿假单胞菌的外毒素A、外膜复合物c(OMPC)、孔蛋白、运铁蛋白结合蛋白、肺炎球菌溶血素、肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎链球菌表面粘附素A(PsaA)、肺炎链球菌PhtD、肺炎链球菌表面蛋白BVH-3和BVH-11、炭疽杆菌的保护性抗原(PA)和炭疽杆菌的解毒水肿因子(EF)和致死因子(LF)、卵白蛋白、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、结核菌素的纯化蛋白衍生物(PPD)、合成肽、热休克蛋白、百日咳蛋白、细胞因子、淋巴因子、激素、生长因子、包括来自各种病原体衍生化的抗原(比如N19)的多个人CD4+T细胞表位的人工蛋白、铁摄取蛋白、来自艰难梭菌的毒素A或B和无乳链球菌蛋白和其片段、衍生物、修饰。
121.根据权利要求120所述的制备副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物的方法，其中所述载体蛋白为破伤风类毒素(TT)。
122.根据权利要求120所述的制备副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物的方法，其中所述载体蛋白为白喉类毒素(DT)。
123.根据权利要求120所述的制备副伤寒沙门氏菌A糖-载体蛋白缀合物的方法，其中所述载体蛋白为CRM197。
124.根据前述权利要求中任一项所述的免疫原性组合物，其中免疫原性组合物配制为用于预防伤寒、副伤寒和非伤寒感染，减少由伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌和沙门氏菌非伤寒相关菌种引起的感染的发作或预防由伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌和沙门氏菌非伤寒相关菌种引起的感染的方法，所述方法涉及通过肠胃外或皮下或皮内或肌内或腹膜内或静脉内施用或注射施用或从植入物持续释放，或通过滴眼剂施用或鼻腔或直肠或口腔或阴道、经口或胃内或粘膜或唇周、肺泡或牙龈或嗅觉或呼吸道粘膜施用或任何其他免疫途径，向2岁以下的人类受试者、青少年、成人或老年人施用有效量的免疫原性组合物。
125.根据前述权利要求中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物在2℃至8℃、25℃和40℃下稳定超过六个月的时间。
126.根据前述权利要求中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物在2℃至8℃、25℃和40℃下是稳定的，并且6个月后对于180kDa至220kDa多糖，游离多糖不大于7.5％，并且对于388kDa、80kDa和45kDa多糖，游离多糖不大于10.5％。
127.根据前述权利要求中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物配制为用于根据由单剂量的所述疫苗组合物组成的单剂量方案施用至2岁以下的人类受试者、青少年、成人或老年人。
128.根据前述权利要求中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物配制为用于根据由第一剂和在第一剂之后3个月至2年之间施用的第二剂组成的双剂方案施用至2岁以下的人类受试者、青少年、成人或老年人。
129.根据前述权利要求中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物配制为用于根据由第一剂、在第一剂之后3个月至2年之间施用的第二剂和在第二剂之后3个月至2年之间施用的第三剂组成的三剂方案施用至2岁以下的人类受试者、青少年、成人或老年人。
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