CN114717356B - 一种水稻富硒性状紧密连锁分子标记及应用 - Google Patents

一种水稻富硒性状紧密连锁分子标记及应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及水稻分子生物学及遗传育种技术领域，具体涉及一种水稻富硒性状紧密连锁分子标记及应用。所述分子标记位于水稻第6号染色体，通过引物对1和引物对2扩增得到，获得的目标扩增产物为137～139bp的片段、127～129bp的片段、119～121bp的片段和131～133bp的片段中的任意两个。通过本发明提供的分子标记对水稻富硒性状主要关联区域具有很好的鉴别效果，鉴别方法简单，在常规的分子生物学实验室即可实现。且本发明提供的分子标记可以筛选富硒水稻种质资源或选育富硒水稻新品种，快速筛选出具有富硒基因的水稻品种。

Description

一种水稻富硒性状紧密连锁分子标记及应用
技术领域
本发明涉及水稻分子生物学及遗传育种技术领域，具体涉及一种水稻富硒性状紧密连锁分子标记及应用。
背景技术
硒(Se)作为生态环境中重要的一种微量元素，具有抗衰老、抗癌和解毒等多种作用，被世界卫生组织和中华医学会定为二十一世纪继碘、锌后必补的第三大微量营养保健元素。市场上富含硒的产品大多价格很高，超出了消费者的购买力，若通过经常食用的一种谷类作物，如水稻，能够补充硒的日常摄取量，且该谷类作物的培育与种植成本又相对低廉，就可以满足消费者对其产品的消费需求。
利用富硒种质资源，培育富硒水稻品种，是提高大米硒含量的理想途径，但传统杂交选育方法育种进度很慢，而且富硒性状需要专门仪器检测，育种过程中不便观测表型。
因此，如何对富硒种质资源的富硒性状相关基因进行定位，开发紧密连锁的分子标记，成为当下需要研究的课题。
发明内容
为了解决上述问题，本发明定位获得了一个与水稻富硒性状关联的主效数量性状基因座(QTL)，开发了与QTL紧密连锁的分子标记，应用该分子标记可以通过分子标记辅助选择(MAS)将该QTL快速转移到优质栽培品种中，提高水稻的硒富集能力，增加稻米中的硒含量，有利于富硒水稻育种技术的应用推广。
本发明提供了一种水稻富硒性状紧密连锁分子标记，所述分子标记位于水稻第6号染色体，通过引物对1和引物对2扩增得到，获得的目标扩增产物为137～139bp的片段、127～129bp的片段、119～121bp的片段和131～133bp的片段中的任意两个，其中，引物对1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；引物对2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物的核苷酸序列如SEQID NO.4所示。
所述水稻富硒性状紧密连锁分子标记通过如下方法得到：
利用富硒品种水稻品种‘乌严粳’，与低硒水稻品种‘金泰软占’，杂交获得F1代，‘乌严粳’由中国水稻研究所提供，‘金泰软占’由江西省农科院水稻所提供，自交构建F2群体，收获各单株稻谷，检测糙米硒含量，将硒含量最高的30个单株的叶片提取完整核DNA混合组成极端富硒基因池，硒含量最低的30个单株的叶片提取完整核DNA混合组成极端低硒基因池，将两个极端池、乌严粳完整核DNA、金泰软占完整核DNA，采用重测序-BSA法进行基因定位，通过检测4个样品池的SNP、InDel突变频率，统计分析进行定位，结果获得第6号染色体20800000～23350000bp区间为富硒性状主要关联区域。
对‘乌严粳’和‘金泰软占’基因组进行重测序，获得两亲本的插入或缺失突变位点，在突变位点两端设计引物，PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳验证扩增产物的差异，获得位于‘乌严粳’第6号染色体第20872553位的插入或缺失突变位点扩增产物具有良好的差异性，‘乌严粳’中的扩增产物为137～139bp，‘金泰软占’中的扩增产物为119～121bp；获得位于‘乌严粳’的第6号染色体第23347993位的插入或缺失突变位点扩增产物具有良好的差异性，‘乌严粳’中的扩增产物为127～129bp，‘金泰软占’中的扩增产物为131～133bp。
另一方面，本发明提供了一种水稻富硒性状紧密连锁分子标记的检测引物，所述检测引物包括引物对1和引物对2，其中，引物对1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；引物对2的正向引物的核苷酸序列如SEQID NO.3所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
另一方面，本发明提供了一种水稻富硒性状紧密连锁分子标记在富硒水稻种质资源筛选或分子标记辅助选育富硒水稻新品种中的应用。
另一方面，本发明提供了上述检测引物在富硒水稻种质资源筛选或分子标记辅助选育富硒水稻新品种中的应用。
另一方面，一种富硒水稻种质资源筛选或分子标记辅助选育富硒水稻新品种试剂盒，包括所述的水稻富硒性状紧密连锁分子标记的检测引物。
可选的，还包括：引物对1和引物对2各自对应的PCR扩增体系，以10μL为计，均为如下：
10×PCR buffer，1μL；
dNTP，每种碱基的浓度为2mM，1μL；
Mgcl2，浓度为25mM，0.8μL；
Taq酶，0.5U；
正向引物，浓度为10μM，0.2μL；
反向引物，浓度为10μM，0.2μL；
DNA模板，1μL；
加双蒸水至10μL。
另一方面，本发明提供了一种富硒水稻种质资源筛选方法，具体包括：
步骤1：提取待测水稻DNA；
步骤2：以待测水稻DNA为模板，分别使用所述引物对1和引物对2进行PCR扩增反应，得到扩增产物；
步骤3：检测扩增产物，根据扩增产物的长度，判断是否为具有富硒性状的水稻品种，若两引物对扩增得到的扩增产物长度分别为137～139bp和127～129bp，则为具有富硒性状的水稻品种，若两引物对扩增得到的扩增产物长度分别为119～121bp和131～133bp，则为具有低硒性状的水稻品种。
可选的，步骤2中，所述PCR扩增的条件为94℃预变性5min；94℃变性60s，53℃退火60s，72℃延伸60s，35个循环；最后72℃延伸7min，4℃保存。
可选的，步骤2中，引物对1和引物对2各自PCR扩增采用的反应体系为10μL，均包括：10×PCR buffer 1μL，每种碱基浓度为2mM的dNTP为1μL，25mM的Mgcl2为0.8μL，Taq酶0.5U，10μM的正向引物0.2μL，10μM的反向引物0.2μL，DNA模板1μL，加双蒸水至10μL。
另一方面，本发明提供了一种选育富硒水稻新品种的方法，具体包括：
步骤1：选取供体亲本和受体亲本；所述供体亲本为利用所述的筛选方法鉴别为具有富硒性状的水稻品种，所述受体亲本为利用所述的筛选方法鉴别为具有低硒性状的水稻品种；
步骤2：将供体亲本与受体亲本进行杂交得到杂交一代，为F1代，F1代混合收种，自交繁殖至杂交二代，为F2代；
步骤3：种植F2代，提取F2代单株DNA，用所述引物对1和引物对2进行PCR扩增检测，检测扩增产物长度，获得具有富硒性状的纯合单株、具有低硒性状的纯合单株和杂合单株；
所述具有富硒性状的纯合单株为：扩增产物长度包含137～139bp和127～129bp；
所述具有低硒性状的纯合单株为：扩增产物长度包含119～121bp和131～133bp；
所述杂合单株为：扩增产物长度包含137～139bp和119～121bp，或者扩增产物长度包含127～129bp和131～133bp，或者扩增产物长度包含137～139bp和131～133bp，或者扩增产物长度包含119～121bp和127～129bp；
步骤4：选择具有富硒性状的纯合单株收获种子，种植F3代，重复步骤3的步骤，筛选具有富硒性状的纯合单株，重复该过程直至F6～7代，得到具有富硒性状一致的单株，获得了富硒水稻新品种。
可选的，所述引物对1和引物对2各自对应的PCR扩增体系，以10μL为计，均为如下：
10×PCR buffer，1μL；
dNTP，每种碱基的浓度为2mM，1μL；
Mgcl2，浓度为25mM，0.8μL；
Taq酶，0.5U；
正向引物，浓度为10μM，0.2μL；
反向引物，浓度为10μM，0.2μL；
DNA模板，1μL；
加双蒸水至10μL。
可选的，步骤3中，所述PCR扩增的条件为94℃预变性5min；94℃变性60s，53℃退火60s，72℃延伸60s，35个循环；最后72℃延伸7min，4℃保存。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的水稻富硒性状紧密连锁分子标记对水稻富硒性状主要关联区域具有很好的鉴别效果，鉴别方法简单，在常规的分子生物学实验室即可实现。
2.本发明提供的水稻富硒性状紧密连锁分子标记可以对富硒水稻种质资源进行鉴定，快速筛选出具有富硒基因的水稻品种。
3.本发明提供的分子标记可以应用于MAS选育富硒水稻品种，加快育种进程，具有在富硒水稻种质资源筛选或分子标记辅助选育富硒水稻新品种中的应用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1：实施例1中各水稻品种植株采用引物对1进行PCR扩增的凝胶电泳图，其中编号M为marker，M左侧的100～500bp表示条带对应的碱基数量，编号P1～P7为各品种植株带型，P1：‘乌严粳’，P2：‘金泰软占’、P3：‘粤香430’、P4：‘黑帅’、P5：‘IR68144’、P6：‘广油占’、P7：‘早糯’；
图2：实施例1中各水稻品种植株采用引物对2进行PCR扩增的凝胶电泳图，其中编号M为marker，M左侧的100～500bp表示条带对应的碱基数量，编号P1～P7为各品种植株带型，P1：‘乌严粳’，P2：‘金泰软占’、P3：‘粤香430’、P4：‘黑帅’、P5：‘IR68144’、P6：‘广油占’、P7：‘早糯’；
图3：实施例2中F2代单株采用引物对1进行PCR扩增的凝胶电泳图，其中编号M为marker，M左侧的100～500bp表示条带对应的碱基数量，编号1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#为F2单株带型，P1为亲本‘乌严粳’带型，P2为亲本‘金泰软占’带型；
图4：实施例2中F2代单株采用引物对2进行PCR扩增的凝胶电泳图，其中编号M为marker，M左侧的100～500bp表示条带对应的碱基数量，编号1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#为F2单株带型，P1为亲本‘乌严粳’带型，P2为亲本‘金泰软占’带型。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实施例1
本实施例提供了一种富硒水稻种质资源的筛选试剂盒，包括：
引物对1和引物对2各自对应的PCR扩增体系，均为如下：
10×PCR buffer，1μL；
dNTP，每种碱基浓度为2mM，1μL；
Mgcl2，浓度为25mM，0.8μL；
Taq酶，0.5U；
正向引物，浓度为10μM，0.2μL；
反向引物，浓度为10μM，0.2μL；
DNA模板，1μL；
加双蒸水至10μL。
引物对1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，具体为5’-3’：aaaaaggccaaaatgtactc，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，具体为5’-3’：gtgaacgggatgtattctaa；
引物对2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，具体为5’-3’：cccactccttcgatctctcc，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，具体为5’-3’：aaatgggctggaactttaggc。
本实施例还提供了一种富硒水稻种质资源的筛选方法，包括以下步骤：
选择水稻品种‘乌严粳’、‘金泰软占’、‘粤香430’、‘黑帅’、‘IR68144’、‘广油占’、‘早糯’，在田间按常规方法种植，苗期采集各水稻品种植株的幼嫩叶片，分别提取‘乌严粳’、‘金泰软占’、‘粤香430’、‘黑帅’、‘IR68144’、‘广油占’、‘早糯’的新鲜叶片完整核DNA；
以新鲜叶片完整核DNA为模板，使用引物对1，其中，正向引物的核苷酸序列为5’-3’：aaaaaggccaaaatgtactc，所述反向引物的核苷酸序列为5’-3’：gtgaacgggatgtattctaa，进行PCR扩增，配制的PCR体系如表1所示；
以新鲜叶片完整核DNA为模板，使用引物对2，其中，正向引物的核苷酸序列为5’-3’：cccactccttcgatctctcc，所述反向引物的核苷酸序列为5’-3’：aaatgggctggaactttaggc，进行PCR扩增，配制的PCR体系如表1所示；
表1、PCR体系
PCR扩增的程序为：94℃预变性5min；94℃变性60s，53℃退火60s，72℃延伸60s，35个循环；最后72℃延伸7min，4℃保存。扩增产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离，结果如图1～2所示，将‘粤香430’、‘黑帅’、‘IR68144’、‘广油占’、‘早糯’电泳结果分别与‘乌严粳’(从图1中可以看到采用引物对1扩增得到的产物为137～139bp，从图2中可以看到采用引物对2扩增得到产物为127～129bp)、‘金泰软占’(从图1中可以看到采用引物对1扩增得到的产物为119～121bp，从图2中可以看到采用引物对2扩增得到的产物为131～133bp)比对，两种引物对的扩增产物都与‘乌严粳’电泳结果一致的标记为富硒品种，两种引物对的扩增产物都与‘金泰软占’电泳结果一致的标记为低硒品种，经比对，P4、P7为富硒品种，P3、P5、P6为低硒品种。
实施例2
一种选育富硒水稻新品种的方法，包括以下步骤：
S1.选择使用引物对1得到的扩增条带为137～139bp，且使用引物对2得到的扩增条带为127～129bp的水稻品种‘乌严粳’(由中国水稻研究所国家水稻种质库提供)为富硒亲本，选择引物对1扩增条带为119～121bp，且引物对2扩增条带为131～133bp的水稻品种‘金泰软占’(江西省农科院水稻所提供)为低硒亲本；
S2.将步骤S1选取的富硒亲本‘乌严粳’与低硒亲本‘金泰软占’杂交，得到杂交一代，为F1代，F1代混合收种，自交繁殖得到杂交二代，为F2代；
S3.种植F2代并于分蘖盛期获取两个亲本和每个杂交后代单株的幼叶，提取新鲜叶片完整核DNA，分别用引物对1和引物对2进行PCR扩增，
引物对1：
正向引物的核苷酸序列(如SEQ ID NO.1所示)为5’-3’：aaaaaggccaaaatgtactc，
反向引物的核苷酸序列(如SEQ ID NO.2所示)为5’-3’：gtgaacgggatgtattctaa；
引物对2：
正向引物的核苷酸序列(如SEQ ID NO.3所示)为5’-3’：cccactccttcgatctctcc，
反向引物的核苷酸序列(如SEQ ID NO.4所示)为5’-3’：aaatgggctggaactttaggc。
PCR扩增体系及扩增的程序与实施例1相同。
扩增产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离，将各单株的引物电泳结果分别与富硒亲本‘乌严粳’和低硒亲本‘金泰软占’比对，将电泳结果都与‘乌严粳’电泳结果一致的单株标记为备选单株，经比对为5#样品。
部分单株的PCR扩增聚丙烯酰胺凝胶电泳效果见图3、图4。
S4.待备选单株成熟后，收获备选各单株和亲本水稻，重复S3的步骤，选择扩增产物长度包含137～139bp和127～129bp两种条带的单株，筛选农艺性状优良的单株进行下一代繁殖，重复上述过程直至获得性状稳定一致的水稻品系，筛选育成扩增产物长度包含137～139bp和127～129bp两种条带的水稻品系，暂命名为‘赣稻1号’。
对比例
使用富硒水稻品种‘乌严粳’和农艺性状优良的低硒品种水稻品种‘粤香430’，杂交获得F1代，杂交一代F1混合收种，繁殖至杂交二代F2，F2收获农艺性状较好的单株，繁殖F3代，重复该过程，获得性状稳定一致的水稻品系，暂命名为‘赣稻2号’。
实验例
将‘赣稻1号’、‘赣稻2号’、‘乌严粳’、‘金泰软占’、‘粤香430’、‘黑帅’、‘IR68144’、‘广油占’、‘早糯’种植于江西省高安市相城镇同一田块，按相同的常规方法进行田间管理，成熟后收获稻谷，碾制出大米，采用GB 5009.93-2017《食品安全国家标准食品中硒的测定》的方法检测大米硒含量，所得数据为随机采样5次的平均值，试验结果如表2所示：
表2硒含量检测结果表
试验结果表明：
利用本发明的分子标记的辅助筛选，选择出了富硒品种‘黑帅’、‘早糯’，其稻米硒含量与乌严粳接近，而远远高于金泰软占，说明分子标记辅助筛选的结果与直接检测大米硒含量的结果一致，具有结果准确，简单易操作的特点，不需要等到水稻结实就能鉴定出结果，大大缩短鉴定的时间，并节省田间试验的费用。
利用大米富硒水稻品种和低硒水稻品种，通过有性杂交和分子标记的辅助选择，培育出籽粒硒富集能力强且农艺性状良的水稻品种‘赣稻1号’，稻米硒含量为0.071mg/kg，远远高于低硒亲本‘金泰软占’，与富硒亲本‘乌严粳’接近，与对比例相比较而言，在没有分子标记辅助下，得到的品系‘赣稻2号’的稻米硒含量仅为0.032mg/kg，使用本发明的选育富硒水稻新品种的方法得到的‘赣稻1号’的硒含量明显较对比例高，同时硒含量达到国家标准GB/T 22499-2008。该方法生产的富硒稻米安全可靠、生态环保、经济高效、成本低廉，适合大规模地推广应用。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护。
序列表
<110> 江西省农业科学院农产品加工研究所
<120> 一种水稻富硒性状紧密连锁分子标记及应用
<130> NHA202100536
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
aaaaaggcca aaatgtactc 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gtgaacggga tgtattctaa 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
cccactcctt cgatctctcc 20
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
aaatgggctg gaactttagg c 21

Claims (11)

1.一种水稻富硒性状紧密连锁分子标记的检测引物，其特征在于，所述检测引物包括引物对1和引物对2，其中，引物对1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；引物对2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.一种如权利要求1所述的水稻富硒性状紧密连锁分子标记的检测引物在富硒水稻种质资源筛选的应用；所述富硒水稻种质资源选自乌严粳、黑帅、早糯或其杂交后代。
3.一种如权利要求1所述的水稻富硒性状紧密连锁分子标记的检测引物在分子标记辅助选育富硒水稻新品种中的应用；所述富硒水稻新品种选自乌严粳、黑帅和/或早糯的杂交后代。
4.一种富硒水稻种质资源筛选或分子标记辅助选育富硒水稻新品种试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的水稻富硒性状紧密连锁分子标记的检测引物。
5.根据权利要求4所述的富硒水稻种质资源筛选或分子标记辅助选育富硒水稻新品种试剂盒，其特征在于，还包括：引物对1和引物对2各自对应的PCR扩增体系，以10μL为计，均为：
10×PCR buffer，1 µL；
dNTP，每种碱基的浓度为2mM，1 µL；
MgCl2，浓度为25mM，0.8 µL；
Taq酶，0.5 U；
正向引物，浓度为10µM，0.2 µL；
反向引物，浓度为10µM，0.2 µL；
DNA模板，1 µL；
加双蒸水至10 µL。
6.一种富硒水稻种质资源筛选方法，其特征在于，包括：
步骤1：提取待测水稻DNA；所述水稻选自乌严粳、黑帅、早糯或其杂交后代；
步骤2：以待测水稻DNA为模板，分别使用权利要求1中的引物对1和引物对2进行PCR扩增反应，得到扩增产物；
步骤3：检测扩增产物，根据扩增产物的长度，判断是否为具有富硒性状的水稻品种，若引物对1扩增得到的扩增产物长度为137~139bp和引物对2扩增得到的扩增产物长度为127~129bp，则为具有富硒性状的水稻品种，若引物对1扩增得到的扩增产物长度为119~121bp和引物对2扩增得到的扩增产物长度为131~133bp，则为具有低硒性状的水稻品种。
7.如权利要求6富硒水稻种质资源筛选方法，其特征在于，步骤2中，所述PCR扩增反应的条件为： 94 ℃预变性5 min； 94 ℃变性60 s，53 ℃退火60 s，72 ℃延伸60 s，35 个循环；最后72 ℃延伸7 min，4 ℃保存。
8.如权利要求6~7任一项所述的富硒水稻种质资源筛选方法，其特征在于，步骤2中，引物对1和引物对2各自PCR扩增采用的反应体系为10μL，均包括：10×PCR buffer为1 µL，每种碱基浓度为2mM的dNTP为1 µL，25mM的MgCl2为0.8 µL，Taq酶为0.5 U，10µM的正向引物0.2 µL，10µM的反向引物 0.2 µL，DNA模板为1 µL，加双蒸水至10 µL。
9.一种选育富硒水稻新品种的方法，其特征在于，包括：
步骤1：选取供体亲本和受体亲本；所述供体亲本为利用权利要求6-8任一项所述的富硒水稻种质资源筛选方法鉴别为具有富硒性状的水稻品种，所述受体亲本为利用权利要求6-8任一项所述的富硒水稻种质资源筛选方法鉴别为具有低硒性状的水稻品种；
步骤2：将供体亲本与受体亲本进行杂交得到杂交一代，为F1代，F1代混合收种，自交繁殖至杂交二代，为F2代；
步骤3：种植F2代，提取F2代单株DNA，用权利要求1中的引物对1和引物对2进行PCR扩增，检测扩增产物长度，获得具有富硒性状的纯合单株、具有低硒性状的纯合单株和杂合单株；
所述具有富硒性状的纯合单株为：扩增产物长度包含137~139bp和127~129bp；
所述具有低硒性状的纯合单株为：扩增产物长度包含119~121bp和131~133bp；
所述杂合单株为：扩增产物长度包含137~139bp和119~121bp，或者扩增产物长度包含127~129bp和131~133bp，或者扩增产物长度包含137~139bp和131~133bp，或者扩增产物长度包含119~121bp和127~129bp；
步骤4：选择具有富硒性状的纯合单株收获种子，种植F3代，重复步骤3的步骤，筛选具有富硒性状的纯合单株，重复上述过程直至F6～7代，得到具有富硒性状一致的单株，获得了富硒水稻新品种。
10.根据权利要求9所述的选育富硒水稻新品种的方法，其特征在于，所述引物对1和引物对2各自对应的PCR扩增体系，以10μL为计，均为：
10×PCR buffer，1 µL；
dNTP，每种碱基的浓度为2mM，1 µL；
MgCl2，浓度为25mM，0.8 µL；
Taq酶，0.5 U；
正向引物，浓度为10µM，0.2 µL；
反向引物，浓度为10µM，0.2 µL；
DNA模板，1 µL；
加双蒸水至10 µL。
11.根据权利要求9所述的选育富硒水稻新品种的方法，其特征在于，步骤3中，所述PCR扩增反应的条件为： 94 ℃预变性5 min； 94 ℃变性60 s，53 ℃退火60 s，72 ℃延伸60s，35 个循环；最后72 ℃延伸7 min，4 ℃保存。
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