CN114717144B - 一株无色杆菌及其应用、包含该无色杆菌的土壤改良菌剂 - Google Patents
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Abstract
本发明属于土壤修复菌剂技术领域，具体为一株无色杆菌及其应用、包含该无色杆菌的土壤改良菌剂。该株无色杆菌(Achromobacter sp.)WX1501，保藏日期为2017年6月28日，保藏编号为CCTCC No:M2017392。包含该无色杆菌的土壤改良菌剂按重量份包括：枯草芽孢杆菌2‑3份、地衣芽孢杆菌1‑2份、多粘类芽孢杆菌0.5‑1份、解淀粉芽孢杆菌0.5‑1份、无色杆菌0.5‑1份。本发明提供的无色杆菌(Achromobacter sp.)WX1501对土壤中的异菌脲具有较好的降解效果，该无色杆菌与其他常用的土壤改良微生物菌株协同使用，拓展了现有土壤改良菌剂的性能。
Description
技术领域
本发明属于土壤修复菌剂技术领域，具体为一株无色杆菌及其应用、包含该无色杆菌的土壤改良菌剂。
背景技术
植物病害离不开农药的使用，农药一旦进入土壤，残留是不可避免的。残留的农药容易通过植物进入人体，对人体造成危害。虽然土壤对农残有一定的自我降解能力，但自然降解所需的时间较长，需要一个较长的休耕期。随着科技的进步，各种低毒杀菌剂被开发后用于植物病害的防治，异菌脲就是其中一种。异菌脲是一种高效广谱、触杀型杀菌剂，被广泛用于灰霉病的防治，种植草莓、番茄的土壤中常常出现异菌脲超标，产生的草莓、番茄中也常常被检出异菌脲。
无色杆菌属菌是Achromobacter属的微生物，原产地为中国。近年来，无色杆菌在农用生产中的应用渐渐变得热门。如中国专利文献CN 110699279A公开了一种无色杆菌及其在改善花生铁营养中的应用，其分离得到的菌株具有较强的产铁载体能力，可将土壤中难溶性的铁转化为有效铁，从而增加土壤养分，促进植物对土壤铁的吸收。中国专利文献CN112694999 A还公开了一株木糖氧化无色杆菌、包括木糖氧化无色杆菌的菌剂，其分离得到的菌株能够在72h内将500mg/kg的敌草隆降解90％以上，敌草隆为一种低毒的取代脲类除草剂。
本申请的发明人于2017年在南海海底沉积物中分离纯化得到一株无色杆菌，对其做了保藏。在对一块被机油污染的耕地土壤进行改良时，发明人使用了该无色杆菌，发现这株无色杆菌其对异菌脲也有较好的降解作用。
发明内容
本发明的目的是提供一株无色杆菌及其应用，以期能降解土壤中所含的异菌脲。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
本发明提供了一株无色杆菌(Achromobacter sp .) WX1501，保藏日期为2017年6月28日，保藏编号为 CCTCC No:M2017392。
上述无色杆菌(Achromobacter sp .) WX1501在降解土壤中异菌脲的应用。申请人在后续的实验中发现，无色杆菌(Achromobacter sp .) WX1501对异菌脲有较好地降解作用。
本发明还提供了一种包含该无色杆菌的土壤改良菌剂。
在一个实施例中，所述土壤改良菌剂按重量份包括：枯草芽孢杆菌2-3份、地衣芽孢杆菌1-2份、多粘类芽孢杆菌0.5-1份、解淀粉芽孢杆菌0.5-1份、无色杆菌0.5-1份，无色杆菌为保藏编号为CCTCC No:M2017392的无色杆菌。
作为改进，所述枯草芽孢杆菌有效活菌含量≥80亿/g、地衣芽孢杆菌有效活菌含量≥40亿/g；多粘类芽孢杆菌有效活菌含量≥20亿/g、解淀粉芽孢杆菌有效活菌含量≥20亿/g、无色杆菌≥10亿/g。
本发明的有益效果：本发明提供的无色杆菌(Achromobacter sp .) WX1501对土壤中的异菌脲具有较好的降解效果，该无色杆菌与其他常用的土壤改良微生物菌株协同使用，拓展了现有土壤改良菌剂的性能。
生物保藏说明
无色杆菌(Achromobacter sp .) WX1501，于2017年6月28日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌区，保藏编号为CCTCC No:M2017392。
具体实施方式
实施例1 无色杆菌的筛选方法
1、实验仪器与试剂
箱式沉积物采泥器（德国HYDRO-BIOS-KIEL）、表面张力测定仪（山东淄博科森公司Auto-tensi⁃ometer ZL-2 型）、生物安全柜（上海力身科学仪器有限公司）、电子天平（梅特勒-托利多国际贸易(上海)有限公司）、磁力搅拌器（上海梅颖浦仪器仪表制造有限公司）、微生物试剂分液器（杭州大微生物技术有限公司）、纯水仪（Smart-RO上海力身科学仪器有限公司）、叠加式恒温振荡箱（摇床）（苏州捷美电子有限公司）、两槽式培养箱（重庆雅马拓科技有限公司）、PCR扩增仪（Heal Force）、立式灭菌器（山东新华医疗器械股份有限公司）等
富集培养基(g)：NaNO2 1.0，CH3COONa 4.8，K2HPO4·3H2O 1.2，Fe3PO4·4H2O0.01，蒸馏水定容至 1 L(固体培养基加2%的琼脂)，pH 7.0，121 °C高压灭菌 20 min。
筛选培养基(g):NaNO2 0.5，CH3COONa 3.4，K2HPO4·3H2O 1.0，Fe3PO4·4H2O 0.01，MgSO4·7H2O 0.01，NaCl 30，蒸馏水定容至1 L, pH 7.0，121 ℃高压灭菌 20 min。
2、样品的采集
使用箱式沉积物取样器，对沉积物表层以下5cm处的沉积物进行采集，用50mL的无菌离心管进行插管，随后用无菌橡胶塞进行封口保存，样品置于冰盒中带回实验室。
、菌株的富集
一次富集：取250g沉积物加到5L的富集瓶中，加入750mL富集培养基，并加入适量的纤维棉，在室温条件下连续曝气富集培养2个月，再此期间每隔5天分别添加50ml的灭菌海水和50ml的富集培养基。
二次富集：将第一次富集的含有细菌附着量较大的纤维棉样品按5%的比例接种到含有0.2%石油的富集培养基中，于30 °C，180 r/min摇床振荡培养48 h，重复操作3次，淘汰弱势菌群。
、无色杆菌的分离与纯化
取适量的富集液使用无菌水稀释至10-4、10-5、10-6，均匀涂布于加有0.5%石油的筛选固体培养基平板上，置于30℃培养48h后，选择不同形态特征的菌落，重新转接至添加0.5%原油的筛选培养基中，相同条件下培养以验证是否具有原油降解能力，培养液变混后，进一步纯化，并检测发酵液表面张力，直至得到有降解能力的纯培养菌株。
石油降解率的测定：
将活化至对数生长期的菌株悬液2 mL 接入 100 mL 含 0.5% 石油的筛选培养基中，以不接菌种的 100 mL 含 0.5% 石油的筛选培养基作为对照，于30 °C，180 r/min摇床振荡培养48 h，采用紫外分光光度法测定。
发酵液表面张力测定：
原油降解菌一般会代谢产生乳化剂一类的生物活性物质，以降低发酵液的表面张力，增强对原油的降解代谢能力。因此，检测发酵液的表面张力变化可以间接反映原油降解菌的代谢活性和原油的乳化、降解情况。本试验中发酵液表面张力测定采用表面张力测定仪。
、无色杆菌的纯化
将符合上述条件的菌液，在筛选培养基平板上进行划线分离，直至得到纯的单菌落。将分离纯化的细菌接种至斜面培养基中并于冰箱4℃保存。
、无色杆菌的鉴定
（1）形态学鉴定：菌落呈圆形、轻微隆起、湿润、淡黄色、半透明、边缘整齐、表面光滑。革兰氏染色结果呈阴性，光学显微镜下观察菌体为微杆状，菌丝呈直杆状，其生长形态特征及革兰氏染色结果均符合无色杆菌的基本特征。
（2）生化鉴定：菌株生化特性鉴定参考《伯杰细菌鉴定手册》。
（3）16S鉴定：将纯化后的菌株进行DNA的提取，使用通用引物27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492r (5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。以筛选得到的菌株总DNA为模板进行PCR扩增，扩增反应体系(50 μL)：10× buffer 5.0 μL，dNTP 4.0 μL，上下游引物各1.0 μL Taq酶0.5 μL，模板1.0 μL，ddH2O 37.5 μL。反应程序：95 °C预变性 5 min；94 °C变性 30 s，54 °C 退火30 s，72 °C延伸30 s，32个循环；72 °C终延伸10 min。PCR产物送擎科测序有限公司测序，测序结果在GenBank数据库中利用BLAST 进行在线同源性对比。将对比结果最为相似的序列与分离菌株的序列用MEGA 7软件构建菌株的16S rDNA系统进化树。
将上述经鉴定的无色杆菌编号为WX1501。
实施例2实验室效果验证
本实验在实验室进行，为比对无色杆菌WX1501对异菌脲的降解效果，在中国工业微生物菌种保藏管理中心购置用于比对的无色杆菌02101TSA，使用以下培养基活化：
NB培养基：蛋白胨10.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，蒸馏水1.0L，pH7.0。
NA培养基：蛋白胨10.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.0。
取少量冻干粉加入NB培养基，置于30℃， 180 r/min摇床振荡培养48 h；再划线至NA培养基，30 ℃培养48 h，待长出单个菌落；挑取单个菌落接种于NB培养基，置于30℃，180r/min摇床振荡培养48 h；再次划线至NA培养基，30℃培养48h，观察菌落形态。可见菌体呈杆状，菌落淡黄色，湿润，液滴状，圆形，凸起，半透明，边缘不整齐。经革兰氏染色镜检，为G-且不产芽孢。其生长形态特征及革兰氏染色结果均符合无色杆菌的基本特征。
将实验室分离到的无色杆菌与购买的无色杆菌标准菌使用NB培养基培养至菌液OD600=1.2±0.2。
在浙江省湖州市吴兴区湖州师范学院试验田大棚的土地上，取实验用土6份，每份100g。每份中拌入异菌脲0.2g，搅拌均匀后静置15天。加入无色杆菌，其中3份土样中加入无色杆菌(Achromobactersp .) WX1501菌液，另三份土样中加入市售的无色杆菌02101TSA菌液，加入量均为0.2g。置于室外，30天后检测土壤中的异菌脲含量。
| 土样编号 | 添加菌株 | 静置15天后土壤中异菌脲含量 | 添加无色杆菌30天后土壤中异菌脲含量 |
| 1 | WX1501 | 1.42 mg/g | 0.80 mg/g |
| 2 | WX1501 | 1.59 mg/g | 0.73 mg/g |
| 3 | WX1501 | 1.55mg/g | 0.75 mg/g |
| 4 | 市售无色杆菌 | 1.71 mg/g | 1.38 mg/g |
| 5 | 市售无色杆菌 | 1.83mg/g | 1.51 mg/g |
| 6 | 市售无色杆菌 | 1.76mg/g | 1.40mg/g |
异菌脲的检测方法
（1）仪器与试剂
仪器与耗材：气相色谱仪（Agilent 公司）、旋转蒸发仪、色谱柱（Agilent HP-5 毛细管色谱柱，规格：30 m×0.25 mm×0.45 μm）、Carbon/NH2复合柱（Agilent 公司）。
试剂：异菌脲标准品（纯度：1000 mg/L）购置于农业部环境质量监督检验测试中心（天津）；乙腈、丙酮、甲苯、正己烷（纯度：99.99%色谱纯）购置于赛默飞世尔科技公司；氯化钠等无机盐试剂（纯度：99.99%分析纯）购置于国药化工试剂有限公司。
（2）样品预处理
称取10 g 土样，加入15 mL 纯净水制备样品，加入 50 mL 乙腈和6 g NaCl 于180 r/min 条件下震荡30min，然后超声提取5 min，定量滤纸过滤后摇匀静置分层，5 mL乙腈+甲苯（3+1）预淋洗 Carbon/NH2复合柱后吸取 10 mL 上清液过 Carbon/NH2复合柱，5mL 乙腈+甲苯（3+1）润洗 SPE 小柱 3 次，滤液旋转蒸发后用正己烷+丙酮（9+1）定容至 5mL，上机待测。
（3）气相色谱条件
色谱柱为 HP-5 毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.45 μm）；载气为氦气（纯度为99.999%），流速为 3.0 mL/min；分流模式（分流比为 10:1）；进样量 1 μL；进样口温度为280 ℃；升温程序如下：初始柱温为 150 ℃，以 15 ℃/min 的速率升至 210 ℃，在以 10℃/min 的速率升至 260℃，最后以 20 ℃/min 的速率升至 300 ℃保持 6 min；检测器温度为 330 ℃；检测器为电子捕获检测器。异菌脲的保留时间为 8.3min。
实施例3 田间效果验证
将无色杆菌WX1501与其他菌种配伍得到土壤改良菌剂。土壤改良菌剂按重量份包括：2份枯草芽孢杆菌、1份地衣芽孢杆菌、0.5份多粘类芽孢杆菌、0.5份解淀粉芽孢杆菌、0.5份无色杆菌(Achromobacter sp .) WX1501。其中，枯草芽孢杆菌有效活菌含量≥80亿/g、地衣芽孢杆菌有效活菌含量≥40亿/g；多粘类芽孢杆菌有效活菌含量≥20亿/g、解淀粉芽孢杆菌有效活菌含量≥20亿/g、无色杆菌有效活菌含量≥10亿/g。
用该土壤改良菌剂对位于浙江省湖州市吴兴区的一块草莓种植地进行土壤改良，以解决草莓抗重茬问题。改良时间为2021年6月，改良前，测得土壤中残留异菌脲1.5mg/g。2021年7月，改良后的土地定植草莓苗，进行正常的田间管理。2021年12月底草莓上市时，同时对草莓地和草莓果实进行异菌脲检测，结果均为未检出。
Claims (5)
1.一株无色杆菌(Achromobacter sp .) WX1501，保藏日期为2017年6月28日，保藏编号为 CCTCC No:M2017392。
2.如权利要求1所述的无色杆菌(Achromobacter sp .) WX1501在降解土壤中异菌脲的应用。
3.包含无色杆菌的土壤改良菌剂，其特征在于：所述无色杆菌为权利要求1所述的一株无色杆菌(Achromobacter sp .) WX1501。
4.如权利要求3所述的包含无色杆菌的土壤改良菌剂，其特征在于：所述土壤改良菌剂按重量份包括：枯草芽孢杆菌2-3份、地衣芽孢杆菌1-2份、多粘类芽孢杆菌0.5-1份、解淀粉芽孢杆菌0.5-1份、无色杆菌0.5-1份，无色杆菌为保藏编号为CCTCC No:M2017392的无色杆菌。
5.如权利要求4所述的包含无色杆菌的土壤改良菌剂，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌有效活菌含量≥80亿/g、地衣芽孢杆菌有效活菌含量≥40亿/g、多粘类芽孢杆菌有效活菌含量≥20亿/g、解淀粉芽孢杆菌有效活菌含量≥20亿/g、无色杆菌有效活菌含量≥10亿/g。
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Citations (5)
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|---|---|---|---|---|
| RU2009105432A (ru) * | 2009-02-18 | 2010-08-27 | Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН (RU) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Achromobacter sp.-ДЕСТРУКТОР ОРГАНОФОСФОНАТОВ И СПОСОБ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ БИОРЕМЕДИАЦИИ ПОЧВ |
| CN106086152A (zh) * | 2016-08-10 | 2016-11-09 | 浙江省农业科学院 | 一种环脂肽表面活性剂的生物合成方法 |
| CN107114660A (zh) * | 2017-06-13 | 2017-09-01 | 吉林大学 | 利用电子加速器辐照降解草莓中异菌脲的方法 |
| CN107760621A (zh) * | 2017-10-18 | 2018-03-06 | 南京农业大学 | 异菌脲降解菌、降解酶IpaH与其编码基因ipaH及其应用 |
| CN109852604A (zh) * | 2019-03-28 | 2019-06-07 | 贵州大学 | 高效降解菌核净的单胞属菌固定化菌的制备方法及应用 |
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|---|---|---|---|---|
| RU2009105432A (ru) * | 2009-02-18 | 2010-08-27 | Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН (RU) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Achromobacter sp.-ДЕСТРУКТОР ОРГАНОФОСФОНАТОВ И СПОСОБ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ БИОРЕМЕДИАЦИИ ПОЧВ |
| CN106086152A (zh) * | 2016-08-10 | 2016-11-09 | 浙江省农业科学院 | 一种环脂肽表面活性剂的生物合成方法 |
| CN107114660A (zh) * | 2017-06-13 | 2017-09-01 | 吉林大学 | 利用电子加速器辐照降解草莓中异菌脲的方法 |
| CN107760621A (zh) * | 2017-10-18 | 2018-03-06 | 南京农业大学 | 异菌脲降解菌、降解酶IpaH与其编码基因ipaH及其应用 |
| CN109852604A (zh) * | 2019-03-28 | 2019-06-07 | 贵州大学 | 高效降解菌核净的单胞属菌固定化菌的制备方法及应用 |
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