CN114705782A - 用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物组合及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物组合及其应用，该代谢标志物选自N‑乙酰苯丙氨酸、1,7‑二甲基黄嘌呤、8,15‑二羟基二十碳四烯酸、N‑乙酰基‑5‑甲氧基色胺、2‑氨基‑4‑羟基蝶啶、5‑羟色胺、溶血磷脂酰胆碱(15:0)、甲基马来酸、N‑甲基‑α‑氨基异丁酸、胸腺嘧啶的一种或多种组合。本发明提供的10种代谢标志物能准确诊断结直肠癌，灵敏度高，特异性强，能够替代现有基于血液和粪便检测诊断结直肠癌的方法，减少创伤和漏诊率，降低检测费用，具备临床使用推广价值。
Description
技术领域
本发明涉及检测技术领域，具体涉及一种用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物组合及应用。
背景技术
结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)又称大肠癌，是消化系统常见的恶性肿瘤。据世界卫生组织国际癌症研究中心资料显示，2020年全世界约有193万结直肠癌新发病例，居恶性肿瘤第3位。中国结直肠癌新发病例约56万，死亡病例约28万，分别排在所有癌症的第2位和第5位。
据估计，结直肠癌的5年生存率可达到65％以上，早期诊断并治疗的患者5年生存率可达到90％以上，而晚期患者的5年生存率不到15％。因此，早筛是降低结直肠癌死亡率最有效的手段(Miller,K.D.,Nogueira,L.,Mariotto,A.B.et al.Cancer treatment andsurvivorship statistics,2019.CA Cancer J Clin.2019,69(5):363-385)。
目前，结直肠癌诊断方法主要包括结肠镜检查，免疫法粪便隐血试验(FIT)，多靶点粪便DNA检测和血浆Septin9基因甲基化检测等。结肠镜检查属于侵入式检查，依从性较差。FIT检测容易出现假阳性，漏诊率高，多靶点粪便DNA检测费用昂贵，血浆Septin9基因甲基化检测敏感性差，成本效益比低。
因此，开发新的性能可靠、操作简便、成本较低的结直肠癌早诊生物标志物和相关技术迫在眉睫。
发明内容
基于此，有必要提供一种用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物组合及应用，能够在降低筛查成本的同时提升结直肠癌诊断的特异性，能够很好地替代现有结直肠镜检查及化学法检测诊断模式，减少创伤和漏诊率，具备临床使用推广价值。
本发明采用如下技术方案：
本发明提供一种用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物，所述代谢标志物选自N-乙酰苯丙氨酸、1,7-二甲基黄嘌呤、8,15-二羟基二十碳四烯酸、N-乙酰基-5-甲氧基色胺、2-氨基-4-羟基蝶啶、5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱(15:0)、甲基马来酸、N-甲基-α-氨基异丁酸、胸腺嘧啶中的至少一种。
在其中一些实施例中，所述用于诊断或监测结直肠癌的代谢标志物至少选自N-乙酰苯丙氨酸、1,7-二甲基黄嘌呤中的至少一种。
进一步地，所述血浆代谢标志物还选自8,15-二羟基二十碳四烯酸、N-乙酰基-5-甲氧基色胺和2-氨基-4-羟基蝶啶中的至少一种。
进一步地，所述血浆代谢标志物还选自5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱(15:0)、甲基马来酸、N-甲基-α-氨基异丁酸和胸腺嘧啶中的至少一种。
上述用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物在制备诊断或监测结直肠癌的代谢物数据库、试剂盒中的应用。
本发明还提供一种用于诊断或监测结直肠癌的试剂盒，包括上述所述的用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物的标准品。该试剂盒还可以包括提取试剂和内标物，所述内标物优选为L-苯基丙氨酸。
本发明还提供上述所述的用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物的筛选方法，包括如下步骤：分别采集健康对照组样本和结直肠癌患者组样本；采用LC-MS检测健康对照组样本和结直肠癌患者组样本，经判别分析，获得候选差异代谢物；对所述差异代谢物及其组合进行受试者工作特征曲线分析，确定用于诊断或监测肠道结直肠癌的代谢标志物。
在其中一些实施例中，所述LC-MS检测采用梯度洗脱程序，色谱柱：WatersACQUITY UPLC HSS T3 C18，流动相：A相：含0.04％乙酸水溶液，B相为含0.04％乙酸的乙腈溶液。
与现有技术相比，本发明采用大规模临床样本进行血浆代谢组学研究获得针对结直肠癌诊断的10种代谢标志物，单个代谢标志物ROC曲线下的面积AUC值大于0.7，在0.702～0.845之间；多个代谢标志物组合的性能明显优于单个代谢标志物，ROC曲线下的面积AUC值为0.722～0.981。采用本发明的10种血浆代谢标志物进行检测诊断时能够在降低筛查成本的同时提升结直肠癌诊断的特异性，仅通过取血检测就能实现诊断，无需额外采集组织样本，能够很好地替代现有的组织活检及化学法检测诊断模式，减少创伤和漏诊率，具备临床使用推广价值。
附图说明
图1为本发明实施例1所提供的代谢物OPLS-DA的S-plot图。
图2为本发明依据实施例1代谢物差异绘制的不同样本分组的OPLS-DA统计图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本发明。
以下各实施例，仅用于说明本发明，但不止用来限制本发明的范围。基于本发明中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本发明的保护范围。
在本发明实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本发明实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
表1实验试剂
| 化合物 | CAS编号 | 品牌 |
| 甲醇 | 67-56-1 | Merck |
| 乙腈 | 75-05-8 | Merck |
| 乙酸 | 64-19-7 | Aladdin |
| L-苯基丙氨酸 | 63-91-2 | isoreag |
关键仪器信息分别见下表2：
表2实验仪器信息
| 名称 | 型号 | 品牌 |
| HPLC-TOF-MS | TripleTOF 6600 | SCIEX |
| LC-MS/MS | QTRAP 6500+ | SCIEX |
| 离心机 | 5424R | Eppendorf |
| 离心浓缩仪 | CentriVap | LABCONCO |
| 涡旋混合器 | VORTEX-5 | Kyllin-Be11 |
实施例1
本实施例提供一种用于诊断结直肠癌的血浆代谢标志物的筛选方法，包括如下步骤：
S1，采集样品
本研究在取得患者同意后，收集临床医学研究中心的100例健康对照和88例结直肠癌患者的外周静脉血血浆样本。其中健康对照来源于体检后无肠道疾病的人群；结直肠癌患者经过结直肠镜检查和术后确诊。所有样本均无其它任何恶性肿瘤病史，无其他全身性重大疾病，无长期用药的慢性病史。各组样本间的年龄和性别均相匹配。
采血时间均为清晨空腹状态。所有血浆样本离心后置于-80℃冰箱内保存，研究时分别取出血浆样品解冻后进行后续分析。
S2，血浆广泛靶向代谢组学分析
(1)样品预处理
从-80℃冰箱中取出步骤S1采集的样品，于冰上解冻至样本中没有冰块(后续操作都要求在冰上进行)；样本解冻后，涡旋10s混匀，取样本50μL加入到对应编号的离心管中；加入300μL纯甲醇内标提取液(含100ppm浓度的L-苯基丙氨酸内标)；涡旋5min，静置24h，再于12000r/min、4℃条件下离心10min；吸取上清液270μL浓缩24h；再加入100μL的复溶液(由乙腈和水按照体积比1:1组成)中，用于LC-MS/MS分析。每个样本各取20μL混合成质控样本(QC)，每间隔15个样本采集一次。
(2)样品代谢物检测
确定液相色谱条件如下：色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18 1.8μm，2.1mm*100mm；柱温为40℃；进样量为2μL。
流动相：A相为含0.04％乙酸水溶液，B相为含0.04％乙酸的乙腈溶液。洗脱梯度程序为：0min，A相与B相的体积比为95:5；11.0min，A相与B相的体积比为10:90；12.0min，A相与B相的体积比为10:90；12.1min，A相与B相的体积比为95:5；14.0min，A相与B相的体积比为95:5。流速0.4mL/min。
确定质谱条件如下：电喷雾离子源(electrospray ionization，ESI)温度500℃，质谱电压5500V(positive)或者-4500V(negative)，离子源气体I(GS I)55psi，气体II(GSII)60psi，气帘气(curtain gas,CUR)25psi，碰撞诱导电离(collision-activateddissociation，CAD)参数设置为高。
在三重四极杆(Qtrap)中，每个离子对是根据优化的去簇电压(declusteringpotential，DP)和碰撞能(collision energy，CE)进行MRM模式扫描检测。
按照确定的液相色谱条件和质谱条件分别对样本进行分析检测：随机挑选健康对照组和结直肠癌组中各20％的样本，采用增强离子扫描质谱(MIM-EPI)和飞行时间质谱(TOF)结合多反应监测采集模式的代谢组学方法，以及整合本地标准品数据库进行结直肠癌血浆代谢物数据库构建。
用液相色谱-质谱联用代谢组学方法和构建的结直肠癌血浆代谢物数据库对采集的血浆样本进行分析，得到各血浆样本的原始质谱数据。
(3)图谱峰面积预处理和积分
基于结直肠癌血浆特异性代谢物数据库，对样本的代谢物进行质谱定性定量分析。通过液相色谱能够分离不同分子量的代谢物。利用三重四极杆的多反应监测模式(MRM)筛选出每个物质的特征离子，在检测器中获得特征离子的信号强度(CPS)。用MultiQuant软件打开样本下机质谱文件，根据质荷比、保留时间对原始质谱数据进行预处理和校正，进行色谱峰的积分和校正工作，每个色谱峰的峰面积(Area)代表对应物质的相对含量，设置S/N>5，保留时间偏移不超过0.2min的峰保留；根据质谱峰强度计算峰面积得到代谢物相对含量信息，最后导出所有色谱峰面积积分数据保存，用于下一步统计分析。
(4)实验质量控制
通过对不同质控QC样本质谱检测分析的总离子流图进行重叠展示分析，可以判断代谢物提取和检测的重复性，即技术重复。仪器的高稳定性为数据的重复性和可靠性提供了重要的保障。CV值即变异系数(Coefficient of Variation)，是原始数据标准差与原始数据平均数的比，可反映数据离散程度。使用经验累积分布函数(Empirical CumulativeDistribution Function,ECDF)可以分析小于参考值的物质CV出现的频率，QC样本的CV值较低的物质占比越高，代表实验数据越稳定：QC样本CV值小于0.5的物质占比高于85％，表明实验数据较稳定；QC样本CV值小于0.3的物质占比高于75％，表明实验数据非常稳定。同时监测检测过程中L-苯基丙氨酸内标CV值变化情况，内标CV值的变化小于20％，表明检测过程中仪器稳定性好。
(5)数据处理分析
将所有样本测试的峰面积积分数据导入SIMCA软件(Version 14.1，Sweden)进行多元统计分析。通过建立正交-偏最小二乘法判别(OPLS-DA)模型，寻找健康人与结直肠癌患者之间贡献较大的代谢物(VIP>1.0)。如图1中深色标记的点为VIP>1.0的代谢物，浅色标记的点为VIP<1.0的代谢物。然后通过T-test检验和FDR校正，设置FRD<0.05为差异显著性标准。最终筛选出VIP>1.0且FDR<0.05的差异代谢物，可能是潜在诊断结直肠癌的代谢标志物。
上述分析筛选的潜在结直肠癌代谢标志物，根据其保留时间、一级和二级质谱推测标志物的分子质量和分子式，并且与代谢物谱图数据库中的谱图信息进行比对，从而对代谢物进行定性鉴定。最终通过购买标准品，用标准品的分子量、色谱保留时间和相应的多级MS裂解谱比对，验证代谢标志物的结构。
本实施例中利用二元逻辑回归向前逐步法筛选到10种差异代谢物能够诊断区分结直肠癌：N-乙酰苯丙氨酸、1,7-二甲基黄嘌呤、8,15-二羟基二十碳四烯酸、N-乙酰基-5-甲氧基色胺、2-氨基-4-羟基蝶啶、5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱(15:0)、甲基马来酸、N-甲基-α-氨基异丁酸和胸腺嘧啶，代谢物具体信息见下表3和表4：
表3用于结直肠癌诊断的10种血浆代谢标志物
表4结直肠癌患者组VS健康人组代谢物差异
| 中文名称 | 差异倍数 | VIP | FDR |
| N-乙酰苯丙氨酸 | 1.29 | 1.86 | 8.08E-03 |
| 1,7-二甲基黄嘌呤 | 0.59 | 1.63 | 6.48E-02 |
| 8,15-二羟基二十碳四烯酸 | 1.20 | 1.52 | 8.80E-02 |
| N-乙酰基-5-甲氧基色胺 | 0.86 | 1.66 | 6.49E-02 |
| 2-氨基-4-羟基蝶啶 | 1.31 | 1.34 | 5.90E-02 |
| 5-羟色胺 | 0.95 | 1.08 | 5.06E-03 |
| 溶血磷脂酰胆碱(15:0) | 0.86 | 1.02 | 4.25E-02 |
| 甲基马来酸 | 0.86 | 1.03 | 8.17E-02 |
| N-甲基-α-氨基异丁酸 | 0.89 | 1.15 | 1.91E-03 |
| 胸腺嘧啶 | 0.92 | 1.11 | 3.90E-03 |
由上表可以看出，与健康对照相比，结直肠癌患者组中的N-乙酰苯丙氨酸、8,15-二羟基二十碳四烯酸、2-氨基-4-羟基蝶啶、2-氨基-4-羟基蝶啶的代谢物含量同步提升，1,7-二甲基黄嘌呤、N-乙酰基-5-甲氧基色胺、5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱(15:0)、甲基马来酸、N-甲基-α-氨基异丁酸以及胸腺嘧啶的代谢物含量同步降低。
进一步采用受试者工作特征曲线(ROC)分析代谢物对结直肠癌的诊断性能。单个及任意2～9个代谢物联合用于诊断时的AUC值见表5和表6：
表5单个代谢物用于结直肠癌诊断的AUC值
表6任意代谢物联合用于结直肠癌诊断的AUC值
| 联合个数 | AUC | 灵敏度 | 特异性 |
| 任意二个 | ≥0.722 | ≥72.2％ | ≥71.3％ |
| 任意三个 | ≥0.745 | ≥74.4％ | ≥74.0％ |
| 任意四个 | ≥0.754 | ≥75.1％ | ≥74.5％ |
| 任意五个 | ≥0.775 | ≥76.9％ | ≥75.2％ |
| 任意六个 | ≥0.807 | ≥79.2％ | ≥78.1％ |
| 任意七个 | ≥0.856 | ≥84.9％ | ≥83.2％ |
| 任意八个 | ≥0.891 | ≥88.0％ | ≥87.1％ |
| 任意九个 | ≥0.926 | ≥91.6％ | ≥90.5％ |
由上表统计结果可以看出：对于N-乙酰苯丙氨酸、1,7-二甲基黄嘌呤、8,15-二羟基二十碳四烯酸、N-乙酰基-5-甲氧基色胺、2-氨基-4-羟基蝶啶、5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱(15:0)、甲基马来酸、N-甲基-α-氨基异丁酸、胸腺嘧啶的差异代谢物组合，这10个差异代谢物单个用于诊断结直肠癌能力较强，ROC曲线下面积(AUC)均大于0.7，具有临床诊断意义。这10个差异代谢物联合用于诊断时，AUC进一步提高。
10个联合起来诊断结直肠癌的AUC值达到0.973，在最佳cutoff值下，灵敏度和特异性分别为96.3％和95.1％。
其中，部分示例优选代谢标志物组合及其模型统计结果如下：
采用N-乙酰苯丙氨酸和1,7-二甲基黄嘌呤构建诊断结直肠癌模型，这2个代谢标志物联合起来诊断结直肠癌的AUC值达到0.886，在最佳cutoff值下，灵敏度和特异性分别为85.4％和84.3％。
采用N-乙酰苯丙氨酸、1,7-二甲基黄嘌呤、8,15-二羟基二十碳四烯酸、N-乙酰基-5-甲氧基色胺和2-氨基-4-羟基蝶啶构建诊断结直肠癌模型。这5个代谢标志物联合起来诊断结直肠癌的AUC值达到0.922，在最佳cutoff值下，灵敏度和特异性分别为91.2％和90.1％。
采用N-乙酰苯丙氨酸、1,7-二甲基黄嘌呤、8,15-二羟基二十碳四烯酸、N-乙酰基-5-甲氧基色胺、2-氨基-4-羟基蝶啶、5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱(15:0)和甲基马来酸构建诊断结直肠癌模型。这8个代谢标志物联合起来诊断结直肠癌的AUC值达到0.957，在最佳cutoff值下，灵敏度和特异性分别为94.4％和93.2％。
另外，参见图2，根据上述差异代谢物绘制不同样本分组之间的OPLS-DA统计图，能够反应代谢标志物具有较好的诊断性能。
实施例2检测验证
本实施例在取得患者同意后，收集2个独立医学研究中心的405例健康对照和364例结直肠癌患者的外周静脉血血浆样本。其中健康对照来源于体检后无肠道疾病的人群；结直肠癌患者经过结直肠镜检查和术后确诊。所有样本均无其它任何恶性肿瘤病史，无其他全身性重大疾病，无长期用药的慢性病史。各组样本间的年龄和性别均相匹配，采血时间均为清晨空腹状态。所有血浆样本离心后置于-80℃冰箱内保存，研究时分别取出血浆样品解冻后进行后续分析。
本实施例与实施例1的检测条件和数据分析方法相同，检测和分析的用于诊断结直肠癌的差异代谢物为以下10种：N-乙酰苯丙氨酸、1,7-二甲基黄嘌呤、8,15-二羟基二十碳四烯酸、N-乙酰基-5-甲氧基色胺、2-氨基-4-羟基蝶啶、5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱(15:0)、甲基马来酸、N-甲基-α-氨基异丁酸、胸腺嘧啶。这10个代谢标志物在结直肠癌患者体内发生显著变化，具体信息见表7：
表7结直肠癌患者VS健康人代谢物
| 中文名称 | 差异倍数 | VIP | FDR |
| N-乙酰苯丙氨酸 | 1.33 | 1.67 | 8.90E-04 |
| 1,7-二甲基黄嘌呤 | 0.61 | 1.69 | 8.61E-03 |
| 8,15-二羟基二十碳四烯酸 | 1.36 | 1.86 | 1.19E-02 |
| N-乙酰基-5-甲氧基色胺 | 0.87 | 1.29 | 3.19E-03 |
| 2-氨基-4-羟基蝶啶 | 1.22 | 1.20 | 4.32E-04 |
| 5-羟色胺 | 0.91 | 1.02 | 4.86E-02 |
| 溶血磷脂酰胆碱(15:0) | 0.89 | 1.09 | 1.12E-02 |
| 甲基马来酸 | 0.86 | 1.15 | 2.65E-02 |
| N-甲基-α-氨基异丁酸 | 0.93 | 1.09 | 3.51E-02 |
| 胸腺嘧啶 | 0.94 | 1.04 | 4.24E-02 |
由上表可以看出，与健康对照相比，结直肠癌患者组中的N-乙酰苯丙氨酸、8,15-二羟基二十碳四烯酸、2-氨基-4-羟基蝶啶、2-氨基-4-羟基蝶啶的代谢物含量依然表现为同步提升，1,7-二甲基黄嘌呤、N-乙酰基-5-甲氧基色胺、5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱(15:0)、甲基马来酸、N-甲基-α-氨基异丁酸以及胸腺嘧啶的代谢物含量依然表现为同步降低。
上述10种代谢标志物中，单个及任意2～9个代谢物联合用于诊断时的AUC见表8和表9：
表8单个代谢物用于结直肠癌诊断的AUC值
表9任意差异代谢物联合用于结直肠癌诊断的AUC值
| 联合个数 | AUC | 灵敏度 | 特异性 |
| 任意二个 | ≥0.736 | ≥72.6％ | ≥71.8％ |
| 任意三个 | ≥0.760 | ≥74.8％ | ≥73.5％ |
| 任意四个 | ≥0.788 | ≥76.3％ | ≥75.5％ |
| 任意五个 | ≥0.801 | ≥78.1％ | ≥76.8％ |
| 任意六个 | ≥0.835 | ≥81.2％ | ≥80.1％ |
| 任意七个 | ≥0.866 | ≥84.2％ | ≥83.3％ |
| 任意八个 | ≥0.907 | ≥89.0％ | ≥88.1％ |
| 任意九个 | ≥0.931 | ≥91.6％ | ≥90.3％ |
由上表可以看出：N-乙酰苯丙氨酸、8,15-二羟基二十碳四烯酸、2-氨基-4-羟基蝶啶、2-氨基-4-羟基蝶啶的代谢物含量依然表现为同步提升，1,7-二甲基黄嘌呤、N-乙酰基-5-甲氧基色胺、5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱(15:0)、甲基马来酸、N-甲基-α-氨基异丁酸以及胸腺嘧啶单个用于诊断结直肠癌患者能力较强，ROC曲线下面积(AUC)均大于0.7，具有临床诊断意义。多个代谢标志物联合时，AUC进一步提高。这10个差异代谢标志物联合用于诊断时，诊断结直肠癌的AUC值达到0.981，在最佳cutoff值下，灵敏度和特异性分别为97.1％和95.8％。
在本实施例中，部分优选代谢标志物组合如下：
采用N-乙酰苯丙氨酸和1,7-二甲基黄嘌呤构建诊断结直肠癌模型，这2个代谢标志物联合起来诊断结直肠癌的AUC值达到0.891，在最佳cutoff值下，灵敏度和特异性分别为86.3％和84.8％。
采用N-乙酰苯丙氨酸、1,7-二甲基黄嘌呤、8,15-二羟基二十碳四烯酸、N-乙酰基-5-甲氧基色胺、2-氨基-4-羟基蝶啶联合构建诊断结直肠癌模型，这5个代谢标志物联合起来诊断结直肠癌的AUC值达到0.935，在最佳cutoff值下，灵敏度和特异性分别为92.4％和91.1％。
采用N-乙酰苯丙氨酸、1,7-二甲基黄嘌呤、8,15-二羟基二十碳四烯酸、N-乙酰基-5-甲氧基色胺、2-氨基-4-羟基蝶啶、5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱(15:0)、甲基马来酸联合构建诊断结直肠癌模型，这8个代谢标志物联合起来诊断结直肠癌的AUC值达到0.966，在最佳cutoff值下，灵敏度和特异性分别为95.4％和94.3％。
实施例3
本实施例提供一种用于诊断或监测结直肠癌的检测试剂盒，包括：
(1)代谢标志物的标准品：N-乙酰苯丙氨酸、1,7-二甲基黄嘌呤、8,15-二羟基二十碳四烯酸、N-乙酰基-5-甲氧基色胺、2-氨基-4-羟基蝶啶、5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱(15:0)、甲基马来酸、N-甲基-α-氨基异丁酸、胸腺嘧啶，单独分装或者混合封装。
(2)溶剂：
纯甲醇和50％乙腈水溶液，用于样品提取。
50％乙腈水溶液可以用作溶解标准品的溶剂。
(3)内标物：L-苯基丙氨酸。
使用本实施例中用于诊断或监测结直肠癌的检测试剂盒的筛查方法，包括如下步骤：
S1，收集血浆样本，预处理，获得供试液。
S2，采用LC-MS分析检测供试液，获得N-乙酰苯丙氨酸、1,7-二甲基黄嘌呤、8,15-二羟基二十碳四烯酸、N-乙酰基-5-甲氧基色胺、2-氨基-4-羟基蝶啶、5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱(15:0)、甲基马来酸、N-甲基-α-氨基异丁酸和/或胸腺嘧啶的含量变化信息。
S3，依据上述代谢标志物的含量变化信息，判定是否可能属于结直肠癌患者。
在此有必要指出的是，以上实施例仅限于对本发明的技术方案做进一步的阐述和说明，并不是对本发明的技术方案的进一步的限制，本发明的方法仅为较佳的实施方案，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物，其特征在于，所述血浆代谢标志物选自N-乙酰苯丙氨酸、1,7-二甲基黄嘌呤、8,15-二羟基二十碳四烯酸、N-乙酰基-5-甲氧基色胺、2-氨基-4-羟基蝶啶、5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱(15:0)、甲基马来酸、N-甲基-α-氨基异丁酸、胸腺嘧啶中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物，其特征在于，所述血浆代谢标志物至少选自N-乙酰苯丙氨酸、1,7-二甲基黄嘌呤中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物，其特征在于，所述血浆代谢标志物还选自8,15-二羟基二十碳四烯酸、N-乙酰基-5-甲氧基色胺和2-氨基-4-羟基蝶啶中的至少一种。
4.根据权利要求2或3所述的用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物，其特征在于，所述血浆代谢标志物还选自5-羟色胺、溶血磷脂酰胆碱(15:0)、甲基马来酸、N-甲基-α-氨基异丁酸和胸腺嘧啶中的至少一种。
5.权利要求1至4任一项所述的用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物在制备诊断或监测结直肠癌的代谢物数据库、试剂盒中的应用。
6.一种用于诊断或监测结直肠癌的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1至4任一项所述的用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物的标准品。
7.根据权利要求6所述的用于诊断或监测结直肠癌的试剂盒，其特征在于，还包括提取试剂和内标物。
8.根据权利要求7所述的用于诊断或监测结直肠癌的试剂盒，其特征在于，所述内标物为L-苯基丙氨酸。
9.权利要求1至4所述的用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物的筛选方法，包括如下步骤：
分别采集健康对照组样本和结直肠癌患者组样本；
采用LC-MS检测健康对照组样本和结直肠癌患者组样本，经判别分析，获得候选差异代谢物；
对所述差异代谢物及其组合进行受试者工作特征曲线分析，确定用于诊断或监测肠道结直肠癌的血浆代谢标志物。
10.权利要求9所述的用于诊断或监测结直肠癌的血浆代谢标志物的筛选方法，其特征在于，所述LC-MS检测采用梯度洗脱程序，色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18，
流动相：A相：含0.04％乙酸水溶液，B相为含0.04％乙酸的乙腈溶液。
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114705782B (zh) | 2023-12-01 |
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